专利名称：Ron抗体及其用途的制作方法
RON抗体及其用途
背景技术：
R0N(recepteur d，origine nantais，也称为 MST1R)是一种对于胚胎发育必不 可少的受体型蛋白酪氨酸激酶，并且还在炎症反应中起重要作用(Camp等人Arm. Surg. Oncol. 12 :273-281 (2005))。RON主要在来源于上皮的细胞类型中表达，并且有人提出 RON同大量的其它受体型酪氨酸激酶一样可能在恶性上皮癌的演变中起作用(Wang等人 Carcinogensis 23 :1291_1297(2003))。受体型蛋白酪氨酸激酶通常由结合胞外配体诸如生长因子和激素的胞外结构域 以及具备激酶功能结构域的胞内结构域组成。受体型蛋白酪氨酸激酶已被细分为许多类 别，并且RON是受体酪氨酸激酶的MET家族的成员，该家族还包括Stk、c-Met和c-Sea (Camp 等人Ann. Surg. Oncol. 12 :273_281 (2005))。RON和c_Met是在人类中发现的仅有的该家族 的成员，并且它们总体上共有约65%的同源性。C-Met是肝细胞生长因子/分散因子(HGF/ SF)的受体并且已被相当充分地表征为原癌基因。已经确定RON的配体巨噬细胞刺激蛋白(MSP)，其与c_Met配体HGF/SF共有约 40%的同源性。MSP和HGF属于通过Kringle结构域表征的纤溶酶原-凝血酶原家族。有 趣的是，MSP也已证实与癌症有关。例如，Welm等人最近观察到MSP与乳腺癌的转移和不良 预后之间的关联(PNAS104 7501-7575(2007)) ο已经证实MSP与称为脑信号蛋白(sema)结构域的RON的胞外部分中的特定结构 域结合。RON和c-Met是仅有的具有胞外sema结构域的受体酪氨酸激酶，并且已经证实RON 的sema结构域包括其配体结合位点。MSP与RON的结合导致RON的激酶结构域中磷酸化， 这使得RON激酶活性增加。或者，β工整联蛋白可经由Src依赖性途径将RON磷酸化并活 化(Camp等人Ann. Surg. Oncol. 12 :273_281 (2005))。RON的活化引发了许多途径的信号传 导，包括PI3-K、RaS、Src、β-连环蛋白和Fak信号传导。由RON活化的许多信号传导途径 牵涉在与癌症相关的过程诸如增殖和凋亡的抑制中。最近，由于多种原因，RON本身已牵涉在癌症演变中。例如，RON在包括乳腺癌、膀 胱癌、结肠癌、卵巢癌和胰腺癌的多种人类肿瘤中表达。此外，RON已经在体外显示出增加细 胞增殖和活动性。而且，RON在RON转基因小鼠中诱导肿瘤生长和转移(metastisis) (Waltz 等人Cancer Research66 11967-11974 (2006))。因此，对可以抑制RON信号传导途径的包 括抗RON抗体在内的分子存在需求。
发明内容
在一些实施方案中，本发明提供一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或 其抗原结合片段特异性地结合至与选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、 M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体相同的RON表位。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其抗原 结合片段，其中所述抗体或片段竞争性地抑制选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、
20M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体与RON结合。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其抗 原结合片段，其中所述抗体或其片段包含与选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体的抗原结合结构域 相同的抗原结合结构域。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的重链可变区(VH)包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸 序列至少 90% 相同的氨基酸序列SEQ IDN0:4、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO 115, SEQ ID NO 125, SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:145。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的轻链可变区(VL)包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸 序列至少 90%相同的氨基酸序列SEQ IDN0:9、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 29、SEQ ID N0: 39,SEQ ID NO 49,SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 89、SEQ IDNO 99、SEQ ID NO 120,SEQ ID NO 130,SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID N0:150。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由 以下组成的组的参考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ IDNO :84、SEQ ID NO : 94、SEQ ID N0:115、SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO: 145。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由 以下组成的组的参考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ IDNO :89、SEQ ID NO : 99、SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO: 150。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、 SEQ ID NO 74,SEQ IDNO : 84、SEQ ID NO : 94、SEQ ID NO : 115、SEQ ID NO 125,SEQ ID NO: 135 和 SEQ ID NO :145。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、 SEQ ID NO 79,SEQ IDNO :89、SEQ ID NO 99,SEQ TD NO 120,SEQ ID NO 130,SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO :150。
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在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH和VL分别包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列 至少 90%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO :14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24 禾口 SEQID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ IDNO 49 ；SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID N0:84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ IDNO :94 禾口 SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO :120、SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO :130、SEQ ID NO 135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ IDN0:145 和 SEQ ID NO 150。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH和VL各自除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外，分 别包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO 34 和 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO 44 和 SEQ TD NO 49 ；SEQ ID NO 54 和 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ； SEQ ID N0:94 禾口 SEQ ID NO 99、SEQ IDNO :115 禾口 SEQ ID NO 120,SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130, SEQ IDNO 135 禾口 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO 150。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH和VL分别包含选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ ID NO 4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 115 禾口 SEQ ID NO :120、SEQ ID NO: 125 禾口 SEQ ID NO 130、SEQ IDNO 135 和 SEQ ID NO: 140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ο在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考重链互补决定区-1 (VH-⑶Rl)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶Rl氨基酸序 列SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :15、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO
55、SEQID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :95、SEQ IDNO :116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136和SEQ ID N0:146。在另外的实施方案中，所述VH-CDRl氨基酸序 列选自由以下组成的组:SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO 45,SEQ ID NO 55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 85、SEQ IDNO :95、SEQ ID NO 116, SEQ ID NO 126, SEQ ID N0:136 和 SEQ ID NO 146。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考重链互补决定区-2 (VH-⑶R2)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶R2氨基酸序 列SEQ ID N0:6、SEQ IDNO 16,SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID N0:
56、SEQID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO :86、SEQ ID NO :96、SEQ IDNO :117、SEQ ID NO 127,SEQ ID N0:137和SEQ ID NO 147。在另外的的实施方案中，所述VH-CDR2氨基酸
22序列选自由以下组成的组SEQ IDN0:6、SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 26, SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46,SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 86、SEQ IDNO :96、SEQ ID N0:117、SEQ ID NO 127, SEQ ID N0:137 禾口 SEQ IDNO :147。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考重链互补决定区-3 (VH-⑶R3)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶R3氨基酸序 列SEQ ID NO :7、SEQ IDNO :17、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO -JrJ、SEQ ID NO :87、SEQ ID NO :97、SEQ IDNO :118、SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138和SEQ ID N0:148。在另外的实施方案中，所述VH-CDR3氨基酸序 列选自由以下组成的组:SEQ IDNO :7、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO 47,SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO :97、SEQ ID NO118,SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138 禾口 SEQ IDNO 148。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考轻链互补决定区-I(VL-OTRl)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶Rl氨基酸序 列SEQ ID NO :10、SEQ IDNO 20,SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 40,SEQ ID NO 50,SEQ ID NO
60、SEQID NO 70,SEQ ID NO 80,SEQ ID NO 90,SEQ ID N0:100、SEQID NO: 121、SEQ ID N0:131、SEQ ID N0:141和SEQ ID N0:151。在另外的实施方案中，所述VL-CDRl氨基酸序 列选自由以下组成的组SEQ IDNO :10、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、SEQ ID NO :90、SEQ IDNO :100、 SEQ ID N0:121、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 141 禾口 SEQ IDNO 151。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考轻链互补决定区-2 (VL-⑶R2)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶R2氨基酸序 列SEQ ID NO IUSEQ IDNO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO:
61、SEQID N0:71、SEQ ID N0:81、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO: 101、SEQID NO: 122、SEQ ID NO 132,SEQ ID NO: 142和SEQ ID NO : 152。在另外的实施方案中，所述VL-CDR2氨基酸序 列选自由以下组成的组SEQ IDNO :11、SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ IDNO :101、 SEQ ID NO 122, SEQ ID NO 132, SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组 成的组的参考轻链互补决定区-3 (VL-⑶R3)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶R3氨基酸序 列SEQ ID NO :12、SEQ IDNO :22、SEQ ID NO 32,SEQ ID NO :42、SEQ ID NO 52,SEQ ID NO
62、SEQID NO 72,SEQ ID N0:82、SEQ ID NO 92,SEQ ID NO 102,SEQID NO 123,SEQ ID NO 133,SEQ ID N0:143和SEQ ID N0:153。在另外的实施方案中，所述VL-CDR3氨基酸序 列选自由以下组成的组:SEQ IDNO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :92、SEQ IDNO :102、 SEQ ID N0:123、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 143 和 SEQ ID NO 153。
在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中除了在所述VH-CDR中的至少一个上的一个、二个、三个或四个氨基酸取代以外，所 述抗体或其片段的VH包含选自由以下组成的组的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序 列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、 36 和 37 ；SEQ ID NO :45、46 和 47 ；SEQ ID NO :55、56 和 57 ；SEQID NO :65、66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID N0:116、117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ；SEQ ID NO :136、137 禾口 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VH包含选自由以下组成的组的VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3 氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID N0:65、66 和 67; SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、86 和 87 ；SEQID NO :95、96 和 97 ；SEQ ID NO :116、 117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO :146、 147 和 148。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中除了在VL-CDR中至少一个上的一个、二个、三个或四个氨基酸取代以外，所述抗体 或其片段的VL包含选自由以下组成的组的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ；SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NO :40、41和 42 ；SEQ ID NO :50、51和 52 ；SEQ ID NO :60、61和 62 ；SEQ ID NO :70、71和 72 ；SEQ ID NO 80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQID NO 100、101 和 102 ;SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ； SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ； SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 和 153。在一些实施方案中，本发明提供一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片 段，其中所述抗体或其片段的VL包含选自由以下组成的组的VL-⑶R1、VL-⑶R2和VL-⑶R3 氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 和 12 ;SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ； SEQ ID NO :40、41 和 42 ；SEQ ID NO :50、51 和 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、 71和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91和 92 ；SEQID NO 100、101 禾口 102 ；SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ;SEQ ID N0:141、142 禾口 143;以及 SEQ ID NO :151、152 和 153。在上述的抗体或其片段的各种实施方案中，除了五个或更少的氨基酸取代以外， 所述VH构架区和/或VL构架区是人类的。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段结合至线性表位或非线性构象表位。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段是多价的，并包含至少两条重链和至少 两条轻链。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段是多特异性的。在另外的实施方案中，上 述的抗体或其片段是双特异性的。在上述的抗体或其片段的各种实施方案中，重链和轻链可变结构域是鼠的。在 另外的实施方案中，重链和轻链可变结构域来自选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和
241P5B10组成的组的单克隆抗体。在上述的抗体或其片段的各种实施方案中，重链和轻链可变结构域是完全人类 的。在另外的实施方案中，重链和轻链可变结构域来自选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、 M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 组成的组的单克隆 Fab 抗体片段。在各种实施方案中，上述的抗体或其片段是人源化的。在各种实施方案中，上述的抗体或其片段是嵌合的。在各种实施方案中，上述的抗体或其片段是灵长源化的。在各种实施方案中，上述的抗体或其片段是完全人类的。在某些实施方案中，上述的抗体或其片段是Fab片段、Fab，片段、F (ab) 2片段或Fv 片段。在某些实施方案中，上述的抗体是单链抗体。在某些实施方案中，上述的抗体或其片段包含选自由人类κ恒定区和人类λ恒 定区组成的组的轻链恒定区。在某些实施方案中，上述的抗体或其片段包含重链恒定区或其片段。在另外的实 施方案中，重链恒定区或其片段选自由人类IgG4、IgG4agly、IgGl和IgGlagly组成的组。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段以小于所述参考单克隆抗体的解离常数 (Kd)的Kd所表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其片段、或RON变体多肽。在另外的实 施方案中，解离常数(Kd)不大于 5Χ1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5Χ1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5Χ1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5Χ1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在一些实施方案中，上述的抗体或其片段相对于鼠RON多肽或其片段优先地结合 至人类RON多肽或其片段。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段结合至细胞表面上表达的RON。在另外的 实施方案中，所述细胞是恶性细胞、赘生性细胞、肿瘤细胞、转移性细胞或肿瘤相关巨噬细 胞。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段阻断MSP与RON结合。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段抑制MSP依赖性RON活化。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段抑制非MSP依赖性RON活化。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段抑制RON介导的RAS/MAPK信号传导途径 的活化。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段抑制RON介导的ERK或AKT的磷酸化。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段抑制RON介导的细胞增殖、肿瘤细胞生 长、肿瘤细胞迁移、肿瘤细胞侵入或肿瘤细胞转移。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段诱导凋亡。在另外的实施方案中，上述的抗体或其片段还包含与其融合的异源性多肽。在一些实施方案中，上述的抗体或其片段轭合于选自由以下组成的组的剂细胞 毒性剂、治疗剂、细胞抑制剂、生物毒素、前体药物、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节 齐U、药物剂、淋巴因子、异源性抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、和两种或两种以上任何所述剂的组合。在另外的实施方案中，所述细胞毒性剂选自由以下组成的组放射性 核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免疫活性的配 体、生物反应调节剂、或者两种或两种以上任何所述细胞毒性剂的组合。在另外的实施方案 中，所述可检测标记选自由以下组成的组酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放 射性标记、或者两种或两种以上任何所述可检测标记的组合。在另外的实施方案中，本发明包括包含上述抗体或其片段和载体的组合物。本发明的某些实施方案包括一种包含编码抗体VH多肽的核酸的分离的多核苷 酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相 同SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ IDNO 24,SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44,SEQ ID NO 54,SEQ ID NO 64,SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO 115,SEQ IDNO 125,SEQ ID N0:135和SEQ ID NO :145 ；并且其中包含所述VH多肽的抗体或其抗原结合片 段特异性地结合至RON。在另外的实施方案中，所述VH多肽的氨基酸序列选自由以下组成 的组SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ IDNO :115、SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO 145。在某些实施方案中，编码所述VH多肽的核苷酸序列被优化以增加所述VH多肽的 表达而不改变其氨基酸序列。在另外的实施方案中，所述优化包括识别和移除剪接供体位 点和剪接受体位点和/或表达所述多核苷酸细胞的密码子使用的优化。在另外的实施方案 中，所述核酸包含选自由以下组成的组的核苷酸序列SEQ ID N0:3、SEQ FD NO 13,SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :63、SEQ IDNO :73、SEQ ID NO 83,SEQ ID NO :93、SEQ ID NO : 114、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 134 禾口 SEQ ID NO: 144。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码抗体VL多肽的核酸的分离的多核 苷酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90% 相同SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :19、SEQ IDNO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID N0:120、SEQ IDNO :130、SEQ ID NO 140和SEQ ID NO 150 ；并且其中包含所述VL多肽的抗体或其抗原 结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施方案中，所述VL多肽的氨基酸序列选自由以 下组成的组SEQ ID NO :9、SEQ IDNO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、 SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 120、SEQ ID NO 130, SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO 150。在某些实施方案中，编码所述VL多肽的核苷酸序列被优化以增加所述VL多肽的 表达而不改变其氨基酸序列。在另外的实施方案中，所述优化包括识别和移除剪接供体位 点和剪接受体位点和/或表达所述多核苷酸细胞的密码子使用的优化。在另外的实施方案 中，所述核酸包含选自由以下组成的组的核苷酸序列SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :68、SEQ IDNO :78、SEQ ID NO 88,SEQ ID NO 98,SEQ ID NO 119,SEQ ID NO 129、SEQ ID N0:139 禾口 SEQ ID N0: 149。在某些其它实施方案中，本发明提供一种包含编码抗体VH多肽的核酸的分离的
26多核苷酸，其中除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外，所述VH多肽的氨基酸序列与选 自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、 SEQ ID NO :34、SEQID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO 84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 135 和 SEQID NO: 145;并 且其中包含所述VH多肽的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码抗体VL多肽的核酸的分离的多核 苷酸，其中除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外，所述VL多肽的氨基酸序列与选自由 以下组成的组的参考氨基酸序列相同SEQID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 29, SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ IDNO :99、SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ IDNO 150 ；并且其中包 含所述VL多肽的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VH-⑶Rl氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，其中除了两个或更少的氨基酸取代以外，所述VH-CDRl氨基酸序列与选自由 以下组成的组的参考VH-CDRl氨基酸序列相同:SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 35,SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 85,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO :116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID N0:146;并 且其中包含所述VH-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施方 案中，所述VH-CDRl氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :116、SEQID NO :126、SEQ ID NO 136 和 SEQ ID NO
146。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VH-⑶R2氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，所述VH-CDR2氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外，与选自由以下 组成的组的参考VH-CDR2氨基酸序列相同=SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :26、 SEQ ID NO :36、SEQID NO :46、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO
86、SEQID NO :96、SEQ ID NO :117、SEQ ID NO :127、SEQ ID NO 137 和 SEQ ID NO 147 ； 并且其中包含所述VH-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施 方案中，所述VH-⑶R2氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO :6、SEQ ID N0:16、SEQ ID NO 26,SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 86,SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 127、SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID N0:
147。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VH-⑶R3氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，所述VH-CDR3氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外，与选自由以下 组成的组的参考VH-CDR3氨基酸序列相同SEQ ID NO :7、SEQ ID N0:17、SEQ ID NO :27、 SEQ ID NO :37、SEQID NO :47、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO :77、SEQ ID NO
87、SEQID NO :97、SEQ ID NO :118、SEQ ID NO :128、SEQ ID NO 138 和 SEQ ID NO 148 ； 并且其中包含所述VH-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施 方案中，所述VH-⑶R3氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO :7、SEQ ID N0:17、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 67、SEQ IDNO 77、SEQ
27ID NO 87,SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 128、SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO: 148。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VL-CDRl氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，所述VL-CDRl氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外，与选自由以下 组成的组的参考VL-CDRl氨基酸序列相同SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :30、 SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、SEQ IDNO
90、SEQID NO :100、SEQ ID NO :121、SEQ ID NO :131、SEQ FD NO 141 和 SEQ ID NO 151 ； 并且其中包含所述VL-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施 方案中，所述VL-CDRl氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、 SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 100,SEQ ID NO 121、SEQID NO 131、SEQ ID NO 141 和 SEQ ID NO :151。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VL-CDR2氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，所述VL-CDR2氨基酸序列除了两个或更少的氨基酸取代以外，与选自由以下 组成的组的参考VL-CDR2氨基酸序列相同SEQ ID NO =IUSEQ ID N0:21、SEQ ID NO :31、 SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ IDNO
91、SEQID NO 101 ； SEQ ID NO :122、SEQ ID NO :132、SEQ ID NO 142 和 SEQ ID NO 152 ； 并且其中包含所述VL-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施 方案中，所述VL-CDR2氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、 SEQ ID N0:91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO 122、SEQID NO 132、SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码VL-CDR3氨基酸序列的核酸的分离 的多核苷酸，所述VL-CDR3氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外，与选自由以下 组成的组的参考VL-CDR3氨基酸序列相同SEQ ID NO 12, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO :32、 SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、SEQ IDNO
92、SEQID N0:102、SEQ ID N0:123、SEQ ID N0:133、SEQ ID N0:143 禾口 SEQ ID NO 153 ； 并且其中包含所述VL-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在另外的实施 方案中，所述VL-CDR3氨基酸序列选自由以下组成的组SEQ ID NO 12,SEQ ID NO 22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、 SEQ ID NO 92,SEQ ID NO 102,SEQ ID NO 123、SEQID NO 133、SEQ ID N0:143 和 SEQ ID NO :153。在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码抗体VH多肽的核酸的分离的多核 苷酸，其中所述VH多肽包含选自由以下组成的组的VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序 列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、 36 和 37;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID N0:116、117和 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ；SEQ ID NO :136、137 禾口 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148 ；并且其中包含所述VH-⑶R3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
在一些实施方案中，本发明提供一种包含编码抗体VL多肽的核酸的分离的多核 苷酸，其中所述VL多肽包含选自由以下组成的组的VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序 列=SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 和 22 ；SEQ ID NO :30、31 和 32 ；SEQ ID NO 40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 禾口 72 ;SEQ ID NO :80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQID N0:100、101和 102；SEQ ID NO :121、 122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 和 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、 152和153 ；并且其中包含所述VL-⑶R3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。在一些实施方案中，上述的多核苷酸还包含编码融合于所述抗体VH多肽或所述 抗体VL多肽的信号肽的核酸。在某些其它实施方案中，上述的多核苷酸还包含编码融合于所述VH多肽的重链 恒定区CHl结构域、编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH2结构域、编码融合于所述VH 多肽的重链恒定区CH3结构域、或编码融合于所述VH多肽的重链铰链区的核酸。在另外的 实施方案中，所述重链恒定区选自由人类IgG4、IgG4agly、IgGl或IgGlagly组成的组。在一些实施方案中，上述的多核苷酸包含编码融合于所述VL多肽的轻链恒定区 结构域的核酸。在另外的实施方案中，所述轻链恒定区是人类κ。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段特异性地结合与选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10和M80-B03组成的 组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的 参考单克隆抗体相同的RON表位。在上述多核苷酸的各种其它实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或 其抗原结合片段竞争性地抑制选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、 M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体。在上述多核苷酸的各种实施方案中，除了五个或更少的氨基酸取代以外，所述VH 多肽或所述VL多肽的构架区是人类的。在上述多核苷酸的各种实施方案中，本发明提供一种包含由所述核酸编码的多肽 的抗体或其抗原结合片段，其结合于线性表位或非线性构象表位。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是多价的，并包含至少两条重链和至少两条轻链。在上述多核苷酸的某些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是多特异性的。在另外的实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗 原结合片段是双特异性的。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段包含为完全人类的重链和轻链可变结构域。在另外的实施方案中，重链和轻链 可变结构域与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E 12组成的组的单克隆Fab抗体片段的重链和轻链可变结构域相同。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段包含为鼠的重链和轻链可变结构域。在另外的实施方案中，重链和轻链可变结构 域与选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的单克隆抗体的重链和轻链可
29变结构域相同。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是人源化的。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是灵长源化的。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是嵌合的。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是完全人类的。在上述多核苷酸的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab) 2片段或FV片段。在上述多核苷酸的某些实施方案 中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结合片段是单链抗体。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段以解离常数(Kd)所表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其片段、或RON变体 多肽，所述解离常数(Kd)不大于 5 X 1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5 X 1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5 X 1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5 X 1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段相对于鼠RON多肽或其片段优先地结合至人类RON多肽或其片段。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段结合于细胞表面上表达的RON。在另外的实施方案中，所述细胞是恶性细胞、赘生 性细胞、肿瘤细胞或转移性细胞。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段阻断MSP与RON结合。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段抑制MSP依赖性RON活化。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段抑制非MSP依赖性RON活化。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段抑制Ras/MAPK信号传导途径的活化。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段抑制RON介导的ERK的磷酸化。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段抑制RON介导的细胞增殖或肿瘤细胞生长。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段诱导凋亡。在一些实施方案中，上述的多核苷酸还包含编码异源性多肽的核酸。在上述多核苷酸的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原 结合片段轭合于选自由以下组成的组的剂细胞毒性剂、治疗剂、细胞抑制剂、生物毒素、前体药物、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药物制剂、淋巴因子、异源性抗体或其片 段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、以及两种或两种以上任何所述剂的组合。在另外的实施方 案中，所述细胞毒性剂选自由以下组成的组放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞 抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免疫活性的配体、生物反应调节剂、或者两种或两种 以上任何所述细胞毒性剂的组合。在某些其它实施方案中，所述可检测标记选自由以下组 成的组酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记、或者两种或两种以上任 何所述可检测标记的组合。在一些实施方案中，本发明提供包含上述的多核苷酸的组合物。在某些其它实施方案中，本发明提供包含上述的多核苷酸的载体。在另外的实施 方案中，所述多核苷酸可操作地与启动子缔合。在另外的实施方案中，本发明提供包含这样 的载体的宿主细胞。在另外的实施方案中，本发明提供其中多核苷酸可操作地与启动子缔 合的载体。在另外的实施方案中，本发明提供产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方 法，包括培养含有包含上述的多核苷酸的载体的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。在另 外的实施方案中，本发明提供由上述方法产生的分离的多肽。在一些实施方案中，本发明提供由上述的多核苷酸编码的分离的多肽。在上述多肽的另外的实施方案中，包含所述多肽的抗体或其片段特异性地结合至 RON。其它实施方案包括包含上述多肽的分离的抗体或其片段。在一些实施方案中，本发明提供一种包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编 码多核苷酸的组合物，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸分别包括编码与 选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 9 ；SEQ IDNO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQID NO 59 ； SEQ ID NO 64 和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ IDNO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94和 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO :115和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID NO 135 和 SEQ ID NO 140 ；以及 SEQ ID NO 145 和 SEQ IDNO 150 ；并且其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性地结合RON。在另 外的实施方案中，所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸分别包括编码选自由以下 组成的组的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ； SEQ ID N0:14和SEQ ID NO: 19 ；SEQ IDNO :24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO 54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84 禾口 SEQ IDNO 89 ；SEQ ID NO :94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID N0:115 禾口 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID N0:135 禾口 SEQ IDNO 140 ；以及 SEQ ID NO: 145 禾口 SEQ ID NO 150。在某些其它实施方案中，本发明提供一种包含分离的VH编码多核苷酸和分离的 VL编码多核苷酸的组合物，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸分别包括编 码除了少于20个保守性氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同的 氨基酸序列的核酸:SEQ IDNO :4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO :14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO :64 禾口 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ； SEQID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID NO 135 和 SEQ ID NO 140 ； 以及SEQ ID NO: 145和SEQ ID NO 150 ；并且其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗 体或其片段特异性地结合RON。在另外的实施方案中，所述VH编码多核苷酸编码包含选自由以下组成的组的 VH-CDRl、VH-CDR2 和 VH-CDR3 氨基酸序列的 VH 多肽SEQID NO :5、6 和 7 ;SEQ ID N0:15、 16 禾口 17;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID N0:85、86 和 87 ；SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID NO :116、117 和 118 ;SEQ ID NO : 126、127 和 128 ;SEQ ID NO : 136、137和138 ；以及SEQ IDNO 146、147禾口 148 ；其中所述VL编码多核苷酸编码包 含选自由以下组成的组的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的VL多肽SEQID NO 10、11和12· ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51和 52 ；SEQ ID NO :60、61和 62 ；SEQ ID NO :70、71和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQ ID NO 100、101 禾口 102 ;SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ;SEQ ID N0:141、142 禾口 143;以及 SEQ IDNO 151、152 禾口 153 ；并且 其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性地结合RON。在上述组合物的各种实施方案中，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述 抗体VH多肽的信号肽的核酸。在上述组合物的各种实施方案中，所述VL编码多核苷酸还包含编码融合于所述 抗体VL多肽的信号肽的核酸。在上述组合物的一些实施方案中，所述VH编码多核苷酸还包含编码融合于所述 VH多肽的重链恒定区CHl结构域的核酸，还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH2 结构域的核酸，还包含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH3结构域的核酸，或者还包 含编码融合于所述VH多肽的重链铰链区的核酸。在另外的实施方案中，所述重链恒定区选 自由人类IgG4、IgG4agly、IgGl和IgGlagly组成的组。在上述组合物的一些实施方案中，所述VL编码多核苷酸还包含编码融合于所述 VL多肽的轻链恒定区结构域的核酸。在另外的实施方案中，所述轻链恒定区是人类κ。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或 其片段特异性地结合与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、 M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、 1P4A3UP4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体相同的RON表位。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或 其片段竞争性地抑制选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、 M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、 1P4A3UP4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体与RON结合。在上述组合物的一些实施方案中，除了五个或更少的氨基酸取代以外，所述VH和 VL多肽的构架区是人类的。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其
32片段结合于线性表位或非线性构象表位。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段是多价的，并且包含至少两条重链和至少两条轻链。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段是多特异性的。在另外的实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段是双特异性的。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段包含为完全人类的重链和轻链可变结构域。在另外的实施方案中，所述重链和轻链 可变结构域与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E12组成的组的单克隆Fab抗体片段的重链和轻链可变结构域相同。在上述组合物的一些实施方案中，由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段包含为鼠的重链和轻链可变结构域。在另外的实施方案中，所述重链和轻链可变结构 域与选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的单克隆抗体的重链和轻链可 变结构域相同。在上述组合物的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段是人源化的。在上述组合物的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段是灵长源化的。在上述组合物的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段是嵌合的。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段是完全人类的。在上述组合物的各种实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段或Fv片段。在上述组合物的某些实施方案中， 包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结合片段是单链抗体。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段以解离常数(Kd)表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其片段、或RON变体多肽， 其中所述解离常数(Kd)不大于 5 X 1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5 X 1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5 X 1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5 X 1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段相对于鼠RON多肽或其片段优先地结合至人类RON多肽或其片段。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段结合至细胞表面上表达的RON。在另外的实施方案中，所述细胞是恶性细胞、赘生性 细胞、肿瘤细胞、转移性细胞或肿瘤相关巨噬细胞。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段阻断MSP与RON结合。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段抑制MSP依赖性RON活化。
33
在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段抑制非MSP依赖性RON活化。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段抑制Ras/MAPK信号传导途径的活化。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段抑制RON介导的ERK或AKT的磷酸化。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段抑制RON介导的细胞增殖、肿瘤细胞生长、肿瘤细胞迁移、肿瘤细胞侵入或肿瘤细胞 转移。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段诱导凋亡。在上述组合物的一些实施方案中，所述VH编码多核苷酸、所述VL编码多核苷酸、 或所述VH和VL编码多核苷酸二者还包含编码异源性多肽的核酸。在上述组合物的一些实施方案中，包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结 合片段轭合于选自由以下组成的组的剂细胞毒性剂、治疗剂、细胞抑制剂、生物毒素、前 体药物、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药物制剂、淋巴因子、异源性抗体或其片 段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、以及两种或两种以上任何所述剂的组合。在另外的实施方 案中，所述细胞毒性剂选自由以下组成的组放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞 抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免疫活性的配体、生物反应调节剂、或者两种或两种 以上任何所述细胞毒性剂的组合。在某些其它实施方案中，所述可检测标记选自由以下组 成的组酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记、或者两种或两种以上任 何所述可检测标记的组合。在上述组合物的一些实施方案中，所述VH编码多核苷酸包含在第一载体上且所 述VL编码多核苷酸包含在第二载体上。在另外的实施方案中，所述VH编码多核苷酸可操 作地与第一启动子缔合且所述VL编码多核苷酸可操作地与第二启动子缔合。在某些其它 实施方案中，所述第一启动子和所述第二启动子是相同启动子的拷贝。在另外的实施方案 中，所述第一启动子和所述第二启动子是不相同的。在上述组合物的各种实施方案中，所述第一载体和所述第二载体包含在单个宿主 细胞中。在上述组合物的某些其它实施方案中，所述第一载体和所述第二载体包含在分别 的宿主细胞中。在一些实施方案中，本发明提供一种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方 法，包括培养上述的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。在其它实施方案中，本发明提供一种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方 法，包括共培养分别的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。在上述方法的另外的实施方案 中，本发明提供组合所述VH编码多肽和VL编码多肽，并回收所述抗体或其片段。在一些实施方案中，本发明提供由上述的方法产生的一种特异性地结合RON的抗 体或其片段。在一些实施方案中，本发明提供组合物，其中所述VH和VL编码多核苷酸在同一载
34体上，以及所述组合物所在的载体。在上述载体的各种实施方案中，所述VH和VL编码多核苷酸各自可操作地与启动 子缔合。在上述载体的各种实施方案中，所述VH和VL编码多核苷酸在框内融合，从与其可 操作地缔合的单个启动子共转录，并共翻译为单链抗体或其抗原结合片段。在上述载体的各种实施方案中，所述VH和VL编码多核苷酸从与其可操作地缔合 的单个启动子共转录，但分别翻译。在另外的实施方案中，所述载体还包括安放在所述VH 编码多核苷酸与所述VL编码多核苷酸之间的IRES序列。在某些其它实施方案中，各自与 分别的启动子可操作地缔合的所述编码VH的多核苷酸和所述编码VL的多核苷酸分别转 录。在另外的实施方案中，所述分别的启动子是同一启动子的拷贝，或所述分别的启动子是 不相同的。在一些实施方案中，本发明提供包含上述载体的宿主细胞。在其它实施方案中，本发明提供一种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方 法，包括培养上述的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。在一些实施方案中，本发明提供一种由上述的方法产生的特异性地结合RON的抗 体或其片段。在一些实施方案中，本发明提供一种治疗动物的过度增生性病症的方法，包括向 需要治疗的动物施用包含以下组分的组合物a)如上述的分离的抗体或片段；和b)药学上 可接受的载体。在另外的实施方案中，所述过度增生性疾病或病症选自由癌症、赘生物、肿 瘤、恶性肿瘤、或其转移组成的组。在上述方法的各种实施方案中，所述抗体或其片段特异性地结合至恶性细胞表面 上表达的RON。在另外的实施方案中，所述抗体或其片段对恶性细胞的结合导致所述恶性细 胞的生长抑制。在上述方法的各种实施方案中，所述抗体或其片段抑制RON磷酸化或抑制肿瘤细 胞增殖。在另外的实施方案中，通过阻止或阻滞转移性生长而抑制肿瘤细胞增殖。在上述方法的各种实施方案中，所述抗体或其片段抑制肿瘤细胞迁移。在另外的 实施方案中，通过阻止或阻滞肿瘤向相邻组织扩散而抑制肿瘤细胞增殖。在上述方法的各种实施方案中，所述过度增生性疾病或病症是位于以下位置的赘 生物前列腺、结肠、腹部、骨、乳房、消化系统、肝脏、胰、腹膜、肾上腺、甲状旁腺、垂体腺、睾 丸、卵巢、胸腺、甲状腺、眼、头、颈、中枢神经系统、周围神经系统、淋巴系统、骨盆、皮肤、软 组织、脾脏、胸部、或泌尿生殖道。在上述方法的各种实施方案中，所述过度增生性疾病是癌症，所述癌症选自由以 下组成的组上皮鳞状细胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、脑癌、肺癌、胰腺癌、子宫颈 癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌和头颈癌。在 另外的实施方案中，所述癌症选自由胃癌、肾癌、脑癌、膀胱癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺 癌、卵巢癌和前列腺癌组成的组。在上述方法的各种实施方案中，所述动物是哺乳动物。在另外的实施方案中，所述 哺乳动物是人类。
3
图1显示与SW480细胞结合的抗体的代表性FACS结合曲线。图2A和2B显示单克隆鼠抗RON抗体和人类单克隆抗RON Fab对MSP与RON结合 的作用。图3A-3C显示抗RON抗体对MB-453乳腺癌细胞和BxPC_3胰腺癌细胞中MSP引起 的RON磷酸化的作用。图4A-C显示抗RON抗体对过表达野生型RON的293细胞、表达RON的组成型活化 的激酶结构域突变体的细胞和BxPC-3胰腺细胞中非MSP依赖性RON信号传导的作用。图5显示抗RON抗体对BxPC3和MDA-MB-453肿瘤细胞中pAKT磷酸化的作用。图6显示与表达人类RON剪接变体RON δ 160的细胞结合的抗体的FACS结合曲线。图7显示测量RON抗体对可溶性RON的结合的ELISA测定结果。图8显示与表达RON的293细胞结合的抗体的FACS结合曲线。图9是描绘测量与表达RON的CHO细胞结合的抗体的FACS测定结果的条形图。图10显示用RON抗体处理的肿瘤细胞中ERK和磷酸-ERK的蛋白质印迹。该条形 图显示利用抗体1P3B2. 2获得的蛋白质印迹中的结果定量。图IlA显示用RON抗体处理的肿瘤细胞中AKT和磷酸-AKT的蛋白质印迹。图IlB 描绘条形图，显示利用抗体1P3B2. 2获得的蛋白质印迹中的结果定量。图12显示未处理的、用对照抗体处理的、用MSP处理的、或用MSP和抗RON抗体处 理的各种肿瘤细胞中磷酸-AKT和磷酸-ERK的蛋白质印迹。图13A显示测量RON抗体与可溶性人类RON和cyno RON的结合的ELISA测定结 果。图13B和13C显示测量人类MSP与可溶性人类RON (图13C)和cyno (图13B) RON的结 合的ELISA结果。图 14A-C 显示利用 HT1080 和 HT1080-R0N(图 14A)、AGS (图 14B)禾PMDA-MB-231 (图 14C)细胞系的肿瘤细胞侵入测定结果。较高的条表示增加的细胞侵入。图15显示测量RON抗体对可溶性人类RON (Sema和PSI结构域)和RON的PSI结 构域的结合的ELISA测定结果。图16显示抗鼠RON抗体结合至表达鼠RON的293细胞的FACS结合曲线。图17A显示表达鼠RON的且用抗鼠RON抗体处理的CHO细胞中AKT和磷酸-AKT 的蛋白质印迹。图17B显示其定量。图18A-B显示抗鼠RON抗体和抗人类RON抗体与表达鼠RON蛋白(图18A)或人 类(图18B)RON蛋白的293细胞结合的FACS结合曲线。图19是显示在各种癌症细胞类型中RON表达水平和磷酸-ERK与磷酸-AKT的增 加的表格。图20显示展示施用了肿瘤细胞并用抗RON抗体治疗的SCID小鼠中肿瘤大小的 图。箭头表示施用抗体的时间点。发明详述I.定义注意术语“一个”实体是指一个或多个该实体；例如“RON抗体”理解为表示一个 或多个RON抗体。像这样，术语“一个)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换地使
如本文所用，术语“多肽”旨在涵盖单数的“多肽”以及复数的“多肽”，并且指的是 由被酰胺键(也被称作肽键)以线状连接的单体(氨基酸)所组成的分子。术语“多肽”是 指含两个或更多个氨基酸的任何链，并且不是指特定长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、低 聚肽、“蛋白”、“氨基酸链”或用来指两个或更多个氨基酸的链的任何其它术语被包括在“多 肽”的定义之中，而且术语“多肽”可替代这些术语中的任何一个使用或者可与这些术语中 的任何一个互换地使用。术语“多肽”也意指多肽的表达后修饰的产物，所述修饰包括但不 限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、由已知的保护/封端基团进行的衍生作用、蛋白酶剪 切或由非天然存在的氨基酸进行的修饰。多肽可由天然生物来源得到或由重组技术产生， 但不一定是从指定的核酸序列翻译而来。它能够以任何方式产生，包括通过化学合成。本发明的多肽可以具有大约3个或更多个、5个或更多个、10个或更多个、20个或 更多个、25个或更多个、50个或更多个、75个或更多个、100个或更多个、200个或更多个、 500个或更多个、1，000个或更多个或者2，000个或更多个氨基酸的大小。多肽可具有确定 的三维结构，虽然它们不一定具有这种结构。具有确定的三维结构的多肽被称为是折叠的， 而不具有确定的三维结构的多肽反而能够采用大量不同构象并且被称为是未折叠的。如本 文所用，术语糖蛋白是指与至少一个碳水化合物部分偶联的蛋白，其中所述碳水化合物部 分是通过氨基酸残基例如丝氨酸残基或天冬酰胺残基的含氧或含氮侧链连接至蛋白的。“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物意为不处于其天然环境的多肽。不需要特 定水平的纯化。例如，分离的多肽可从其天生的或天然的环境中取出。表达在宿主细胞中 的重组产生的多肽和蛋白被认为是为了本发明的目的而分离的，就像已通过任何适合的技 术而分离、分馏或者部分地或基本上纯化的天生或重组多肽一样。本发明的多肽还包括前述多肽的片段、衍生物、类似物或变体及其任意组合。当指 本发明的RON抗体或抗体多肽时，术语“片段”、“变体”、“衍生物，，和“类似物，，包括保留相 应的天然抗体或多肽的至少一些抗原结合特性的任何多肽。本发明多肽的片段包括蛋白酶 解片段以及缺失片段，另外还包括本文在别处所讨论的具体抗体片段。本发明的RON抗体 和抗体多肽的变体包括上述的片段，并且还包括含有由于氨基酸取代、缺失或插入所致的 氨基酸序列改变的多肽。变体可天然地存在或非天然地存在。可以使用领域已知的诱变技 术产生非天然地存在的变体。变体多肽可包括保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。 本发明的RON抗体和抗体多肽的衍生物是已被改变以表现未见于天然多肽的其它特征的 多肽。实例包括融合蛋白。变体多肽在本文还称为“多肽类似物”。如本文所用，RON抗体 或抗体多肽的“衍生物”是指具有通过功能侧基的反应而化学衍生出的一个或多个残基的 主题多肽。还包括为“衍生物”的是包含二十种标准氨基酸的一种或多种自然产生的氨基酸 衍生物的肽。例如，4-羟基脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲 基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸；以及鸟氨酸可以取代赖氨酸。术语“多核苷酸”旨在涵盖单数的核酸以及复数的核酸，并且是指分离的核酸分子 或构建体，例如信使RNA (mRNA)或质粒DNA (pDNA)。多核苷酸可包括常规的磷酸二酯键或 非常规的键(例如酰胺键，像在肽核酸(PNA)中发现的)。术语“核酸”是指任何一个或多 个核酸区段，例如存在于多核苷酸中的DNA或RNA片段。“分离的”核酸或多核苷酸是指从 其天生环境被取出的核酸分子、DNA或RNA。例如，为了本发明的目的，包含在载体中的编码
37RON抗体的重组多核苷酸被视为分离的。分离的多核苷酸的另外的实例包括被保持在异源 宿主细胞中的重组多核苷酸或溶液中的(部分地或基本上)纯化的多核苷酸。分离的RNA 分子包括本发明多核苷酸的体内或体外RNA转录物。根据本发明的分离的多核苷酸或核酸 还包括通过合成而产生的那些分子。另外，多核苷酸或核酸可以是调节元件或者可以包括 调节元件，例如启动子、核糖体结合位点或转录终止子。如本文所用，“编码区”是由翻译为氨基酸的密码子所组成的核酸分子的一部分。 虽然“终止密码子”(TAG、TGA或TAA)未被翻译为氨基酸，但它可被视为编码区的一部分，然 而任何旁侧序列例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子以及诸如此类不是编码 区的一部分。本发明的两个或多个编码区可存在于单个多核苷酸构建体中例如在单个载体 上，或者在分别的多核苷酸构建体中例如在分别的(不同的)载体上。此外，任何载体可含 有单个编码区，或者可包括两个或更多编码区，例如单个载体可分别编码免疫球蛋白重链 可变区和免疫球蛋白轻链可变区。另外，本发明的载体、多核苷酸或核酸可编码异源性编码 区，所述异源性编码区被融合或未被融合至编码RON抗体或其片段、变体或衍生物的核酸。 异源性编码区包括但不限于专门的元件或模体，例如分泌信号肽或异源性功能域。在某些实施方案中，所述多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情况下，包括编码多肽 的核酸在内的多核苷酸通常可包含与一个或多个编码区可操作地缔合的启动子和/或其 它转录或翻译控制元件。可操作的缔合是指基因产物例如多肽的编码区以这样一种方式与 一个或多个调节序列相缔合以将该基因产物的表达置于所述一个或多个调节序列的影响 或控制之下。两个DNA片段(例如多肽编码区和与之相缔合的启动子)是“可操作地缔合 的”，如果启动子功能的诱导导致编码期望的基因产物的mRNA的转录并且如果这两个DNA 片段之间的连接的性质不干扰表达调节序列指导该基因产物的表达的能力或不干扰DNA 模板被转录的能力的话。因此，可将启动子区与编码多肽的核酸可操作地缔合，如果所述启 动子能够实现该核酸的转录。所述启动子可以是只在预先确定的细胞中指导DNA的大量转 录的细胞特异性启动子。除了启动子之外的其它转录控制元件，例如增强子、操纵子、阻抑 物和转录终止信号，能够与多核苷酸可操作地缔合以指导细胞特异性转录。适合的启动子 和其它转录控制区公开在本文中。本领域技术人员知道各种转录控制区。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中起作 用的转录控制区，例如但不限于来自如下病毒的启动子和增强子区段细胞巨化病毒(与 内含子A—起的立即早期启动子)、猿猴病毒40(早期启动子)和逆转录病毒(例如劳氏肉 瘤病毒)。其它的转录控制区包括源自脊椎动物基因的那些，例如肌动蛋白、热激蛋白、牛生 长激素和兔球蛋白，以及能够控制真核细胞中的基因表达的其它序列。另外的适合的 转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导的启动子(例如可被干扰 素或白细胞介素诱导的启动子)。相似地，各种翻译控制元件是本领域普通技术人员已知的。这些包括但不限于核 糖体结合位点、翻译起始密码子和终止密码子以及源自微小RNA病毒的元件(特别是内部 核糖体进入位点或IRES，其也被称作CITE序列)。在其它的实施方案中，本发明的多核苷酸是RNA，例如以信使RNA (mRNA)的形式。本发明的多核苷酸和核酸编码区可与编码分泌肽或信号肽的另外的编码区相缔 合，其中所述分泌肽或信号肽指导由本发明的多核苷酸编码的多肽的分泌。根据信号假说，由哺乳动物细胞分泌的蛋白具有信号肽或分泌前导序列，其在生长中的蛋白链跨粗面内质 网输出被启动时从成熟蛋白上被切下。本领域普通技术人员知道，由脊椎动物细胞分泌的 多肽通常具有融合至所述多肽N端的信号肽，其从完整的或“全长”的多肽被切下以产生分 泌的或“成熟的”形式的多肽。在某些实施方案中，使用天然的信号肽例如免疫球蛋白重链 或轻链信号肽，或者该序列的功能衍生物，所述功能性衍生物保持了指导与之可操作地缔 合的多肽分泌的能力。或者，可以使用异源性哺乳动物信号肽或其功能性衍生物。例如，可 以用人类组织纤溶酶原激活剂(TPA)或小鼠葡萄糖醛酸酶的前导序列取代野生型前导 序列。本发明还涉及某些RON抗体、或其抗原结合片段、变体或衍生物。除非具体地指原 尺寸的抗体诸如自然产生的抗体，否则术语“RON抗体”涵盖原尺寸的抗体以及这样的抗体 的抗原结合片段、变体、类似物或衍生物，例如，以类似于抗体分子的方式结合抗原的天然 产生的抗体或免疫球蛋白分子或改造的抗体分子或片段。术语“抗体”和“免疫球蛋白，，在本文中被互换地使用。抗体或免疫球蛋白至少包 含重链的可变结构域，并且通常至少包含重链和轻链的可变结构域。脊椎动物系统中基本 的免疫球蛋白结构被理解得相对较好。参见，例如Harlow等人，Antibodies =A Laboratory Manual (抗体实验手册)，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第 2 版，1988)。下面将更详细地讨论到，术语“免疫球蛋白”包括可通过生物化学手段区别的各 种广泛类别的多肽。本领域技术人员将理解，重链被分类为gamma、mu、alpha、delta或 epsilon(y , μ、α、δ、ε )以及它们中的一些亚类(例如，Y 1_ Y 4)。此链的性质决定抗体 的“类别”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)例如IgGl、IgG2、 IgG3、IgG4、IgAl等被很好地表征并已知给予功能专门化。这些类别和同种型的各自的修 饰形式是可由技术人员鉴于本公开而容易辨别的，并且因此在本发明的范围内。所有的免 疫球蛋白类别都清楚地在本发明的范围内，下面的讨论通常将针对免疫球蛋白分子的IgG 类别。关于IgG，标准的免疫球蛋白分子包含两个分子量大约为23，000道尔顿的相同的轻 链多肽和两个分子量为53，000-70, 000的相同的重链多肽。这四条链通常被二硫键以“Y” 构型连结，其中所述轻链支撑所述重链，其中所述重链从“Y”的口开始并延伸通过可变区。轻链被分类为kappa或lambda(K，λ)。每个重链类别可与κ或λ轻链结合。 通常，轻链和重链互相以共价键相连，并且当免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或基因工程改造 的宿主细胞产生时，两条重链的“尾”部由共价的二硫键连接或非共价的连接相连。在重链 中，氨基酸序列从处于Y构型叉端的N端向处于每条链底部的C端延伸。轻链和重链均被划分成结构和功能同源的一些区域。术语“恒定”和“可变”是就 功能而言使用的。就此而言，将理解轻链(VL)和重链(VH)部分的可变结构域均决定抗原 的识别和特异性。相反地，轻链的恒定结构域(CL)和重链的恒定结构域(CH1、CH2或CH3) 赋予重要的生物特性，诸如分泌、经胎盘移动、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区 结构域的编号随着它们离抗原结合位点或抗体的氨基端更远而增加。N端部分是可变区，而 在C端部分是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基端。如上指出，可变区允许抗体选择性地识别并特异性地结合抗原上的表位。也就是 说，抗体的VL结构域和VH结构域，或者多个互补决定区(CDR)的亚组联合形成定义三维抗 原结合位点的可变区。这种四级抗体结构形成存在于Y每条臂末端的抗原结合位点。更
39具体地，抗原结合位点是由在每条VH和VL链上的三个⑶R所定义的。在一些情况下，例 如来源于骆驼科动物物种或根据骆驼科动物免疫球蛋白工程化的某些免疫球蛋白分子，完 整的免疫球蛋白分子可以只由重链组成而不含轻链。参见，例如Hamers-Casterman等人， Nature 363 446-448(1993)。在天然存在的抗体中，各抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是 当抗体采取它在水环境中的三维构型时被特定地设置以形成抗原结合结构域的短的、不连 续的氨基酸序列。抗原结合结构域中余下的氨基酸显示较少的分子间差异性，称作“构架” 区。构架区很大程度地采用β折叠构象而且⑶R形成环，所述环连接β折叠结构并且在一 些情况下形成β折叠结构的一部分。因此，构架区起到形成支架的作用，所述支架有助于 通过链间非共价相互作用而将六个CDR置于正确的方向。由放置的CDR形成的抗原结合结 构域确定与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补的表面促进抗体与其同类表位的 非共价结合。对任何给定的重链或轻链可变区，分别包含CDR和构架区的氨基酸可由本领 域普通技术人员容易地识别，因为它们已被准确地界定(参见，“Sequence of Proteinsof Immunological Interest (免疫学上重要蛋白的序列)"Kabat，Ε.等人，美国卫生和服务部 (U. S. Department of Health and Human Services)，(1983)；以及 Chothia禾口 Lesk，J. Mol. Biol.，196 :901-917(1987)，其全文以引用的方式并入本文)。在本领域中使用和/或公认术语的存在两种或两种以上定义的情况下，除非明确 说明相反，否则如本文所用的术语的定义意为包括所有这样的含义。具体的实例是使用术 语“互补决定区”(“CDR”)来描述见于重链和轻链多肽二者的可变区中的不连续抗原组合 位点。这一特定区域已经描述在Kabat等人，美国卫生和服务部，“Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest (免疫学上重要蛋白的序列)”(1983)和 Chothia 等人，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)，其以引用的方式并入本文，其中定义包括彼此比较时氨基酸残 基的重叠或亚组。然而，应用任一种定义来指抗体或其变体的CDR意为在本文定义和使用 的术语的范围之内。包含以上引用的参考文献定义的CDR的适当的氨基酸残基列在下表1 中作为比较。包含特定CDR的准确残基数将依赖于CDR的序列和大小而变化。给出抗体的 可变区氨基酸序列时，本领域技术人员可常规地确定哪些残基包含特定⑶R。表1.CDR 定义权利要求
一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合至与选自由M14 H06、M15 E10、M16 C07、M23 F10、M80 B03、M93 D02、M96 C05、M97 D03和M98 E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体相同的RON表位。
2.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段 竞争性地抑制选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、 1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体与RON结合。
3.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段 包含与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和M98-E12组成的组的单克隆Fab抗体片段或选自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B 10组成的组的参考单克隆抗体的抗原结合结构域相同的抗原结合结构域。
4.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的重链可 变区(VH)包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO: 14、SEQ IDNO 24,SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44,SEQ ID NO 54,SEQ ID NO 64,SEQ ID NO 74,SEQ ID NO 84,SEQ ID NO 94,SEQ ID NO: 115、SEQ IDNO : 125、 SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO : 145。
5.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的轻链可 变区(VL)包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 19、SEQ IDNO 29,SEQ ID NO 39,SEQ ID NO 49,SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID NO: 120、SEQ IDNO : 130、 SEQ ID N0:140 和 SEQ ID NO : 150。
6.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH包含 除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同 的氨基酸序歹Ij :SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 14、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO :44、 SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ IDNO 115、SEQ ID NO 125,SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID NO 145。
7.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VL包含 除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同 的氨基酸序歹Ij :SEQ ID N0:9、SEQ IDNO 19,SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO :49、 SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID N0: 120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO 150。
8.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH包含 选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44、SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO 115, SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO 145。
9.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VL包含 选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 39,SEQ ID NO 49、SEQ IDNO 59、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 89、SEQ IDNO 99, SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO: 150。
10.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH和 VL分别包含与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 115 禾口 SEQ ID NO :120、SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130、SEQ IDNO 135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ο
11.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH和 VL各自除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外，分别包含与选自由以下组成的组的参 考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQID NO 4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14和SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO 34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO 44 和 SEQTD NO 49 ；SEQ ID NO 54 和 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 和 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94和 SEQ ID NO :99、 SEQ ID N0:115 和 SEQ ID NO :120、SEQID N0:125 禾口 SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 和 SEQ ID NO 150。
12.—种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH和 VL分别包含选自由以下组成的组的氨基酸序列SEQ IDNO 4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34和 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO 44 禾口 SEQID NO 49 ；SEQ ID NO 54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94禾口 SEQ ID NO :99、SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO :120、SEQID NO 125 和 SEQ ID NO :130、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 和 SEQ ID N0:150。
13.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VH包含除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考重链互补决定 区-1 (VH-CDRl)氨基酸序列相同的KabatVH-CDRl氨基酸序列=SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 15,SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO :65、SEQ IDNO 75,SEQ ID N0:85、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 和 SEQ ID NO :146。
14.根据权利要求13所述的抗体或其片段，其中所述VH-CDRl氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID N0:5、SEQ ID NO 15,SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55,SEQ ID N0:65、SEQ ID NO 75,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO :116、 SEQ IDNO :126、SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID N0:146。
15.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VH包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考重链互补决定 区-2(VH-CDR2)氨基酸序列相同的KabatVH-CDR2氨基酸序列SEQ ID NO :6、SEQ ID N0: 16,SEQ ID NO 26,SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ IDNO 76,SEQ ID NO 86,SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 117,SEQ ID NO 127、SEQ ID N0:137 和 SEQID NO :147。
16.根据权利要求15所述的抗体或其片段，其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56, SEQ ID NO 66, SEQ ID NO 76, SEQ ID NO 86, SEQ ID NO 96, SEQ ID NO :117、 SEQID NO: 127、SEQ ID NO: 137 和 SEQ ID NO: 147。
17.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VH包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考重链互补决定 区-3(VH-CDR3)氨基酸序列相同的KabatVH-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :7、SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ IDNO 77,SEQ ID N0:87、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138 和 SEQ ID NO :148。
18.根据权利要求17所述的抗体或其片段，其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID N0:7、SEQ ID NO 17,SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57,SEQ ID NO 67,SEQ ID NO 77,SEQ ID NO87,SEQ ID N0:97、SEQ ID NO 118、 SEQID N0:128、SEQ ID N0:138 和 SEQ ID NO 148。
19.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VL包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考轻链互补决定 区-I(VL-CDRl)氨基酸序列相同的 KabatVL-CDRl 氨基酸序列=SEQ ID NO 10、SEQ ID N0: 20,SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 70、SEQ IDNO 80,SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 121,SEQ IDNO 131、SEQ ID N0:141和 SEQ ID NO :151。
20.根据权利要求19所述的抗体或其片段，其中所述VL-CDRl氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、 SEQ ID NO 60,SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 100,SEQ ID N0:121、SEQIDNO:131、SEQ ID NO: 141 禾口 SEQ ID NO 151。
21.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VL包含除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考轻链互补决定 区-2(VL-CDR2)氨基酸序列相同的KabatVL-CDR2氨基酸序列=SEQ ID NO =IUSEQ ID N0: 21、SEQ ID N0:31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ IDNO 81,SEQ ID N0:91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO : 122、SEQ IDNO 132,SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。
22.根据权利要求21所述的抗体或其片段，其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、 SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO:122、SEQIDN0:132、SEQ ID N0:142 禾口 SEQ ID NO :152。
23.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的 VL包含除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考轻链互补决定 区-3(VL-CDR3)氨基酸序列相同的 KabatVL-CDR3 氨基酸序列=SEQ ID NO :12、SEQ ID NO: 22,SEQ ID NO 32,SEQ ID NO 42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ IDNO `82、SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :102、SEQ ID NO :123、SEQ ID NO :133、SEQ ID NO 143 和 SEQ ID NO :153ο
24.根据权利要求23所述的抗体或其片段，其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自由以下 组成的组SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、 SEQ ID N0:62、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO: 123、SEQID NO:133、SEQ ID NO: 143 禾口 SEQ ID NO 153。
25.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中除了在所述VH-CDR中的至 少一个上的一个、二个、三个或四个氨基酸取代以外，所述抗体或其片段的VH包含选自由 以下组成的组的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 禾口 47 ； SEQ ID NO :55、56 和 57 ；SEQ ID NO :65、66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、 86 和 87 ；SEQ ID NO :95、96 和 97 ；SEQID NO :116、117 禾口 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ； SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO 146,147 ^P 148。
26.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VH包 含选自由以下组成的组的VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6和7 ； SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、 46 和 47;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQID NO :116、117 禾口 118;SEQ ID N0:126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148。
27.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中除了在所述VL-⑶R中的至 少一个上的一个、二个、三个或四个氨基酸取代以外，所述抗体或其片段的VL包含选自由 以下组成的组的VL-CDRU VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列:SEQ ID NO :10、11和12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID N0:50、51 禾口 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQID NO :80、81 和 82 ；SEQ ID NO 90,91和 92 ；SEQ ID NO :100、101 禾口 102 ；SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 和 133 ;SEQ IDNO 141、142 禾口 143;以及 SEQ ID N0:151、152 和 153。
28.一种特异性地结合至RON的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的VL包 含选自由以下组成的组的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列=SEQ ID NO :10、11和 12 ；SEQ ID NO :20、21和 22 ；SEQ ID NO :30、31和 32 ；SEQ ID NO :40、41和 42 ；SEQ ID NO 50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 禾口 72 ;SEQ ID NO :80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQ ID NO :100、101 禾口 102 ;SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ;SEQ ID NO: 131,132 禾口 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 禾口 153。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的抗体或其片段，其中除了五个或更少的氨基 酸取代以外，所述VH构架区是人类的。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的抗体或其片段，其中除了五个或更少的氨基 酸取代以外，所述VL构架区是人类的。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段结合至线 性表位。
32.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段结合至非线性构象表位。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是多价的， 并包含至少两条重链和至少两条轻链。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是多特异 性的。
35.根据权利要求34所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是双特异性的。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是双特异 性的。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，其中所述重链和轻链可变结 构域是鼠的。
38.根据权利要求37所述的抗体或其片段，其中所述重链和轻链可变结构域来自选自 由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的单克隆抗体。
39.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，其中所述重链和轻链可变结 构域是完全人类的。
40.根据权利要求39所述的抗体或其片段，其中所述重链和轻链可变结构域来自选自 由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 组成的组的单克隆Fab抗体片段。
41.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是人源化的。
42.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是嵌合的。
43.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是灵长源 化的。
44.根据权利要求1至36中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是完全人 类的。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是Fab片段。
46.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是Fab’片段。
47.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是F(ab) 2 片段。
48.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是Fv片段。
49.根据权利要求1至44中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段是单链抗体。
50.根据权利要求1至46和49中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段包含 选自由人类κ恒定区和人类λ恒定区组成的组的轻链恒定区。
51.根据权利要求1至46和49中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段包含 重链恒定区或其片段。
52.根据权利要求51所述的抗体或其片段，其中所述重链恒定区或其片段选自由人类IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly 组成的组。
53.根据权利要求1至52中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段以小于所 述参考单克隆抗体的解离常数(KD)的KD所表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其片 段、或RON变体多肽。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段以解离常 数(KD)所表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其片段、或RON变体多肽，其中所述解 离常数(KD)不大于 5 X 10-2M、10-2M、5 X 10-3M、10-3M、5 X 10-4M、10-4M、5 X 10-5M、10-5M、 5X10-6M、10-6M、5X 10-7M、10-7M、5X10-8M、10-8M、5X10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、 5X10-11M、10-11M、5X 10-12M、10-12M、5X10-13M、10-13M、5X10-14M、10-14M、5X10-15M 或 10-15M。
55.根据权利要求1至54中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段相对于鼠 RON多肽或其片段优先地结合至人类RON多肽或其片段。
56.根据权利要求1至55中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段结合至细 胞表面上表达的RON。
57.根据权利要求56所述的抗体或其片段，其中所述细胞是恶性细胞、赘生性细胞、肿 瘤细胞、转移性细胞或肿瘤相关巨噬细胞。
58.根据权利要求1至57中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段阻断MSP 与RON结合。
59.根据权利要求1至58中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制MSP 依赖性RON活化。
60.根据权利要求1至59中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制非 MSP依赖性RON活化。
61.根据权利要求1至60中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制RON 介导的RAS/MAPK信号传导途径的活化。
62.根据权利要求1至61中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制RON 介导的ERK或AKT的磷酸化。
63.根据权利要求1至62中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制RON 介导的细胞增殖。
64.根据权利要求1至63中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段抑制肿瘤 细胞生长、肿瘤细胞侵入或肿瘤细胞转移。
65.根据权利要求1至64中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段诱导凋亡。
66.根据权利要求1至65中任一项所述的抗体或其片段，所述抗体或其片段还包含与 其融合的异源性多肽。
67.根据权利要求1至66中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体轭合于选自由 以下组成的组的剂细胞毒性剂、治疗剂、细胞抑制剂、生物毒素、前体药物、肽、蛋白、酶、病 毒、脂质、生物反应调节剂、药物剂、淋巴因子、异源性抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇 (PEG)、和两种或两种以上任何所述剂的组合。
68.根据权利要求67所述的抗体或其片段，其中所述细胞毒性剂选自由以下组成的 组放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免7疫活性的配体、生物反应调节剂、或者两种或两种以上任何所述细胞毒性剂的组合。
69.根据权利要求68所述的抗体或其片段，其中所述可检测标记选自由以下组成的 组酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记、或者两种或两种以上任何所 述可检测标记的组合。
70.一种组合物，所述组合物包含权利要求1至69中任一项所述抗体或其片段和载体。
71.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所 述VH多肽的氨基酸序列与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14,SEQ ID NO 24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ IDNO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :115、SEQ ID N0125、SEQ ID N0:135和SEQ ID NO : 145 ；并且其中包含所述VH多肽的抗体或其抗原结合片段特异性 地结合至RON。
72.根据权利要求71所述的多核苷酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列选自由以下组成 的组SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 24, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO 44, SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ IDNO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :115、SEQ ID NO 125, SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID N0:145。
73.根据权利要求71或72所述的多核苷酸，其中编码所述VH多肽的核苷酸序列被优 化以增加所述VH多肽的表达而不改变其氨基酸序列。
74.根据权利要求73所述的多核苷酸，其中所述优化包括识别和移除剪接供体位点和 剪接受体位点。
75.根据权利要求73或74所述的多核苷酸，其中所述优化包括表达所述多核苷酸细胞 的密码子使用的优化。
76.根据权利要求71至75中任一项所述的多核苷酸，其中所述核酸包含选自由以下 组成的组的核苷酸序列:SEQ ID N0:3、SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 23、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO 43,SEQ ID NO :53、SEQ IDNO :63、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO :93、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 134 和 SEQ ID NO: 144。
77.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所 述VL多肽的氨基酸序列与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列至少90%相同SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19,SEQ ID NO 29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO 69,SEQ IDNO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 130、SEQ ID N0:140和SEQ ID NO : 150 ；并且其中包含所述VL多肽的抗体或其抗原结合片段特异性 地结合至RON。
78.根据权利要求77所述的多核苷酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列选自由以下组成 的组SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 29, SEQ ID NO 39, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ IDNO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ ID NO :120、SEQ ID N0:130、SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO: 150。
79.根据权利要求77或78所述的多核苷酸，其中编码所述VL多肽的核苷酸序列被优 化以增加所述VL多肽的表达而不改变其氨基酸序列。
80.根据权利要求79所述的多核苷酸，其中所述优化包括识别和移除剪接供体位点和 剪接受体位点。
81.根据权利要求79或80所述的多核苷酸，其中所述优化包括表达所述多核苷酸细胞 的密码子使用的优化。
82.根据权利要求77至81中任一项所述的多核苷酸，其中所述核酸包含选自由以下 组成的组的核苷酸序列:SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 28、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO 48,SEQ ID NO :58、SEQ IDNO :68、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :98、SEQ ID N0:119、SEQ ID NO 129, SEQ ID N0:139 和 SEQ ID N0:149。
83.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所 述VH多肽的氨基酸序列除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考氨基酸序列相同:SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO 44,SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO :94、SEQ ID N0:115、SEQ ID NO 125、SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID NO : 145 ；并且其中包含所述 VH 多 肽的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
84.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所 述VL多肽的氨基酸序列除了 20个或更少的保守性氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考氨基酸序列相同:SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO 49,SEQ IDNO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ ID N0:120、SEQ ID NO : 130、SEQ ID NO 140 ^P SEQ ID NO : 150 ；并且其中包含所述 VL 多 肽的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
85.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VH-CDRl氨基酸序列的核酸， 其中所述VH-CDRl氨基酸序列除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考 VH-CDRl 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO : 25、SEQ ID NO:35、SEQIDNO :45、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO 95,SEQ ID N0:116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID NO : 146 ；并且其中包含 所述VH-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
86.根据权利要求85所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDRl氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID N0:5、SEQ ID NO 15、SEQ IDNO 25、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO :45、 SEQ ID NO55,SEQ ID NO 65,SEQ ID NO75,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO95,SEQ ID NO:116、SEQIDN0:126、SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID NO : 146。
87.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VH-CDR2氨基酸序列的核酸， 其中除了四个或更少的氨基酸取代以外，所述VH-CDR2氨基酸序列与选自由以下组成的组 的参考 VH-CDR2 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO:36、SEQID NO :46、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ IDNO :86、SEQ ID NO 96,SEQ ID NO :117、SEQ ID NO 127,SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID NO : 147 ；并且其中包含 所述VH-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
88.根据权利要求87所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDR2氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 16,SEQ IDNO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO :46、 SEQ ID N0:56、SEQ ID NO 66, SEQ ID NO : 76、SEQ ID NO 86, SEQ ID NO : 96、SEQ ID NO:117、SEQIDN0:127、SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID NO : 147。
89.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VH-CDR3氨基酸序列的核酸，其中所述VH-CDR3氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考 VH-CDR3 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 17,SEQ ID NO 27、SEQ ID NO: 37、SEQ IDNO :47、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO -JrJ、SEQ ID NO :87、SEQ ID NO 97,SEQ ID N0:118、SEQ ID NO 128 ；SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO : 148 ；并且其中包含 所述VH-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
90.根据权利要求89所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDR3氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :17、SEQ IDNO :27、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :47、 SEQ ID NO57,SEQ ID NO 67,SEQ ID NO77,SEQ ID NO 87,SEQ ID NO97,SEQ ID NO: 118、SEQID NO 128 ；SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO : 148。
91.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VL-CDRl氨基酸序列的核酸， 其中所述VL-CDRl氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考 VL-CDRl 氨基酸序列相同:SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO 40,SEQ IDNO 50,SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO :100、SEQ ID NO :121、SEQ ID NO :131、SEQ FD NO 141 和 SEQ ID NO 151 ；并且其中包 含所述VL-CDRl的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
92.根据权利要求91所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDRl氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ IDNO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO 50、SEQID NO60,SEQ ID NO 70,SEQ ID NO80,SEQ ID NO 90,SEQ ID N0:100、SEQ ID NO: 121、SEQID NO: 131、SEQ ID NO 141 和 SEQ ID NO 151。
93.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VL-CDR2氨基酸序列的核酸， 其中所述VL-CDR2氨基酸序列除了两个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考 VL-CDR2 氨基酸序列相同SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID N0:41、SEQ IDN0:51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ ID NO 101 ；SEQ ID NO :122、SEQ ID NO :132、SEQ ID NO 142 和 SEQ ID NO 152 ；并且其中包 含所述VL-CDR2的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
94.根据权利要求93所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDR2氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ IDNO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO 51、SEQID N0:61、SEQ ID N0:71、SEQ ID N0:81、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO 101 ；SEQ ID NO: 122、SEQID NO: 132、SEQ ID NO: 142 和 SEQ ID NO : 152。
95.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码VL-CDR3氨基酸序列的核酸， 其中所述VL-CDR3氨基酸序列除了四个或更少的氨基酸取代以外与选自由以下组成的组 的参考 VL-CDR3 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO 42,SEQ IDNO 52,SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO :102、SEQ ID NO :123、SEQ ID NO :133、SEQ ID NO 143 和 SEQ ID NO 153 ；并且其中包 含所述VL-CDR3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
96.根据权利要求95所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDR3氨基酸序列选自由 以下组成的组SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO 52、SEQID N0:62、SEQ ID NO 72, SEQ ID N0:82、SEQ ID NO 92, SEQ ID NO 102, SEQ ID NO :123、SEQID NO 133, SEQ ID N0:143 和 SEQ ID N0:153。
97.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VH多肽的核酸，其中所 述VH多肽包含选自由以下组成的组的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID N0:35、36 和 37; SEQID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、 76 禾口 77;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID NO :116、117 和 118 ;SEQ ID N0:126、127 和 128 ；SEQID N0:136、137 禾口 138;以及 SEQ ID NO 146,147 ^P 148 ；并且 其中包含所述VH-⑶R3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
98.一种分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码抗体VL多肽的核酸，其中所 述VL多肽包含选自由以下组成的组的VL-⑶Rl、VL-⑶R2和VL-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ；SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ； SEQID NO :50、51 和 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQ ID NO :80、 81 和 82 ；SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ；SEQ ID NO :100、101 和 102 ；SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ； SEQ ID NO :131、132 和 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 和 153 ； 并且其中包含所述VL-⑶R3的抗体或其抗原结合片段特异性地结合至RON。
99.根据权利要求71至98中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述抗体VH 多肽的信号肽的核酸。
100.根据权利要求71至98中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述抗体VL 多肽的信号肽的核酸。
101.根据权利要求71至100中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述VH多 肽的重链恒定区CHl结构域的核酸。
102.根据权利要求71至101中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述VH多 肽的重链恒定区CH2结构域的核酸。
103.根据权利要求71至102中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述VH多 肽的重链恒定区CH3结构域的核酸。
104.根据权利要求71至103中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述VH多 肽的重链铰链区的核酸。
105.根据权利要求101至104中任一项所述的多核苷酸，其中所述重链恒定区选自由 以下组成的组人类 IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly0
106.根据权利要求71至105中任一项所述的多核苷酸，还包含编码融合于所述VL多 肽的轻链恒定区结构域的核酸。
107.根据权利要求106所述的多核苷酸，其中所述轻链恒定区是人类κ。
108.根据权利要求71至107中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段特异性地结合与选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体相同的RON表位。
109.根据权利要求71至108中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的 多肽的抗体或其抗原结合片段竞争性地抑制选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体。
110.根据权利要求71至109中任一项所述的多核苷酸，其中除了五个或更少的氨基酸 取代以外，所述VH多肽的构架区是人类的。
111.根据权利要求71至110中任一项所述的多核苷酸，其中除了五个或更少的氨基酸 取代以外，所述VL多肽的构架区是人类的。
112.根据权利要求71至111中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段结合于线性表位。
113.根据权利要求71至112中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段结合于非线性构象表位。
114.根据权利要求71至113中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是多价的，并包含至少两条重链和至少两条轻链。
115.根据权利要求71至114中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是多特异性的。
116.根据权利要求71至115中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是双特异性的。
117.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段包含为完全人类的重链和轻链可变结构域。
118.根据权利要求117所述的多核苷酸，其中所述重链和轻链可变结构域与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 组 成的组的单克隆Fab抗体片段的重链和轻链可变结构域相同。
119.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段包含鼠的重链和轻链可变结构域。
120.根据权利要求119所述的多核苷酸，其中所述重链和轻链可变结构域与选自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的单克隆抗体的重链和轻链可变结构域相 同。
121.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是人源化的。
122.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是嵌合的。
123.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是灵长源化的。
124.根据权利要求71至116中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是完全人类的。
125.根据权利要求71至124中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是Fab片段。
126.根据权利要求71至124中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是Fab’片段。
127.根据权利要求71至124中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是F (ab) 2片段。
128.根据权利要求71至124中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多肽的抗体或其抗原结合片段是Fv片段。
129.根据权利要求71至124中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段是单链抗体。
130.根据权利要求71至129中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的 多肽的抗体或其抗原结合片段以解离常数(KD)所表征的亲和力特异性地结合至RON多肽 或其片段、或RON变体多肽，所述解离常数(KD)不大于5X10-2M、10-2M、5X10-3M、10-3M、 5X 10-4M、10-4M、5X 10-5M、10-5M、5X 10-6M、10-6M、5X 10-7M、10-7M、5X 10-8M、10-8M、 5X 10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X10-12M、10-12M、5X 10-13M、 10-13M、5X 10-14M、10-14M、5X 10-15M 或 10-15M。
131.根据权利要求71至130中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段相对于鼠RON多肽或其片段优先地结合至人类RON多肽或其片 段。
132.根据权利要求71至131中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段结合于细胞表面上表达的RON。
133.根据权利要求132所述的多核苷酸，其中所述细胞是恶性细胞、赘生性细胞、肿瘤 细胞、转移性细胞或肿瘤相关巨噬细胞。
134.根据权利要求71至133中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段阻断MSP与RON结合。
135.根据权利要求71至134中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制MSP依赖性RON活化。
136.根据权利要求71至135中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制抑制非MSP依赖性RON活化。
137.根据权利要求71至136中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制RON介导的Ras/MAPK信号传导途径的活化。
138.根据权利要求71至137中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制RON介导的ERK或AKT的磷酸化。
139.根据权利要求71至138中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制RON介导的细胞增殖。
140.根据权利要求71至139中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段抑制肿瘤细胞生长、肿瘤细胞侵入或肿瘤细胞转移。
141.根据权利要求71至140中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段诱导凋亡。
142.根据权利要求71至141中任一项所述的多核苷酸，还包含编码异源性多肽的核酸。
143.根据权利要求71至142中任一项所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸编码的多 肽的抗体或其抗原结合片段轭合于选自由以下组成的组的剂细胞毒性剂、治疗剂、细胞抑 制剂、生物毒素、前体药物、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药物制剂、淋巴因子、 异源性抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、以及两种或两种以上任何所述剂的组I=I O
144.根据权利要求143所述的多核苷酸，其中所述细胞毒性剂选自由以下组成的组 放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免疫活 性的配体、生物反应调节剂、或者两种或两种以上任何所述细胞毒性剂的组合。
145.根据权利要求143所述的多核苷酸，其中所述可检测标记选自由以下组成的组 酶、荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记、或者两种或两种以上任何所述可 检测标记的组合。
146.一种组合物，所述组合物包含权利要求71至145中任一项的多核苷酸和载体。
147.—种载体，所述载体包含权利要求71至145中任一项的多核苷酸。
148.根据权利要求147所述的载体，其中所述多核苷酸可操作地与启动子相缔合。
149.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求147或权利要求148的载体。
150.一种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方法，所述方法包括培养权利要求 149的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。
151.一种分离的多肽，所述分离的多肽由权利要求150的方法产生。
152.一种分离的多肽，所述分离的多肽由权利要求71至145中任一项的多核苷酸编码。
153.根据权利要求152所述的分离的多肽，其中包含所述多肽的抗体或其片段特异性 地结合至RON。
154.一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段包含权利要求152或153的多肽。
155.—种组合物，所述组合物包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸， 其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸分别包含编码与选自由以下组成的组的 参考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO: 14 禾口 SEQ IDNO 19 ； SEQ ID N0:24 禾口 SEQ ID NO 29 ； SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO 39 ； SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ IDNO :64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ； SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ；并且其中由所述 VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性地结合RON。
156.根据权利要求155所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核 苷酸分别包含编码选自由以下组成的组的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID N0:14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID N0:24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ IDNO :44和 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQID NO 89 ；SEQ ID N0:94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID N0:115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID N0:125 和 SEQ ID N0: 130 ；SEQ ID N0:135 禾口 SEQ IDNO 140 ；以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO 150。
157.一种组合物，所述组合物包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸， 其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸分别包含编码除了少于20个保守性氨 基酸取代以外与选自由以下组成的组的参考氨基酸序列相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO 4 禾口 SEQ IDNO 9 ；SEQ ID NO 14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ IDNO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO: 125 禾口 SEQ IDNO 130 ； SEQ ID NO: 135 禾口 SEQ ID NO: 140;以及 SEQ ID NO: 145 和 SEQID NO 150 ；并且其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段特异性地结合 RON。
158.—种组合物，所述组合物包含分离的VH编码多核苷酸和分离的VL编码多核苷酸， 其中所述VH编码多核苷酸编码包含选自由以下组成的组的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3 氨基酸序列的 VH 多肽SEQ IDNO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID N0:25、26 和 27 ；SEQID NO :35、36和37 ；SEQ ID NO :45、46和47 ；SEQ ID NO :55、56和57 ；SEQ ID NO :65、 66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、86 和 87 ；以及 SEQ ID NO :95、96 和 97 ； 其中所述VL编码多核苷酸编码包含选自由以下组成的组的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3 氨基酸序列的 VL 多肽SEQ ID NO :10、11 和 12 ;SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、 31 禾口 32;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91 和 92 ；SEQ ID NO 100、101和 102 ；SEQ ID NO :116、117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ； 以及SEQ ID NO :146、147和148 ；并且其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其 片段特异性地结合RON。
159.根据权利要求155至158中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸还包 含编码融合于所述抗体VH多肽的信号肽的核酸。
160.根据权利要求155至158中任一项所述的组合物，其中所述VL编码多核苷酸还包 含编码融合于所述抗体VL多肽的信号肽的核酸。
161.根据权利要求155至160中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸还包 含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CHl结构域的核酸。
162.根据权利要求155至161中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸还包 含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH2结构域的核酸。
163.根据权利要求155至162中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸还包 含编码融合于所述VH多肽的重链恒定区CH3结构域的核酸。
164.根据权利要求155至163中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸还包 含编码融合于所述VH多肽的重链铰链区的核酸。
165.根据权利要求155至164中任一项所述的组合物，其中所述重链恒定区选自由人 类 IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly 组成的组。
166.根据权利要求155至165中任一项所述的组合物，其中所述VL编码多核苷酸还包 含编码融合于所述VL多肽的轻链恒定区结构域的核酸。
167.根据权利要求166所述的组合物，其中所述轻链恒定区是人类κ。
168.根据权利要求155至167中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多 核苷酸编码的抗体或其片段特异性地结合与选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体相同的RON表位。
169.根据权利要求155至167中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多 核苷酸编码的抗体或其片段竞争性地抑制选自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12组成的组的参考单克隆Fab抗体片段或选 自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的参考单克隆抗体。
170.根据权利要求155至169中任一项所述的组合物，其中除了五个或更少的氨基酸 取代以外，所述VH和VL多肽的构架区是人类的。
171.根据权利要求155至170中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段结合于线性表位。
172.根据权利要求155至170中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段结合于非线性构象表位。
173.根据权利要求155至170中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是多价的，并包含至少两条重链和至少两条轻链。
174.根据权利要求155至173中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是多特异性的。
175.根据权利要求155至174中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是双特异性的。
176.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段包含为完全人类的重链和轻链可变结构域。
177.根据权利要求176所述的组合物，其中所述重链和轻链可变结构域与选自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 组 成的组的单克隆Fab抗体片段的重链和轻链可变结构域相同。
178.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段包含为鼠的重链和轻链可变结构域。
179.根据权利要求178所述的组合物，其中所述重链和轻链可变结构域与选自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10组成的组的单克隆抗体的重链和轻链可变结构域相 同。
180.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是人源化的。
181.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是嵌合的。
182.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是灵长源化的。
183.根据权利要求155至175中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是完全人类的。
184.根据权利要求155至183中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是Fab片段。
185.根据权利要求155至183中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是Fab’片段。
186.根据权利要求155至183中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核苷酸编码的抗体或其片段是F (ab) 2片段。
187.根据权利要求155至183中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是Fv片段。
188.根据权利要求155至183中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段是单链抗体。
189.根据权利要求155至188中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多 核苷酸编码的抗体或其片段以解离常数(KD)表征的亲和力特异性地结合至RON多肽或其 片段、或RON变体多肽，其中所述解离常数(KD)不大于5X10-2M、10-2M、5X10-3M、10-3M、 5X 10-4M、10-4M、5X 10-5M、10-5M、5X 10-6M、10-6M、5X10-7M、10-7M、5X 10-8M、10-8M、 5X 10-9M、10-9M、5X 10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X 10-12M、10-12M、5X 10-13M、 10-13M、5X 10-14M、10-14M、5X 10-15M 或 10-15M。
190.根据权利要求155至189中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段相对于鼠RON多肽或其片段优先地结合至人类RON多肽或其片 段。
191.根据权利要求155至190中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段结合至细胞表面上表达的RON。
192.根据权利要求191所述的组合物，其中所述细胞是恶性细胞、赘生性细胞、肿瘤细 胞、转移性细胞或肿瘤相关巨噬细胞。
193.根据权利要求155至192中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段阻断MSP与RON结合。
194.根据权利要求155至193中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制MSP依赖性RON活化。
195.根据权利要求155至194中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制非MSP依赖性RON活化。
196.根据权利要求155至195中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制RON介导的Ras/MAPK信号传导途径的活化。
197.根据权利要求155至196中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制RON介导的ERK或AKT的磷酸化。
198.根据权利要求155至197中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制RON介导的细胞增殖。
199.根据权利要求155至198中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段抑制肿瘤细胞生长、肿瘤细胞侵入或肿瘤细胞转移。
200.根据权利要求155至199中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段诱导凋亡。
201.根据权利要求155至200中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸、所 述VL编码多核苷酸、或所述VH编码多核苷酸与所述VL编码多核苷酸二者还包含编码异源 性多肽的核酸。
202.根据权利要求155至201中任一项所述的组合物，其中由所述VH和VL编码多核 苷酸编码的抗体或其片段轭合于选自由以下组成的组的剂细胞毒性剂、治疗剂、细胞抑制剂、生物毒素、前体药物、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药物剂、淋巴因子、异源 性抗体或其片段、可检测标记、聚乙二醇(PEG)、和两种或两种以上任何所述剂的组合。
203.根据权利要求202所述的组合物，其中所述细胞毒性剂选自由以下组成的组放 射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、细胞抑制性或细胞毒性治疗剂、前体药物、免疫活性 的配体、生物反应调节剂、或者两种或两种以上任何所述细胞毒性剂的组合。
204.根据权利要求202所述的组合物，其中所述可检测标记选自由以下组成的组酶、 荧光标记、化学发光标记、生物发光标记、放射性标记、或者两种或两种以上任何所述可检 测标记的组合。
205.根据权利要求155至204中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸被包 含在第一载体上并且所述VL编码多核苷酸被包含在第二载体上。
206.根据权利要求205所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸可操作地与第一启动 子相缔合并且所述VL编码多核苷酸可操作地与第二启动子相缔合。
207.根据权利要求206所述的组合物，其中所述第一启动子和所述第二启动子是同一 启动子的拷贝。
208.根据权利要求206所述的组合物，其中所述第一启动子和所述第二启动子是不相 同的。
209.根据权利要求205至208中任一项所述的组合物，其中所述第一载体和所述第二 载体被包含在单个宿主细胞中。
210.根据权利要求205至208中任一项所述的组合物，其中所述第一载体和所述第二 载体被包含在分别的宿主细胞中。
211.—种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方法，所述方法包括培养权利要求 209的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。
212.—种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方法，所述方法包括共培养权利要 求210的分别的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。
213.—种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方法，所述方法包括分别培养权利 要求210的分别的宿主细胞，组合所述VH和VL编码多肽，并回收所述抗体或其片段。
214.—种特异性地结合RON的抗体或其片段，所述抗体或其片段由权利要求211至 213中任一项的方法产生。
215.根据权利要求155至204中任一项所述的组合物，其中所述VH编码多核苷酸和所 述VL编码多核苷酸在同一载体上。
216.权利要求215的载体。
217.根据权利要求216所述的载体，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷 酸各自可操作地与启动子缔合。
218.根据权利要求216所述的载体，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷 酸在框内融合，从与其可操作地缔合的单个启动子共转录，并共翻译为单链抗体或其抗原 结合片段。
219.根据权利要求216所述的载体，其中所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷 酸从与其可操作地缔合的单个启动子共转录，但分别翻译。
220.根据权利要求219所述的载体，还包含设置在所述VH编码多核苷酸和所述VL编码多核苷酸之间的IRES序列。
221.根据权利要求216所述的载体，其中各自与分别的启动子可操作地缔合的所述编 码VH的多核苷酸和所述编码VL的多核苷酸被分别转录。
222.根据权利要求221所述的载体，其中所述分别的启动子是同一启动子的拷贝。
223.根据权利要求221所述的载体，其中所述分别的启动子是不相同的。
224.—种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求216至223中任一项的载体。
225.—种产生特异性地结合RON的抗体或其片段的方法，所述方法包括培养权利要求 224的宿主细胞，并回收所述抗体或其片段。
226.—种特异性地结合RON的抗体或其片段，所述抗体或其片段由权利要求225的方 法产生。
227.—种用于治疗动物的过度增生性病症的方法，所述方法包括向需要治疗的动物施 用包含以下组分的组合物a)权利要求1至69、154、214和226中任一项的分离的抗体或其片段；和b)药学上可接受的载体。
228.根据权利要求227所述的方法，其中所述过度增生性疾病或病症选自由癌症、赘 生物、肿瘤、恶性肿瘤、或其转移组成的组。
229.根据权利要求228所述的方法，其中所述抗体或其片段特异性地结合至恶性细胞 表面上表达的RON。
230.根据权利要求229所述的方法，其中所述抗体或其片段与所述恶性细胞的结合使 得所述恶性细胞的生长受抑制。
231.根据权利要求227至230中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段抑制肿瘤 细胞增殖。
232.根据权利要求231所述的方法，其中通过阻止或阻滞转移性生长来抑制肿瘤细胞增殖。
233.根据权利要求227至230中任一项所述的方法，其中所述抗体或其片段抑制肿瘤 细胞迁移。
234.根据权利要求231所述的方法，其中通过阻止或阻滞肿瘤向相邻组织扩散来抑制 肿瘤细胞增殖。
235.根据权利要求228所述的方法，其中所述过度增生性疾病或病症是位于以下位置 的赘生物前列腺、结肠、腹部、骨、乳房、消化系统、肝脏、胰、腹膜、肾上腺、甲状旁腺、垂体 腺、睾丸、卵巢、胸腺、甲状腺、眼、头、颈、中枢神经系统、周围神经系统、淋巴系统、骨盆、皮 肤、软组织、脾脏、胸部、或泌尿生殖道。
236.根据权利要求228所述的方法，其中所述过度增生性疾病是癌症，所述癌症选自 由以下组成的组上皮鳞状细胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、脑癌、肺癌、胰腺癌、子宫 颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌和头颈癌。
237.根据权利要求236所述的方法，其中所述癌症选自由胃癌、肾癌、脑癌、膀胱癌、结 肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌组成的组。
238.根据权利要求227至237中任一项所述的方法，其中所述动物是哺乳动物。
239.根据权利要求238所述的方法，其中所述哺乳动物是人类。
全文摘要
本发明涉及结合RON(receptor d’origine nantais，MST1R)的抗体及其用途，特别是在癌症的诊断和治疗中的用途。提供了抑制RON介导的促存活和肿瘤增殖途径的特异性抗体、及其变体、片段和衍生物。还提供了阻断配体MSP与RON结合能力的特异性抗体、以及这些抗体的片段、变体和衍生物。本发明还包括编码上述抗体或其片段、变体或衍生物的多核苷酸、以及含有这些多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明还包括使用本发明的抗体来诊断和治疗癌症的方法。
文档编号C07K16/28GK101977937SQ200980110217
公开日2011年2月16日 申请日期2009年1月22日 优先权日2008年1月22日
发明者C·加弗, E·加伯, H·休特, S·米克拉斯, V·贝利 申请人:拜奥根Idec马萨诸塞公司