一种南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺和磷脂酰丝氨酸的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，包括下述步骤：收集南极磷虾头，加水煎煮，搅拌，将磷虾头煎煮液送至冷榨机中固液分离，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体；在磷虾头等固体中加入无水乙醇，高剪切萃取，离心分离、浓缩获得油状液体；合并油状液体、减压干燥，再经板框过滤机过滤去除不溶性物质，之后经膜分离浓缩，、柱层析分离纯化，冷冻干燥，获得磷脂酰胆碱产品。本发明还提供了南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，提取到的磷脂酰胆碱经磷脂酶D水解，萃取，获得富含DHA和EPA的磷脂酰丝氨酸。本发明提取工艺和制备方法环保，成本低，获得的产品含量高，活性好，可以工业化生产。
【专利说明】一种南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺和磷脂酰丝氨酸的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从南极磷虾的深加工方法，具体的涉及从南极磷虾中提取磷脂酰胆碱和制备磷脂酰丝氨酸的方法。
【背景技术】
[0002]富含不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)的磷脂酰丝氨酸(PS)作为将来防止老年痴呆，预防少儿多动症等脑健康和防止心血管的新兴保健和医药原料具有广阔的市场前
旦
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[0003]南极磷虾是一种生活在南极洲水域的磷虾，也是地球上数量最大、繁衍最成功的单种生物资源之一。从南极磷虾中提取的磷虾油富含磷脂(主要以卵磷脂为主)等功效成分，且磷脂的脂肪酸组成以二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)为主，EPA和DHA含量占磷脂中脂肪酸总量的40%以上。南极磷虾油具有降低心血管疾病、预防老年痴呆及提高机体免疫力等多种生理活性，并且其活性优于目前市场上的甘油三酯型EPA/DHA产品及陆生植物来源的卵磷脂产品(其脂肪酸组成中不含EPA和DHA)，不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)是主要结合在磷脂胆碱甘油基的2位上(Sn2位)，也就是我们所提到的不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)结合的磷脂胆碱PC。DHA是构成脑磷脂，脑细胞膜的基础，对脑细胞的分裂、增殖、神经传导、突触的生长和发育起着极为重要的作用，是人类大脑形成和智商开发的必需物质。它对视觉、大脑活动、脂肪代谢、胎儿生长、及免疫功能和避免老年性痴呆都有极大影响，缺乏时可引发一系列症状，包括生长发育迟缓、皮肤异常鳞屑、不育、智力障碍等。但是普通的DHA是以随机的方式排列，处于无序的状态，无法确保完全被人体吸收，通常Snl，Sn3位上`的DHA会被燃烧产生热量，或者结合Sn2上的脂肪酸，形成三酸甘油酯，只有Sn2位上的DHA才能被人体完全吸收。磷虾油中磷脂的Sn2位上是DHA，能够完全被人吸收，根据我们的数据研究，Sn2上的DHA的生物活性和生物利用度是普通鱼油DHA活性的3-5倍。同时将磷虾中富含的磷脂胆碱通过生物酶催化的办法，转成磷脂酰丝氨酸。磷脂酰丝氨酸其功能主要是改善神经细胞功能，调节神经脉冲的传导，增进大脑记忆功能。因此经过发明人的长期研究和总结，从磷虾油来源的不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)结合的磷脂酰丝氨酸由于其综合作用机理，对于改善脑部神经细胞功能和大脑活动，改善记忆力和促进婴幼儿脑部发育和维护脑部健康具有重大的经济价值和生物医药研究的课题意义。
[0004]在磷虾深加工的不断增长下，如何提高磷虾加工中废弃物中提取磷脂和深加工磷虾油的磷脂，进而转化成磷脂酰丝氨酸则是目前生物医药领取重要的焦点。目前普遍的技术解决方案有三种:
[0005]第一种是直接采购已经现有的磷虾油成品，进行磷脂酰胆碱的进一步分离提纯。专利CN102405988A， 申请人:为辽宁省大连海洋渔业集团公司，专利名称“从磷虾中提取高磷脂含量磷虾油的方法”；专利CN102439125A，权利人上海赢贝生物技术有限公司，发明专利“一种制备富含多不饱和双键脂肪酰基的磷脂酰丝氨酸的高品质南极磷虾油的方法”以及里勃根(Lipogen)提取自挪威的生物技术公司Aker BioMarine的纯Superba磷奸油(Superba Krill Oil),形成磷奸油来源10%磷脂酰丝氨酸产品。目前该原料本身的价格就已经在200美金以上每公斤，经过转化的产品成本约为300-5000美金以上，由于该产品存在生产工艺复杂和繁琐，需要去除蛋白和游离杂质才能形成流动性油状最终产物磷虾油，尤其各国目前对于食品原料的法规越来越严格，最后制成符合要求的原料成本高，而且油状的富含磷脂的不饱和脂肪酸对于后道经过催化后形成磷脂酰丝氨酸前的液体配置及产品的提取分离，增加很多难度，导致产品含量偏低，游离脂肪酸含量高、流动性差、浑浊以及溶剂残留超标等缺陷，不是获取工业化生产磷脂酰丝氨酸的最佳工业化办法。
[0006]第二种工艺路线是使用有机溶剂或者多种有机溶剂进行萃取，目前有关类似提取的工艺比如加拿大N印tune公司为代表的提取方法(专利号EP01417211B1)，用丙酮加乙醇及乙酸乙酯等混合溶剂进行杂质分离和富集浓缩。但是随着我们现有环保和安全生产问题的进一步严格规范，对于污水处理和安全生产的管理控制的成本会越来越高，包括类似工艺的环评和项目立项上就有很大的难度。而且现有很多包括日本，欧盟和我国都对很多溶剂萃取都提出了很多法规要求，比如丙酮不能作为食品添加和保健产品的萃取溶剂，因而类似产品在将来进入部分国际市场上有很大的法规障碍。再次，由于使用有机溶剂，特别是部分产品包括甲醇和丙酮等，将给后期去除残留增加很多工序和难度。
[0007]第三种工艺路线是使用超临界提取。二氧化碳超临界对于试验和理论阶段都是比较可行的手段，但是真正投入一套设备需要高达上亿人民币的投入才能真正形成产业化。根据本发明人的研究，该工艺路线，具有很大的设备投资要求，即使投产，由于设备折旧的问题，同样也是高成本，同时二氧化碳超临界萃取是一种粗放萃取手段，不能有针对性富集所需磷脂含量高的不饱和脂肪酸，因而也有其局限性。该工艺路线可参考CN102358865A，山东科芮尔生物制品有限公司申请的“一种超临界二氧化碳提取南极磷虾油的方法”等。
[0008]因此，本领域需要 开 发新的环保、成本较低的南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺和磷脂酰丝氨酸的制备方法。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种环保、成本较低的南极磷虾来源的磷脂酰胆碱(PC)的提取工艺。
[0010]本发明的第二个目的还提供一种经济、环保的磷脂酰丝氨酸(PS)的制备方法。
[0011]本发明的第一方面，提供一种南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，所述提取工艺包括下述步骤:
[0012](a)收集南极磷虾头，加水，煎煮，搅拌，将磷虾头煎煮液送至冷榨机中固液分离，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体；
[0013](b)在磷虾头等固体中加入无水乙醇，高剪切萃取，离心分离获得上清液；本步骤进行1-2次，合并上清液，浓缩获得油状液体；
[0014](c)将步骤(a)和步骤(b)中的油状液体合并、减压干燥，获得含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物；
[0015](d)将含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品级有机溶剂中，经板框过滤机过滤去除不溶性物质，过滤后获得的液体再经膜分离浓缩，获得浓缩液；
[0016](e)浓缩液经柱层析分离纯化，获得磷脂酰胆碱混合物；再经冷冻干燥，获得磷脂酰胆碱产品。
[0017]上述步骤(a)中磷虾头在解冻后2h内，加水，40_55°C煎煮，搅拌时加入乙醇。所述乙醇的重量百分比为5%。
[0018]上述步骤(b)中上清液经减压浓缩，获得油状液体。
[0019]上述步骤(d)中食品级有机溶剂为乙醇和正己烷。
[0020]上述步骤(d)中乙醇:正己烷的体积比为2-4:0.5-1.5。优选乙醇:正己烷的体积比为3:1。
[0021]上述步骤(d)中，采用超滤膜分离浓缩，料液比W:V为1:20，温度10_55°C，采用口径IOOnm — 20nm双膜法分离。
[0022]上述步骤(d)中，膜分离中采用微滤膜或超滤膜，所述膜的孔径为0.02-10 Pm、在膜上施加压力0.015~lOMPa。
[0023]上述步骤(e)中先将浓缩液溶解于正己烷、异丙醇、水组成的流动相中，固定相选用50-400目粗孔硅胶或大孔树脂。
[0024]上述步骤(e)柱层析时，所述柱子径高比1:5_10，所述洗脱剂选自正己烷的水溶液、异丙醇的水溶液或正己烷和异丙醇的水溶液。
[0025]上述固定相选用100-200目粗孔硅胶。
`[0026]本发明的第二方面，提供一种南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括下述步骤:
[0027](a)收集南极磷虾头，加水煎煮，搅拌，将磷虾头煎煮液送至冷榨机中固液分离，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体；
[0028](b)在磷虾头等固体中加入无水乙醇，高剪切萃取，离心分离获得上清液；本步骤萃取1-2次，合并上清液，浓缩获得油状液体；
[0029](c)将步骤(a)和步骤(b)中的油状液体合并、减压干燥，获得含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物；
[0030](d)将含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品级有机溶剂中，经板框过滤机过滤去除不溶性物质，过滤后获得的液体再经膜分离浓缩，获得浓缩液；
[0031](e)浓缩液经柱层析分离纯化，获得磷脂酰胆碱混合物；再经冷冻干燥，获得磷脂酰胆碱；
[0032](f)在水相中，加入L-丝氨酸、磷脂酶D、氯化钙，水解磷脂酰胆碱，生成磷脂酰丝氨酸；去除溶剂，获得磷脂酰丝氨酸粗产品；
[0033](g)将磷脂酰丝氨酸粗产品经2-4次食品级有机溶剂反复萃取，第一次萃取时将PH调节到3，去除有机溶剂，获得磷脂酰丝氨酸产物。
[0034]上述步骤(f)中，磷脂酰胆碱在水相中水解反应时，温度为40_45°C，pH5_6，所述磷脂酰胆碱=L-丝氨酸:磷脂酶D为1:7-13:0.03-0.06。
[0035]上述步骤(f)中，在50°C以下，采用减压法去除溶剂。
[0036]上述步骤(g)中，第一次萃取时，使用的食品级有机溶剂为乙醇和正己烷的混合物，所述乙醇和正己烷体积比为4:1，并采用食用盐酸调节pH至3，去除上层液。[0037]上述步骤(g)中，采用正己烷进行后续1-3次萃取，每次萃取结束去除上层液。
[0038]上述步骤(g)中，反复萃取后，采用90%乙醇水溶液，去除正己烷，得到磷脂酰丝氨酸产物。
[0039]上述步骤(d)中食品级有机溶剂为乙醇和正己烷。
[0040]上述步骤(d)中，乙醇:正己烷的体积比为2-4:0.5-1.5。优选乙醇:正己烷的体积比为3:1。
[0041]上述步骤(a)中磷虾头在解冻后2h内，加水，40_55°C煎煮，搅拌时加入乙醇。所述乙醇的重量百分比为5%。
[0042]上述步骤(b)中上清液经减压浓缩，获得油状液体。
[0043]上述步骤(d)中，采用超滤膜分离浓缩，料液比W:V为1:20，温度10_55°C，采用口径IOOnm — 20nm双膜法分离。
[0044]上述步骤(d)中，膜分离中采用微滤膜或超滤膜，所述膜的孔径为0.02-10 Pm，在膜上施加压力0.015~lOMPa。
[0045]上述步骤(e)中先将浓缩液溶解于正己烷、异丙醇、水组成的流动相中，固定相选用50-400目粗孔硅胶或大孔树脂。
[0046]上述步骤(e)柱层析时，所述柱子径高比1:5_10，所述洗脱剂选自正己烷的水溶液、异丙醇的水溶液或正己烷和异丙醇的水溶液。
[0047]上述固定相选用100-200目粗孔硅胶。
[0048]本发明的第三方面，提供了根据上述提取工艺提取的南极磷虾来源的磷脂酰胆碱。
[0049]本发明的第四方面，提供了根据上述制备方法制备的南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸。
[0050]本发明所述“磷虾头在解冻后2h内清洗”是指:磷虾头在收集后立刻冷冻，提取磷脂酰胆碱时，磷虾头在解冻后2h内加水煎煮；或者，在冷冻的磷虾解冻后2h内，收集磷虾头，并进行加水煎煮。
[0051]本发明的优点和效果是:
[0052]1.本发明特别是对水产公司的磷虾头集中及时煎煮、冷榨、高剪切萃取、板框过滤、膜分离、柱层析等前处理，根据磷脂产品的特性，针对性选取多种物理和纳米提取工艺的组合，生产工艺中采用膜超滤工艺过滤不会在正己烷中聚合的油脂等，大大降低了后续产品的提纯和分离的负荷，降低了后续树脂吸附的杂质上柱，提高了吸附当量，提高了产品的收率，进一步提高了产品的质量和稳定性能，同时从经济上节约了生产成本,并大大降低了酸碱及乙醇的用量。且原料来自水产公司废弃物，提取工艺中形成的副产物还可以用作其他用途，具有最大的社会经济效应。从环保上来讲，大大降低了废水的排放，缓解了环保压力；从生产上讲，整个系统易于维护，大大改善了操作环境，降低了劳动强度。
[0053]2.本发明工艺相比国内外普遍的溶剂萃取的分离提纯手段，提高了 PC的收率，改变了过去PC制备过程低收率及废水高污染的实际工业化难题，同时相比二氧化碳超临界的工业化投资，设备投入只有3%不到。本工艺有效防止了南极磷虾中有效成分在高温和间歇工艺中活性成分的氧化和降解，使得获得高含量的精制DHA-PS产品的工业化生产得到实现。[0054]该工艺的特点是首次以制备高含量不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)的磷脂酰丝氨酸(PS)产品为最终目的，通过温度和物理提取手段的针对性组合方式，能经济环保的提取磷虾加工厂的废弃磷虾头中磷脂，并通过冷榨，高剪切萃取，膜过滤，高速离心和层析等方法的综合使用，通过有针对性的筛选分离去除杂质，使得混合产物中不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)磷脂的含量能达到45%以上。
[0055]以下结合实施例对本发明进行详细说明。
【具体实施方式】
[0056]以下结合具体实施例对本发明做进一步的说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。
[0057]本发明思想为:针对现有技术真正工业化中存在的不足之处而提供一种将南极磷虾头及时集中前处理工艺，并有效防止了南极磷虾中有效成分在高温和间歇工艺中活性成分的氧化和降解，最大限度提取分离高含量磷脂酰胆碱，使得获得高含量的磷虾来源磷脂酰丝氨酸的工业化生产能够得到实现。
[0058]实验方法
[0059]每年7月下旬开始南极磷虾捕捞期间，将水产加工厂废弃的磷虾头等资源进行统一收集，得到一个原料批次2000kg左右，在室温15°C通风解冻。本发明对3批样品进行了提取分离实验，从下面实施例1~3中实验数据可知:生产DHA-PS的南极磷虾油来源的高磷脂加工工艺是可行的，其最终形成的富含DHA的磷脂酰丝氨酸PS产品为含量45%以上，产品中检测到两类活性物质，其中DHA含量高达15%以上，PS高达45%以上。它同时具有DHA及PS两类活性功能，可以作为生产天然保健和医药的原料，该原料与将DHA和PS这二种单一物质的混合物相比，生物活性提高了 3-5倍，是生产加工食品、药品和保健食品领域的极具潜力的原料。为了最大限度提取分离高含量磷脂酰胆碱，磷虾头解冻后宜在2h内加水煎煮预处理；也可以直接在水`产加工厂磷虾解冻后，2h内将收集的磷虾头加水煎煮预处理，再进行后续的提取工艺。
[0060]实施例1磷脂酰丝氨酸的制备I
[0061](I)将2000kg南极磷虾头等置5吨的醇提煎煮锅，冲入2000L水，加温50°C，为后续冷榨方便，边搅拌边喷洒5%食用乙醇，食用乙醇重量百分比可以为3-6%，一般5%为最佳，能增加压榨的润滑。搅拌lOmin，接着把磷虾头煎煮液输送至冷榨机(型号6YL-165型，河南中矿)中固液分离，冷榨机处理量1000kg/h，转速28-35r/min，功率30kw，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体；
[0062](2)将(I)获得的固体置于反应器中，加入质量4倍于所得固体的无水乙醇溶剂，高剪切搅拌20min (15~30min均可)，使磷脂组分充分溶解在乙醇中离心分离；将沉淀物放入反应器再加入质量4倍于所得固体的无水乙醇溶剂高剪切搅拌，离心，所得两次上清液减压浓缩成油状液体；
[0063](3)将(I)所得油状液体与(2)所得浓缩油状液体合并，减压旋转蒸干，得到含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物589kg。
[0064](4)我们检测(3)获得的含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物中水分含量为总重量的67%，取少量蛋白凝固物，将其低温蒸发干燥后，检测干燥后的蛋白凝固物，得到如下指标
[0065]
【权利要求】
1.一种南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，包括下述步骤: Ca)收集南极磷虾头，加水，煎煮，搅拌，将磷虾头煎煮液送至冷榨机中固液分离，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体； (b)在磷虾头等固体中加入无水乙醇，高剪切萃取，离心分离获得上清液；本步骤进行1-2次，合并上清液，浓缩获得油状液体； (c)将步骤(a)和步骤(b)中的油状液体合并、减压干燥，获得含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物； (d)将含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品级有机溶剂中，经板框过滤机过滤去除不溶性物质，过滤后获得的液体再经膜分离浓缩，获得浓缩液； Ce)浓缩液经柱层析分离纯化，获得磷脂酰胆碱混合物；再经冷冻干燥，获得磷脂酰胆喊广品。
2.如权利要求1所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤Ca)中磷虾头在解冻后2h内，加水，40-55°C煎煮，搅拌时加入乙醇。
3.如权利要求1所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(b)中上清液经减压浓缩，获得油状液体。
4.如权利要求1所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤Cd)中食品级有机溶剂为乙醇和正己烷。
5.如权利要求4所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤Cd)中，乙醇:正己烷的体积比为2-4:0.5-1.5。
6.如权利要求1-5任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(d)中，采用超滤膜分离，料液比W:V为1:20，温度10-55°C，采用口径IOOnm — 20nm双膜法分离。
7.如权利要求1-5任一权利要求南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(d)中，膜分离中采用微滤膜或超滤膜，所述膜的孔径为0.02-10 ym、在膜上施加压力0.015~lOMPa。
8.如权利要求1-5任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(e)中先将浓缩液溶解于正己烷、异丙醇、水组成的流动相中，固定相选用50-400目粗孔硅胶或大孔树脂。
9.如权利要求8所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(e)柱层析时，所述柱子径高比1:5_10，所述洗脱剂选自正己烷的水溶液、异丙醇的水溶液或正己烷和异丙醇的水溶液。
10.如权利要求8所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述固定相选用100-200目粗孔硅胶。
11.如权利要求7所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述步骤(d)中，采用超滤膜分离，料液比W: V为1:20，温度10-55 °C，采用口径IOOnm — 20nm双膜法分离。
12.如权利要求9或10所述南极磷虾来源的磷脂酰胆碱的提取工艺，其特征在于，所述流动相中正己烷:异丙醇:水体积比为1:1:0.16。
13.一种南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，包括下述步骤:(a)收集南极磷虾头，加水煎煮，搅拌，将磷虾头煎煮液送至冷榨机中固液分离，获得富含磷脂的油状液体和磷虾头等固体； (b)在磷虾头等固体中加入无水乙醇，高剪切萃取，离心分离获得上清液；本步骤萃取1-2次，合并上清液，浓缩获得油状液体； (c)将步骤(a)和步骤(b)中的油状液体合并、减压干燥，获得含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物； (d)将含有磷脂及不饱和脂肪酸的蛋白凝固物溶于食品级有机溶剂中，经板框过滤机过滤去除不溶性物质，过滤后获得的液体再经膜分离浓缩，获得浓缩液； Ce)浓缩液经柱层析分离纯化，获得磷脂酰胆碱混合物；再经冷冻干燥，获得磷脂酰胆碱； (f)在水相中，加入L-丝氨酸、磷脂酶D、氯化钙，水解磷脂酰胆碱，生成磷脂酰丝氨酸；去除溶剂，获得磷脂酰丝氨酸粗产品； (g)将磷脂酰丝氨酸粗产品经2-4次食品级有机溶剂反复萃取，第一次萃取时将pH调节到3，去除有机溶剂，获得磷脂酰丝氨酸产物。
14.如权利要求13所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(f)中，水解反应时，温度为40-45°C，pH5-6，所述磷脂酰胆碱:L_丝氨酸:磷脂酶D为1:7-13:0.03-0.06。
15.如权利要求13所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中磷虾头在解冻后2h内`，加水煎煮后冷榨。
16.如权利要求13-15任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(g)中，第一次萃取时，使用的食品级有机溶剂为乙醇和正己烷的混合物，所述乙醇和正己烷体积比为4:1，并采用食用盐酸调节pH至3，去除上层液。
17.如权利要求16所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(g)中，采用正己烷进行后续1-3次萃取，每次萃取结束去除上层液。
18.如权利要求16所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(g)中，反复萃取后，采用90%乙醇水溶液，去除正己烷，得到磷脂酰丝氨酸产物。
19.如权利要求13-15、17或18任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)中食品级有机溶剂为乙醇和正己烷。
20.如权利要求19所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)中，采用超滤膜分离浓缩，料液比W:V为1:20，温度10-55 °C，采用口径IOOnm — 20nm双膜法分离。
21.如权利要求19所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)中，乙醇:正己烷的体积比为2-4:0.5-1.5。
22.如权利要求19所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)中，膜分离中采用微滤膜或超滤膜，所述膜的孔径为0.02-10 ym，在膜上施加压力0.015~lOMPa。
23.如权利要求13-14、17、18、20-22任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中磷虾头在解冻后2h内，加水煎煮后冷榨。
24.如权利要求13-15、17或18任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(e)中先将浓缩液溶解于正己烷、异丙醇、水组成的流动相中，固定相选用50-400目粗孔硅胶或大孔树脂。
25.如权利要23所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(e)中先将浓缩液溶解于正己烷、异丙醇、水组成的流动相中，固定相选用50-400目粗孔硅胶或大孔树脂。
26.如权利要求24所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤(e)柱层析时，所述柱子径高比1:5-10，所述洗脱剂选自正己烷的水溶液、异丙醇的水溶液或正己烷和异丙醇的水溶液。
27.如权利要求13-15、17、18、20-22、25-26任一权利要求所述南极磷虾来源的磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，所述 步骤(b)中，上清液经减压浓缩，获得油状液体。
【文档编号】C07F9/10GK103509047SQ201210209670
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月22日 优先权日:2012年6月22日
【发明者】蒋锋锋, 包琦 申请人:上海傲硕生物科技有限公司