专利名称：用于标记寡糖的荧光化合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于标记寡糖的化合物，特别涉及一种用于标记寡糖的荧光化合物。还涉及这种用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法。
背景技术：
文献I “Analytical Chemistry, 69 (15): 2919-26; 1997” 公开了一种糖衍生化标记糖的方法，该方法采用还原胺化法，即糖链与铵盐离子和NaCHBH3反应生成1-氨基-1-去氧糖醇，然后与荧光试剂FITC、PITC、TRSE反应，生成带有荧光标记的衍生化产物。该方法缺点是FITC、PITC、TRSE等荧光试剂可与样品中存在的非糖上的氨基反应，故该方法缺乏特异性，不能实现定量标记，并且糖的还原胺化，实验过程繁琐、且破坏了糖的结构。文献2 “Analytica Chimica Acta, 609(1):66 - 75; 2008”公开了一种标记糖的方法，该方法采用迈克尔加成法即在碱性条件下，糖与衍生化试剂如PMP发生迈克尔加成。该方法的缺点是两分子PMP和一分子糖加成，因此低聚糖的色谱特性占主导地位，可能不利于异构体的分离。 文献3 “Analytical Biochemistry, 376 (I): 1-12; 2008” 公开了一种标记糖的方法，该方法采用H2O2与CdSe/ZnS作用淬灭QDs的荧光，而达到检测葡萄糖的目的。GSH修饰的CdSe/ZnS与FITC标记的抗生素蛋白(avidin)通过辛二酸结合形成QDs-avidin-FITC,
后者结合葡萄糖氧化酶获得葡萄糖探针。葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下产生H2O2,淬灭量子点荧光，因此实现检测葡萄糖的目的。该方法缺点是由重金属做成的荧光量子点具有一定的生物毒性。文献4 “Journal of Proteome Research, 7 (I): 367-374; 2008，，公开了一种标记糖的方法，该方法采用同位素标记法，糖分子和带有同位素13C的小分子化学试剂通过化学反应与糖的某些基团相结合因此使糖带上13C,可用13C质谱仪进行检测和分析。该方法的缺点是采用了放射性元素，试验设备不符合标准以及实验者操作防护意识缺乏会对人体和环境造成危害。
发明内容
为了克服现有化合物用于标记寡糖时破坏糖结构、进而影响糖链性能的不足，本发明提供一种用于标记寡糖的荧光化合物。该荧光化合物由发光基团和标记基团两部分组成，发光基团是荧光素化合物母体，标记基团是苯甲醛的缩醛。根据苯甲醛的缩醛能选择性标记寡糖链上4，6位羟基的特性，进行寡糖链的标记，不破坏糖结构，不影响糖链的性能。本发明还提供这种用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种用于标记寡糖的荧光化合物，其结构式是
权利要求
1.一种用于标记寡糖的荧光化合物，其结构式是
2.—种权利要求1所述用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (a)将4-甲酰基-3-甲基苯甲酸和含有取代基的间苯二酚按照摩尔比1:2 1:4进行研磨混合； (b)在步骤(a)得到的混合物中加入甲基磺酸或者浓硫酸做催化剂，混合物与甲基磺酸或者浓硫酸的质量/体积比为1:4 1: 8g/ml，搅拌均匀，得到透明溶液； (c)将步骤(b)中所得透明溶液放入微波炉中，在功率400 1500 条件辐射I 20min，反应完毕后将反应混合物倒入冰水中，充分搅拌得到沉淀，抽滤，用0.1 0.3mol/L的稀盐酸洗涤，得到荧光素化合物粗产品； Cd)将粗产品利用色谱柱分离提纯，以200 300目柱层析硅胶为填料，以体积比V/v=l:1 1:6甲醇和三氯甲烷混合溶剂作为洗脱剂，分离得到荧光素化合物； Ce)向步骤(d)得到的荧光素化合物中加入二氯甲烷，荧光素化合物与二氯甲烷的质量/体积比为1:20 l:40g/ml，搅拌溶解；再加入吡唆，荧光素化合物与吡啶的质量/体积比为1:1 5:lg/ml ;再加入三氟乙酸N-琥珀酰亚胺酯，荧光素化合物与三氟乙酸N-琥珀酰亚胺酯的质量比为1:8 l:15g/g ;室温搅拌，薄层板监测，反应完毕后，依次用0.1 ·0.3mol/L的稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，得荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯； Cf)在步骤(e)得到的荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯中加入溶剂二氯甲烷，荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯与二氯甲烷的质量/体积比为1:20 l:40g/ml，搅拌溶解；再加入2-(4-( 二甲氧基甲基)苯基)乙胺，荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯与2-(4-( 二甲氧基甲基)苯基)乙胺的摩尔比为1:1 1:4 ;薄层板监测，反应完毕后，依次用pH=5 7磷酸盐缓冲溶液、0.1 0.3mol/L的稀盐酸、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，得到目标产物用于标记寡糖的荧光化合物。
全文摘要
本发明公开了一种用于标记寡糖的荧光化合物和这种用于标记寡糖的荧光化合物的制备方法，用于解决现有化合物用于标记寡糖时破坏糖结构、进而影响糖链性能的技术问题。技术方案是首先将4-甲酰基-3-甲基苯甲酸和含有取代基的间苯二酚进行研磨混合，加入催化剂搅拌，再经微波炉辐射，经分离提纯得到荧光素化合物；再依次加入二氯甲烷、吡啶和三氟乙酸N-琥珀酰亚胺酯搅拌，得荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯；在荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯中加入溶剂二氯甲烷，再加入2-(4-(二甲氧基甲基)苯基)乙胺反应，得到用于标记寡糖的荧光化合物。本发明根据苯甲醛的缩醛选择性标记寡糖链上4,6位羟基的特性，进行寡糖链的标记，不破坏糖结构，不影响糖链的性能。
文档编号C07D311/82GK103224483SQ20131016931
公开日2013年7月31日 申请日期2013年5月6日 优先权日2013年5月6日
发明者武祥龙, 范於菟, 潘亚磊, 翟远坤, 牛银波, 李晨睿, 梅其炳 申请人:西北工业大学