可溶性环氧化物水解酶的酰基哌啶抑制剂的制作方法

可溶性环氧化物水解酶的酰基哌啶抑制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供了并入多个药效团的可溶性环氧化物水解酶(sEH)的抑制剂并且用于疾病的治疗。在一些实施方案中，本发明提供了一种用于监测可溶性环氧化物水解酶的活性的方法，所述方法包括使所述可溶性环氧化物水解酶与足以通过与存在于所述sEH的催化部位中的一个或多个色氨酸残基相互作用而使所述可溶性环氧化物水解酶的荧光产生可检测的变化的量的本发明的化合物接触。
【专利说明】可溶性环氧化物水解酶的酰基脈啶抑制剂
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年2月1日提交的美国临时申请号61/593,805的优先权，所述 美国临时申请出于所有目的整体并入本文。
[0003] 关于在联邦赞助的研究和开发下作出的对发明的权利的声明
[0004] 本发明根据国家环境卫生科学研究所授予的授权号ES002710下的政府资助产 生。政府享有本发明中的某些权利。
[0005] 发明背景
[0006] 环氧化物水解酶（EH，EC 3. 3. 2. 3)通过水的加成催化环氧化物或芳烃氧化物水 解为其相应的二醇（参见〇esch，F.等，Xenobiotica 1973,3,305-340)。一些EH在各种化 合物的代谢作用中起重要作用，所述各种化合物包括激素、化学治疗药物、致癌物、环境污 染物、真菌毒素以及其它有害外来化合物。
[0007] 存在两种充分研究的EH,微粒体环氧化物水解酶（mEH)和可溶性环氧化物水解酶 (sEH)。这些酶的关系非常远，具有不同的亚细胞定位，并且具有不同但部分重叠的底物选 择性。已知可溶性EH形式和微粒体形式在降解一些植物天然产物方面彼此互补（参见 Hammock，B.D.等，COMPREHENSIVE T0XIC0L0GY，0xford:Pergamon Press 1977, 283-305 和 Fretland，A. J.等，Chem. Biol. Intereract2〇00, I29, 41_59)。
[0008] sEH的主要作用是在脂质环氧化物的代谢作用方面，包括花生四烯酸（参见 Zeldin，D.C.等，J_Biol.Chem.1993,268,6402-6407)、亚油酸（参见Moghaddam，M. F.等，Nat. Med. 1997, 3, 562-567)，一些作为内源性化学介体的酸（参见Carroll, ΜΑ.等， Thorax 2000, 55, S13-16) 的代谢作用。 已知花生四烯酸的环氧化物 （环氧二十碳 三烯酸或EET)和其它脂质环氧化物和二醇是血压的效应子（参见Capdevila, J. H.等，J. Lipid. Res. 2000, 41，163-181)和血管渗透性的调节剂（参见 Oltman, C. L.等，Circ Res. 1998, 83, 932-939)。EET的血管舒张性质与导致血管平滑肌超极化的钙激活钾通道 的开放状态可能性增加相关（参见Fisslthaler，B.等，Nature 1999,401,493-497)。由 sE：H引起的花生四烯酸环氧化物的水解减弱这种活性（参见Capdevila, J. H.等，J. Lipid. Res. 2000, 41，163-181)。EET的sHl水解还调节其并入到冠状动脉内皮磷脂中，表明由sEH 引起的内皮功能的调节（参见Weintraub, Ν· L.等，Am. J. Physiol. 1992, 277, H2098-2108)。 最近已示出用选择性sEH抑制剂治疗自发性高血压大鼠（SHR)显著降低了其血压（参见 Yu，Z.等，Circ. Res. 2000, 87, 992-998)。另外，据称雄性敲除sHl小鼠具有比野生型小鼠 显著更低的血压（参见 Sinai, C.J·等，J. Biol Chem. 2000, 275, 40504-405010)，然而随后 的研究证明随着繁殖回到C57b小鼠中，20-HETE水平为了补偿血浆EET的增加而增加（参 见 Luria, A 等，J. Biol. Chem. 2007, 282:2891-2898)。
[0009] EET还已证明在内皮细胞中的抗炎性质（参见Node, K. 等,Sciencel999, 285, 1276-1279 和 Campbell,W.B. Trends Pharmacol Sci. 2000,21，125-127)。相反，衍生自环氧亚油酸（白细胞毒素）的二醇扰乱膜渗透性 和钙体内平衡（参见]?(^1^(1(^111，]\1匕等，似七]^(1.1997,3,562-567)，这产生由一氧化氮 合成酶和内皮素-1调节的炎症（参见lshizaki，T.等，Am. J. Physiol. 1995, 269，L65-70 和 Ishizaki，T.等，J.Appl. Physiol. 1995,79, 1106-1611)。报道与炎症和缺氧相关的 微摩尔浓度的白细胞毒素（参见Dudda，A.等，Chem.Phys.Lipids 1996,82,39-51)抑 制体外线粒体呼吸（参见Sakai, T.等，Am. J. Physiol. 1995, 269, L326-331)，并且在体 内引起哺乳动物心肺毒性（参见Ishizaki，T.等，Am. J. Physiol. 1995, 269, L65-70 ; Fukushima，A·，等 Cardiovasc.Res.l988,22,213_218;和 Ishizaki，T.等，Am. J，Physiol. 1995, 268, L123-128)。白细胞毒素毒性呈现出表明多器官衰竭和急性呼吸窘迫 综合症（ARDS)的症状（参见 Ozawa, T.等，Am. Rev. Respir, Dis. 1988, 137, 535-540)。在细 胞模型和有机体模型中，白细胞毒素介导的毒性取决于环氧化物水解（参见Moghaddam，Μ. F.等，Nat. Med. 1997, 3, 562-567 ;Morisseau，C.等，Proc，Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 8849-8854 ;和 Zheng, J.等，Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2001，25, 434-438)， 表明sEH在调节炎症和血管渗透性中的作用。这些环氧-脂肪酸的生物活性表明抑制连 位-二羟基-脂质生物合成可具有治疗价值，使sEH成为有前途的药理学靶标。
[0010] 最近，1，3-二取代脲、氨基甲酸酯和酰胺已报道作为sEH的新型有效和稳定的 抑制剂，参见美国专利号6, 150, 415。化合物192和化合物686为这种类型抑制剂的代 表性结构（其中的图1)。这些化合物是与纯化的重组sEH化学计量相互作用的具有纳 摩尔KI值的竞争性紧密结合抑制剂（参见Morisseau，C.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999,96,8849-8854)。基于X射线晶体结构，示出脲抑制剂以确立氢键并且以形 成抑制剂的脲官能与sffi活性部位的残基之间的盐桥联，模拟通过这种酶在环氧化物 开环的反应坐标中遇到的特征（参见Argiriadi, Μ. A.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 10637-10642 和 Argiriadi，M. A.等，J. Biol Chem. 2000, 275, 15265-15270)。这 些抑制剂有效地减少若干体外模型和体内模型中的环氧化物水解（参见Yu，Z.等，Circ. Res. 2000, 87, 992-998 ;Morisseau，C.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 8849-8854 ; 和 Newman, J. W.等，Environ. Health Perspect. 2001，109, 61-66)。尽管高活性与这些抑制 剂相关，但是仍存在对拥有类似或增加的活性的化合物的需要，优选地具有改进的溶解度 和/或药物代谢动力学性质以促进配制和递送。
[0011] 本发明提供此类化合物连同用于使用其的方法和包含其的组合物。
[0012] 发明简述
[0013] 在一些实施方案中，本发明提供以下各项中的化合物：
[0014] 1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0015] (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0016] 1-(1_异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0017] 1- (1- (2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0018] 1-(1-(2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0019] (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0020] 1-环己基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌陡-4-基）脲、
[0021] 1-环庚基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0022] 1- (4-异丙基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0023] 1- (3, 5-二-三氟甲基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0024] 1- (4-叔丁基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0025] 1-(4-乙基环己基）-3-(1-异丁酰基哌啶-4-基）脲，
[0026] 或其盐和异构体。
[0027] 在另一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明的化合物和药 学上可接受的赋形剂。
[0028] 鉴于上述内容，一方面，本发明提供一种用于抑制可溶性环氧化物水解酶的方法， 所述方法包括使可溶性环氧化物水解酶与抑制量的本发明的化合物接触。
[0029] 在其它实施方案中，本发明提供了一种用于监测可溶性环氧化物水解酶的活性的 方法，方法包括使可溶性环氧化物水解酶与足以通过与存在于所述sHl的催化部位中的一 个或多个色氨酸残基相互作用而使可溶性环氧化物水解酶的荧光产生可检测的变化的量 的本发明的化合物接触。
[0030] 附图简述
[0031] 图1示出用于制备本发明的化合物的合成方案1-4。
[0032] 图2示出本发明的化合物和现有技术化合物的活性数据的表格。
[0033] 图3示出在0. 3mg/kg(MPK)下施用的小鼠体内的化合物1728、化合物2372、化合 物2389、化合物2422和化合物2426的血液药物水平。通过经口管饲用20% (v/v)PEG400 的富含油酸的甘油三酯溶液配制的药物来治疗小鼠。结果为8只小鼠的平均值。
[0034] 图4示出针对本发明的各种化合物的小鼠体内的血液浓度水平，其中在0. 3mg/ kg(MPK)下施用化合物。通过经口管饲用20% (v/v)PEG400的富含油酸的甘油三酯溶液配 制的药物来治疗小鼠。结果为8只小鼠的平均值。
[0035] 图5示出各种施用剂量下的在0. 1MPK、0. 3MPK、1MPK和3MPK下的大鼠加上在单次 剂量3MPK下的另一只大鼠体内的化合物2389和化合物2422的血液浓度水平。通过经口 管饲用20% (v/v)PEG400的富含油酸的甘油三酯溶液配制的药物来治疗大鼠。结果为8只 大鼠的平均值。
[0036] 图6示出在0. 1MPK、0. 3MPK、1MPK和3MPK下的各种施用剂量下的大鼠体内的化合 物2391和化合物2696的血液浓度水平。通过经口管饲用20% (v/v)PEG400的富含油酸的 甘油三酯溶液配制的药物来治疗大鼠。结果为8只大鼠的平均值。
[0037] 图7示出在0. 1MPK、0. 3MPK、1MPK和3MPK下的各种施用剂量下的大鼠体内的化合 物1770的血液浓度水平。通过经口管饲用20% (v/v)PEG400的富含油酸的甘油三酯溶液 配制的药物来治疗大鼠。结果为8只大鼠的平均值。
[0038] 发明详述
[0039] I.缩写和定义：
[0040] "顺式-环氧二十碳三烯酸"（"EET"）为通过细胞色素 P450环氧化酶合成的生物 介体。
[0041] "环氧化物水解酶"（"EH";EC 3. 3. 2. 3)为α / β水解酶折叠家族中的酶，所述酶 将水加成至称为环氧化物的3元环醚。
[0042] "可溶性环氧化物水解酶"（"sEH"）为内皮细胞、平滑肌细胞和其它细胞类型中的 酶，所述酶将EET转化成称为二羟基二十碳三烯酸（"DHET"）的二羟基衍生物。鼠 sHl的 克隆和序列列举于 Grant 等，J. Biol Chem. 268(23):17628-17633(1993)中。人 sHl 序列 的克隆、序列和登录号列举于 Beetham 等，Arch. Biochem. Biophys. 305 (1) : 197-201 (1993) 中。人sEH的氨基酸序列还作为美国专利号5, 445, 956的SEQ ID N0:2列举出；编码人 sHl的核酸序列作为所述专利的SEQ ID NO: 1的核苷酸42-1703列举出。基因的进化和 命名讨论于Beetham等，DNA Cell Biol. 14 (1):61-71 (1995)中。可溶性环氧化物水解酶 代表啮齿动物与人之间具有超过90 %同源性的单一高度保守基因产物（Arand等，FEBS Lett.，338:251-256(1994))。
[0043] 术语"治疗（treat) "、"治疗（treating)"和"治疗（treatment)"是指治疗或改 善损伤、病理、病状或症状（例如，疼痛）的任何成功标记，包括任何客观或主观参数，如减 轻、消退、减弱症状或使症状、损伤、病理或病状对患者更耐受；减小症状或病状的频率或持 续时间；或在一些情况下，预防症状或病状的发作。治疗或改善症状可以基于任何客观或主 观参数；包括例如体检的结果。
[0044] 术语"调节"是指化合物增加或减小相关活动的功能或活性的能力（例如，可溶性 环氧化物水解酶）。如本文以其不同形式使用的"调节"意指包括与sHl相关的活性的拮抗 作用和部分拮抗作用。sEH的抑制剂为例如结合以部分或完全地阻碍酶活性的化合物。
[0045] 如本文所使用的术语"化合物"旨在不仅涵盖指定的分子实体而且还涵盖其药学 上可接受的药理学活性衍生物，包括但不限于盐、前药缀合物如酯和酰胺、代谢物、水合物、 溶剂化物等。
[0046] 如本文所使用的术语"组合物"旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及直接 或间接地由指定量的指定成分的组合产生的任何产品。"药学上可接受的"意指必须与制剂 的其它成分相容并且不会对其受体有害的载体、稀释剂或赋形剂。
[0047] 术语"受试者"在本文定义为包括动物如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物（例 如，人）、奶牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在一些实施方案中，受试者为人。
[0048] 术语"sEH-介导的疾病或病状"等是指特征在于小于或大于正常sffi活性的疾病 或病状。sEH-介导的疾病或病状为sEH的调节对潜在的病状或疾病产生一些影响（例如， sEH抑制剂或拮抗剂在至少一些患者体内产生患者健康的一些改进）的疾病或病状。
[0049] "薄壁组织"是指如与相关的结缔组织或支持组织区别的器官的组织特征。
[0050] "慢性阻塞性肺疾病"或"C0PD"有时还称为"慢性阻塞性气道疾病"、"慢性阻塞性 肺病"和"慢性气道疾病"。coro -般定义为特征在于最大呼吸流量减少和肺的用力排空缓 慢的病症。coro被认为涵盖两种相关的病状，肺气肿和慢性支气管炎。coro可以通过普通 医师使用本领域公认的技术，如患者的用力肺活量（"fvc"）、在最大吸入后可以用力排出 的空气的最大体积来诊断。在普通医师的办公室中，通常由通过肺活量计的6秒最大呼气 来近似FVC。C0PD、肺气肿和慢性支气管炎的定义、诊断和治疗为本领域熟知的并且由例如 Honig 和 Ingram 在 Harrison' s Principles of Internal Medicine (Fauci 等编著），第 14 版，1998, McGraw-Hill, New York,第 1451-1460 页（下文为 "Harrison's Principles of Internal Medicine"）中详细讨论。
[0051] "肺气肿"为特征在于终末细支气管远端的气室永久性破坏扩大的肺疾病。
[0052] "慢性支气管炎"为特征在于持续一个月中的大多数天数、持续三个月、一年、持续 两年的慢性支气管分泌的肺疾病。
[0053] 如名称所暗含"阻塞性肺疾病"和"阻塞性肺病"是指与限制性疾病相反的阻塞性 疾病。这些疾病具体地包括COPD、支气管哮喘和小气道疾病。
[0054] "小气道疾病"是指气道阻塞完全或主要由于涉及小气道的少数患者。这些被定义 为直径小于2mm的气道并且相应于小软骨支气管、终末细支气管和呼吸性细支气管。小气 道疾病（SAD)通过增加气道阻力的炎性变化和纤维化变化代表腔阻塞。阻塞可以是暂时的 或永久的。
[0055] "间质性肺病（ILD) "为涉及肺泡壁、肺泡周围组织和邻接支持结构的病状的组。 如在美国肺脏协会的网页上所讨论，肺的气囊之间的组织为间质，并且所述间质为疾病中 受纤维化影响的组织。患有疾病的人因为肺组织僵硬而具有呼吸困难，但是相反患有阻塞 性肺病的人不具有呼气困难。间质性肺病的定义、诊断和治疗为本领域熟知的并且由例如 Reynolds, Η· Y.在Harrison's Principles of Internal Medicine,同上，在第 1460-1466 页中详细讨论。Reynolds注意到，虽然ILD具有各种发起事件，但是肺组织的免疫病理反应 为限制的并且因此ILD具有共同的特征。
[0056] "特发性肺纤维化"或"IPF"被认为是原型ILD。虽然它为病因未知的特发性的， 但是Reynolds同上注意到术语是指明确定义的临床实体。
[0057] "支气管肺泡灌洗"或"BAL"为容许从下呼吸道去除和检查细胞并且在人体内用作 肺病症如IPF的诊断手续的测试。在人患者中，通常在支气管镜检过程中进行所述测试。
[0058] "抑制（inhibition) "、"抑制（inhibits) "、"抑制（inhibiting) "和"抑制剂"是 指禁止具体作用或功能的化合物或禁止具体作用或功能的方法。
[0059] 术语"接触"是指使至少两种相异的物种接触以使得它们可以反应的过程。然而， 应该了解到，所得到的反应产物可以直接由添加的试剂之间的反应产生或由可以在反应混 合物中产生的来自一种或多种添加的试剂的中间体产生。
[0060] 术语"盐"是指在本发明的方法中使用的化合物的酸盐或碱盐。药学上可接受的 盐的说明性实例为无机酸（盐酸、氢溴酸、磷酸等）盐、有机酸（乙酸、丙酸、谷氨酸、柠檬酸 等）盐、季铵（甲基碘、乙基碘等）盐。应该理解到，药学上可接受的盐为非毒性的。关于 合适的药学上可接受的盐的额外信息可以见于Remington' s Pharmaceutical Sciences, 第17版，Mack Publishing Company, Easton, Pa. ,1985中，所述参考文献以引用的方式并 入本文。
[0061] 术语"药学上可接受的赋形剂"是指帮助活性剂施用至受试者或被受试者吸收的 物质。有用于本发明的药物赋形剂包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣、甜 味剂、调味剂和颜料（color)。本领域普通技术人员将认识到其它药物赋形剂也是有用于本 发明。
[0062] 术语"治疗有效量或剂量"或"治疗足够量或剂量"或"有效或足够的量或剂量" 是指针对所述剂量施用产生治疗作用的剂量。精确的剂量将取决于治疗的目的，并且将 由本领域普通技术人员使用已知技术可确定（参见，例如Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (第 1-3 卷,1992) ；Lloyd,The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999) ；Pickar, Dosage Calculations (1999)； 和 Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第 20 版,2003,Gennaro 编 著，1^--111(3〇?，町111&1118&1111^118)。在致敏细胞中，治疗有效剂量可以常常低于非致敏细 胞的常规治疗有效剂量。
[0063] II.概述
[0064] 本发明源自以下发现：1，3-二取代脲（或相应的酰胺或氨基甲酸酯，还称为初级 药效团）可以进一步功能化以提供具有改进物理性质的更有效sHl抑制剂。如本文所描述， 引入杂环部分可以增加 sEH抑制剂的水溶性和口服利用度。这些部分的组合提供各种化合 物增加的水溶性。
[0065] 杂环药效团的发现还已经导致采用用于建立具有sEH抑制活性的广泛化合物的 组合化学方法。极性药效团将分子分成各自可以组合方式通过普通化学方法来简单操控的 结构域，导致设计和确认用于治疗疾病如高血压和血管炎症的新型口服可利用治疗剂。本 发明的药剂（agent)治疗此类疾病同时增加钠排泄，减少血管和肾炎症并且减少男性勃起 功能障碍。如下所示（参见实施例和附图），溶解度、生物利用度和药理性质的改变导致可 以改变实验动物的调节脂质的化合物在与其二醇产物或促炎性和高血压的羟基二十碳四 烯酸（HETE)相比时增加环氧花生四烯酸酯衍生物的相对量。因为环氧花生四烯酸酯为抗 高血压和抗炎的，所以改变脂质比可以导致血压降低以及血管和肾炎症减少。如在美国专 利申请号10/817, 334和11/256,685中所报道已经验证了这种方法，所述专利申请以引用 的方式整体并入本文。
[0066] 杂环基团改进了 sHl抑制剂的水溶性以及sEH的特异性，并且多种多样的官能性 如酯、酰胺、氨基甲酸酯或能够类似地贡献出或接受氢键的类似官能性可以有助于这个极 性基团。例如，在药物化学中，杂环基团通常用于模拟羰基作为氢键供体和受体。当然，一 级、二级和三级药效基团可以组合在具有适合间隔的单个分子中以便改进活性或作为前药 呈现抑制剂。
[0067] III.用于抑制可溶性环氧化物水解酶的化合物：
[0068] 除了以下提供的方法，本发明提供可以抑制可溶性环氧化物水解酶的活性的化合 物。具体地来说，本发明提供具有选自下式的式的化合物。本发明的化合物具有允许附接 荧光分子用于结合研究的化学处理，如荧光偏振或FRET。还可以将亲和配体附接至本发明 的化合物。
[0069] 在一些实施方案中，本发明提供以下各项中的化合物：
[0070] 1- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0071] (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0072] 1- (1-异丁酰基哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0073] 1- (1- (2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0074] 1- (1- (2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0075] (S) -1- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0076] 1-环己基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌陡-4-基）脲、
[0077] 1-环庚基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0078] 1-(4-叔丙基苯基）-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0079] 1-(3,5-二-三氟甲基苯基）-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0080] 1- (4-叔丁基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、
[0081] 1-(4-乙基环己基）-3-(1-异丁酰基哌啶-4-基）脲，
[0082] 或其盐和异构体。
[0083] 在一些实施方案中，化合物可为
[0084] 1- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、
[0085] (S) -1- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0086] 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、或
[0087] (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
[0088] 在一些其它实施方案中，化合物可为
[0089] (S) -1- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲基）苯基）脲、
[0090] 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、或
[0091] (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
[0092] 在一些实施方案中，化合物可为⑶-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌 啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲。在其它实施方案中，化合物可为1-(1-异丁酰 基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。在一些其它实施方案中，化合物可为 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
[0093] 本发明的某些化合物拥有不对称碳原子（光学中心）或双键；外消旋体、非对映异 构体、几何异构体和单独的异构体所有均旨在涵盖于本发明的范围内。
[0094] 本发明的酸性化合物的药学上可接受的盐为使用碱形成的盐，称为阳离子盐如碱 金属盐和碱土金属盐，如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐以及铵盐，如铵盐、三甲基铵盐、二乙 基铵盐和二 _(轻甲基）_甲基-铵盐。
[0095] 类似地如无机酸、有机羧酸和有机磺酸例如盐酸、甲磺酸、马来酸的酸加成盐还可 能提供构成结构的一部分的碱性基团，如吡啶基。
[0096] 可以通过使盐与碱或酸接触并且以常规方式分离母体化合物来再生化合物的中 性形式。化合物的母体形式在某些物理性质（如在极性溶剂中的溶解度）方面不同于各种 盐形式，但在其它方面，盐出于本发明的目的等效于化合物的母体形式。
[0097] 在一些实施方案中，本发明的sHl抑制剂在定义的测定中的IC5(I小于50 μ M。在 另一个实施方案中，化合物的IC5(I为ΙμΜ或更少。在另一个实施方案中，化合物的IC5Q为 500nM或更少。在另一个实施方案中，化合物的IC 5(I为150nM或更少。在另一个实施方案 中，化合物的IC5(I为ΙΟΟηΜ或更少。在另一个实施方案中，化合物的IC 5(I为50nM或更少。 在另一个实施方案中，化合物的IC5(I为InM或更少。
[0098] 可以通过如一般在方案中所概述的各种方法来制备本发明的化合物。方案1描述 通过使取代的芳基异氰酸酯与保护的4-氨基-哌啶缩合、接着去保护哌啶氮并且与合适的 基团如羧酸和用于偶联哌啶氮和羧酸的EDCI反应来制备脲。
[0099] 方案2描述如在方案1中所描述的脲的形成，但是其中哌啶氮已经被官能化。方 案3描述类似于方案2的方法，但是其中芳基异氰酸酯在原位由芳基胺和三光气生成。 [0100] 方案4描述使用方案1中描述的方法制备磺酰基-哌啶，但是其中哌啶氮使用磺 酰氯被磺酰基改性。
[0101] IV.药物组合物
[0102] 在另一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明的化合物和药 学上可接受的赋形剂。
[0103] 本发明的化合物可以各种各样的口服剂型、肠胃外剂型和局部剂型制备和施 用。口服制剂包括适用于患者摄取的片剂、丸剂、粉剂、糖锭剂、胶囊、液体、锭剂、扁囊 齐IJ、凝胶、糖浆、浆液、混悬液等。本发明的化合物还可以通过注射，即静脉内、肌肉内、 皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内施用。而且，本文所描述的化合物可以通过吸入例如 鼻内施用。另外，本发明的化合物可以透皮施用。本发明的化合物还可以通过眼内、阴 道内和直肠内途径施用，包括栓剂、吹入剂、粉剂和气雾剂制剂（例如具有类固醇吸入 齐II，参见 R〇hatagi，J.Clin.Pharmacol.35:1187-1193, 1995 ;Tjwa，Ann.Allergy Asthma Immunol. 75:107-111，1995)。因此，本发明还提供包括药学上可接受的载体或赋形剂和本 发明的化合物或本发明的化合物的药学上可接受的盐的药物组合物。
[0104] 为了由本发明的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体可为固体或液 体。固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散粒剂。固体载体 可为一种或多种物质，其还可以用作稀释剂、调味剂、结合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包 囊材料。关于用于配制和施用的技术的细节很好地描述于科学和专利文献中，参见例 如最新版本的 Remington, s Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA( "Remington，s"）。
[0105] 在粉剂中，载体为精细分散的固体，其与精细分散的活性组分混合。在片剂中，活 性组分以合适的比例与具有必要结合性质的载体混合并且压制成所希望的形状和大小。粉 剂和片剂优选地含有5%或10%至70%的活性化合物。
[0106] 组合物通常包括常规药物载体或赋形剂，并且可以额外包括其它药剂、载体、佐 齐?、稀释剂、组织渗透增强剂、增溶剂等。优选地，组合物将含有约〇. 01重量％至约90重 量％、优选地约0. 1重量％至约75重量％、更优选地约0. 1重量％至50重量％、还更优选 地约0. 1重量％至10重量％的本发明的配体或其组合，其中剩余物由合适的药物载体和/ 或赋形剂组成。可以通过本领域熟知的方法例如REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES 同上，对具体组成和施用途径定制适当的赋形剂。
[0107] 合适的固体赋形剂包括但不限于：碳酸镁；硬脂酸镁；磷酸钙；硅酸钙；滑石；果 胶；葡聚糖、糊精和环糊精包合复合物；低熔点蜡；可可脂；碳水化合物；糖类，包括但不限 于乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；淀粉，包括但不限于来自玉米、小麦、稻米、土豆或 其它植物的淀粉；纤维素如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；以及树胶， 包括阿拉伯树胶、黄蓍胶和阿拉伯胶；以及蛋白质，包括但不限于明胶、胶原；微晶纤维素、 水、盐水、糖浆、乙基纤维素和聚丙烯酸如卡波普，例如卡波普941、卡波普980、卡波普981 等；润滑剂；矿物油；润湿剂；乳化剂；悬浮剂；防腐剂如羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯 和羟基苯甲酸丙酯（即对羟基苯甲酸酯） ；PH调节剂，如无机和有机的酸和碱；甜味剂；以 及调味剂；生物可降解聚合物珠粒。如果希望，可以添加崩解剂或增溶剂，如交联聚乙烯吡 咯烷酮、琼脂、海藻酸、海藻酸盐或其盐，如海藻酸钠。
[0108] 药学上可接受的载体可以包括例如用来稳定本发明的化合物或调节其吸收的生 理上可接受的化合物或其它所希望的赋形剂。生理上可接受的化合物包括例如碳水化合 物，如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质 或其它稳定剂或赋形剂。本领域普通技术人员将知道选择药学上可接受的载体（包括生理 上可接受的化合物）取决于例如本发明的化合物的施用途径和本发明的化合物的具体物 理化学特征。
[0109] 通常，此类载体在所采用的剂量和浓度下应该对接受者没有毒性。通常，此类组合 物的制备需要使治疗剂与以下物质组合：缓冲剂；抗氧化剂，如抗坏血酸；低分子量（小于 约10个残基）多肽；蛋白质；氨基酸；碳水化合物，包括葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或糊精；螯合 齐U，如EDTA ;谷胱甘肽以及其它稳定剂和赋形剂。中性缓冲的盐水或与非特异性血清白蛋 白混合的盐水为示例性适当的稀释剂。
[0110] 糖锭核提供有合适的包衣如浓缩糖溶液，其还可以含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯 吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合 物。可以将染料或颜料添加至片剂或糖锭包衣以便用于产品鉴定或以便表征活性化合物的 量（即，剂量）。本发明的药物制剂还可以使用例如由明胶制成的推入配合胶囊、以及由明 胶制成的软密封胶囊和如甘油或山梨醇的包衣口服使用。推入配合胶囊可以含有与填充剂 或结合剂如乳糖或淀粉、润滑剂如滑石或硬脂酸镁以及任选地稳定剂混合的本发明的化合 物。在软胶囊中，本发明的化合物可以溶解或悬浮在合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡或 具有或不具有稳定剂的液体聚乙二醇。
[0111] 为了制备栓剂，首先使低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化并且如通 过搅拌使活性组分均匀分散在其中。然后将熔化的均匀混合物倾倒入合宜大小的模具中， 允许冷却并且从而固化。
[0112] 液体形式制剂包括溶液、悬浮液以及乳液，例如水或水/丙二醇溶液。针对肠胃外 注射，可以在水性聚乙二醇溶液中以溶液形式配制液体制剂。
[0113] 适用于口服使用的水溶液可以通过将活性组分溶解在水中并且添加所希望的合 适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。适用于口服使用的水性悬浮液可以通过使用 粘性材料和分散剂或润湿剂使精细分散的活性组分分散在水中来制得，所述粘性材料如天 然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙 烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶，所述分散剂或润湿剂如天然存在的磷脂（例如，卵磷 脂）、氧化烯与脂肪酸的缩合产物（例如，聚氧乙烯硬脂酸酯）、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩 合产物（例如，十七碳乙烯辛醇酯（heptadecaethylene oxycetanol))、环氧乙烧与衍生自 脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物（例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯）、或环氧乙烷与衍生 自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物（例如，聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯）。水性悬浮 液还可以含有一种或多种防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种 着色剂、一种或多种调味剂以及一种或多种甜味剂如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。可以调节制剂 的摩尔渗透压浓度。
[0114] 还包括固体形式制剂，其用以在使用之前短时间内转化为用于口服施用的液体形 式制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。这些制剂除了活性组分以外可以含有着 色剂、调味齐U、稳定齐U、缓冲齐U、人造和天然的甜味齐U、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0115] 油性悬浮液可以通过将本发明的化合物悬浮在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油 或椰子油中或悬浮在矿物油如液体石蜡中或这些的混合物中来配制。油性悬浮液可以含有 增稠剂如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以添加甜味剂以提供可口的口服制剂，如甘油、山梨醇 或蔗糖。这些制剂可以通过添加抗氧化剂如抗坏血酸来保存。可注射的油媒介物的实例参 见Minto，J. Pharmacol Exp. Ther. 281:93-102, 1997。本发明的药物制剂还可以呈水包油乳 液的形式。油相可为以上所描述的植物油或矿物油或这些的混合物。合适的乳化剂包括天 然存在的树胶，如阿拉伯树胶和黄蓍树胶；天然存在的磷脂，如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸 和己糖醇酐的酯或偏酯，如脱水山梨醇单油酸酯；以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如 聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。如在糖浆和酏剂的配制中，乳液还可以含有甜味剂和调味 齐IJ。此类制剂还可以含有缓和剂、防腐剂或着色剂。
[0116] V.施用
[0117] 可以经由任何接受的施用方式进行本发明的化合物与需要时的适合药物赋形剂 的施用。因此，施用可以例如为静脉内、局部、皮下、经皮、透皮、肌肉内、口服、关节内、肠胃 夕卜、小动脉内、皮内、心室内、颅内、腹膜内、病灶内、鼻内、直肠、阴道或通过吸入。还可以直 接向骨表面施用和/或进入骨周围的组织中。
[0118] 含有本发明的化合物或化合物的组合的组合物可以重复施用，例如施用至少2 次、3次、4次、5次、6次、7次、8次或更多次，或可以通过连续输注施用组合物。施用的合适 的部位包括但不限于皮肤、支气管、胃肠、肛门、阴道、眼睛和耳朵。制剂可以采取固体、半固 体、冻干粉末的形式或液体剂型，例如像片剂、丸剂、胶囊、粉剂、溶液、混悬液、乳液、栓剂、 保留灌肠剂、霜剂、软膏剂、洗剂、凝胶、气雾剂等，优选地呈适用于简单施用精确剂量的单 位剂型。
[0119] 通常将药物制剂递送至哺乳动物，包括人和非人哺乳动物。使用本发明方法治疗 的非人哺乳动物包括家养动物（即，犬、猫、鼠、啮齿动物和兔类）和农业动物（牛、马、绵 羊、猪）。
[0120] 药物制剂优选地呈单位剂型。术语"单位剂型"是指适合用作人受试者和其它哺乳 动物（例如，狗）的单位剂量的物理不连续单位，每个单位均含有计算以产生希望的发作、 耐受性和/或治疗作用的预先确定的量的与合适的药物赋形剂缔合的活性材料（例如，安 瓿）。另外，可以由接着可以产生更稀释的单位剂量组合物的物质制备更浓缩的组合物。因 此，更浓缩的组合物将含有大致上多于例如至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、 9倍、10倍或更多倍的化合物或化合物的组合的量。在所述形式中，制剂被再分成含有适当 量的活性组分的单位剂量。单位剂型可为包装的制剂，含有不连续量的制剂的包装，如包装 片剂、胶囊以及小瓶或安瓿中的粉末。而且，单位剂型可为胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身， 或单位剂型可为呈包装形式的适当数目的任何这些。如果希望，组合物还可以含有其它相 容的治疗剂。优选的药物制剂可以呈持续释放制剂递送本发明的化合物。
[0121] 用于制备此类剂型的方法为本领域普通技术人员已知的（参见例如REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES,第18版，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990))。待施用的 组合物含有以当根据本发明的教义施用时用于减轻治疗的病状（例如骨质疏松症）的药物 有效量的一定量的化合物或化合物的组合。另外，本发明的化合物的药学上可接受的盐（例 如，酸加成盐）可以使用合成有机化学领域普通技术人员已知的标准工序来制备并且包括 在组合物中，并且例如由 J. March, Advanced Organic Chemistry:Reactions, Mechanisms and Structure,第 4 版·（New York:Wiley_Interscience, 1992)描述。
[0122] 针对口服施用，组合物可以呈片剂、胶囊、乳液、混悬液、溶液、糖浆、喷雾剂、锭剂、 粉剂和持续释放制剂的形式。用于口服施用的适合赋形剂包括药物级的甘露醇、乳糖、淀 粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、明胶、蔗糖、碳酸镁等。
[0123] 在一些实施方案中，药物组合物采取丸剂、片剂或胶囊的形式，并且因此组合物可 以连同化合物或化合物的组合含有任何以下物质：稀释剂如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等；崩解 剂如淀粉或其衍生物；润滑剂如硬脂酸镁等；以及粘合剂如淀粉、阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯 烷酮、明胶、纤维素和其衍生物。化合物还可以配制成例如置于聚乙二醇（PEG)载体中的栓 剂。
[0124] 可以通过将化合物或化合物的组合和任选地一种或多种药学上可接受的佐剂溶 解或分散在载体例如像盐水溶液（例如，〇. 9% w/v氯化钠）、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等中 以形成例如用于口服、局部或静脉内施用的溶液或悬浮液来制备液体组合物。本发明的化 合物还可以配制成保留灌肠剂。
[0125] 针对局部施用，本发明的组合物可以呈乳液、洗剂、凝胶、霜剂、果冻、溶液、悬浮 液、软膏和透皮贴剂的形式。针对通过吸入递送，组合物可以作为干粉或呈液体形式经由喷 雾器递送。针对肠胃外施用，组合物可以呈无菌可注射溶液和无菌包装粉末的形式。优选 地，在约4. 5至约7. 5的pH下配制可注射溶液。
[0126] 本发明的组合物还可以呈冻干形式提供。此类组合物可以包括用于在施用前复原 的缓冲剂例如碳酸氢盐或可以包括在冻干组合物中用于例如用水复原的缓冲剂。冻干组合 物可以进一步包含合适的血管收缩剂，例如肾上腺素。冻干组合物可以被提供在注射器中， 任选地与用于复原的缓冲剂组合包装，以使得复原的组合物可以向患者立即施用。
[0127] 通常，施用的剂量将有效于使皮摩尔至微摩尔浓度的化合物递送至适当的部位或 多个部分。然而，本领域普通技术人员理解到所施用的剂量将取决于许多因素而变化，所述 因素包括但不限于待施用的具体化合物或一组化合物、施用方式、应用类型（例如，成像、 治疗）、患者年龄以及患者的物理状况。优选地，应该使用产生希望的结果所要求的最小剂 量和浓度。针对儿童、年老体弱的患者和患有心脏和/或肝脏疾病的患者应该适当调整剂 量。可以使用评估剂量的实验动物模型从本领域已知的研究中获得另外的指导。然而，与 本发明的化合物相关的细胞结合亲和性和特异性增加容许剂量浓度和重复给药的安全界 限更宽。
[0128] 本发明的药物组合物可以被制备用于通过各种不同途径来施用。通常，基于施用 的方式选择载体的类型。药物组合物可以被配制用于任何适当方式的施用，包括例如局部、 口服、鼻、鞘内、直肠、阴道、舌下或肠胃外施用，包括皮下、静脉内、肌肉内、胸骨内、海绵窦 内、道内（intrameatal)或尿道内注射或输注。药物组合物（例如，用于口服施用或通过注 射递送）可以呈液体的形式（例如，酏剂、糖浆、溶液、乳液或悬浮液）。液体药物组合物可 以包括例如一种或多种以下物质：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液（优选地生理盐水）、 林格溶液、等渗氯化钠、可以用作溶剂或悬浮介质的固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它 溶剂；抗细菌剂；抗氧化剂；螯合剂；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及用于调节张 力的试剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可以被封闭在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性 注射器或多次剂量小瓶中。使用生理盐水是优选的，并且可注射药物组合物优选地为无菌 的。
[0129] 本发明的制剂还适用于在所有身体间隙/体腔中施用，包括但不限于肋部、腹膜、 颅、纵隔、心包、滑囊或滑液囊、硬膜外、鞘内、眼内、关节内、椎间盘内、髓内、脊髓周围等。
[0130] 一些缓释实施方案包括缓慢生物可降解和/或溶解的聚合物质。此类聚合物质 包括聚乙烯吡咯烷酮、低分子量和中等分子量的羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素、交联 羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉、甲基丙烯酸钾二乙烯基苯共聚物、聚乙烯醇、淀粉、淀粉衍生 物、微晶纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素和纤维素衍生物、β -环糊精、聚（甲基乙烯基醚/ 马来酸酐）、葡聚糖、scierozlucans、甘露聚糖、黄原胶、海藻酸和其衍生物、糊精衍生物、单 硬脂酸甘油酯、半合成甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、甘油二十二烷酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明 胶、硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钠、滑石、苯甲酸钠、硼酸以及胶体二氧化硅。
[0131] 本发明的缓释剂还可以包括佐剂，如淀粉、预凝胶淀粉、磷酸钙、甘露醇、乳糖、蔗 糖、葡萄糖、山梨醇、微晶纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、淀粉溶液、乙基纤维 素、阿拉伯树胶、黄蓍胶、硬脂酸镁、硬脂酸、胶体二氧化硅、单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、 蜡以及单取代甘油酯、二取代甘油酯和三取代甘油酯。还可以如通常在W094/06416中所描 述制备缓释剂。
[0132] 在实践本发明的方法中，药物组合物可以单独使用或与其它治疗剂或诊断剂组合 使用。在本发明的组合实验方案中使用的额外药物可以单独地施用或在组合实验方案中使 用的一种或多种药物可以如在混合物中一起施用。在单独施用一种或多种药物的情况下， 每种药物的施用时间和方案可以变化。可以单独地与本发明的化合物同时施用其它治疗剂 或诊断剂或在不同时间下施用其它治疗剂或诊断剂。
[0133] VI.方法
[0134] 鉴于上述内容，本发明一方面提供一种用于抑制可溶性环氧化物水解酶的方法， 所述方法包括使可溶性环氧化物水解酶与抑制量的本发明的化合物接触。
[0135] 在其它实施方案中，本发明提供了一种用于监测可溶性环氧化物水解酶的活性的 方法，方法包括使可溶性环氧化物水解酶与足以通过与存在于所述sHl的催化部位中的一 个或多个色氨酸残基相互作用而使可溶性环氧化物水解酶的荧光产生可检测的变化的量 的本发明的化合物接触。
[0136] A.监测可溶性环氧化物水解酶活性的测定：
[0137] 另外，本发明提供用于监测可溶性环氧化物水解酶活性，特别是通过施用以上提 供的一种或多种化合物已调节的活性的各种测定和相关的方法。
[0138] 在一组实施方案中，本发明提供用于减少由可溶性环氧化物水解酶的作用产生的 生物活性二醇的形成的方法，所述方法包括使可溶性环氧化物水解酶与足以抑制可溶性环 氧化物水解酶的活性和减少生物活性二醇的形成的量的本发明的化合物接触。
[0139] 在另一组实施方案中，本发明提供用于在可溶性环氧化物水解酶的存在下稳定生 物活性环氧化物的方法，所述方法包括使可溶性环氧化物水解酶与足以抑制可溶性环氧化 物水解酶的活性和稳定生物活性环氧化物的量的本发明的化合物接触。
[0140] 在每个这些组的实施方案中，所述方法可以作为体外测定的部分进行或所述方法 可以通过监测各自的生物活性环氧化物或二醇的血液滴度在体内进行。
[0141] 一些脂肪酸的环氧化物和二醇为生物上重要的化学介体并且涉及若干生物过程。 最强的生物数据支持氧脂素作为血管内皮与血管平滑肌之间的化学介体的作用。环氧脂质 为抗炎性的和抗高血压的。另外，认为脂质通过β_氧化以及通过环氧化物水合来代谢。认 为可溶性环氧化物水解酶为涉及这些氧脂素的水解代谢的主要酶。本发明的化合物可以在 体外和体内均抑制环氧化物水解酶并且稳定环氧脂质。这种活性在四个单独的啮齿动物模 型中引起1?血压减少。此外，抑制剂不出与1?血压|旲型相关和无关的肾炎症减少。
[0142] 更具体地来说，本发明提供用于在花生四烯酸酯和亚油酸酯级联中同时监测各种 脂质以便解决系统生物学的方法。GLC-MS系统或LC-MS方法可以用来以高度定量的形式监 测单次注射中的超过740种分析物。分析物包括花生四烯酸环氧化物（EET)、二醇（DHET) 的区域异构体以及包括HETE的其它P450产物。还可以监测花生四烯酸和亚油酸酯系列中 的环加氧酶途径、脂加氧酶途径和过氧化物酶途径的特征产物。此类方法具体用作预测某 些疾病状态。可以在施用环氧化物水解酶的抑制剂之后在哺乳动物中监测氧脂素。通常， EH抑制剂在体液和组织中以二醇浓度为代价增加环氧脂质浓度。
[0143] 用于本发明的此方面的其它化合物为其中通过与天然底物中的末端羧酸与环氧 化物官能团之间的距离近似的距离使初级药效团与二级和/或三级药学团分开的本发明 的那些化合物。
[0144] B.治疗由可溶性环氧化物水解酶调节的疾病的方法：
[0145] 另一方面，本发明提供治疗疾病，尤其是由可溶性环氧化物水解酶（sEH)调节的 那些疾病的方法。方法一般涉及向有此种治疗需要的受试者施用有效量的本发明的化合 物。这种施用的剂量、频率和时间将大部分取决于选择的治疗剂、治疗的病状的性质、受试 者的状况包括年龄、重量和其它病状或病症的存在、施用的制剂以及主治医师的判断。优 选地，本发明的组合物和化合物以及其药学上可接受的盐经由口服、肠胃外、皮下、肌肉内、 静脉内或局部途径施用。通常，以在每天约2mg高达至约2, OOOmg范围内的剂量下施用 化合物，虽然如上所述取决于疾病目标、患者和施用途径，变化将必然发生。在约0. 05mg/ kg至约20mg/kg的范围内、更优选地在约0. 05mg/kg至约2mg/kg的范围内、最优选地在约 0. 05mg/kg至约0. 2mg/kg体重/天的范围内口服施用剂量。针对局部施用所采用的剂量当 然将取决于治疗的区域的大小。
[0146] 先前已示出，可溶性环氧化物水解酶（"sEH"）的抑制剂可以减少高血压。此类抑 制剂可以有用于控制具有不希望地高血压的人们的血压，包括遭受糖尿病的那些人。
[0147] 在一些实施方案中，向有治疗以下疾病需要的受试者施用本发明的化合物：高血 压、确切地来说肾高血压、肝高血压或肺高血压；炎症，确切地来说肾炎症、血管炎症和肺炎 症；成人呼吸窘迫综合症；糖尿病并发症；末期肾疾病；雷诺氏综合症和关节炎。
[0148] C.用于抑制肾退化（肾病）的进展和降低血压的方法：
[0149] 在本发明的另一方面中，如通过蛋白尿所测量，本发明的化合物可以减少对肾脏 的损害，并且尤其是由糖尿病对肾脏的损害。本发明的化合物可以甚至在不具有高血压的 个体中减少由糖尿病引起的肾退化（肾病）。治疗施用的条件如上所述。
[0150] 顺式-环氧二十烷三烯酸（"EET"）可以与本发明的化合物一起使用以进一步减 少肾脏损害。已知花生四烯酸的环氧化物EET为血压的效应子、炎症的调节剂和血管渗透 性的调节剂。由sffi引起的环氧化物的水解减弱了这种活性。抑制sffi升高了 EET的水平， 因为EET水解为DHET的速率减小。不希望受理论约束，相信升高EET的水平干扰了由微脉 管系统变化和糖尿病高血糖的其它病理作用引起的对肾脏细胞的损害。因此，相信升高肾 脏中的EET水平保护肾脏不受由微白蛋白尿至末期肾疾病进展的影响。
[0151] EET为本领域熟知的。有用于本发明的方法的EET以这种优选的顺序包括 14, 15-EET、8, 9-EET和11，12-EET以及5, 6EET。优选地，以甲酯的形式施用EET，其为更稳 定的。熟练的人们将认识到EET为区域异构体，如8S，9R-EET和14R，15S-EET。8, 9-EET、 11，12-EET和 14R, 15S-EET可从例如 Sigma-Aldrich(目录号分别为 E5516、E5641 和E5766， Sigma-Aldrich 公司，St. Louis, M0)商业获得。
[0152] 由内皮产生的EET具有抗高血压性质，并且EET 11，12-EET和14, 15-EET可为内 皮来源的超极化因子（EDHF)。另外，EET如11，12-EET具有促纤维蛋白溶解作用、抗炎性作 用并且抑制平滑肌细胞增殖和迁移。在本发明的上下文中，相信这些有利性质在肾疾病和 心血管疾病状态期间保护脉管系统和器官。
[0153] 现在相信，可以充分抑制sEH活性以增加 EET的水平并且因此扩大通过其自身施 用sHl抑制剂的作用。这容许EET与一种或多种sHl抑制剂一起使用以减少本发明的方法 中的肾病。其进一步容许EET与一种或多种sHl抑制剂一起使用以减少高血压或炎症或这 两者。因此，可以制得可以与一种或多种sEH抑制剂一起施用的EET的药剂，或可以任选地 含有一种或多种EET的含有一种或多种sHl抑制剂的药剂。
[0154] 可以与sEH抑制剂同时施用EET或在施用sHl抑制剂之后施用EET。应该理解到， 像所有药物一样，抑制剂具有由身体代谢其或从身体排出其的速率限定的半衰期，并且抑 制剂将在施用之后具有一段时间，在这段时间过程中其将以足够有效的量存在。如果在施 用抑制剂之后施用EET，因此希望在其过程中抑制剂将以有效于延迟EET的水解的量存在 的时期施用EET。通常，将在施用sHl抑制剂的48小时内施用EET或多种EET。优选地，在 抑制剂的24小时内并且甚至更优选地在12小时内施用EET或多种EET。在希望的升序方 式，在施用抑制剂之后10小时、8小时、6小时、4小时、2小时、1小时或半小时内施用EET或 多种EET。最优选地，与抑制剂同时施用EET或多种EET。
[0155] 在一些实施方案中，EET、本发明的化合物或这两者被提供在容许其随时间释放以 提供更长的作用持续时间的材料中。缓释包衣为药物领域中熟知的；具体缓释包衣的选择 不是本发明的实践的关键。
[0156] EET在酸性条件下易受降解。因此，如果待口服施用EET，希望在胃中保护其不受 降解影响。合宜地，可以涂布用于口服施用的EET以容许其穿过胃的酸性环境进入肠的碱 性环境中。此类包衣为本领域熟知的。例如，涂布有所谓"肠溶包衣"的阿司匹林为商业上 可广泛获得的。此类肠溶包衣可以用来在穿过胃的过程中保护EET。示例性包衣列举于实 施例中。
[0157] 虽然已认识到EET的抗高血压作用，但还尚未施用EET来治疗高血压，因为认为内 源性sEH将使EET水解地太快而使其不能具有任何有用作用。出乎意料地，在构成本发明 的基础的研究过程中发现外源性施用的sHl的抑制剂成功充分地抑制sEH，EET的水平可以 通过外源性EET的施用而进一步升高。这些发现构成相对于抑制肾病的发展和进展共同施 用sEH抑制剂和共同施用以上所描述的EET的基础。这是扩大治疗的重要改进。虽然预期 内源性EET的水平随sHl抑制剂的作用引起的sHl活性的抑制而升高，并且因此在症状或 病理上产生至少一些改进，但是还不能在所有情况下足以完全抑制肾脏损害的进展或抑制 至所想的程度。这是具体的事实，其中疾病或其它因素使内源性EET的浓度降低至正常存 在于健康个体中的那些浓度以下。因此预期与sffi抑制剂一起施用外源性EET是有益的， 并且扩大sEH抑制剂减少糖尿病肾病的进展的作用。
[0158] 本发明可以关于达至其与肾脏或肾脏功能的进展性损害相关的程度的任何形式 和所有形式的糖尿病而使用。糖尿病的慢性高血糖与各种器官，尤其是眼睛、肾脏、神经、心 脏和血管的长期损害、功能障碍和衰竭相关。糖尿病的长期并发症包括具有潜在失明的视 网膜病；导致肾衰竭的肾病；具有足溃疡、截肢和夏科氏关节危险的外周神经病。
[0159] 另外，患有代谢综合症的人们处于进展为2型糖尿病的高危险中，并且因此处于 比糖尿病肾病的平均值更高的危险中。因此希望监测所述个体的微白蛋白尿并且施用sEH 抑制剂和任选地作为干预减少肾病的发展的一种或多种EET。从业者可以在开始干预之前 等待直到看见微白蛋白尿。如上所述，在血压没有130/85或更高的情况下人们可以被诊断 具有代谢综合症。具有血压为130/85或更高的人们与具有血压低于130/85的人们均可以 获益于sEH抑制剂和任选地一种或多种EET的施用以减缓对其肾脏损害的进展。在一些实 施方案中，人们具有代谢综合症和低于130/85的血压。
[0160] 脂质代谢的血脂异常或病症为心脏疾病的另一个危险因素。此类病症包括LDL胆 固醇的水平增加、HDL胆固醇的水平降低以及甘油三酯的水平增加。血清胆固醇并且尤其 是LDL胆固醇的水平增加与心脏疾病的危险增加相关。肾脏也由此类高水平损害。相信 高水平的甘油三酯与肾脏损害相关。具体地来说，超过200mg/dL的胆固醇水平，并且尤其 是超过225mg/dL的水平将表明应该施用sHl抑制剂和任选地EET。类似地，多于215mg/ dL并且尤其250mg/dL或更高的甘油三酯水平将表明施用sHl抑制剂和任选地EET将为可 取的。在具有或不具有EET的情况下施用本发明的化合物可以减少向患者施用他汀类药物 (HMG-CoA还原酶抑制剂）的需要或减少所需要的他汀类的量。在一些实施方案中，用于本 发明的方法、用途和组合物的候选人具有超过215mg/dL的甘油三酯水平和低于130/85的 血压。在一些实施方案中，候选人具有超过250mg/dL的甘油三酯水平和低于130/85的血 压。在一些实施方案中，用于本发明的方法、用途和组合物的候选人具有超过200mg/dL的 胆固醇水平和低于130/85的血压。在一些实施方案中，候选人具有超过225mg/dL的胆固 醇水平和低于130/85的血压。
[0161] D.抑制血管平滑肌细胞增殖的方法：
[0162] 在其它实施方案中，本发明的化合物抑制血管平滑肌（VSM)细胞的增殖而没有显 著的细胞毒性（例如，对VSM细胞特异）。因为VSM细胞增殖为动脉粥样硬化的病理生理学 中的完整过程，这些化合物适用于减缓或抑制动脉粥样硬化。这些化合物有用于处于动脉 粥样硬化危险的受试者，如已具有心脏病发作或示出向心脏的血液循环减少的测试结果的 个体。治疗施用的条件如上所述。
[0163] 本发明的方法具体有用于已具有经皮介入（如重新打开狭窄动脉的血管成形 术）的患者以减少或减缓由再狭窄引起的重新打开的通道的变窄。在一些实施方案中，动 脉为冠状动脉。可以将本发明的化合物放置于聚合物涂层中的支架上以提供控制的局部 的释放以减少再狭窄。用于可植入医疗装置如支架的聚合物组合物和用于将药剂包埋在 聚合物中用于控制的释放的方法为本领域已知的并且例如教导于美国专利号6, 335, 029 ; 6, 322, 847 ;6, 299, 604 ;6, 290, 722 ;6, 287, 285 和 5, 637, 113 中。在一些实施方案中，涂层 经过一段时间释放抑制剂，优选地经过几天、几周或几个月的时期。所选择的具体聚合物或 其它涂层不是本发明的关键部分。
[0164] 本发明的方法有用于减缓或抑制天然血管移植物和合成血管移植物的狭窄或再 狭窄。如上关于支架所述，希望地，合成血管移植物包含随时间释放本发明的化合物以减缓 或抑制VSM增殖和随之而来的移植物狭窄的材料。血液透析移植物为具体实施方案。
[0165] 除了这些用途，本发明的方法可以用来减缓或抑制已具有心脏病发作或其测试结 果表明其处于心脏病发作危险中的人们的血管的狭窄或再狭窄。
[0166] 在一组实施方案中，施用本发明的化合物以减少没有患有高血压的人们中的VSM 细胞的增殖。在另一组实施方案中，本发明的化合物用来减少使用非sffi抑制剂的药剂治 疗高血压的人们中的VSM细胞的增殖。
[0167] 本发明的化合物可以用来干扰展现出不适当的细胞周期调节的细胞增殖。在一组 重要的实施方案中，细胞为癌症的细胞。此类细胞的增殖可以通过使细胞与本发明的化合 物接触来减缓或抑制。确定本发明的具体化合物是否可以减缓或抑制任何具体类型的癌症 的细胞的增殖可以使用本领域常规测定来确定。
[0168] 除了使用本发明的化合物以外，可以通过添加 EET来升高EET的水平。与EET和 本发明的化合物均接触的VSM细胞展现出比暴露于单独地EET或单独地本发明的化合物的 细胞更慢的增殖。因此，如果希望，可以通过连同本发明的化合物一起添加 EET来增强减缓 或抑制本发明的化合物的VSM细胞。在支架或血管移植物的情况下，例如，这可以合宜地通 过将EET连同本发明的化合物一起包埋在涂层中以使得一旦支架或移植物置于适当位置 时即释放这两者来完成。
[0169] E.抑制阻塞性肺疾病、间质性肺疾病或哮喘的进展的方法：
[0170] 慢性阻塞性肺疾病或coro涵盖两种病状，肺气肿和慢性支气管炎，其涉及由空气 污染、长期暴露于化学品和烟草烟雾对肺引起的损害。作为疾病的肺气肿涉及对肺的肺泡 的损害，其引起肺泡之间的间隔消失和随之而来的可供气体交换使用的整个表面积减小。 慢性支气管炎涉及细支气管发炎，从而引起粘蛋白过量产生和随之而来的由通向肺泡的气 道的粘蛋白引起的阻塞。虽然患有肺气肿的人们不必要具有慢性支气管炎或反之亦然，但 是通常患有病状之一的人们还具有另一种病状以及其它肺病症。
[0171] 由于C0PD、肺气肿、慢性支气管炎以及其它阻塞性肺病症引起的对肺的一些损害 可以通过施用已知作为可溶性环氧化物水解酶或" sHl"的酶的抑制剂来抑制或逆转。sEH 抑制剂的作用还可以通过施用EET来增加。作用是随着分开施用两种药剂而至少加成的， 并且确实可为协同的。
[0172] 本文所报道的研究示出EET可以与sHl抑制剂一起使用以减少由烟草烟雾或由延 伸、由职业引起或环境刺激物引起的对肺的损害。这些发现表明共同施用sEH抑制剂和EET 可以用来抑制或减缓C0PD、肺气肿、慢性支气管炎或引起肺发炎的其它慢性阻塞性肺疾病 的发展或进展。
[0173] C0PD的动物模型和患有C0PD的人具有提高的免疫调节淋巴细胞和嗜中性细胞的 水平。引起组织损害的嗜中性细胞释放剂（并且如果没有调节）将随时间具有破坏作用。 不希望受理论约束，相信降低嗜中性细胞水平减少了有助于阻塞性肺疾病如C0PD、肺气肿 和慢性支气管炎的组织损害。在C0PD的动物模型中向大鼠施用sHl抑制剂引起肺中存在 的嗜中性细胞的数目减少。除了 sEH抑制剂以外施用EET还降低嗜中性细胞水平。在sEH 抑制剂和EET存在下的嗜中性细胞水平降低大于在单独sHl抑制剂存在下。
[0174] 虽然预期内源性EET的水平随sHl抑制剂的作用引起的sHl活性的抑制而升高， 并且因此在症状或病理上产生至少一些改进，但是还不能在所有情况下足以抑制coro或 其它肺疾病的进展。这是具体的事实，其中疾病或其它因素使内源性EET的浓度降低至正 常存在于健康个体中的那些浓度以下。因此，预期与sffi抑制剂一起施用外源性EET以扩 大sHl抑制剂在抑制或减少COPD或其它肺疾病的进展方面的作用。
[0175] 除了抑制或减少慢性阻塞性气道病状的进展以外，本发明还提供减少慢性限制性 气道疾病的严重性或进展的新方式。虽然阻塞性气道疾病趋向于由肺薄壁组织并且尤其是 肺泡的破坏引起，但是限制性疾病趋向于由薄壁组织中的过量胶原的沉积引起。这些限制 性疾病通常称为"间质性肺病"或"ILD"并且包括如特发性肺纤维化的病状。本发明的方 法、组合物和用途有用于减少ILD如特发性肺纤维化的严重性或进展。巨噬细胞在刺激间 质细胞（具体是成纤维细胞）以铺设胶原方面起重要作用。不希望受理论约束，相信嗜中 性细胞涉及激活巨噬细胞，并且在本文所报道的研究中发现嗜中性细胞水平降低证明本发 明的方法和用于还将适用于减少ILD的严重性和进展。
[0176] 在一些实施方案中，ILD为特发性肺纤维化。在其它实施方案中，ILD为职业 引起的或环境的暴露相关的疾病。此类ILD的示例为石棉肺、硅肺、煤炭工人的尘肺以 及铍中毒。此外，相信职业引起的暴露于任何许多的无机粉尘和有机粉尘与粘液分泌过 多和呼吸道疾病相关，包括水泥粉尘、焦炉排放、云母、岩石粉尘、棉花粉尘和谷粉尘（与 这些病状相关的职业引起的粉尘的更完整的列表参见Speizer, "Environmental Lung Diseases, ^Harrisor^ Principles of Internal Medicine,下文，第 1429-1436 页的表 254-1)。在其它实施方案中，ILD为肺的结节病。ILD还可以由具体用于乳癌的医学治疗中 的辐射引起，并且由结缔组织或胶原疾病如类风湿关节炎和系统性硬化病引起。相信本发 明的方法、用途和组合物可以有用于每种这些间质性肺疾病。
[0177] 在另一组实施方案中，本发明用来减少哮喘的严重性或进展。哮喘通常引起粘蛋 白分泌过多，从而产生部分气道阻塞。另外，气道发炎引起导致气道阻塞的介体释放。虽然 在哮喘中募集至肺的淋巴细胞和其它免疫调节细胞可以不同于由于coro或ILD而募集的 那些细胞，但是预期本发明将减少免疫调节细胞如嗜中性细胞和嗜酸性细胞的流入并且减 轻阻塞的程度。因此，预期施用SH1抑制剂和与EET组合施用SH1抑制剂将有用于减少由 于哮喘引起的气道阻塞。
[0178] 在每种这些疾病和病状中，相信对肺的至少一些损害是由于渗入到肺中的嗜中性 细胞所释放的药剂。因此，在气道中存在嗜中性细胞表明继续来自疾病或病状的损害，而嗜 中性细胞的数目减少表明损害或疾病进展减少。因此，在药剂的存在下，气道中的嗜中性细 胞的数目减少为减少由于疾病或病状引起的损害并且减缓疾病或病状的进一步发展的药 剂的标记物。存在于肺中的嗜中性细胞的数目可以例如通过支气管肺泡灌洗来确定。
[0179] F.减少中风损害的预防方法和治疗方法
[0180] 可溶性环氧化物水解酶（"sEH"）的抑制剂和与sHl的抑制剂一起施用的EET已 示出减少来自中风的脑损害。基于这些结果，我们预期在缺血性中风之前服用sEH的抑制 剂将减小脑损害的面积并且将很可能减小随之而来的受损程度。损害的面积减小还应该与 更快地从中风影响恢复过来相关。
[0181] 虽然不同亚型的中风的病理生理学不同，但是它们所有均引起脑损害。出血性中 风不同于缺血性中风，因为损害极大地由于当血管破裂之后血液在颅内的有限空间中积累 时的组织压缩，然而在缺血性中风中，损害极大地由于在通过血块阻塞血管的下游失去向 组织的氧气供应。将缺血性中风分成血块阻塞脑中血管的血栓性中风和在体内的其它地方 形成的血块通过血流携带并且在那里阻塞脉管的栓塞性中风。但是，在出血性中风和缺血 性中风中，损害均是由于脑细胞的死亡。然而，基于在我们的研究中所观察到的结果，我们 将在所有类型的中风和在所有亚型中预期脑损害有至少一些减少。
[0182] 许多因素与中风危险增加相关。给定构成本发明的基础的研究的结果，向具有任 何一种或多种以下病状或危险因素的人们施用的sffi抑制剂将减少中风的脑损害的面积 ： 高血压、烟草使用、糖尿病、颈动脉疾病、外周动脉疾病、心房纤维性颤动、短暂性缺血发作 (TIA)、血液病症如高红血细胞计数和镰状细胞贫血病、高血液胆固醇、肥胖症、针对妇女一 天酒精使用多于一种饮品或针对男人一天两种饮品、使用可卡因、中风家族史、先前中风或 心脏病发作或年老。关于年老，中风的危险每10年有所增加。因此，当个体达到60、70或 80时，施用sEH抑制剂具有日益更大的潜在益处。如在下一节中所述，与一种或多种sEH抑 制剂组合施用EET可以有益于进一步减少脑损害。人们可以在导致缺血性再灌注损伤如心 脏病发作的各种疾病中预期来自具有或不具有EET的sEHI的有益作用。
[0183] 在一些使用和方法中，sHl抑制剂和任选地EET向使用烟草、具有颈动脉疾病、具 有外周动脉疾病、具有心房纤维颤动、已具有一种或多种短暂性缺血发作（TIA)、具有血液 病症如高红血细胞计数或镰状细胞贫血病、具有高血液胆固醇、肥胖的、如果是妇女一天使 用超过一种饮品的酒精或如果是男人一天两种饮品、使用可卡因、具有中风家族史、已具有 先前中风或心脏病发作并且不具有高血压或糖尿病、或年龄为60岁、70岁或80岁或更高并 且不具有高血压或糖尿病的人们施用。
[0184] 血块溶解剂如组织纤溶酶原激活物（tPA)已示出如果在中风不久后的几小时内 施用可减少来自缺血性中风的损害程度。tPA例如被FDA批准用于在中风后的前三个小时 内使用。因此，来自中风的至少一些脑损害不是瞬时的，但是经过一段时间或在中风后过去 的一段时间之后发生。因此，相信如果在中风已发生后的6小时内施用，更优选地在中风已 发生后的5小时、4小时、3小时或2小时内施用，则施用sHl抑制剂任选地连同EET -起也 可以减少脑损害，其中每个连续的更短间隔为更优选的。甚至更优选地，在中风后的2小时 或更少或甚至1小时或更少施用抑制剂或多种抑制剂以使脑损害减少最大化。技术人员清 楚知道如何诊断患者是否已患有中风。此类确定通常在医院急诊室中进行，接着是标准鉴 别诊断方案和成像工序。
[0185] 在一些使用和方法中，sHl抑制剂和任选地EET在最后6小时内向以下个人已患 有中风的人们施用：使用烟草、具有颈动脉疾病、具有外周动脉疾病、具有心房纤维颤动、已 具有一种或多种短暂性缺血发作（TIA)、具有血液病症如高红血细胞计数或镰状细胞贫血 病、具有高血液胆固醇、肥胖的、如果是妇女一天使用超过一种饮品的酒精或如果是男人一 天两种饮品、使用可卡因、具有中风家族史、已具有先前中风或心脏病发作并且不具有高血 压或糖尿病、或年龄为60岁、70岁或80岁或更高并且不具有高血压或糖尿病。
[0186] 针对所有这些迹象的治疗施用的条件如上所述。
[0187] 提供以下实施例以说明本发明并且不旨在限制如上或在以下权利要求中所列举 出的本发明的任何方面。
[0188] VII.实施例
[0189] 概沭
[0190] 所有试剂和溶剂均购自 Fishersci、Arcos Organics、TCI America 和 Aldrich，并 且直接使用而无需进一步纯化。在干燥氮气气氛中进行所有合成，除非另外指明。
[0191] 通过薄层色谱法（TCL)在Merck F254硅胶60铝片上监测反应，斑点在光或UV光 (254mm)下可见或用氧化溶液处理（ΚΜη0 4染色）。用Silicycle娃胶60进行柱色谱法。
[0192] 在300MHz下用氘化氯仿（CDC13 = 7.24 ppm )或氘化二甲亚砜（d6-DMS0)作 为内标物在Varian QE-300光谱仪上记录?-ΝΙ?谱。在75MHz下在Varian QE-300光谱 仪上记录13C-NMR谱，并且在282. 4MHz下在Varian QE-300光谱仪上记录19F-NMR谱。
[0193] 合成方法1
[0194] 步骤1.将相应的异氰酸酯（1当量）和4-氨基-Ι-Boc-哌啶（1. 1当量）溶解于 CH2Cl2(100mL)中并且搅拌12h。通过添加水猝灭反应。分离有机层并且用EtOAc萃取水层 4次。在真空下浓缩合并的有机层并且通过快速色谱法进一步纯化，产生相应的Boc-保护 的脲。
[0195] 步骤2.将来自步骤1的Boc保护的脲溶解于HC1溶液（2M，MeOH)中。回流所得 到的溶液持续2h。在真空下去除溶剂并且通过NaOH溶液（6N)使粗产物碱化至pH 12。过 滤沉淀物并且在高真空下干燥。最终产物未保护的脲用作下一步合成的支架。
[0196] 步骤3.除非指出，否则将来自步骤2的未保护的脲（1当量）、EDCI (1.5当量）、 DMAP(1. 5当量）和相应的羧酸（1. 5当量）溶解于CH2C12中并且搅拌过夜。通过添加 HC1 溶液（1M)猝灭反应。收集有机层并且用EtOAc萃取水层4次。在真空下浓缩合并的有机 层并且通过快速色谱法进一步纯化。
[0197] 合成方法2
[0198] 将相应的异氰酸酯（1当量）添加至靶向哌啶（1. 1当量）在CH2Cl2(100mL)中的 悬浮液中。在室温下，搅拌反应过夜。使用添加 HC1溶液（2M，50mL)猝灭反应。收集有机 层并且用EtOAc进一步萃取水层三次。用饱和NaCl溶液洗涤合并的有机层。在真空下浓 缩有机层。通过快速色谱法纯化产物。
[0199] 合成方法3
[0200] 将相应的胺（1当量）和三乙胺（1. 2当量）溶解于CH2C12中并且在-78°C下搅拌。 在-78°C下，逐滴添加溶解于CH 2C12中的三光气（0. 37当量）。然后将反应加温至室温并且 搅拌30分钟。使反应冷却至0°C。缓慢添加溶解于CH2C1 2中的相应哌啶（1. 1当量）并且 在室温下进一步搅拌反应持续12h。使用添加 HC1溶液（2M，50mL)猝灭反应。收集有机层 并且用EtOAc进一步萃取水层三次。用饱和NaCl溶液洗涤合并的有机层。在真空下浓缩 有机层。通过快速色谱法纯化产物。
[0201] 合成方法4
[0202] 除非指出，否则前两个步骤与方法1相同。
[0203] 步骤3.将未保护的脲（1当量）和Et3N(l. 2当量）溶解于CH2C12中，并且在0°C 下逐滴添加相应的磺酰氯并且在室温下搅拌反应过夜。通过添加 HC1溶液（1M)猝灭反应。 收集有机层并且用EtOAc萃取水层4次。在真空下浓缩合并的有机层并且通过快速色谱法 进一步纯化。
[0204] Log P确定.根据0E⑶准则117通过HPLC方法确定辛醇-水分配系数。此方法所 接受的误差为摇瓶值的±0.5。等度1^!1 :!120(3:1，￥八）、调节至？!19.0的160!1 :!120(3:1， v/v)中的50mM乙酸铵以及用Η3Ρ04调节至pH 3.0的Me0H:H20(3:l，V/v)分别用于中性、碱 性和酸性分析物，其中流速为0. 75mL/分钟。使用化合物24和化合物54验证HPLC方法， 使用摇瓶方法（OE⑶准则107)发现所述化合物的log P值分别为1. 9和2. 3。
[0205] 纯度确定.在10 μ g/mL下将最终产物溶解于Me0H:H20(3:1，v/v)中，并且通过在 210nm、230nm、254nm和290nm处检测的HPLC-UV分析100 μ L注射剂三次。HPLC条件与用 于log Ρ确定的那些条件相同。纯度判断为每个波长的总峰面积的百分比。报道所观察到 的最低纯度。还基于用短波UV可视化并且用高锰酸钾染色的薄层色谱法来判断化合物为 纯净的。
[0206] 实施例1.合成4-(3-(4-(三氟甲某）苯某）脲某）哌啶-1-甲酸叔丁酯（1)
【权利要求】
1. 一种化合物，其选自由以下组成的组： 1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、 1- (1- (2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3- (4-(三氟甲氧基）苯基）脲、 1-(1-(2-乙基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、 1-环己基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、 1-环庚基-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、 1-(4-异丙基苯基）-3-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、 1- (3, 5-二-三氟甲基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、 1- (4-叔丁基苯基）-3- (1- (2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）脲、 1-(4-乙基环己基）-3-(1-异丁酰基哌啶-4-基）脲， 或其盐和异构体。
2. 如权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的组： 1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲、 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲，以及 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
3. 如权利要求1所述的化合物，其选自由以下组成的组： (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲、 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲，以及 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
4. 如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲基）苯基）脲。
5. 如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为 1-(1-异丁酰基哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
6. 如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为 (S)-1-(1-(2-甲基丁酰基）哌啶-4-基）-3-(4-(三氟甲氧基）苯基）脲。
7. -种药物组合物，其包含如权利要求1所述的化合物和药物赋形剂。
8. -种用于抑制可溶性环氧化物水解酶的方法，所述方法包括使所述可溶性环氧化物 水解酶与治疗有效量的如权利要求1所述的化合物接触，从而抑制所述可溶性环氧化物水 解酶。
9. 一种用于监测可溶性环氧化物水解酶的活性的方法，所述方法包括使所述可溶性环 氧化物水解酶与足以通过与存在于所述可溶性环氧化物水解酶的催化部位中的一个或多 个色氨酸残基相互作用而使所述可溶性环氧化物水解酶的荧光产生可检测的变化的量的 如权利要求1所述的化合物接触。
【文档编号】C07D211/58GK104093708SQ201380007892
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2013年2月1日 优先权日:2012年2月1日
【发明者】B·D·哈莫克, K·S·李, C·莫里西佑 申请人:加利福尼亚大学董事会