本发明涉及由源自水产物的油脂制造碳原子数20以上的游离一元不饱和脂肪酸(具有1个双键的不饱和脂肪酸，以下也记为MUFA。)或其低级醇酯的方法、游离一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯、及它们的用途。
背景技术：
鱼油特有的脂肪酸即二十碳五烯酸(以下为EPA)、二十二碳六烯酸(以下为DHA)等多元不饱和脂肪酸(以下为PUFA)被发现具有许多的生理活性，被广泛用作补充剂或医药品。
植物油被广泛用于食用，饱和脂肪酸提高血中的胆固醇值，与之相对，大量含于植物油中的碳原子数18的不饱和脂肪酸、即油酸(一元)、亚油酸(二元)、亚麻酸(三元)由于使胆固醇值降低，所以备受关注。特别是，碳原子数18的MUFA即油酸对好胆固醇没有影响，而仅使坏胆固醇降低，因此可以说有益健康。植物油中所含的MUFA中也有碳原子数20、22的物质，它们大多包含在菜籽油、紫罗兰油、芥子油、桐油等中。主要是碳原子数20以上的MUFA被称作LC-MUFA。源自植物油的LC-MUFA的制造方法报告有尿素加成、重结晶等方法(例如，WO89/08095及日本特开平9-278706号)。
另外，鱼油中也含有一元不饱和脂肪酸(以下为MUFA)、主要含有碳原子数20或22的MUFA(以下，将碳原子数20以上的MUFA称作LC-MUFA)。报告了源自鱼油的LC-MUFA也具有胆固醇降低作用等生理活性(例如WO2012/121080)。源自植物油的LC-MUFA以n-9为主，与之相对，源自鱼油的LC-MUFA主要是n-11，存在不同。n-9表示的是从脂肪酸的甲基末端数第9个键为双键，n-11表示从脂肪酸的甲基末端数第11个键为双键。
与植物油不同，在源自水产物的油脂中，除MUFA以外，还含有碳原子数12～24且具有0～6个双键的多种脂肪酸。作为从水产物油脂进行精制的精制例，WO2012/121080中记载有一种将秋刀鱼油乙酯化，将其附于ODS柱上来浓缩MUFA的实验室标准的精制方法。通过该方法获得的源自水产物的碳原子数20和/或22的MUFA的浓度显示为70％左右。
技术实现要素：
发明所要解决的课题
除源自水产物的油脂中所含的MUFA以外，在碳原子数12～24且具有0～6个双键的多种脂肪酸中也存在在精制处理中显示与MUFA类似的行为的物质，因此，难以高效地将MUFA浓缩成高浓度，且迄今为止没有发现通过可工业利用的方法进行量产的例子。
报告有秋刀鱼、鳕鱼等水产物油脂中富含的LC-MUFA具有对代谢综合症的改善效果，但水产物油脂中还含有碳原子数20以上的高度不饱和脂肪酸(以下，也称作LC-PUFA。)，在正确地验证LC-MUFA或其酯的效果上成为障碍。为了将作为医药品有用的LC-MUFA或其酯等应用于临床或应用于更广泛的疾病领域，寻求大量且高效地生产高浓度地含有LC-MUFA的物质；或几乎不含除LC-MUFA以外的成分的例如LC-MUFA浓度(纯度)为85重量％以上、进而为90重量％以上的物质。
特别是，源自水产物油脂的LC-MUFA以源自植物油的油脂中所含的LC-MUFA和双键的位置不同的异构体为主要成分。关于高浓度地含有这种异构体的源自水产物油脂的LC-MUFA，由于高浓度的源自水产物油脂的LC-MUFA并不存在，所以需要其的供给装置。
本发明的课题在于，提供一种用于高效地得到高浓度的LC-MUFA的、或用于高效地得到LC-PUFA及饱和脂肪酸含量低的LC-MUFA的、工业上的制造方法、及由此得到的高纯度的LC-MUFA。
用于解决课题的技术方案
本发明包含制造以下的碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的方法、以及碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯的各方式。
[1]一种制造碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的方法，其包括以下工序：将源自水产物原料的油脂进行水解或醇解，得到游离脂肪酸或低级醇酯的工序；对所述游离脂肪酸或低级醇酯进行蒸馏，使该游离脂肪酸或低级醇酯中的碳原子数18以下的脂肪酸的浓度降低的工序；以及通过反相分配系的柱色谱法，分取碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的组分的工序。
[2]根据[1]所述的方法，其中，源自水产物原料的油脂为对由水产物得到的粗油进行选自脱胶、脱酸、脱色及脱臭构成的组中的至少一种精制处理而得到的精制油。
[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，蒸馏为精馏。
[4]根据[1]或[2]所述的方法，其中，蒸馏为分子蒸馏或短程蒸馏。
[5]根据[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，蒸馏为使用规则填充物的精馏。
[6]根据[1]～[5]中任一项所述的方法，其中，通过柱色谱法，得到全部脂肪酸中的浓度为70重量％以上、80重量％以上、90重量％以上或95重量％以上的碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯。
[7]根据[1]～[6]中任一项所述的方法，其中，实施蒸馏后的碳原子数18以下的游离脂肪酸或它们的低级醇酯的浓度为全部脂肪酸中的30重量％以下、20重量％以下、10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。
[8]根据[1]～[7]中任一项所述的方法，其中，实施蒸馏及柱色谱法后的游离高度不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的浓度为全部脂肪酸中的5重量％以下或1重量％以下。
[9]一种碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯，其可通过[1]～[8]中任一项所述的方法得到。
[10]一种游离脂肪酸或其低级醇酯，其至少含有游离鳕油酸(n-11)或其低级醇酯、或游离鲸蜡烯酸(n-11)或其低级醇酯，
含有全部脂肪酸的70重量％以上、80重量％以上或90重量％以上的碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯。
[11]根据[10]所述的游离脂肪酸或其低级醇酯，其中，碳原子数20的游离一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯为游离鳕油酸(n-11)或其低级醇酯、和/或、游离巨头鲸鱼酸(n-9)或其低级醇酯，碳原子数22的游离一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯为游离鲸蜡烯酸(n-11)或其低级醇酯、和/或、游离芥酸(n-9)或其低级醇酯。
[12]一种游离脂肪酸或其低级醇酯，其中，全部脂肪酸中的至少70重量％为碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯，至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的游离饱和脂肪酸或其低级醇酯为10重量％以下，且全部脂肪酸中的游离高度不饱和脂肪酸或其低级醇酯为5重量％以下。
[13]根据[12]所述的游离脂肪酸或其低级醇酯，其中，全部脂肪酸中的至少90重量％为碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯，至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的游离饱和脂肪酸或其低级醇酯为5重量％以下，且全部脂肪酸中的游离高度不饱和脂肪酸或其低级醇酯为1重量％以下。
[14]根据[9]～[13]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯，其至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯，在全部脂肪酸中含有30重量％以上、40重量％以上、50重量％以上、60重量％以上或70重量％以上的游离鳕油酸(n-11)或其低级醇酯。
[15]根据[9]～[14]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯，其中，全部脂肪酸中的碳原子数18以下的游离脂肪酸或其低级醇酯为30重量％以下、20重量％以下、10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。
[16]根据[9]～[15]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯，其可由水产物的油脂获得。
[17][9]～[16]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯在食品制造中的用途。
[18]一种代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂，其中，以[9]～[16]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯作为有效成分。
[19]一种代谢综合症改善组合物或生活方式病预防用组合物，其含有[18]所述的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂、和添加成分。
[20][9]～[16]中任一项所述的游离脂肪酸或其低级醇酯在[18]所述的代谢综合症改善组合物或生活方式病预防用组合物的制造中的用途。
发明效果
根据本发明的方法，能够高效地得到高浓度的LC-MUFA。另外，根据本发明的一个方面，可以提供一种LC-PUFA及饱和脂肪酸含量低，高浓度且高产率地得到的源自水产物油脂的LC-MUFA。根据本发明的一个方面，可以降低LC-MUFA的组合物中的饱和脂肪酸以及LC-PUFA的含量。在将LC-MUFA用作功能性成分的情况下，适用于寻求饱和脂肪酸和/或LC-PUFA的浓度低的用途。脂肪酸在碳原子数或双键的数目不同时，不仅其物性，而且在生理功能上也产生大的不同。由于能够将目前难以分离的源自水产物油脂的LC-MUFA按碳原子数进行分离，从而能够明确各自的功能并加以有效利用。适用于以LC-MUFA作为有效成分的医药品、补充剂等的用途。
具体实施方式
在本说明书中，“油”或“油脂”不仅是指甘油三酯，还包含以甘油三酯为主要成分，含有甘油二酯、单酸甘油酯、磷脂、胆固醇、游离脂肪酸等其它脂质的粗油。“油”或“油脂”是指包含这些脂质的组合物。
术语“脂肪酸”不仅包含游离的饱和或不饱和脂肪酸其本身，而且还包含游离的饱和或不饱和脂肪酸、饱和或不饱和脂肪酸醇酯、甘油三酯、甘油二酯、单酸甘油酯、磷脂、甾醇酯等中所含的作为结构单元的脂肪酸，也可以说成结构脂肪酸。本说明书中，只要没有特别说明，则有时省略含有脂肪酸的化合物的方式。作为含有脂肪酸的化合物的方式，可举出游离脂肪酸方式、脂肪酸醇酯方式、甘油酯方式、磷脂方式、甾醇酯方式等。含有同一脂肪酸的化合物在油中可以以单一的方式含有，也可以作为两种以上的方式的混合物含有。
经验判明了脂肪酸的水解或醇解的反应效率高，在水解或醇解后，主要得到含有游离脂肪酸方式或它们的低级醇酯方式的脂肪酸的组合物。因此，关于加工工序后的脂肪酸，只要没有特别说明，则有时省略表述组合物、及脂肪酸为游离脂肪酸方式或低级醇酯方式的脂肪酸。但是，不完全排除含有除游离脂肪酸方式或低级醇酯方式以外的方式的脂肪酸。
在表述脂肪酸时，有时采用如下数值表现：分别使用数字和字母简化表示碳原子数、双键的数目及双键的部位。例如，碳原子数20的饱和脂肪酸可表述为“C20：0”，碳原子数18的一元不饱和脂肪酸可表述为“C18：1”等，花生四烯酸可表述为“C20：4、n-6”等。“n-”表示从脂肪酸的甲基末端数的双键的位置，例如若是“n-6”，则表示双键的位置从脂肪酸的甲基末端数为第6个。该方法对于本领域人员而言是众所周知的，只要是本领域技术人员，则就可以容易地限定根据该方法表述的脂肪酸。
本说明书中，“粗油”是指上述的脂质的混合物，即从生物提取的状态的油。本说明书中，“精制油”是指对粗油进行选自脱胶工序、脱酸工序、脱色工序、及脱臭工序构成的组中的至少一种的油脂的精制工序，进行除去磷脂及甾醇等目标物以外的物质的精制处理得到的油。
本发明中，“由水产物得到的油脂”或“源自水产物原料的油脂”可示例含有鱼类、甲壳类、或海产动物中所含的油脂、磷脂、蜡酯等的脂质。作为LC-MUFA的含量多的鱼类，可示例：秋刀鱼等属于秋刀鱼科的鱼、大头鳕、黄线狭鳕、大西洋鳕、裸盖鱼等属于鳕鱼科的鱼、大马哈鱼、银大马哈鱼、红大马哈鱼、细鳞大马哈鱼、大西洋鲑鱼、虹鳟鱼等鲑科鱼、毛鳞鱼、柳叶鱼等胡瓜鱼科鱼、鲱鱼等鲱科鱼等。除此之外，银针鱼、金枪鱼、鲭鱼、红金眼鲷、牛眼鲷、松原氏平鲉、太平洋鲈鱼、蓝平鲉等鱼也较大量含有。另外，北太平洋角鲨、姥鲨、黑线银鲛等鲨鱼类的肝油也含有较多。也可以利用源自海豹及鲸鱼等动物的油脂。即使是LC-MUFA不多的原料，也能够浓缩使用。
第五次修订日本食品标准成分表中记载有秋刀鱼(生)的脂肪酸中所含的二十二烯酸(C22：1)为19.3重量％，二十烯酸(C20：1)为17.2重量％、单不饱和脂肪酸的总量为50.1重量％。秋刀鱼油的特征是，即使在鱼油中，单不饱和脂肪酸的含量也是多的。脂肪酸中，优选选择分别含有10重量％以上、优选为15重量％以上的二十二烯酸及二十烯酸的鱼油。优选将秋刀鱼、鳕鱼类等捕鱼量多的鱼类的鱼油作为原料。
本发明中，“一元不饱和脂肪酸”、或“MUFA”是指具有一个双键的脂肪酸，“高度不饱和脂肪酸”、或“PUFA”是指具有4个以上的双键的脂肪酸。将MUFA或PUFA、即碳原子数20以上的长链(Long Chain)的脂肪酸记为LC-MUFA、或LC-PUFA。
LC-MUFA中，在本发明中，可以高浓度地得到碳原子数20和/或22的MUFA、特别是n-11的异构体。
碳原子数20的MUFA以IUPAC名命而被称为二十烯酸(icosene acid)，根据双键的位置被称为cis-icos-9-enoic acid(n-11、常用名鳕油酸(Gadoleic acid))、cis-icos-11-enoic acid(n-9、常用名巨头鲸鱼酸(Gondoic acid))等。碳原子数22的MUFA以IUPAC名命而被称为二十二烯酸，根据双键的位置被称为cis-docos-11-enoic acid(n-11、常用名鲸蜡烯酸)、cis-docos-13-enoic acid(n-9、常用名芥酸)等。水产物油脂中含有大量n-11的鳕油酸和/或鲸蜡烯酸。
作为鱼油等中所含的除MUFA以外的脂肪酸，可举出饱和脂肪酸(碳原子数14、16、18、20等)、二元、三元的不饱和脂肪酸(碳原子数18、20等)、及四元以上的高度不饱和脂肪酸(PUFA、碳原子数20、22等)。它们中，高度不饱和脂肪酸是对鱼油等而言具有特征的脂肪酸，例如为碳原子数20以上、双键数4以上的脂肪酸，具体而言，可举出花生四烯酸(20：4、n-6)、二十碳五烯酸(20：5、n-3)、二十二碳五烯酸(22：5、n-6)、二十二碳六烯酸(22：6、n-3)等。
本发明中，MUFA的酯是指MUFA的碳原子数1～3的低级醇、优选为MUFA的乙醇的酯。
本发明一个方式的制造碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的方法包含：将源自水产物原料的油脂进行水解或醇解，得到游离脂肪酸或低级醇酯(以下，有时称为加工工序)；对上述游离脂肪酸或低级醇酯进行蒸馏，使该游离脂肪酸或低级醇酯中的碳原子数18以下的脂肪酸的浓度降低(以下，有时称为蒸馏工序)；以及、通过反相分配系的柱色谱法分取碳原子数20和/或22的游离一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯的组分(以下，有时称为柱工序)，根据情况可以包含其它工序。
由各水产物原料得到粗油的方法可以是任何方法。如果以秋刀鱼粗油为例，通常，与其它鱼油同样地通过以下方法进行获取。在将秋刀鱼整体或由水产加工产生的鱼的头、皮、中骨、内脏等加工残渣粉碎并进行蒸煮后，进行压榨，分离成蒸煮液(粘液)和压榨粗粉。将与蒸煮液一同得到的油脂通过离心分离从蒸煮液分离，制成秋刀鱼粗油。
通常，鱼油的粗油根据原料，经脱胶工序、脱酸、使用活性白土或活性炭的脱色、水洗工序、基于水蒸汽蒸馏等的脱臭工序等精制工序制成精制鱼油。作为本发明的原料，可以使用该精制鱼油。换言之，用于本发明一个方式的方法的源自水产物原料的油脂可以为对由水产物得到的粗油进行这种一般的精制工序而得到的精制油。例如，可以将对由水产物得到的粗油进行脱胶工序、脱酸工序、及脱色工序中的至少一种精制处理得到的精制油作为源自水产物原料的油脂。
本发明一个方式的方法的加工工序是通过水解或醇解将源自水产物原料的油脂分解成游离的脂肪酸或低级醇酯的工序。水解是在油脂中加入水和酸等催化剂或酶并进行反应，使与甘油键合的脂肪酸游离。醇解是在油脂中加入碳原子数1～3的低级醇、优选为乙醇、和催化剂或酶并进行反应，生成与甘油键合的脂肪酸和低级醇的酯。通过使游离的脂肪酸或低级醇酯与甘油分离，可以浓缩所期望的脂肪酸。
本发明一个方式的方法的蒸馏工序是通过蒸馏，使在加工工序中制造的游离脂肪酸或低级醇酯中的碳原子数18以下的脂肪酸的浓度降低的工序。在此，通过尽可能地除去碳原子数18以下的脂肪酸，可以使接下来的柱工序更有效地起作用。碳原子数18以下的脂肪酸优选降低至30面积％以下、20面积％以下、10面积％以下、5面积％以下或1面积％以下，换言之降低至30重量％以下、20重量％以下、10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。如实施例的表2及表3的结果所示，如果通过精馏这样的蒸馏进一步降低碳原子数18以下的脂肪酸的浓度，则在柱工序中可以对C20：1组分更多地浓缩C20：1。
蒸馏方法可以是任何方法，其中，优选可以尽可能地除去碳原子数18以下的脂肪酸的方法。作为这种蒸馏方法，可以举出分子蒸馏、短程蒸馏等单蒸馏；及精馏，特别优选精馏。精馏及单蒸馏均优选为含有薄膜式加热蒸发器的薄膜蒸馏。
要将LC-MUFA和碳原子数18以下的脂肪酸分离，精馏与短程蒸馏、分子蒸馏等单蒸馏相比，分离性好，因此可以高效降低C18以下的脂肪酸。精馏的条件可以通过作为原料的低级醇酯的脂肪酸组成来进行调整。作为优选的精馏条件，塔底温度为220℃以下，优选为150～220℃，特别优选为150～200℃。减压条件为10mmHg以下，更优选为1mmHg以下，进一步优选为0.1mmHg以下。压力的下限值没有特别限制，根据所使用的装置适宜设定。用于提高分离的理论段数的内部构造，可以采用填充式、托盘式等各种样式。更优选为使用规则填充物的填充式。短程蒸馏、分子蒸馏等的单蒸馏与精馏相比，生产性优异，适合大量处理。作为单蒸馏、特别是短程蒸馏或分子蒸馏中优选的蒸馏条件，蒸发面温度为120℃以下，优选为50～120℃，更优选为50～80℃。单蒸馏、特别是短程蒸馏或分子蒸馏中的优选的减压条件为0.05mmHg以下，更优选为0.0013mmHg以下。压力的下限值没有特别限制，根据所使用的装置适宜设定。
本发明一个方式的方法的柱工序是用于将碳原子数20和/或22的MUFA浓缩、或者将它们与其它不饱和脂肪酸分离的工序。为了将碳原子数20和/或22的MUFA与其它不饱和脂肪酸分离，适用反相分配系的柱色谱法。具体而言，优选为ODS柱。作为固定相，只要是反相分配系的吸附剂，则可以不用特别指定地使用，优选为使用有十八烷基甲硅烷基(ODS)的ODS柱。吸附剂量优选为供于柱色谱法的原料量的10倍重量以上、更优选为100倍重量以上。吸附剂量的上限值没有特别限制，例如可以设为1000倍量。关于洗脱液及移动相，可以使用甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、乙腈等各种极性溶剂、或这些极性溶剂中添加了水的含水溶剂，优选为甲醇。
通过从上述加工工序起按顺序实施柱工序，换言之，通过实施蒸馏及色谱法，可以将全部脂肪酸中所占的碳原子数20和/或22的游离的MUFA或它们的低级醇酯浓缩成高浓度，例如，可以将它们单独、或以组合的总计计浓缩为70重量％以上、80重量％以上、90重量％以上或95重量％以上，在全部脂肪酸中可以为99.99重量％以下或99.9999重量％以下。
通过实施蒸馏及色谱法，可以降低碳原子数18以下的游离的脂肪酸或其低级醇酯在全部脂肪酸中所占的浓度，例如，可以将它们单独、或以组合的总计计降低至30重量％以下、20重量％以下、10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。
通过实施蒸馏及色谱法，可以将全部脂肪酸中所占的游离饱和脂肪酸或其低级醇酯降低至10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。
通过实施蒸馏及色谱法，可以将全部脂肪酸中所占的PUFA降低至5重量％以下或1重量％以下。
对于所得到的游离脂肪酸或其低级醇酯，为了从水产物的油脂中获得，被高浓度浓缩的碳原子数20的游离的一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯可以为游离的鳕油酸(n-11)和/或游离的巨头鲸鱼酸(n-9)或它们的低级醇酯，被高浓度浓缩的碳原子数22的游离的一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯可以为游离的鲸蜡烯酸(n-11)或其低级醇酯和/或游离的芥酸(n-9)或其低级醇酯。所得到的游离脂肪酸或其低级醇酯可以至少含有游离的鳕油酸(n-11)或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸(n-11)或其低级醇酯，可以至少含有游离的鳕油酸或其低级醇酯。
其中，就游离脂肪酸或其低级醇酯而言，在全部脂肪酸中可以含有30重量％以上、40重量％以上、50重量％以上、60重量％以上或70重量％以上的游离的鳕油酸或其低级醇酯，在全部脂肪酸中可以含有99.99重量％以下、或99.9999重量％以下的游离的鳕油酸或其低级醇酯。
就游离脂肪酸或其低级醇酯而言，在全部脂肪酸中可以含有30重量％以上、40重量％以上、50重量％以上、60重量％以上或70重量％以上的游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，在全部脂肪酸中可以含有99.99重量％以下或99.9999重量％以下的游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯。
就游离脂肪酸或其低级醇酯而言，在全部脂肪酸中可以含有5重量％以上、10重量％以上、15重量％以上或20重量％以上的游离的巨头鲸鱼酸或其低级醇酯，在全部脂肪酸中可以含有99.99重量％以下或99.9999重量％以下的游离的巨头鲸鱼酸或其低级醇酯。
就游离脂肪酸或其低级醇酯而言，在全部脂肪酸中可以含有1重量％以上、2重量％以上或3重量％以上的游离的芥酸或其低级醇酯，在全部脂肪酸中可以含有99.99重量％以下或99.9999重量％以下的游离的芥酸或其低级醇酯。
在游离脂肪酸或其低级醇酯中共同存在游离的鳕油酸及游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯的情况下，它们的总计浓度在全部脂肪酸中可以设为99.99重量％以下或99.9999重量％以下。
在游离脂肪酸或其低级醇酯中共同存在两个以上的游离的鳕油酸、游离的鲸蜡烯酸、游离的巨头鲸鱼酸及游离的芥酸、或这些低级醇酯的情况下，它们的总计浓度在全部脂肪酸中可以设为99.99重量％以下或99.9999重量％以下。
这样的游离脂肪酸或其低级醇酯优选作为以LC-MUFA为有效成分的医药品或补充剂。
可以通过本发明的一个方式进行制造的、至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，且全部脂肪酸中的至少70重量％为碳原子数20和/或22的MUFA的游离脂肪酸或其低级醇酯可以作为以LC-MUFA为有效成分的医药品或补充剂优选使用。
其中，本发明一个方面的以下的、至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的至少70重量％为碳原子数20和/或22的MUFA，且饱和脂肪酸为10重量％以下，PUFA为5重量％以下的游离脂肪酸或其低级醇酯；或者至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的至少90重量％为碳原子数20和/或22的MUFA，且饱和脂肪酸为5重量％以下，PUFA为1重量％以下的、游离脂肪酸或其低级醇酯更优选作为以LC-MUFA为有效成分的医药品或补充剂。
特别是，作为医药品用，优选为至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的至少90重量％为碳原子数20和/或22的MUFA，饱和脂肪酸为1重量％以下，PUFA为1重量％以下的、游离脂肪酸或其低级醇酯。
这些游离脂肪酸或其低级醇酯中，全部脂肪酸中所占的碳原子数18以下的游离的脂肪酸或其低级醇酯可以将它们单独、或以组合的总计计设为30重量％以下、20重量％以下、10重量％以下、5重量％以下或1重量％以下。
本发明一个方式的这些高纯度的组合物对于仅从鳕油酸(n-11)、鲸蜡烯酸(n-11)这种水产物得到的异构体的研究、开发、产品化是不可或缺的。
本发明一个方式的游离脂肪酸或低级醇酯至少含有鳕油酸或鲸蜡烯酸，且高浓度地含有碳原子数20和/或22的游离的一元不饱和脂肪酸，因此，优选适用于鳕油酸或鲸蜡烯酸那种源自水产物的物质的研究、开发、产品化。本发明一个方式的游离脂肪酸或低级醇酯在上述基础上，在选自碳原子数18以下的脂肪酸、饱和脂肪酸及高度不饱和脂肪酸构成的组中的至少一种脂肪酸的浓度低的情况下，更优选使用。
本发明一个方式的游离的脂肪酸也可以是它们的盐。作为盐，可示例钾盐及钠盐等。
如上所述，本发明一个方式的组合物高浓度地含有LC-MUFA，根据情况，可以使饱和脂肪酸、LC-PUFA等的含量变得极低。因此，对以高的浓度要求LC-MUFA的用途的应用是极其有用的。作为这种用途，例如可举出食品用、补充剂用、医药品用等。特别优选用于以LC-MUFA的功能性为目的的用途、例如代谢综合症改善、生活方式病预防等的用途。
本发明的其它方式中，提供一种代谢综合症改善方法，其包含：以本发明一个方式的组合物作为代谢综合症改善剂，以对改善代谢综合症有效的量，向寻求改善代谢综合症的对象给药。
本发明的其它方式中，包含生活方式病预防方法，其包括：以本发明一个方式的组合物为生活方式预防剂，以对生活方式预防有效的量，向寻求生活方式病预防的对象给药。
作为给药对象，可举出人、动物等。
例如，以下(a)～(c)的本发明一个方式的组合物可以作为这些改善方法或予防方法中的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂使用：
(a)含有游离脂肪酸或其低级醇酯的组合物，所述游离脂肪酸或其低级醇酯至少含有游离鳕油酸(n-11)或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸(n-11)或其低级醇酯，且含有碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸或它们的低级醇酯为全部脂肪酸的70重量％以上、80重量％以上或90重量％以上；
(b)含有游离脂肪酸或其低级醇酯的组合物，所述游离脂肪酸或其低级醇酯中，全部脂肪酸中的至少70重量％为碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸，至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的饱和脂肪酸为10重量％以下，且全部脂肪酸中的高度不饱和脂肪酸为5重量％以下；以及
(c)含有游离脂肪酸或其低级醇酯的组合物，所述游离脂肪酸或其低级醇酯中，全部脂肪酸中的至少90重量％为碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸，至少含有游离鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，全部脂肪酸中的饱和脂肪酸为5重量％以下，且全部脂肪酸中的高度不饱和脂肪酸为1重量％以下。
源自鱼类的精制油中含有30重量％左右的碳原子数20和/或22的一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯，这种源自鱼类的精制油具有代谢综合症改善效果(例如，参照WO2012/121080；Lipids(2011)Vol.46,pp.425-434；J.Agric.Food Chem.,2011,Vol.59,pp.7482-7489；Lipids in Health and Disease,2011,vol.10,pp.189-199等)。本发明一个方式的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂至少含有游离的鳕油酸或其低级醇酯、或游离的鲸蜡烯酸或其低级醇酯，且含有更高浓度、例如70重量％以上的碳原子数20和/或22的游离的一元不饱和脂肪酸或其低级醇酯，因此，可以期待更高的代谢综合症改善效果或生活方式病预防效果。
根据本发明的其它方式，可以提供含有上述(a)～(c)的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂、和添加成分的代谢综合症改善用组合物或生活方式病预防用组合物。作为添加成分，例如在作为医药品使用的情况下，可以举出医学上容许的基剂、载体、赋形剂、崩解剂、润滑剂及着色剂等。本发明的其它方式的代谢综合症改善用组合物或生活方式病预防用组合物优选在加工成明胶等软胶囊、或粉末油脂后可以作为片剂或胶囊等提供。代谢综合症改善用组合物或生活方式病预防用组合物可以经将上述(a)～(c)的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂、和添加成分以规定的配合比配合，并根据需要加工成所期望的剂型等附加的工序来制造。代谢综合症改善用组合物或生活方式病预防用组合物中的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂的含有率只要为可以期待效果的含有率，就没有特别限制，例如可以设为0.01重量％～100重量％、0.1重量％～100重量％、或3重量％～100重量％。
上述(a)～(c)的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂可以分别作为食品原材料用于食品。食品是指包含饮料的所有食品，除包含补充剂等健康食品的一般食品之外，还包含以消费者协会的保健功能食品制度规定的特定保健用食品或营养功能食品。例如，可以为带有具有代谢综合症改善作用的消息的显示或具有生活方式病预防作用的消息的显示的功能性食品。在将上述(a)～(c)的代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂作为食品原材料使用的情况下，含有它们的食品可以经根据需要与其它食品原材料组合、进而成形为任意形状等的附加工序制造。代谢综合症改善剂或生活方式病预防剂在食品中的含有率没有特别限制，可以设为期待效果的含有率。作为食品原材料，除食品之外，还可以作为动物用的饵料用的添加成分使用。
在作为医药品或食品对给药对象给药时，根据症状的程度、给药对象的年龄、体重及健康状态等条件适宜设定。例如，如果是成人，则可以以作为有效成分量的1mg～1g/kg/天、优选为5mg～300mg/kg/天的量将本组合物经口或非经口分1天1次或1天2～4次、或1天4次以上适宜隔开间隔给药。
本说明书中，“工序”的术语不仅是独立的工序，即使在不能与其它工序明确区分的情况下，只要能够实现该工序所期望的目的，即包含在本术语中。
本说明书中，使用“～”表示的数值范围表示含有其前后记载的数值分别作为最小值及最大值的范围。
本说明书中，就组合物中的各成分的量而言，在组合物中存在多个与各成分相应的物质的情况下，只要没有特别说明，就是指存在于组合物中的该多个物质的总量。本说明书中，关于百分率，“以下”或“低于”的术语只要没有特别记载下限值，则是指包含0％、或用当前的方法不能检测的值的范围。
本说明书中，标注不定冠词“a”或“an”的要素只要在上下文中未明确示出或结合起来，就不能排除一或多个要素存在的可能性。因此，不定冠词“a”或“an”通常是指“至少一个”。
本说明书中记载的动词“含有(comprising)”及其应用是指以非限定的的意思使用，且包含接着该术语的事项，不排除没有特别提及的事项。
本说明书中，关于发明的各方式(aspect)的一个实施方式(embodiment)中所说明的各发明特征(feature)可以任意组合成新的实施方式，这种新的实施方式应理解为可以包含在本发明的各方式中。
以下，通过实施例详细说明本发明。但是，本发明不限于这些。此外，下述实施例中，在没有特别记述的情况下，“％”是指“重量％”。
实施例
脂肪酸组成可以根据常规方法求出。具体而言，使用低级醇和催化剂将作为测定对象的油脂进行酯化，得到脂肪酸低级醇酯。接着，使用气相色谱法分析得到的脂肪酸低级醇酯。在得到的气相色谱法的图表中，鉴定相当于各脂肪酸的峰，使用安捷伦化学工作站(Agilent ChemStation)积分算法(修正C.01.03[37]、Agilent Technologies)求各脂肪酸的峰面积。峰面积是指使用气相色谱法、薄层色谱/氢火焰离子检测器(TLC/FID)等分析以各种脂肪酸为构成成分的油脂所得的图表中各成分的峰面积相对于全峰面积的比例(面积％)，表示该峰成分的含有比率。通过上述的测定方法得到的面积％所得的值与试样中的各脂肪酸的重量％所得的值相同，可以互换使用。参照日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版2.4.2.1-2013脂肪酸组成(FID恒温气相色谱法)、及日本油化学会(JOCS)制定基准油脂分析试验法2013版2.4.2.2-2013脂肪酸组成(FID升温气相色谱法)。
脂肪酸组成通过实施例所示的方法的气相色谱法进行分析，脂质组成使用TLC/FID进行分析。详细的条件示于实施例。
经验上判明了实施例中使用的烷基酯化方法的乙酯化率为95％～100％。因此，在本实施例的项中，得到的原料乙酯中，推测含有的饱和或不饱和脂肪酸几乎都是脂肪酸乙酯方式。因此，以下，试样中所含的饱和或不饱和脂肪酸全部记载为乙酯方式的饱和或不饱和脂肪酸。但是，不完全排除含有游离脂肪酸方式或低级醇酯方式以外的方式的脂肪酸。
[实施例1]
对从新鲜的秋刀鱼获取到的秋刀鱼粗油4000kg进行脱胶、脱酸及脱色处理，得到3520kg的秋刀鱼精制油。将得到的秋刀鱼精制油2000kg与乙醇钠进行酯交换而进行乙酯化，且添加0.5％的作为抗氧化剂的维他命E，得到1999kg的秋刀鱼油乙酯(试样A)。表1表示得到的秋刀鱼油乙酯的分析值。
[表1]
※作为抗氧化剂的维他命E 添加0.5％
※脂肪酸组成(％)表示基于气相色谱法的全部脂肪酸峰中的面积百分率。
[实施例2]
基于精馏的秋刀鱼油乙酯的精制
将秋刀鱼油乙酯100.06g加入500mL三颈烧瓶中，使用插入有5个实验包EX(25mm×50mm、Sulzer chemtech)的桐山制作所制的带真空夹套的精馏塔(带真空夹套的分馏管(桐山制作所)、分馏头(桐山制作所))，以塔底温度185℃、塔底压力0.8mmHg(约107Pa)、塔内最上部压力8Pa、塔内最上部蒸汽温度133℃的条件进行精密蒸馏，得到精馏馏分43.2g(试样B)和精馏残分54.5g(试样C)。表2表示试样B及C的脂肪酸组成。
[实施例3]
基于分子蒸馏的秋刀鱼油乙酯的精制
将秋刀鱼油乙酯905.5g加入日本车辆制造(株)制的离心式分子蒸馏装置(MS-150)中，以蒸发面温度90℃、压力0.015Torr进行蒸馏，得到蒸馏馏分209.7g和蒸馏残分596.2g(试样D)。表2表示试样D的脂肪酸组成。
[表2]
※脂肪酸组成(％)表示基于气相色谱法的全部脂肪酸峰中的面积百分率。
[实施例4]
蒸馏后基于HPLC的LC-MUFA的精制
对包含通过精馏或分子蒸馏精制的脂肪酸乙酯的试样C及D进一步通过ODS(Octa Decyl Silyl、十八烷基甲基硅烷基)-HPLC实施高度精制。需要说明的是，分离条件如下。
分离条件
柱：JAIGEL-ODS-AP-30、SP-120-15(日本分析工业株式会社)、30φ×200mm
洗脱液：甲醇
流速：20mL/min
柱温度：40℃
取样载荷量：6.30g
检测器：差示折射仪
以差示折射仪的峰值及保持时间为指标，从以下的试样E～H分别分取可含有C20：1的组分(以下称为C20：1组分)、可含有C22：1的组分(以下称为C22：1组分)。表3表示各组分的脂肪酸组成。脂肪酸组成(％)如上所述，为基于气相色谱法的图表的面积比。
试样E：以试样C为原料，分取C20：1组分的试样
试样F：以试样C为原料，分取C22：1组分的试样
试样G：以试样D为原料，分取C20：1组分的试样
试样H：以试样D为原料，分取C22：1组分的试样
[表3]
如表3所示，对于试样E～H，通过实施ODS-HPLC精制，均可提高LC-MUFA的含有比率。特别是试样E、F、G中，可以浓缩至95重量％以上的浓度。
另一个方面，在以作为最初的精制工序使用精馏的试样C为原料的情况下，与以使用分子蒸馏的试样D为原料的情况相比，在精制工序后，可以进一步浓缩碳原子数20的LC-MUFA(试样E、F)。这是因为，在蒸馏工序中，碳原子数18以下的脂肪酸的残留少，在HPLC工序中，有效抑制了碳原子数18以下的脂肪酸的存在导致的C20：1的分离效率的降低。可知通过选择最初的蒸馏工序的方法来提高C20：1的浓度是有效的。因此，可知，为了得到以高浓度含有C20：1的LC-MUFA乙酯，在HPLC精制之前的精制工序中除去碳原子数18以下的脂肪酸及饱和脂肪酸是有效的。
更令人惊讶的是，可知，通过使用精馏除去碳原子数18以下的脂肪酸及饱和脂肪酸，LC-MUFA成为更高浓度，将LC-MURA为同程度的浓度的试样E和试样G进行比较，LC-MUFA的回收率为1.34倍。
如本实施例所示，通过本发明的方式得到的组合物以高浓度含有LC-MUFA，饱和脂肪酸及LC-PUFA的含量极低。因此，对面向以高的浓度要求LC-MUFA的用途的应用是极为有用的。作为这种用途，例如可举出食品用、补充剂用、医药品用等。特别优选用于以LC-MUFA的功能性为目的的用途、例如代谢综合症改善、生活方式病预防等的用途。
2014年7月2日申请的日本专利申请第2014-136436号的公开的整体通过参照被编入本说明书中。
本说明书中记载的所有的文献、专利申请、及技术规格与具体地且个别记载通过参照编入各文献、专利申请、及技术规格的情况相同，被引用编入本说明书中。