技术领域本发明涉及化工领域，特别涉及化合物及其制备方法、应用。
背景技术：
查尔酮是广泛存在于甘草、红花、镰形棘豆等植物中的一类天然化合物，具有多种药理活性，并作为有机颜料被广泛应用于日常生产中。在结构方面，由于查尔酮类化合物分子具有较大的柔性，能与不同的受体结合，因而拥有广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗炎、抗真菌、抗病毒等。因此，查尔酮类化合物具有药物开发的潜在价值。日本已经用于临床的抗胃溃疡的新药Sofalcone,其结构就是异戊烯基醚修饰的查尔酮类化合物。它具有很强的抗幽门螺杆菌(H.pylori)活性,能够调节胃酸分泌。并且它能增加胃组织内前列腺素的含量：可使动物实验性溃疡模型构成胃壁的有效成分硫酸化黏蛋白的含量增加，促进胃黏膜的修复，利于溃疡愈合。其不良反应包括偶见口渴、便秘、烧心等，但都较轻而且可逆。II型糖尿病又称非胰岛素依赖型糖尿病，其患者在糖尿病患者中占90％以上。α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类治疗II型糖尿病的药物，其中包括阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖，均为糖类化合物。α-葡萄糖苷酶抑制剂类糖尿病药物的副作用较小，不良反应包括胃胀气和腹泻。在此发明之前，文献未曾报道，查尔酮类化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其细胞水平的降糖效果。因此，研究查尔酮类α-葡萄糖苷酶抑制剂作为降糖类药物存在必要性.阿卡波糖由发酵所得，收率低，杂质多且分离困难。伏格列波糖可以通过全合成或微生物发酵+半合成的方法制备，但合成路线长，产率较低。米格列醇的生物合成有两种方式：一是先由野霉素或1-脱氧野尻霉素产生菌发酵,制备获得野尻霉素或1-脱氧野尻霉素,然后再经过化学合成方法获得米格列醇,；二是应用氧化葡糖酸菌转化制备米格列醇关键中间体N-取代-1-脱氧野尻霉素,其主要通过化学合成-生物转化-化学合成的方法来制备。目前上市的三种α-葡萄糖苷酶抑制剂均合成困难，产率较低。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供化合物及其制备方法、应用。本发明提供的化合物具有较强的糖苷酶抑制活性，能够用于制备降血糖药物。本发明利用两步反应即可得到双查尔酮类α-葡萄糖苷酶抑制剂，反应步骤简单。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种化合物，其结构如式Ⅰ所示：其中，R1选自H、OH；R2选自H、OH；R3选自H、OH；R4选自H、R5选自H、R6选自在本发明的一些具体实施方案中，所述的化合物中：R1为H；R2为OH；R3为OH；R4为H；R5为R6为或R1为OH；R2为H；R3为OH；R4为R5为H；R6为或R1为OH；R2为H；R3为OH；R4为R5为H；R6选自或R1为OH；R2为H；R3为OH；R4为H；R5为R6为或R1为H；R2为OH；R3为OH；R4为R5为H；R6为或R1为OH；R2为H；R3为OH；R4为H；R5为R6为在本发明的一些具体实施方案中，所述的化合物为：本发明还提供了所述化合物的制备方法，第一步反应为，以50％KOH为催化剂，苯乙酮衍生物与苯甲醛衍生物反应2h后，停止加热，反应液倾入水中，旋蒸除去甲醇后，CH2Cl2萃取，柱层析分离。第二步反应为，在氮气保护下，以CH2Cl2为溶剂，取原料化合物与过量的BBr3反应，25℃±5℃反应24～48h后，冰水浴，将反应液与冰水混合，搅拌、过滤收集固体，干燥，纯化；第一步的原料化合物的结构如式II所示：其中，R1选自H、OMe、CHO、R2选自H、OMe、CHO、R3选自H、OMe、CHO、在本发明的一些具体实施方案中，第一步原料化合物的结构为：或或或或或第二步的原料化合物的结构如式III所示：其中，R7选自H、OMe；R8选自H、OMe；R9选自H、OMe；R4选自H、R5选自H、R6选自在本发明的一些具体实施方案中，第二步原料化合物的结构中，R7为H；R8为OMe；R9为OMe；R4为H；R5为R6为或R7为OMe；R8为H；R9为OMe；R4为R5为H；R6为或R7为OMe；R8为H；R9为OMe；R4为R5为H；R6选自或R7为OMe；R8为H；R9为OMe；R4为H；R5为R6为；或R7为H；R8为OMe；R9为OMe；R4为R5为H；R6为；或R7为OMe；R8为H；R9为OMe；R4为H；R5为R6为在本发明的一些具体实施方案中，第二步原料化合物的结构为：在本发明的一些具体实施方案中，第一步反应温度为70℃，反应时间为2h；第二步反应的温度为0℃～35℃，所述反应的时间为24～48h；第二步反应中所述原料化合物与BBr3的摩尔比为1/11～1/17。本发明还提供了所述的化合物或所述制备方法制得的化合物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。本发明还提供了所述化合物或所述制备方法制得的化合物在制备降血糖的药物中的应用。本发明还提供了一种降血糖的药物，包括所述的化合物或所述制备方法制得的化合物以及药学上可接受的辅料。本发明的目的在于提供上述查尔酮衍生物在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-7所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-3,3'-(1,4-phenylene)bis(1-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-9所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-1,1'-(1,3-phenylene)bis(3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-13所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-3,3'-(1,3-phenylene)bis(1-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-15所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-3,3'-(1,4-phenylene)bis(1-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-17所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-1,1'-(1,3-phenylene)bis(3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。本发明的目的是这样实现的，以下结构式ccy-19所示的查尔酮衍生物：(2E,2'E)-1,1'-(1,4-phenylene)bis(3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，在制备降血糖药物中的应用。体外药理实验表明，本发明提供的化合物对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用(结果见表1)。同时，细胞水平检测发现化合物并不显著影响HepG-2细胞对外源性葡萄糖摄取活动(结果见图1)，并且化合物ccy-13可明显(P＜0.05)降低细胞内葡萄糖含量(～40％)，接近于阳性对照组PG(5μM)，表明化合物ccy-13具有较强的糖苷酶抑制活性(结果见图2)。因此，上述化合物可用于降血糖药物。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示外源性葡萄糖含量的测试结果；图2示化合物(1μM)对内源性葡萄糖含量影响检测结果。具体实施方式本发明公开了化合物及其制备方法、应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。发明提供了6个查尔酮衍生物，化合物ccy-13可明显降低细胞内葡萄糖含量。本发明提供的化合物ccy-7，中文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-亚苯基)双(3-(3,4-二羟基苯基)-2-丙烯-1-酮)，英文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-phenylene)bis(3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，黄色固体，结构式如下：ccy-7的合成路线为：其合成方法的工艺步骤为：将2mmol3,4-二甲氧基苯乙酮溶于10mL甲醇中，加入0.2mL50％KOH的水溶液，70℃加热，1mmol对二苯甲醛溶于10mL甲醇后滴加入3,4-二甲氧基苯乙酮溶液中。反应2h后，停止加热，反应液倾入水中，旋蒸除去甲醇后，CH2Cl2萃取，CH3COOCH2CH3:CH2Cl2＝1:100柱层析分离得到ccy-6。冰水浴，氮气气氛保护下，向两颈瓶中注入5ml1mol/LBBr3的CH2Cl2溶液，0.3mmolccy-6溶解于15ml干燥CH2Cl2并逐滴滴入BBr3溶液中，ccy-6与BBr3的摩尔比为1/17。0～35℃反应24～48h后，溶液倾倒入冰水中，边倒边搅拌，过滤得固体，干燥，甲醇洗涤后得化合物ccy-7。本发明提供的化合物ccy-9，中文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-亚苯基)双(3-(3,4-二羟基苯基)-2-丙烯-1-酮)，英文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-phenylene)bis(3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，分解温度为236-237℃，黄色固体，结构式如下：ccy-9的合成路线为：其合成方法的工艺步骤与ccy-7的合成方法相同，采用3,4-二甲氧基苯甲醛与间苯二乙酮为起始反应物，CH3COOCH2CH3:CH2Cl2＝1:100～1:50柱层析分离得到ccy-8，CH3OH:CH2Cl2＝1:5体系进行柱层析，得到ccy-9。本发明提供的化合物ccy-13，中文名称为(2E,2'E)-3,3'-(1,3-亚苯基)双(3-(2,4-二羟基苯基)-1-丙烯-2-酮)，英文名称为(2E,2'E)-3,3'-(1,3-phenylene)bis(3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-1-en-2-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，熔点为213-215℃，黄色固体，结构式如下：ccy-13的合成路线为：其合成方法的工艺步骤与ccy-7的合成方法相同，采用2,4-二甲氧基苯乙酮与间苯二甲醛为起始反应物，CH3COCH3:CH2Cl2＝1:100～1:50柱层析分离得到ccy-12，Acetone:CH2Cl2＝1:3体系柱层析分离得到ccy-13。本发明提供的化合物ccy-15，中文名称为(2E,2'E)-3,3'-(1,4-亚苯基)双(1-(2,4-二羟基苯基)-2-丙烯-1-酮)，英文名称为(2E,2'E)-3,3'-(1,4-phenylene)bis(1-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，熔点为252-254℃，黄色固体，结构式如下：ccy-15的合成路线为：其合成方法的工艺步骤与ccy-7的合成方法相同，采用2,4-二甲氧基苯乙酮与对苯二甲醛为起始反应物，CH3COOCH2CH3：CH2Cl2＝1:60～1:20柱层析分离得到ccy-14，CH3OH:Acetone:CH2Cl2＝1:1:20体系柱层析分离得到ccy-15。本发明提供的化合物ccy-17，中文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-亚苯基)双(3-(2,4-二羟基苯基)-2-丙烯-1-酮)，英文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,3-phenylene)bis(3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，分解温度为138-140℃，红棕色固体，结构式如下：ccy-17的合成路线为：其合成方法的工艺步骤与ccy-7的合成方法相同，采用2,4-二甲氧基苯甲醛与间苯二乙酮为起始反应物，CH3COOCH2CH3：PE:CH2Cl2＝1:15:15柱层析分离得到ccy-16，Acetone:CH3OH:CH2Cl2＝1:12体系柱层析分离得到ccy-17。本发明提供的化合物ccy-19，中文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,4-亚苯基)双(3-(2,4-二羟基苯基)-2-丙烯-1-酮)，英文名称为(2E,2'E)-1,1'-(1,4-phenylene)bis(3-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one)，分子式C24H18O6，分子量为402.40，黑色固体，结构式如下：ccy-19的合成路线为：其合成方法的工艺步骤与ccy-7的合成方法相同，采用2,4-二甲氧基苯甲醛与对苯二乙酮为起始反应物，CH3COOCH2CH3：CH2Cl2＝1:20～1:10柱层析分离得到ccy-18，CH3OH:CH2Cl2＝1:10体系柱层析分离得到ccy-19。体外药理实验表明，本发明提供的化合物对α-葡萄糖苷酶有抑制作用(结果见表1)。同时，细胞水平检测发现化合物并不显著影响HepG-2细胞对外源性葡萄糖摄取活动(结果见图1)，并且化合物ccy-13可明显(P＜0.05)降低细胞内葡萄糖含量(～40％)，接近于阳性对照组PG(5μM)，表明化合物ccy-13具有较强的糖苷酶抑制活性(结果见图2)。因此，上述化合物可用于降血糖药物。本发明提供的化合物及其制备方法、应用中所用原料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1化合物ccy-7及其合成将364mg(2mmol)3,4-二甲氧基苯乙酮溶于3mL甲醇中，加入0.2Ml50％KOH的水溶液，70℃加热，(134mg)1mmol对二苯甲醛溶于4mL甲醇后滴加入3,4-二甲氧基苯乙酮溶液中。反应2h后，停止加热，反应液倾入水中，旋蒸除去甲醇后，CH2Cl2萃取，CH3COOCH2CH3:CH2Cl2＝1:10～1:20柱层析分离得到353mgccy-6，产率77％。冰水浴，氮气气氛保护，往100ml的两颈瓶中，注入5ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液，137mg(0.3mmol)ccy-6溶解于15ml干燥CH2Cl2并逐滴滴入BBr3溶液中，ccy-6与BBr3的摩尔比为1/17。25℃±5℃反应24h后，溶液倾倒入冰水中，边倒边搅拌，过滤得固体，滤渣干燥，柱层析得到40mgccy-7。产率33％。产物经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3477,3244,3086,2749,1653,1608,1571,1528,1512,1437,1377,1327,1283,1246,1184,1113,1050,977,936,898,865,830,799,785,740,646,622,573,548,508.1HNMR谱(ppm)：9.99(s,2H),9.40(s,2H),7.97–7.93(m,6H),7.70–7.67(m,4H),7.54(d,J＝2.0Hz,2H),6.88(d,J＝8.4Hz,2H).(溶剂DMSO-d6，TMS内标)实施例2化合物ccy-9及其合成339mg(2mmol)3,4-二甲氧基苯甲醛和160mg(1mmol)间二苯乙酮反应，得185mgccy-8，产率41％。188mg(0.4mmol)ccy-8与4.5ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液反应，ccy-8与BBr3的摩尔比为1/11，反应条件、合成方法同实施例1，得100mgccy-9，产率61％。产物经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3448,1654,1597,1514,1437,1367,1284,1167,1103,1061,978,790,678,567.1HNMR谱(ppm)：(300MHz,DMSO)δ9.74(s,2H),9.13(s,2H),8.61(s,1H),8.32(dd,J＝7.8,1.5Hz,2H),7.71(t,J＝7.8Hz,1H),7.65(s,4H),7.28(d,J＝1.8Hz,2H),7.19(dd,J＝8.4,2.1Hz,2H),6.80(d,J＝8.1Hz,2H),6.80(d,J＝8.1Hz,2H).(溶剂DMSO-d6，TMS内标)实施例3化合物ccy-13及其合成365mg(2mmol)2,4-二甲氧基苯乙酮和133mg(1mmol)间苯二甲醛反应，得73mgccy-12，产率16％。229mg(0.5mmol)ccy-12与6ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液反应48h，ccy-12与BBr3的摩尔比为1/12，反应条件、合成方法同实施例1，得29mgccy-13，产率14％。化合物ccy-13经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3163,2922,2851,1637,1594,1577,1520,1435,1361,1310,1288,1227,1173,1129,1029,996,975,838,781,750,663,631,583,560,526,501,484,452.1HNMR谱(ppm)：13.48(s,2H),9.59(s,2H),8.43(s,1H),8.21(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(d,J＝15.6Hz,2H),7.98(dd,J＝7.6Hz,1.6Hz,1H),7.96(d,J＝15.2Hz,2H),7.61(t,J＝7.8Hz,1H),6.53(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.42(d,J＝2.4Hz,1H).(溶剂Acetone-d6，TMS内标)实施例4化合物ccy-15及其合成371mg(2mmol)2,4-二甲氧基苯乙酮和134mg(1mmol)对苯二甲醛反应，得289mgccy-14，产率63％。150mg(0.33mmol)ccy-14与4ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液反应48h，ccy-14与BBr3的摩尔比为1/12，反应条件、合成方法同实施例1，得ccy-1519mg，产率14％。产物经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3403,3183,2918,2846,1648,1557,1514,1423,1353,1241,1149,1030,968,827,770,624.1HNMR谱(ppm)：13.48(s,2H),9.66(s,2H),8.21(d,J＝9.2Hz,2H),8.08(d,J＝15.6Hz,2H),8.00(s,4H),7.93(d,J＝15.2Hz,2H),6.52(dd,J＝8.8,2.4Hz,2H),6.42(d,J＝2.0Hz,2H).(溶剂Acetone-d6，TMS内标)实施例5化合物ccy-17及其合成668mg(4mmol)2,4-二甲氧基苯甲醛和327mg(2mmol)间二苯乙酮反应，得390mgccy-16，产率42.6％。183mg(0.4mmol)ccy-16与6ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液反应48h，ccy-16与BBr3的摩尔比为1/15，反应条件、合成方法同实施例1，得ccy-1720mg，产率13％。产物经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3185,2973,2926,2601,1643,1597,1550,1514,1449,1383,1316,1253,1176,1099,1064,1038,979,847,796,771,737,682,693,602,570,534,499,450.1HNMR谱(ppm)：10.26(s,2H),10.01(s,2H),8.56(s,1H),8.32–8.27(m,2H),8.03(d,J＝15.5Hz,2H),7.79–7.65(m,5H),6.40(d,J＝2.0Hz,2H),6.34(dd,J＝8.5,2.0Hz,2H).(溶剂DMSO-d6，TMS内标)实施例6化合物ccy-19及其合成335mg(2mmol)2,4-二甲氧基苯甲醛和161mg(1mmol)对二苯乙酮反应，得240mgccy-18，产率53％。166mg(0.36mmol)ccy-18与6ml1mol/L的BBr3的CH2Cl2溶液反应48h，ccy-18与BBr3的摩尔比为1/17，反应条件、合成方法同实施例1，得ccy-1915mg，产率10％。产物经IR谱和1HNMR谱测定，分析结果如下：IR谱(KBr涂膜cm-1)：3150,2608,1643,1576,1539,1501,1444,1390,1341,1318,1258,1214,1134,1035,1010,981,846,801,771,701,500,444.1HNMR谱(ppm)：10.28(s,2H),10.05(s,2H),8.18(s,4H),8.03(d,J＝15.6Hz,2H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.69(d,J＝15.2,2H),6.41(d,J＝2.0Hz,2H),6.34(dd,J＝8.4,2.4Hz,2H).(溶剂DMSO-d6，TMS内标)实施例7化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性1、测试所用α-葡萄糖苷酶的溶液配置与调试：准确称取约1毫克的α-葡萄糖苷酶溶于1.0mL的pH＝7.0的50mM的磷酸盐缓冲溶液中。在1.5mL离心管中加入50μLDMSO，再加入920μLpH＝7.0的50mM的磷酸盐缓冲溶液，最后加入酶溶液10μL，将20μL底物(对硝基苯酚葡萄糖苷，3.0mg/mL)加入上述混和液中，混匀后，立刻测试溶液OD值(λ＝400nm)在1min内的变化。根据所得的OD值判断酶溶液的高低，适当改变酶溶液的浓度，使其OD值处于0.09～0.10之间。之后的测试均采用该酶溶液，每次测量取10μL。2、样品IC50值的预测试：准确称取几毫克样品，溶解于1000μL的DMSO溶剂中。分别取0，10，30和50μL该溶液，再分别加入50，40，20和0μL的DMSO，混匀，然后加入920μL的pH＝7.0的50mM的磷酸盐缓冲溶液，混匀，再加入10μL的上述酶溶液，充分混匀后于37℃恒温30分钟。将20μL底物(对硝基苯酚葡萄糖苷，3.0mg/mL)加入上述混和液中，混匀后，立刻测试溶液OD值(λ＝400nm)在1min内的变化，根据三个溶液的OD值，初步判断该化合物的半抑制活性IC50值是否在测试样品浓度区间，否则，进一步稀释或者增浓，得到合适浓度的样品溶液，以测试数据点较均匀地分布在IC50值附近为宜。3、样品抑制活性IC50值的准确测定：在确定了酶溶液浓度以及所测试样品的浓度后，分别取上述样品溶液0，10，20，30，40和50μL，分别加入50，40，30，20，10和0μL的DMSO，混匀，然后加入920μL的pH＝7.0的50mM的磷酸盐缓冲溶液，混匀，再加入10μL的上述酶溶液，充分混和摇匀后于37℃恒温30分钟。最后将20μL底物(对硝基苯酚葡萄糖苷，3.0mg/mL)加入上述混和液中，摇匀后立刻测试溶液OD值(λ＝400nm)在1min内的变化。每组浓度重复三次。利用专业数据处理软件MicrocalOriginProfessional处理实验数据，以反应速率(反应时间为1分钟时，溶液的OD值的变化值)为纵坐标，以抑制剂的浓度为横坐标，可计算得到呫吨酮类衍生物对α-葡萄糖苷酶的抑制IC50值(化合物使酶的活性下降50％时对应的浓度为半抑制浓度，即：IC50值)。表1α-葡萄糖苷酶抑制活性实验*α-葡萄糖苷酶抑制剂的阳性对照，(与文献报道值基本一致，参考文献K.Anam,R.M.Widharna.D.Kurini.α-glucosidaseinhibitoractivityofTerminaliaSpecies.InternationalJournalofPharmacology.2009,5(4),277-280.)由表1可知，化合物ccy-7,ccy-9,ccy-13,ccy-15,ccy-17和ccy-19对α-葡萄糖苷酶的抑制活性达到IC50值1.0～30.4μM，有较好的抑制活性，并且这6个化合物的抑制活性比脱氧野尻霉素的抑制活性好(P<0.01)。实施例8化合物(1μM)对外源性葡萄糖摄取影响检测所选细胞株为人源性肝癌细胞HepG-2，细胞培养于含10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基中，37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。细胞经无血清的培养基培养2小时后，加入终浓度为1μM化合物的化合物共孵育24小时。24小时后，分别收集细胞与培养基上清液，1500rpm离心5min。分别检测培养液中及细胞内葡萄糖的含量；同时，采用BCA蛋白浓度测定试剂盒测试蛋白质含量。外源葡萄糖含量的单位是“mmol葡萄糖/g蛋白”。以对照组作为100％，化合物处理组均对比于对照组。表2对外源性葡萄糖摄取影响结果如图1和表2所示，PG为阳性对照组。与control组相比，阳性对照组及化合物ccy-7,ccy-9,ccy-15,ccy-19并不会明显(P＞0.05)降低HepG-2细胞对外源性葡萄糖摄取量，化合物ccy-13轻微地降低HepG-2细胞对外源性葡萄糖摄取量(～17％)且有显著差异(P<0.05)。实施例9内源性葡萄糖含量的测试细胞在无血清的培养基中2h，然后加入化合物，使其在培养基中浓度为1μM。24小时后，收集细胞，分别采用葡萄糖检测试剂盒与BCA蛋白浓度测定试剂盒测试葡萄糖含量和蛋白质含量。细胞内葡萄糖含量的单位是“mmol葡萄糖/g蛋白”。以对照组作为100％，化合物处理组均对比于对照组。表3内源性葡萄糖含量由图2和表3可知，通过对细胞内葡萄糖含量检测，化合物ccy-13(1μM)处理组可明显(P＜0.05)降低细胞内葡萄糖含量(～40％)，等同于阳性对照组PG(5μM)。结合之前体外筛选实验，表明在具有良好α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物中，ccy-13能显著(P＜0.05)降低细胞内葡萄糖含量，且在低浓度(1μM)就可以达到阳性对照较高浓度(5μM)的效果。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。