一种高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法与流程

文档序号:11936938阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:包括:

1)菌株培养:将巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)以1~10%的接种量接种入216L培养基中培养;

2)粗酶液的制备:将步骤1)培养结束获得的发酵液,离心,洗涤,重悬,获得的细胞用超声破碎后离心,上清液即为粗酶液;

3)在步骤2)所得粗酶液中加入氯化钠溶液使其终浓度为1~3M,和/或在步骤3)所得粗酶液中加入pH 8.0~11.0的分子量为2~500kDa的支链PEI溶液使其终浓度为1~10mg/mL;

4)氧化还原酶对有机溶剂耐受性测定:在平行条件下,向步骤3)所得溶液中分别添加不同的有机溶剂并使各有机溶剂的终浓度至10~30%(v/v),于20~50℃、150~250rpm平行地震荡0.5~1.5h,然后利用酶标仪平行地同时测定加入有不同有机溶剂的体系中氧化还原酶在震荡不同时间后的剩余酶活力,以同时测定不同有机溶剂对氧化还原酶活性和稳定性的影响,从而同时得到该氧化还原酶对不同有机溶剂的耐受性。

2.如权利要求1所述的高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:所述氧化还原酶为NADH或NADPH依赖型氧化还原酶。

3.如权利要求1所述的高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:所述氧化还原酶包括胺脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、异柠檬酸脱氢酶。

4.如权利要求1所述的高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:所述有机溶剂为乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈、正丁醇、甲基叔丁基醚、环己烷、二甲基亚砜。

5.如权利要求1所述的高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:所述步骤1)中,216L培养基组成为1~15.0g/L蛋白胨,1~10.0g/L酵母粉,0.1~1g/L牛肉膏,0.1~2g/L柠檬酸钠,0.1~1g/L硝酸铵,0.1~2g/L乙酸钠,用海水配置;所述的培养条件为:起始pH 6.5~8.0,装液量体积分数为5%~15%,培养温度20~40℃,摇床转速150~250rpm,培养时间12~48h。

6.如权利要求1所述的高通量检测菌株耐有机溶剂氧化还原酶的方法,其特征在于:所述步骤2)中,将步骤1)培养结束获得的发酵液在4℃,8000rpm离心15min获得细胞,弃上清液,沉淀用pH 6.5~8.0的Tris-盐酸缓冲液重悬,充分洗涤后离心,重复操作3次;配置成浓度为0.025~100g/L的细胞液用于超声破碎。

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