一种采用新型双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒与流程

技术特征：

1.一种采用新型双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，其特征在于，包括：

21对特异性引物的复合引物组、复合扩增21个基因座、反应混合液以及热启动Taq酶；

所述复合扩增21个基因座包括Amelogenin，D3S1358，vWA，D7S820，CSF1PO，D8S1179，D21S11，D16S539，TH01，D13S317，TPOX，D18S51，D5S818，FGA，D2S1338，D19S433，D1S1656，D12S391，Penta D，Penta E和D6S1043；

所述反应混合液的组成为：MgCl₂ 5mM、Tris-HCl 125mM pH8.3 25℃，KCl 125mM，dNTPs 0.5mM，BSA 1.5g/L；所述dNTPs为dATP、dTTP、dCTP、dGTP的等摩尔混合物；

所述21对特异性引物的复合引物组的21个基因座的引物对的序列包括SEQ ID NO.01-SEQ ID NO.42；

所述21对特异性引物的复合引物组的各STR基因座采用分别位于该基因座核心重复区两侧的一对引物扩增，其中每对引物中至少有一条引物采用新型双荧光染料标记方法进行标记；

所述21对特异性引物的复合引物组的21个基因座的引物对分为四组采用新型双荧光染料标记方法进行标记；所述四组包括第一组：D3S1358，vWA，D7S820，CSF1PO，PentaE；SEQ ID NO.01-SEQ ID NO.10；第二组：D8S1179，D21S11，D16S539，D2S1338，Penta D；SEQ ID NO.11-SEQ ID NO.20；第三组：D19S433，TH01，D13S317，TPOX，D18S51，D6S1043；SEQ ID NO.21-SEQ ID NO.32；第四组：Amelogenin，D1S1656，D5S818，D12S391，FGA；SEQ ID NO.33-SEQ ID NO.42。

2.根据权利要求1所述的采用新型双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，其特征在于：所述新型双荧光标记方法包括在引物5’端第一个碱基用FAM、HEX、TAMRA、ROX中的一种进行标记；其中，用FAM、TAMRA和ROX标记的引物，引物5’和3’中间一个碱基用FAM进行标记；用HEX标记的引物，引物5’和3’中间一个碱基用HEX进行标记。

3.根据权利要求1所述的采用新型双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：将试剂盒内试剂与样品DNA混合、装入PCR扩增管，置于热循环仪上，进行PCR扩增，扩增程序为：95℃3min；94℃5s、60℃1min，26-28个循环；60℃终延伸10min；4-16℃保持；得到扩增产物，将扩增产物在遗传分析仪上进行荧光检测，再用片段分析软件分析基因测序仪上检测到的数据；所述样品DNA包括利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的人基因组DNA(提取检材的来源包括人的血液、血痕、精液、唾液、体液、毛发、肌肉或组织器官)，或者利用免提取的滤纸、FTA卡、棉签、纱布中任意一种载体收集的人类血液或口腔细胞。

4.根据权利要求1所述的采用新型荧光染料标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒可应用于中国人群的个体识别、亲子鉴定、DNA建库等方面。