1.用于哈蟆油真伪鉴别的引物对,为能扩增出DNA片段A的引物对;
所述DNA片段A是以哈蟆油为模板,用序列1和序列2所示引物对进行扩增得到的产物。
2.根据权利要求1所述的引物对,其特征在于:所述DNA片段A的核苷酸序列为序列5;
或,所述引物对由引物1和引物2组成;
所述引物1为如下1)或2):
1)为序列1所示的单链DNA分子;
2)为序列1删除和/或增加和/或改变一个或几个核苷酸得到的单链DNA分子;
所述引物2为如下3)或4):
3)为序列2所示的单链DNA分子;
4)为序列2删除和/或增加和/或改变一个或几个核苷酸得到的单链DNA分子。
3.一种用于鉴定或辅助哈蟆油的PCR试剂,包括权利要求1或2所述的引物对、DNA聚合酶和dNTP。
4.根据权利要求3所述的PCR试剂,其特征在于:
所述引物对中每条引物在所述PCR试剂中的浓度均为2nmol/l;
和/或,各个dNTP在所述PCR试剂中的浓度具体为2.5nmol/l;
和/或,所述DNA聚合酶具体为SpeedStar HS Taq DNA聚合酶或Phanta Max Super-Fidelity DNA聚合酶。
5.一种鉴定或辅助鉴定哈蟆油的试剂盒,包括权利要求1或2所述的引物或权利要求3或4所述的PCR试剂。
6.权利要求1或2所述的引物中的所述DNA片段A。
7.权利要求1或2所述的引物或权利要求3或4所述的PCR试剂或权利要求5所述的试剂盒或权利要求6所述的DNA片段A在如下(A1)-(A5)中任一种中的应用:
(A1)鉴定或辅助鉴定哈蟆油;
(A2)鉴别或辅助鉴别哈蟆油;
(A3)鉴别或辅助鉴别哈蟆油及其伪品;
(A4)鉴定或辅助鉴定待测样品是否为哈蟆油;
(A5)鉴定或辅助鉴定待测样品是哈蟆油还是其伪品。
8.一种检测或辅助检测待测样品是否为哈蟆油的方法,包括如下步骤:检测待测样品中是否含有权利要求6所述的DNA片段A;如果含有,则待测样品为或候选为哈蟆油;如果不含有,则待测样品不为或候选不为哈蟆油。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:
所述检测待测样品中是否含有DNA片段A的方法包括如下步骤:
1)用权利要求1或2所述的引物对待测样品进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;
2)用如下a或b检测所述PCR扩增产物:
a、向所述PCR扩增产物中加入DNA荧光染料,紫外检测,若PCR扩增产物有荧光,则待测样品含有所述DNA片段A,若PCR扩增产物无荧光,则待测样品不含有所述DNA片段A;
b、检测所述PCR扩增产物大小,若大小为520-530bp,则所述待测样品含有所述DNA片段A,若大小不为520-530bp,则所述待测样品不含有所述DNA片段A。
10.根据权利要求8或9所述的方法,其特征在于:
所述PCR扩增的模板为待测样品的基因组DNA;
所述PCR扩增条件为90℃3s,62℃20s,32个循环。