提取原油总脱氧核糖核酸的方法及试剂盒与流程

文档序号:12411820阅读:来源:国知局

技术特征:

1.提取原油总脱氧核糖核酸的方法,所述方法包括如下步骤:

(1)对原油预处理;

(2)采用阳-阴表活剂法裂解经预处理后的原油中的活细胞和/或死细胞,得含总脱氧核糖核酸的上清液;

(3)利用氯仿-醇沉淀、苯酚/氯仿-醇沉淀、氯仿-纯化柱及苯酚/氯仿-纯化柱4种纯化方法之一从所述上清液中提取得到总脱氧核糖核酸。

2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述的对原油预处理包括以异辛烷和/或乙二胺四乙酸缓冲液对原油进行预处理。

3.根据权利要求1所述的方法,其中,当所述原油为轻质原油时,采用异辛烷和/或三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸缓冲液进行预处理;当所述原油为中质原油、重质原油或特重质原油时,采用异辛烷进行预处理。

4.根据权利要求1~3中任一项所述的方法,其中,阳-阴表活剂法裂解活细胞和/或死细胞包括如下步骤:在步骤(1)预处理后的样品中加入质量体积比1g:20~40μL的浓度为10~20mg/mL溶菌酶,振荡,加入质量体积比为1g:2~4mL的浓度为5~20mg/mL的含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取缓冲液,及质量体积比为1g:20~40μL的浓度为5~20mg/mL朊酶k,振荡,再加入质量体积比为1g:0.2~0.4mL的浓度为100~200mg/mL的十二烷基硫酸钠溶液,样品加热至50~65℃维持1h~2h,冷却至20~25℃后离心收集上清液;所述质量体积比均是相对于所述预处理后的样品。

5.根据权利要求1所述的方法,其中,4种纯化方法中采用含氯仿或苯酚/氯仿的有机溶剂除去步骤(2)上清液中的朊,其包括如下步骤:将步骤(2)中所得上清液与等体积的所述含氯仿或苯酚/氯仿的有机溶剂混合,10~30℃条件下,离心去除含朊沉淀。

6.根据权利要求5所述的方法,其中,在除去步骤(2)上清液中朊后,氯仿-醇沉淀或苯酚/氯仿-醇沉淀纯化方法还包括:移取采用含氯仿或苯酚/氯仿的有机溶剂除去步骤(2)中朊的上清液至等体积的异丙醇或两倍体积无水乙醇中,充分混匀放入4℃冰箱8~12h,离心后弃去上清,并加入预冷的70%乙醇洗涤,在空气中充分干燥后加入灭菌超纯水,涡旋混匀。

7.根据权利要求5所述的方法,其中,在除去步骤(2)中朊后,氯仿-纯化柱或苯酚/氯仿-纯化柱纯化方法还包括:移取采用含氯仿或苯酚/氯仿的有机溶剂除去步骤(2)中朊的上清液至所述核酸纯化柱中,用THE洗液清洗,静止放置,确保所述核酸纯化柱中膜彻底干燥,加入灭菌超纯水,混匀后洗提DNA。

8.提取原油总脱氧核糖核酸的试剂盒,其包括:溶菌酶溶液、含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取液、十二烷基硫酸钠、朊酶k溶液、氯仿/异戊醇、异丙醇及乙醇;或

溶菌酶溶液、含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取液、十二烷基硫酸钠、朊酶k溶液、苯酚/氯仿/异戊醇、异丙醇及乙醇;或

溶菌酶溶液、含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取液、十二烷基硫酸钠、朊酶k溶液、氯仿/异戊醇、THE洗液及核酸纯化柱;或

溶菌酶溶液、含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取液、十二烷基硫酸钠、朊酶k溶液、苯酚/氯仿/异戊醇、THE洗液及核酸纯化柱。

9.提取原油总脱氧核糖核酸的试剂盒,其包括:溶菌酶、含十六烷基三甲基溴化铵的DNA提取缓冲液、十二烷基硫酸钠、朊酶k、氯仿/异戊醇、苯酚/氯仿/异戊醇、异丙醇、乙醇、THE洗液及核酸纯化柱。

10.根据权利要求8或9所述的试剂盒,其中,该试剂盒还包括异辛烷和/或三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸缓冲液。

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