技术特征：
技术总结
本发明公开了一种利用ZFN在哺乳动物细胞中实现多个大片段DNA定点整合的方法，包括如下步骤：(1)构建靶向CCR5基因的单交换ZFN打靶系统：单交换ZFN打靶系统包括针对切割靶点的左、右ZFN表达载体和多个使用不同荧光标记的打靶供体；每个打靶供体的设计包括启动子、荧光标记基因、目的基因左右同源臂以及左右同源臂衔接处的ZFN打靶位点的设计；(2)ZFN打靶系统共转染哺乳动物细胞，转染后利用流式分选稳定表达荧光的细胞；(3)步骤(2)分选的细胞进行PCR检测和测序鉴定，实现在哺乳动物细胞中进行多个DNA大片段的依次定点定向插入。本发明能实现多个6kb以上大片段DNA在哺乳动物细胞中的定点定向整合。
技术研发人员：何祖勇;黄翔;刘小凤;刘小红;陈瑶生
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：2017.04.06
技术公布日：2017.09.29