菌人工染色体（BAC)载体以形 成BoHV-1 预载体（pre-vector)BAC构建体；
[0026] (ii)经由诱导型重组系统将编码至少一种抗原的遗传物质插入所述BoHV-1预载 体BAC构建体中以产生重组BoHV-l-BAC(rBoHV-l-BAC)载体；
[0027] (iii)在细菌宿主中转化或扩增所述rBoHV-1-BAC载体；以及
[0028] (iv)从所述细菌宿主中纯化并分离所述rBoHV-1-BAC载体并且将所述载体配制 成疫苗组合物。
[0029] 还提供了针对牛呼吸道疾病综合症（BRDC)对牛接种疫苗的方法，所述方法包括 对牛施用体液免疫诱导性或细胞介导免疫诱导性有效量的来自低毒力BoHV-1的1型牛疱 瘆病毒（BoHV-1)基因组，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1基 因之间的编码至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达。
[0030] 本公开内容包括来自低毒力BoHV-1的BoHV-1基因组在制造对牛接种疫苗的针对 牛病原体之药物中的用途，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1 基因之间的编码至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达。
[0031] 本文的方法能够制备针对来自牛病原体的至少一种抗原的疫苗，所述方法包括：
[0032] ⑴将来自低毒力BoHV-1的BoHV-1基因组并入细菌人工染色体（BAC)载体以形 成BoHV-1预载体BAC构建体；
[0033] (ii)经由诱导型重组系统将编码至少一种抗原的遗传物质插入所述BoHV-1预载 体BAC构建体中以产生重组BoHV-l-BAC(rBoHV-l-BAC)载体；
[0034] (iii)在细菌宿主中转化或扩增所述rBoHV-1-BAC载体；以及
[0035] (iv)从所述细菌宿主中纯化并分离所述rBoHV-1-BAC载体并且将所述载体配制 成疫苗组合物。
[0036] BoHV-1基因组来自低毒力BoHV-1，当其表达时产生能够对其产生免疫应答的抗 原，所述BoHV-1基因组还包含与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1基因之间的编码至少 一种其他抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达并且其中异源抗 原诱导免疫应答。
[0037] 因此，本文教导的是包含来自低毒力BoHV-1之BoHV-1基因组的疫苗载体，所述 BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1基因之间的编码至少一种抗原的 遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达。
[0038] 本文能够实现多价疫苗，其包含：
[0039] (1)包含来自低毒力BoHV-1之BoHV-1基因组的第一价；以及
[0040] (2)包含编码至少一种抗原的遗传物质的第二价，其与BoHV-1异源、插入两个整 合BoHV-1基因之间，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达；
[0041] 其中所述第一价和第二价产生两个或更多个在牛宿主中对其产生免疫响应的抗 原。
[0042] 本文的BoHV-1疫苗载体还包含来源于BoHV-1菌株V155的BoHV-1基因组，其具有 来自牛病原体的编码至少一种抗原的异源遗传物质，所述遗传物质在BoHV-1基因组上插 入的位点选自BoHV-1参考序列GenBank登记号AJ004801的核苷酸16600至16700 ;22400 至 22500 ;40700 至 40800 ;58000 至 59000 ;67000 至 68000 ;74000 至 76000 ;84000 至 85000 ; 90000至91000以及96000至97000或其他BoHV-1中的功能等效位点。例如，参考表2。
[0043] 还教导了药物组合物、治疗和疫苗接种方案，本公开内容为用于管理受限或成群 牛科动物的商业方法。
[0044] 表2提供了在整合基因之间插入BoHV-1基因组的位点总览。序列坐标是指存入 GenBank登记号AJ004801的BoHV-1参考序列。
[0045] 表 1
[0046] 序列标识符总览
[0047]
【主权项】
1. 一种针对来自牛病原体的至少一种抗原的疫苗，所述疫苗包含来自低毒力BoHV-1 的1型牛疱瘆病毒（BoHV-1)基因组，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整 合BoHV-1基因之间的编码所述至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调所述 BoHV-1基因的表达。
2. 根据权利要求1所述的疫苗，其中编码所述至少一种抗原的遗传物质经由诱导型重 组系统插入所述BoHV-1基因组中。
3. 根据权利要求2所述的疫苗，其中所述诱导型重组系统是GET重组。
4. 根据权利要求3所述的疫苗，其中编码所述至少一种抗原的遗传物质在以下的位点 插入两个整合基因的聚腺苷酸化信号之间，所述位点选自BoHV-1参考序列GenBank登记 号 AJ004801 的 16600 至 16700、22400 至 22500 ;40700 至 40800 ;58000 至 59000 ;67000 至 68000 ;74000 至 76000 ;84000 至 85000 ;90000 至 91000 和 96000 至 97000 或其他 BoHV-1 中的功能等效位点。
5. 根据权利要求4所述的疫苗，其中所述至少一种抗原在选自16600至16612和22400 至22493的位点插入两个整合基因之间。
6. 根据权利要求5所述的疫苗，其中所述至少一种抗原在选自16602至16603和22421 至22470的位点插入两个整合基因之间。
7. 根据权利要求3所述的疫苗，其中所述至少一种抗原在选自表2中所列的位点插入 两个整合基因之间。
8. 根据权利要求1所述的疫苗，其中所述BoHV-1产生BoHV-1抗原。
9. 根据权利要求1至8中任一项所述的疫苗，其中所述至少一种抗原选自来自牛病毒 性腹泻病毒（BVDV)的抗原和来自微生物的抗原。
10. 根据权利要求9所述的疫苗，其中所述BVDV抗原选自糖蛋白E0和糖蛋白E2。
11. 根据权利要求9所述的疫苗，其中所述微生物选自：牛支原体（Mycoplasma bovis)、沙门氏菌（Salmonella)种、多杀巴斯德氏菌（Pateurella multocida)、溶血性曼 氏杆菌（Manhiemia haemolytica)和睡眠嗜血菌（Haemophilus somnus) 〇
12. 根据权利要求1或4所述的疫苗，其中所述低毒力BoHV-1毒株是毒株V155。
13. 根据权利要求1至12中任一项所述的疫苗，其还包含经由限制性内切酶消化而插 入的编码其他抗原之另外的遗传物质。
14. 根据权利要求1至13中任一项所述的疫苗，其配制在药物组合物中。
15. 根据权利要求14所述的疫苗，其中所述药物组合物适于经鼻施用。
16. -种用于针对来自牛病原体的至少一种抗原对牛科动物接种疫苗的方法，所述方 法包括向所述牛科动物施用体液免疫诱导性或细胞介导免疫诱导性有效量的来自低毒力 BoHV-1的1型牛疱瘆病毒（BoHV-1)基因组，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入 两个整合BoHV-1基因之间的编码所述至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下 调BoHV-1基因的表达。
17. 根据权利要求16所述的方法，其中经由诱导型重组系统将编码所述至少一种抗原 的遗传物质插入所述BoHV-1基因组中。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述诱导型重组系统是GET重组。
19. 根据权利要求18所述的方法，其中将编码所述至少一种抗原的遗传物质在以下的 位点插入两个整合基因的聚腺苷酸化信号之间，所述位点选自BoHV-1参考序列GenBank登 记号 AJ004801 的 16600 至 16700、22400 至 22500 ;40700 至 40800 ;58000 至 59000 ;67000 至 68000 ;74000 至 76000 ;84000 至