85000 ;90000 至 91000 和 96000 至 97000 或其他 BoHV-1 中的功能等效位点。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16600至16612和 22400至22493的位点插入两个整合基因之间。
21. 根据权利要求20所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16602至16603和 22421至22470的位点插入两个整合基因之间。
22. 根据权利要求18所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自表2中所列的位点 插入两个整合基因之间。
23. 根据权利要求16所述的方法，其中所述BoHV-1产生BoHV-1抗原。
24. 根据权利要求16至23中任一项所述的方法，其中所述至少一种抗原选自来自牛病 毒性腹泻病毒（BVDV)的抗原和来自微生物的抗原。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述BVDV抗原选自糖蛋白E0和糖蛋白E2。
26. 根据权利要求24所述的方法，其中所述微生物选自：牛支原体、沙门氏菌种、多杀 巴斯德氏菌、溶血性曼氏杆菌和睡眠嗜血菌。
27. 根据权利要求16或19所述的方法，其中所述低毒力BoHV-1毒株是毒株V155。
28. 根据权利要求16至27中任一项所述的方法，其还包含经由限制性内切酶消化而插 入的编码其他抗原的另外的遗传物质。
29. 根据权利要求16至28中任一项所述的方法，其中将所述BoHV-1基因组配制在药 物组合物中。
30. 根据权利要求29所述的方法，其中所述药物组合物适于经鼻施用。
31. -种制备针对来自牛病原体之至少一种抗原的疫苗的方法，所述方法包括： (i) 将来自低毒力BoHV-1的BoHV-1基因组并入细菌人工染色体（BAC)载体中以形成 BoHV-1预载体BAC构建体； (ii) 经由诱导型重组系统将编码所述至少一种抗原的遗传物质插入所述BoHV-1预载 体BAC构建体中以产生重组BoHV-1-BAC(rBoHV-1-BAC)载体； (iii) 在细菌宿主中转化和扩增所述rBoHV-1-BAC载体；以及 (iv) 从所述细菌宿主中纯化并分离所述rBoHV-1-BAC载体并且将所述载体配制成疫 苗组合物。
32. 根据权利要求31所述的方法，其中所述诱导型重组系统是GET重组。
33. 根据权利要求32所述的方法，其中将编码所述至少一种抗原的遗传物质在以下的 位点插入两个整合基因的聚腺苷酸化信号之间，所述位点选自BoHV-1参考序列GenBank登 记号AJ004801的16600至16700和22400至22500或其他BoHV-1中的功能等效位点。
34. 根据权利要求33所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16600至16612和 22400至22493的位点插入两个整合基因之间。
35. 根据权利要求34所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16602至16603和 22421至22470的位点插入两个整合基因之间。
36. 根据权利要求32所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自表2中所列的位点 插入两个整合基因之间。
37. 根据权利要求31所述的方法，其中所述BoHV-1基因组产生BoHV-1抗原。
38. 根据权利要求31至36中任一项所述的方法，其中所述至少一种抗原选自来自牛病 毒性腹泻病毒（BVDV)的抗原和来自微生物的抗原。
39. 根据权利要求38所述的方法，其中所述BVDV抗原选自糖蛋白E0和糖蛋白E2。
40. 根据权利要求38所述的方法，其中所述微生物选自：牛支原体、沙门氏菌种、多杀 巴斯德氏菌、溶血性曼氏杆菌和睡眠嗜血菌。
41. 根据权利要求31所述的方法，其中所述低毒力BoHV-1毒株是毒株V155。
42. 根据权利要求31至41中任一项所述的方法，其还包含经由限制性内切酶消化而插 入的编码其他抗原的另外的遗传物质。
43. 根据权利要求31至42中任一项所述的方法，配制在药物组合物中。
44. 根据权利要求43所述的方法，其中所述药物组合物适于经鼻施用。
45. 用根据权利要求31至44中任一项所述的rBoHV-1-BAC载体转染的培养细胞。
46. -种针对牛呼吸道疾病综合症（BRDC)对牛接种疫苗的方法，所述方法包括向所述 牛施用体液免疫诱导性或细胞介导免疫诱导性有效量的来自低毒力BoHV-1的1型牛疱瘆 病毒（BoHV-1)基因组，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1基因 之间的编码所述至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的表达。
47. 根据权利要求46所述的方法，其中经由诱导型重组系统将编码所述至少一种抗原 的遗传物质插入所述BoHV-1基因组中。
48. 根据权利要求47所述的方法，其中所述诱导型重组系统是GET重组。
49. 根据权利要求47所述的方法，其中将编码所述至少一种抗原的遗传物质在以下的 位点插入两个整合基因的聚腺苷酸化信号之间，所述位点选自BoHV-1参考序列GenBank登 记号 AJ004801 的 16600 至 16700、22400 至 22500 ;40700 至 40800 ;58000 至 59000 ;67000 至 68000 ;74000 至 76000 ;84000 至 85000 ;90000 至 91000 ;以及 96000 至 97000 或其他 BoHV-1中的功能等效位点。
50. 根据权利要求49所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16600至16612和 22400至22493的位点插入两个整合基因之间。
51. 根据权利要求50所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自16602至16603和 22421至22470的位点插入两个整合基因之间。
52. 根据权利要求48所述的方法，其中将所述至少一种抗原在选自表2中所列的位点 插入两个整合基因之间。
53. 根据权利要求46所述的方法，其中所述BoHV-1基因组产生B。狀-1抗原。
54. 根据权利要求46至52中任一项所述的方法，其中所述至少一种抗原选自来自牛病 毒性腹泻病毒（BVDV)的抗原和来自微生物的抗原。
55. 根据权利要求54所述的方法，其中所述BVDV抗原选自糖蛋白E0和糖蛋白E2。
56. 根据权利要求55所述的方法，其中所述微生物选自：牛支原体、沙门氏菌种、多杀 巴斯德氏菌、溶血性曼氏杆菌和睡眠嗜血菌。
57. 根据权利要求46或49所述的方法，其中所述低毒力BoHV-1毒株是毒株V155。
58. 根据权利要求46至57中任一项所述的方法，其还包含经由限制性内切酶消化而插 入的编码其他抗原的另外的遗传物质。
59. 根据权利要求46至58中任一项所述的方法，其中将所述BoHV-1基因组配制在药 物组合物中。
60. 根据权利要求59所述的方法，其中所述药物组合物适于经鼻施用。 61?来自低毒力BoHV-1的1型牛疱瘆病毒（BoHV-1)基因组在制备针对牛病原体的对 牛接种疫苗之药物中的用途，所述BoHV-1基因组具有与BoHV-1异源、插入两个整合BoHV-1 基因之间的编码所述至少一种抗原的遗传物质，其中所述插入基本不下调BoHV-1基因的 表达。
【专利摘要】本公开内容教导一般属于牛科动物的疫苗接种和疾病控制领域。提供了重组1型牛疱疹病毒(BoHV-1)疫苗载体来有效控制一种或更多种牛病原体如与牛呼吸道疾病综合症相关的那些牛病原体，例如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，并且其改善了由此引起的疾病病症。本文还包括用于管理受限或成群牛科动物的方案。
【IPC分类】C12N15-869, C12N15-40, C12N15-31, A61K39-12, A61K39-112, A61K39-102, A61K39-02
【公开号】CN104640991
【申请号】CN201280074502
【发明人】蒂莫西·约翰·马奥尼
【申请人】昆士兰州农渔林业部, 澳洲肉类及畜牧业协会
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2012年7月4日