DCC)和补体依赖的细胞毒作用（⑶C)，而IgG2和IgG4则适于激活或阻断某一受体。抗 体的恒定区不仅能提供效应功能，还能通过于组织细胞表面的IgGFc受体Fc y Rn结合，免 受蛋白酶类降解，在体内保持较长半衰期（20多天)。
[0013] 嵌合抗体的重轻链表达单位可串联于一个表达载体上，也可分别构建于两个载体 上共转染，有文献报道，串联表达载体的转化子中产生抗体的克隆的比例显著高于共转染 表达载体。目前用于增加目的基因扩增的筛选标记主要有二氢叶酸还原酶（DHFR)和谷氨 酰胺合成酶（GS)两种。而用于临床治疗用抗体表达的系统主要是CH0细胞系统，该系统能 为嵌合抗体的恒定区提供有效的糖基化和抗体的加工修饰。文献报道，通过选择有效的表 达载体和筛选系统，抗体表达量可提高到1000-2000mg/L。
[0014] 嵌合抗体技术与其它人源化技术比，具有构建周期短，不易引起亲和力降低等优 势，因而本研究在进行人源化改造时优先考虑嵌合抗体的技术路线。
【发明内容】
[0015] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种抗血管抑素受体人鼠 嵌合单克隆抗体，并进一步提供了编码该单克隆抗体的DNA序列、构建了含该DNA序列的 真核细胞表达载体、稳定高表达该单克隆抗体的宿主细胞株以及建立纯化该抗体的工艺方 法。并通过公开了上述抗体与同类产品的比较的检测结果，验证了所述抗血管抑素受体人 鼠嵌合单克隆抗体的抗肿瘤效果。
[0016] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种抗血管抑素受体人鼠 嵌合单克隆抗体，包括抗体轻链和抗体重链，其抗体轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO: 1或其 保守型变异序列，其抗体重链的氨基酸序列为SEQ ID N0:2或其保守型变异序列，重链和轻 链通过二硫键连接。
[0017] 本发明第二方面提供一种分离的DNA分子，编码所述抗血管抑素受体人鼠嵌合单 克隆抗体的重链和/或轻链的可变区或全长氨基酸。
[0018] 本发明第三方面提供一种构建体，含有所述的分离的DNA分子。
[0019] 优选的，所述构建体由所述分离的DNA分子插入到表达载体的多克隆位点构建而 成。
[0020] 本发明中的表达载体指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病 毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。
[0021] 更优选的，所述表达载体为pCI-neo等。
[0022] 本发明第四方面提供一种单克隆抗体的表达系统，由所述构建体转染到宿主细胞 构建而成。
[0023] 本发明中的宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细 胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙 门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CH0或Bowes 黑素瘤细胞的动物细胞等。
[0024] 优选的，所述宿主细胞是CH0细胞，保存号为20089278。
[0025] 本发明第五方面提供所述抗血管抑素受体人鼠嵌合单克隆抗体的制备方法，包括 如下步骤：在适合表达所述抗体的条件下，培养所述单克隆抗体的表达系统，从而表达出所 述的单克隆抗体，纯化分离出所述的单克隆抗体。
[0026] 本发明中所用的宿主细胞均为现有技术，可通过商业途径直接获取，培养中所用 的培养基亦为各种常规培养基，本领域技术人员可根据经验选择适用的培养基，在适于宿 主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温 度转换或化学诱导）诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。在上面的方法中的重组 多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的 和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知 的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离 心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相 层析（HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
[0027] 本发明从单克隆培养的细胞株中筛选获取目的抗体的基因序列，用以构建真核表 达载体，表达后即可重建抗体的活性，获得抗血管抑素受体人鼠嵌合单克隆抗体。
[0028] 本发明第六方面提供所述抗血管抑素受体人鼠嵌合单克隆抗体在制备肿瘤治疗 或肿瘤诊断类药物上的用途。
[0029] 本发明第七方面提供一种药物组合物，包括治疗有效量的所述抗血管抑素受体人 鼠嵌合单克隆抗体。
[0030] 本发明的单克隆抗体可以通过本领域任何已知的方式配制药物组合物来使用。这 种组合物以所述抗血管抑素受体人鼠嵌合单克隆抗体为活性成分，加上一种或多种药物可 接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂，这依赖于给药方式及所设计的剂量形 式。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于）乳糖、玉米淀粉 或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羚基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸 如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剔、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、 盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提 高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味，在这种组合物中可 以使用抑制剂可是其原始化合物本身的形式，或任选地使用其药物学可接受的盐的形式， 本发明的单克隆抗体可以单独给药，或以各种组合给药，以及与其它治疗药剂一起结合形 式给药。如此配制的组合物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的方式把抑制 剂进行给药。
[0031] 本发明还进一步对抗血管抑素受体单克隆抗体通过体外肿瘤细胞的效果测定和 体内动物实验研究了该抗体在细胞与动物体内的治疗有效性。
[0032] 本发明提供的抗血管抑素受体的单克隆抗体为嵌合抗体，在保持其抗血管抑素受 体活性的同时，使之更适合体内应用。该单抗具有与肿瘤细胞膜表面天然抗原结合活性，并 可明显抑制肿瘤细胞膜表面ATP合成，对抗肿瘤治疗有重要的意义。
【附图说明】
[0033] 图1 :实施例1中构建的表达载体图谱。
[0034] 图2 :实施例2中HAI178(McAbl78)抗体抑制肿瘤细胞/血管内皮细胞膜ATP合 成酶活性示意图。
[0035] 图3 :实施例3中HAI178抗体的生物学活性分析图。
[0036] 图4 :实施例4中HAI178抗体抑制白血病细胞的体内生长能力分析图。
[0037] 图5 :实施例5中流式细胞仪检测100 ii g/ml HAI-178抗体改变细胞周期的作用 示意图；(A)HAI-178抗体对MDA-MB-231细胞增殖周期的影响；(B)HAI-178抗体对A549细 胞增殖周期的影响。
[0038] 图6:实施例5中HAI178抗体影响白血病细胞周期的分析图。
[0039] 图7 :实施例5中Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测100 ii g/ml HAI-178抗体 诱导的人乳腺癌和肺癌细胞凋亡作用示意图。
[0040] 图8 :实施例5中Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测50 y g/ml HAI-178抗体 诱导的人白血病细胞MV4-11和HL-60的凋亡作用示意图。
[0041] 图9 :实施例6中100 y g/mlHAI-178抗体作用48h及72h后抑制人乳腺癌和肺癌 细胞增殖效率示意图。
[0042] 图10 :实施例6中HAI-178抗体作用120h后抑制不同白血病细胞增殖效率示意 图。
[0043] 图11 :实施例6中HAI178抗体抑制肿瘤细胞的克隆性生长示意图。
[0044] 图12 :实施例7中HAI178抗体抑制HUVEC体外血管肢形成示意图。
[0045] 图13 :实施例8中HAI178抗体抑制人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长(瘤重）示意 图。
[0046] 图14