arum)，其保藏编号为：CGMCCNo. 9884， 保藏日为2014年10月30日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研宄所。
【附图说明】
[0041] 图1是本发明实施例解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌体形态（X1000倍）。
[0042] 图2是本发明实施例解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌落形态。
【具体实施方式】
[0043] 一、ZFH-3的制备及鉴定
[0044] 解淀粉芽抱杆菌植物亚种（Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum) ZFH-3
[0045] 1、样品采集
[0046] 从福建省三明市大田县老树林采集土壤样品、收集担子菌纲伞菌红菇科食用真 菌，自然晒干；剪下食用真菌根部，研磨成粉，混合均匀，得食用真菌根部样品；土壤样品研 磨成粉，混合均匀，得土壤样品；
[0047] 2、菌株的分离和抗性菌筛选的与纯化
[0048] (1)样品稀释：分别从混合均匀的2个样品（真菌根部样品和土壤样品）中，各称 取5g溶解到装有45ml无菌水的三角瓶中，150rp振荡器振荡成均匀的KT1稀释液，然后用 lml移液枪吸取该稀释液lml至装有9ml无菌水的试管中，充分摇匀，即制成1(T2的样品稀 释液，并依次稀释至1〇_5;
[0049] (2)培养基准备：
[0050]①NA培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCL5g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml，PH7. 0;
[0051]②PDA培养基：葡萄糖20g，去皮马铃薯200g，琼脂粉20g，蒸馏水1000ml，PH7. 0;
[0052] ③将配制好的NA培养基、PDA培养基灭菌，于45°C-55°C倾倒至无菌的培养基；
[0053](3)菌种分离、筛选及纯化：分别吸取上述2种样品的不同稀释倍数的稀释液 0.lml，均匀涂布于冷却好的PDA培养基、NA培养基，放置28°C培养箱中倒置培养5天，每天 观察并挑选长势良好、对周边菌具明显拮抗作用的菌落于PDA培养基培养；
[0054](4)拮抗菌株验证及纯化：将所挑选出的培养于PDA培养基、能快速生长繁殖且可 能具拮抗作用的菌落，利用实验已有菌株，验证对柑桔酸腐病菌、蒂腐病菌、青绿霉菌、炭疽 病菌，香蕉轴腐病、炭疽病，草莓灰霉病、软腐病等预拮抗试验；并就拮抗作用最好、最具产 业化前景的1个菌株于PDA培养基上培养纯化，并命名菌株ZFH-3 ;
[0055] 3、菌株的鉴定
[0056](1)、菌落形态：解淀粉芽孢杆菌植物亚种（Bacillusamyloliquefacienssubsp. plantarum)ZFH-3,革兰氏阳性，芽饱椭圆形，中生或端生，孢囊不膨大；菌体呈杆状， 0. 7-0. 9ymX1. 8-3. 0ym，单个、成对或栅栏状排列。菌落乳白色，圆形，表面光滑稍突，不 透明，边缘整齐，直径约1mm。见图1、图2〇
[0057] 图1为解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌体形态（普通生物显微镜1000倍下 拍摄）。
[0058] 图2为解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的菌落形态（普通照相机拍摄）。
[0059](2)、ZFH-3的生理活性特征见下表1:
[0060] 表 1
[0061]
【主权项】
1. 一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，其特征在于：该菌株的分类命名为解淀 粉芽孢杆菌植物亚种（Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum)，其保藏编号为： CGMCCNo. 9884〇
2. 如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株原粉的制备方法，包括如 下步骤： (1) 、活化菌种 活化解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，待解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3在LB固 体培养基上菌落乳白色，圆形，明显突起，表面光滑，不透明，边缘整齐； (2) 、一级种子液的制备 选取LB固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，将一级种子摇瓶在32°C、 180r/min下培养14小时，得到一级种子液； (3) 、二级种子液的制备 种子罐中的培养基仍为LB液体培养基，121°C下，灭菌20min，将一级种子液接入种子 罐中培养，培养结束时得到二级种子液； (4) 、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌液发酵 将步骤（4)所得解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的二级种子液，按照接种量为1 %接入 发酵罐中，在发酵培养基下培养，得到发酵成熟菌剂； (5) 、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌原粉 步骤（4)所得的发酵成熟菌剂经碟片离心机或微滤设备浓缩后，加入轻质碳酸钙，浓 缩成熟发酵菌剂与轻质碳酸钙的重量比为100:3,得到液固混合物，将该液固混合物搅拌 30min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到解淀粉芽孢杆菌植物亚 种ZH1-3原粉。
3. 如权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株原粉的制备方法，其特征 在于： 所述步骤（1)中所述LB培养基配方（g/L):蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，溶剂为 水，pH7. 0-7. 2,固体培养基在液体培养基中加2%琼脂； 所述步骤（3)中所述种子罐的接种量为0. 5-1% (V/V);培养条件为：通气比1 :1，搅拌 转速为250-400r/min，培养温度32°C，罐压0. 05Mpa，培养12小时；所述二级种子液的活菌 含量为 1-3X 108cfu/mL，OD 值 0? 85 ; 所述步骤（4)中所述发酵培养基的配方（重量百分比）：玉米淀粉3%，豆柏粉3%，酵 母膏0. 9 %，氯化钠0. 25 %，碳酸钙0. 25 %，硫酸镁0. 4 %，磷酸氢二钾0. 3 %，pH7. 2-7. 5， 121°C灭菌30min;培养条件为：通气比为1 7,搅拌转速为180r/min、罐压0. 05MPa、培养 温度32°C、培养时间为48h，发酵过程中根据泡沫情况流加消泡剂；下罐时间以取样镜检芽 孢90%以上释放为准，成熟发酵液中解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3活芽孢含量为30~ 40XIO8CfVmL; 所述步骤（5)中所述离心式喷雾塔的干燥条件为：进风口温度为180-200°C，出风口温 度为80-85°C，菌原粉中含水量小于5% (W/W)，活芽孢含量2000X108cfu/g。
4. 如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株在防治水果采后病害中的 应用。
5. 如权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株在防治水果采后病害中的 应用，其特征在于：所述病害为青霉病、绿霉病、蒂腐病、酸腐病、炭疽病，炭疽病、轴腐病，灰 霉病或软腐病。
6. 如权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株在防治水果采后病害中的 应用，其特征在于：所述水果为柑桔，所述病害为柑桔青霉病、柑桔绿霉病、柑桔酸腐病、柑 桔炭疽病或柑桔蒂腐病。
7. 如权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株在防治水果采后病害中的 应用，其特征在于：所述水果为香蕉，所述病害为香蕉炭疽病或轴腐病。
8. 如权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株在防治水果采后病害中的 应用，其特征在于：所述水果为草莓，所述病害为草莓灰霉病或软腐病。
【专利摘要】本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3及其应用，该菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884。该菌株对多种农作物病原菌具抑制显著的抑制作用，特别能有效防治水果的采后病害，很好的用于柑桔青霉病、柑桔绿霉病、柑桔蒂腐病、柑桔酸腐病、柑桔炭疽病，香蕉炭疽病、香蕉轴腐病，草莓灰霉病、草莓软腐病等病原真菌的生物防治，显著降低水果果实采后病害的发生，延长贮藏期和货架期，减少化学药物使用量。菌株培养条件简单、繁殖速度快、易于工业化生产及推广应用，具有良好的开发应用前景。CGMCC No.988420141030
【IPC分类】A23B7-155, C12R1-07, C12N1-20
【公开号】CN104694430
【申请号】CN201510103301
【发明人】吴日章
【申请人】珠海真绿色技术有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月9日