br>[0049]
[0050] 本发明中，取代基Boc-为本领域常规所知的叔丁氧羰基。
[0051] 其中，所述的应用较佳地包括下述步骤：将如式I所示的拉科酰胺类似物标准品 溶液和所述反应的反应液分别进行高效液相色谱检测，根据如式I所示的拉科酰胺类似物 标准品色谱图的保留时间确定反应液中相关物质的峰，并根据峰面积计算反应液中式I化 合物的含量，从而最终实现反应终点的控制。
[0052] 其中，所述的高效液相色谱的条件优选如下：流动相A为0. 005~0. 02mol/L磷酸 二氢钾溶液，pH值为2. 8~3. 2,流动相B为乙腈，以流动相A :流动相B按体积比为（55~ 65) : (45~35)进行洗脱，柱温为20~30°C，检测波长为210nm，流速为I. 0~2. OmL/min， 进样量15~25 μ L，如式I所示的拉科酰胺类似物标准品溶液的浓度为0. 2~0. 4mg/mL。
[0053] 其中，所述的高效液相色谱的条件更优选如下：流动相A为0.0 lmol/L磷酸二氢钾 溶液，pH值为3. 0,流动相B为乙腈，以流动相A :流动相B按体积比为60 :40进行洗脱，柱 温为25°C，检测波长为210nm，流速为1.0 mL/min，进样量20 μ L，如式I所示的拉科酰胺类 似物标准品溶液的浓度为〇. 3mg/mL。
[0054] 其中，所述的如式I所示的拉科酰胺类似物标准品溶液较佳地为如式I所示的拉 科酰胺类似物与乙腈混合所形成的溶液。
[0055] 其中，所述的高效液相色谱的色谱柱较佳地为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，其 型号为 Agilent XDB-C18, 250*4. 6mm，5 μ m。
[0056] 其中，在由式II化合物制备式III化合物的反应中，其反应步骤优选如下：在有机 溶剂和水的两相溶剂中，在碱和相转移催化剂的存在下，将式II化合物与甲基化试剂进行 取代反应，即可。
[0057] 所述的甲基化试剂较佳地为对甲苯磺酸甲酯。
[0058] 所述的式II化合物与所述的甲基化试剂的摩尔比较佳地为1 : (3~5)，更佳地为 1: 4〇
[0059] 所述的有机溶剂较佳地为甲苯。
[0060] 所述的反应的温度较佳地为10~30°C。
[0061] 所述的相转移催化剂较佳地为四丁基溴化铵。
[0062] 所述的碱较佳地为无机碱，更佳地为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
[0063] 在所述的反应中，反应终点的控制优选通过如下方法进行：当检测式I化合物的 含量大于5%时，应立即终止反应，表明反应液中式I化合物的含量较高，反应效果不佳；当 检测式I化合物的含量小于0. 5%时，不终止反应，否则会导致式III化合物的产率较低，反 应效果不佳；当检测式I化合物的含量大于等于〇. 5%且小于等于5%时，即可终止反应，反 应效果较好；百分比是指质量百分比。
[0064] 本发明还提供了上述如式I所示的拉科酰胺类似物作为标准品在检测拉科酰胺 原料药中式I化合物含量的应用。
[0065] 其中，所述的应用较佳地包括下述步骤：将如式I所示的拉科酰胺类似物标准品 溶液和拉科酰胺原料药溶液分别进行高效液相色谱检测，根据如式I所示的拉科酰胺类似 物标准品色谱图的保留时间确定拉科酰胺原料药溶液中相关物质的峰，并根据峰面积计算 拉科酰胺原料药溶液中式I化合物的含量，从而最终实现拉科酰胺原料药的质量控制。
[0066] 其中，所述的高效液相色谱的条件优选如下：流动相A为乙腈：甲醇：0.01mol/L 磷酸二氢铵按体积比为20:5:75的混合溶液，pH值为7. O，流动相B为乙腈：甲醇按体积比 为（70~90) : (10~30)的混合溶液，柱温为10~30°C，检测波长为210nm，流速为1.0 ~ 2. OmL/min，进样量15~25 μ L，如式I所示的拉科酰胺类似物标准品溶液的浓度为0. 2~ 0. 4mg/mL，拉科酰胺原料药溶液的浓度为0. 2~0. 4mg/mL。
[0067] 其中，所述的高效液相色谱的条件更优选如下：流动相A为乙腈：甲醇：0.0 lmol/L 磷酸二氢铵按体积比为20:5:75的混合溶液，pH值为7. 0,流动相B为乙腈：甲醇按体积比 为80:20的混合溶液，柱温为25°C，检测波长为210nm，流速为1.0 mL/min，进样量20 μ L，如 式I所示的拉科酰胺类似物标准品溶液的浓度为0. 3mg/mL，拉科酰胺原料药溶液的浓度为 0· 3mg/mL〇
[0068] 其中，所述的高效液相色谱的洗脱较佳地按照如下条件进行梯度洗脱，百分比为 体积百分比：
[0069] 0111；[11:100%流动相六+0%流动相13 - 5111；[11:100%流动相六+0%流动相13-15111；[11: 75%流动相八+25%流动相13 - 20111；[11:75%流动相4+25%流动相13 - 21111；[11:100%流动相 八+0%流动相13 - 25111；[11:100%流动相4+0%流动相13。
[0070] 其中，所述的高效液相色谱检测的方法优选如下：记录色谱图至主成分峰保留时 间的3倍；控制拉科酰胺原料药中式I化合物单个最大杂质峰面积不得大于式I化合物 标准品溶液峰面积的〇. 1%，总杂质峰面积之和不得大于式I化合物标准品溶液峰面积的 1. 0%〇
[0071] 其中，所述的如式I所示的拉科酰胺类似物标准品溶液较佳地为如式I所示的拉 科酰胺类似物与流动相B混合所形成的溶液。
[0072] 其中，所述的拉科酰胺原料药溶液较佳地为拉科酰胺原料药与流动相B混合所形 成的溶液。
[0073] 其中，所述的高效液相色谱的色谱柱较佳地为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，其 型号为 Agilent XDB-C18, 250*4. 6mm，5 μ m。
[0074] 在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳 实例。
[0075] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0076] 本发明中所述的室温为25°C~35°C。
[0077] 本发明的积极进步效果在于：本发明的如式I所示的拉科酰胺类似物是对拉科酰 胺进行质量控制的必需品；本发明的制备方法可以高效地合成上述的类似物。
【附图说明】
[0078] 图1为拉科酰胺类似物I的MS图；
[0079] 图2为拉科酰胺类似物I的1HNMR图；
[0080] 图3为拉科酰胺类似物I的13CNMR图；
[0081] 图4为拉科酰胺类似物I的HMBC图；
[0082] 图5为拉科酰胺类似物I的HPLC图。
【具体实施方式】
[0083] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0084] 需要说明的是，由于HPLC检测时忽略了对甲苯磺酸甲酯、甲苯等原料、溶剂，因 此，实施例中油状物的HPLC检测纯度并非式I化合物在油状物中的含量，而是式I化合物 在忽略了对甲苯磺酸甲酯、甲苯等之后的油状物中的含量。
[0085] 实施例1拉科酰胺类似物式III的合成
[0086] 在IL反应瓶中依次加入甲苯（330mL)、化合物式II (20. 00g，68mmol)，对-甲苯磺 酸甲醋（38. 10g，204mmol)、四丁基溴化按（2. 63g，8. 16mmol)，搅拌均勾，室温下加入氢氧 化钠水溶液（16. OOg氢氧化钠+16mL水），加毕，室温反应3小时。
[0087] 反应毕，加入水（160mL)，搅拌5min，静置分层、分液，有机层依次用5%的磷酸 (80mL)、水（160mLX2)洗涤，有机层55°C减压浓缩，蒸除溶剂后得油状物38. 5g。
[0088] 实施例2拉科酰胺类似物式I正相柱分离纯化
[0089] 用100g 100-200目硅胶湿法装柱（硅胶柱，30mm*400mm)，取上述实施例1中所得 油状物即式I化合物粗品（4g)湿法上样，用正己烷：乙酸乙酯=3:1 (体积比）的混合液作 为流动相，进行洗脱，用荧光薄层硅胶板检测，洗脱7个柱体积时，荧光薄层硅胶板检测到 目标产品，收集洗脱液，减压浓缩后，得到拉科酰胺类似物式I化合物65mg，HPLC检测纯度 为 99. 7%。
[0090] 实施例3拉科酰胺类似物式I正相柱分离纯化
[0091] 用100g 100-200目硅胶湿法装柱（硅胶柱，30mm*400mm)，取上述实施例1中所得 油状物即式I化合物粗品（4g)湿法上样，用石油醚：乙酸乙酯=2. 5:1 (体积比）的混合液 作为流动相，进行洗脱，用荧光薄层硅胶板检测，洗脱8个柱体积时，荧光薄层硅胶板检测 到目标产品，收集洗脱液，减压浓缩后，得到拉科酰胺类似物式I化合物60mg，HPLC检测纯 度为99. 5%。所得化合物经鉴定同实施例2。
[0092] 实施例4拉科酰胺类似物式I正相柱分离纯化
[0093] 用100g 100-200目硅胶湿法装柱（硅胶柱，30mm*400mm)，取上述实施例1中所得 油状物即式I化合物粗品（4g)湿法上样，用正己烷：乙酸乙酯=2:1 (体积比）的混合液