(4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3-(4-(甲氧乙氧基）苯基）肉桂酰胺
[0284]
[0285] 方法同实施例11。
[0286] lHNMR:(DMS0-d6,400MHz):2.15(s，6H)，3.31(s，3H)，3.80(t，2H)，4.30(t，3H)，6. 89 (d, 1H), 7. 32 (s, 1H), 7. 41 (s, 2H), 7. 51 (d, 2H), 7. 58 (d, 2H), 7. 37 (d, 1H), 8. 53 (s, 1H), 8. 62 (s, 1H), 12. 39 (s, 1H), 13. 60 (s, 1H)
[0287] MS-ESI (m/z) :559. 67 (M+H+)
[0288] 实施例 16 I P (E) -N- (4- (4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3-(4-(环丙基）苯基）肉桂酰胺
[0289]
[0290] 方法同实施例11。
[0291] MS-ESI(m/z) :547. 67(M+Na+)
[0292] 实施例 17 I Q (E) -N- (4- (4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (4-(吗啉基）苯基）肉桂酰胺
[0293]
[0294] 方法同实施例11。
[0295] MS-ESI (m/z) :570. 70 (M+H+)
[0296] 实施例 18 I R (E) -N- (4- (4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (3-氟-苯基）肉桂酰胺
[0297]
[0298] 方法同实施例11。
[0299] MS-ESI (m/z) :525. 60 (M+H+)
[0300] 实施例 19 I S (E) -N- (4- (4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (2-氟-苯基）肉桂酰胺
[0301]
[0302] 方法同实施例11。
[0303] MS-ESI (m/z) :525. 60 (M+H+)
[0304] 实施例20 I Tl-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3-苯基硫脲
[0305]
[0308] 称取适量的3,5_二甲基苯胺（(λ 082mol)于40mLDCM中，加入无水 K2C03 (0. 164mol)，冰浴冷却30min，用恒压滴液漏斗滴加乙酰氯（0. 164mol)，滴完后自然 升至室温反应2h，TLC (PE: EA = 2:1)检测反应，待反应完全加20mL水淬灭，用DCM溶解，反 复用水洗有机相2次，稀盐酸洗2次，收集有机相，浓缩干燥得N- (3, 5-二甲基苯基）乙酰 胺13. 30g，为灰白色片状晶体产物；
[0309] IH NMR: (DMS0-d6,400MHz) : 2. 01 (s，3H)，2. 22 (s，6H)，6. 66 (s，1H)，7. 19 (s，2H)，9. 74 (s, 1H)
[0310] 步骤 2
[0311]
[0312] 称取适量的无水三氯化铝（369. 09mmol)与干燥的二氯甲烷溶液中，冰水浴下滴 加乙酰氯（246.06臟〇1)，之后加入1'1-(3,5-二甲基苯基）乙酰胺（82.021111]1〇1)，升温至室 温，反应3h，TLC(PE:EA= 1:1)检测反应，待反应结束，将反应液冲析到600mL水+20mL浓 盐酸中，再加入DCM溶解，萃取，收集有机相，浓缩干燥直接投下一步；
[0313] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 03 (s, 3H), 2. 14 (s, 6H), 2. 42 (s, 3H), 7. 26 (s, 2H), 9. 88 (s, 1H)
[0314] 步骤 3
[0315]
[0316] 将浓缩后得到的固体中加入60mL2N HCl及60mL水，加热至95~100°C水解2h， TLC(PE:EA = 1:1)检测反应终点。待反应结束，加入饱和碳酸氢钠淬灭，调制pH = 8~9， 有大量固体沉淀析出，抽滤固体，真空干燥过夜，得到13. 04g淡黄色粉末固体，为1-(4-氨 基-2,6-二甲基苯基）苯乙酮。
[0317] IH NMR: (DMS0-d6,400MHz) : 2. 06 (s，6H)，2. 34 (s，3H)，5. 17 (s，2H)，6. 21 (s，2H)
[0318] 步骤 4
[0319]
[0320] 称取1-(4-氨基-2,6-二甲基苯基）苯乙酮（82. lmmol)于120mL浓盐酸及40mL 水中，冰盐浴下冷却至温度<5°C，滴加 NaN02溶液，滴加过程保持温度低于5°C，滴加完毕后 反应20min，之后滴加 KI溶液，加完后自然升至室温反应7h，TLC(PE:EA = 4:1)检测反应 进程，待反应结束，用饱和碳酸氢钠淬灭，用乙酸乙酯萃取4次，合并有机相，柱层析分离纯 化，得14. 35g褐色油状液体的1-(4-碘-2,6-二甲基苯基）苯乙酮。
[0321] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 14 (s, 6H), 2. 44 (s, 3H), 7. 48 (s, 2H)
[0322] 步骤 5
[0323]
[0324] 称取1-(4-碘-2,6-二甲基苯基）苯乙酮（52.17臟〇1)于乙酸乙酯/氯仿（3〇1111^ : IOmL)混合溶液，加入 CuBr2(102. 98mmol)，65 ~70°C 回流 8h，TLC(PE:EA = 30:1)检测 反应进程，待反应结束，用饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯萃取，收集有机相，得到棕红色固体 18. 6g2-溴-1-(4-碘-2,6-二甲基苯基）乙酮。直接投下一步。
[0325] 步骤 6
[0326]
[0327] 称取2-溴-1-(4-碘-2,6-二甲基苯基）乙酮（52mmol)及硫脲（52mmol)于80mL 乙醇中，于72~80°C下搅拌过夜，产生大量白色浑浊，反应结束抽滤，用乙醇洗涤滤饼，干 燥得22g白色固体。
[0328] IH NMR: (DMS0-d6,400MHz) : 2. 14 (s，6H)，6. 46 (s，1H)，6. 96 (s，2H)，7. 32 (s，2H) ·
[0329] 步骤 7
[0331] 称取4- (4-碘-2,6-二甲基苯基）噻唑基-2-胺（0. 515mmol)、6_巯基嘌呤 (I. 03mmol)、Cu20(0. 026mmol)、及 K0H(1. 03mmol)于 DMF(40mL)和水（IOmL)中，125 ~ 130°C下反应过夜。TLC监测反应，待反应结束，加入盐酸水溶液淬灭，用乙酸乙酯和水反复 萃取，收集有机相，浓缩干燥得到黄色固体产物。
[0332] lHNMR:(DMS0-d6,400MHz):2.15(s，6H)，6.47(s，lH)，6.95(s，2H)，7.34(s，2H)，8. 49 (s, 1H), 8. 58 (s, 1H), 13. 57 (s, 1H)
[0333] 步骤 8
[0335] 称取4- (4- ((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻唑基-2-胺（2mmol)、苯 基异硫氰酸酯（2mmol)于吡啶（20ml)中，100~IKTC搅拌过夜，待反应结束，反复用乙酸 乙酯和水萃取，收集有机相，柱层析（DCM = MeOH = 20:1)得到纯品，黄色固体，产率62%。
[0336] IH NMR: (DMS0-d6,400MHz) : 2. 19 (s，6H)，7. 15 ~7. 90 (m，8H)，8. 51 (s，1H)，8. 59 (s ,1H), 10. 39 (s, 1H), 11. 81 (s, 1H), 13. 60 (s, 1H)
[0337] MS-ESI (m/z) ：512. I (M+Na+)
[0338] 实施例21 I Ul-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (4-(三氟甲基）苯基）硫脲
[0339]
[0340] 方法同实施例20。
[0341] lHNMR:(DMS0-d6,400MHz):2.21(s，6H)，6.97(s，lH)，7.50(s，2H)，7.56(d，2H)，7. 96 (d, 2H), 8. 52 (s, 1H), 8. 59 (s, 1H), 10. 37 (s, 1H), 13. 43 (s, 1H), 13. 62 (s, 1H)
[0342] MS-ESI (m/z) ：580. 64(M+Na+)
[0343] 实施例22 I Vl-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (4-(甲氧基）苯基）硫脲
[0344]
[0345] 方法同实施例20。
[0346] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 18 (s, 6H), 3. 74 (s, 3H), 6. 98 (d, 3H), 7. 28 (d, 2H), 7. 37 (s, 2H), 8. 49 (s, 1H), 8. 57 (s, 1H), 9. 60 (s, 1H), 13. 563 (s, 1H), 13. 623 (s, 1H)
[0347] MS-ESI (m/z) ：542. 10(M+Na+)
[0348] 实施例23 I Wl-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (2-溴苯基）硫脲
[0349]
[0350] 方法同实施例20。
[0351] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 17 (s, 6H), 7. 19 (m, 2H), 7. 42 (s, 3H), 7. 69 (d, 1H), 7. 83 (d, 1H), 8. 50 (s, 1H), 8. 59 (s, 1H) ,12,14 (s, 1H), 13. 11 (s, 1H), 13. 59 (s, 1H)
[0352] MS-ESI (m/z) :591. 53 (M+Na+)
[0353] 实施例24 I Xl-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (4-氟苯基）硫脲
[0354]
[0355] 方法同实施例20。
[0356] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 17 (s, 6H), 6. 97 (s, 1H), 7. 17 (t, 4H), 7. 40 (t, 4H), 8. 51 (s, 1H), 8. 59 (s, 1H), 9. 84 (s, 2H), 13. 54 (s, 1H)
[0357] MS-ESI (m/z) ：530. 63 (M+Na+)
[0358] 实施例25 I Yl-(4-(4-((9H-嘌呤-6-基）硫）-2,6-二甲基苯基）噻 唑-2-基）-3- (4-氯-3-(三氟甲基）苯基）硫脲
[0359]
[0360] 方法同实施例20。
[0361] IH NMR: (DMS〇-d6,400MHz) : 2. 20 (s, 6H), 6. 98 (s, 1H), 7. 49 (s, 2H), 7. 54 (s, 1H), 8. 14 (s, 1H), 8. 3 (s, 1H), 8. 52 (s, 1H), 8. 58 (s, 1H), 10. 4 (s, 1H), 13. 34 (s, 1H), 13. 61 (s, 1H)
[0362] MS-ESI (m/z) ：615. 08 (M+Na+)
[0363] 药效学实验部分
[0364] 一、细胞增殖抑制实验
[0365] 1、实验试剂
[0366] 四甲基偶氮唑蓝（3_(4, 5-dimethylthiazol_2-yl) _2, 5-diphenylte trazoliumb romide，MTT)、二甲基亚砜（DMSO)、EL 购自美国 Sigma 公司（St. Louis, MO)。DMEM、 RPMI-1640、胎牛血清以及胰酶自购买于Gibco公司（Auckland, N. Z)。本发明中涉及的新化 合物均由我实验室自行合成所得，在体外实验中用DMSO配制成90mmol/L的储备液，并避光 储存在-20°C冰箱备用，实验使用时，用完全培养基稀释至所需浓度。
[0367] 细胞系及其培养：本实验室使用的人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231和MDA-MB-468)、 人宫颈癌细胞株（Hela)和人慢性髓性白血病细胞株（K562)均购买于美国模式菌种收集中 心（ATCC)。
[0368] 人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231和MDA-MB-468)、人宫颈癌细胞株（Hela)使用含 1〇%的胎牛血清和抗生素（青霉素1〇〇1]/11^，链霉素1001]/1^)的01^1完全培养基培养，并 置于37°C、5% CO2、饱和湿度条件下的孵箱。
[0369] 人慢性髓性白血病细胞株（K562)使用含10 %的胎牛血清和抗生素（青霉素 100U/mL，链霉素 lOOU/mL)的RPMI-1640完全培养基培养，并置于37°C、5% CO2、饱和湿度 条件下的孵箱。
[0370] 2、MTT 法
[0371] 收集对数生长期的细胞，并根据细胞生长的快慢调整细胞悬液浓度，以2500~ 4000个细胞/孔的密度接种到96孔板，每孔体积100 μ L ;将96孔板置于37°C、5% C02细 胞培养孵箱内培养过夜；次日以3倍稀释的方式将化合物稀释成相应的浓度，并分别使用 不同浓度的I a~I 1(终浓度分别为90、30、10、3、1、0.3μπι〇1/υ处理细胞，每个浓度梯 度设3~5个复孔，并设置等体积的溶剂对照组，每孔的DMSO的含量均要求在0. 1 %以下 (0. 1%的DMSO对细胞增殖没有明显影响）；置37°C、5% C02细胞培养孵箱内培养96小时， 药物处理组和对照组每孔加入20 μ L MTT溶液（5mg/mL)，继续在孵箱中孵育2~4小时，待 甲瓒形成后终止培养，倾去上清液，每孔加150 μ L DMSO (对于悬浮细胞，待终止培养后，每 孔加入50 μ L的20% SDS溶液，孵育过夜待甲瓒全溶即可）；在摇床上摇15-20分钟，在酶 标仪（λ = 570nm)上测定各孔光吸收值（0D570)，取其平均值记录结果。细胞增殖抑制率 =(对照组0D570-实验组0D570)/对照组0D570X 100%。实验至少重复3次，根据不同 浓度的抑制率用GraphPad Prism软件求算IC5。。
[0372] 3、实验结果
[0373] I A~I W中部分化合物在四个不同肿瘤细胞株上的体外抗肿瘤增殖作用见表1。
[0374] 表 1
[0375]
[0376] 本发明对制备的化合物进行了人乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、MDA-MB-468)、人宫 颈癌细胞株（Hela)和人慢性髓性白血病细胞株（K562)的体外细胞增殖抑制实验研究，结 果表示所制备的化合物均对上述细