一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用
【专利说明】一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用 【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用，属于植物有效成分提取技 术领域。 【【背景技术】】
[0002] 赛北紫堇：无毛草本，高20- 65厘米。主根明显，细长，具少数纤维状分枝；根茎 短，被少数叶残基。茎直立，具棱，自基部多分枝，略带紫色。基生叶数枚，叶柄长4一 6厘 米，基部扩大成鞘，叶片轮廓卵形，二至三回三出分裂，第一回全裂片具柄，第二回近无柄或 无柄，2- 3深裂或浅裂，小裂片倒卵形至倒披针形，先端圆或钝，具短尖，背面具白粉；茎生 叶数枚，疏离，互生，均具叶柄且基部扩大成鞘，叶片同基生叶。总状花序生于茎和分枝先 端，长2. 5-8厘米，果时延长达14厘米，多花，先密后疏；苞片最下部者二回羽状分裂，中部 者深裂至缺刻，最上部者披针形至钻形全缘；花梗纤细，与苞片近等长或稍短。萼片鳞片状， 边缘撕裂状，早落；花瓣黄色，上花瓣长7- 8毫米，花瓣片舟状卵形，先端具短尖，边缘微波 状，背部具矮鸡冠状突起，距圆筒形，短于花瓣片，下花瓣舟状倒披针形，长约5毫米，先端 钝，具短尖，背部鸡冠状突起矮，内花瓣长3-4毫米，花瓣片倒卵形，具1侧生囊，爪线形，与 花瓣片近等长；雄蕊束长3-4毫米，花药极小，花丝披针形，蜜腺体贯穿距的1/2 ;子房线状 长圆形，长约2毫米，具1列胚珠，花柱比子房短，柱头2裂，具4个长乳突。蒴果狭圆柱形， 长1一 1. 2厘米，粗约2毫米，有3- 7枚种子，排成1列，成熟时自果梗基部反折。种子近圆 形，直径约1.5毫米，黑色，具光泽。花果期6 -10月。赛北紫堇是一种常用中药，据《藏药 大典》记载：其花、叶、根均可入药，具有清热解毒、镇静、活血化淤、收敛止痒、祛风利气等功 效。赛北紫堇是滇南地区傣族人民常用的植物药，是一种尽人皆知的解毒良药。
[0003] 产内蒙古（乌拉山）和山西（大五台山），生于海拔1700米附近的林下、山坡灌丛 下、草丛中或地边路旁。蒙古和俄罗斯的西伯利亚广布。在云南主要分布在滇南。本种在 内蒙古和山西的分布是其分布区以南的零星分布，这可能与第四纪冰期的影响有关。
[0004] 研究表明大部分异吲哚类生物碱具有抗肿瘤作用，相关成分在诱导肿瘤细胞分 化、促进肿瘤细胞凋亡以及提高机体免疫力方面亦表现出一定的作用，国内外对该领域的 研究十分活跃，无论是天然存在的，还是人工合成得到的异吲哚类化合物，都引起了化学家 的广泛关注。 【
【发明内容】
】
[0005] 本发明目的是针对现有技术中的需求，提供一种从塞北紫堇中提取到的新的异吲 哚类化合物。
[0006] 本发明的另一目的是提供一种该化合物的制备方法。
[0007] 本发明的第三个目的在于提供一种该化合物的应用。
[0008] 本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：
[0009] -种异吲哚类化合物，其特征在于其结构式为：
[0010]
[0011] 本发明异吲哚类化合物的分子式为C21H19NO 5，命名为Isoindole LYS。
[0012] 本发明异吲哚类化合物是以干燥的紫堇根为原料，经浸膏提取、浸膏萃取、硅胶柱 层析、高压液相色谱分离获得的。
[0013] 本发明异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：
[0014] a、浸膏提取：将紫堇根粗粉碎后用有机溶剂超声提取3次，每次lOOmin，过滤，合 并提取液，旋蒸干其中的有机溶剂，得浸膏A ;
[0015] b、浸膏萃取：在浸膏A中加入2% HCl进行多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合 并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，保留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱 化至pH 9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并 萃取物，并静置挥干氯仿，得浸膏B ;
[0016] c、硅胶柱分离：将浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B重量0. 8~1. 2倍 的80~100目硅胶拌样，上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏B重量的 5~10倍量，用体积比为1:0~1 :2的有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监 测，合并相同洗脱液部分，再将洗脱液上C-18反相柱进一步分离，用体积浓度10~100 %的 甲醇水溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同洗脱液部分；
[0017] d、高效液相色谱分离：将反相柱分离后的洗脱液经高效液相色谱进一步分离纯 化，根据紫外线检测器谱峰收集目标洗脱部分；
[0018] e、将目标洗脱部分经浓缩干燥后，即得。
[0019] 本发明中紫堇粗粉碎到30~40目。
[0020] 本发明步骤a和步骤c中的有机溶剂为醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚、乙酸乙酯中 的一种或几种。
[0021] 本发明步骤b中反应至生物碱反应较弱，表示所测pH值接近中性。
[0022] 本发明在制备过程中要注意回收有机溶剂和氯仿。
[0023] 本发明步骤c中收集的洗脱液为80:20部分。
[0024] 本发明步骤d中高效液相色谱分离是以20~80 %的甲醇为流动相，流速10~ 16ml/min，21. 2 X 250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测 波长为254nm，每次进样50 y L，收集15. 2~16. 4min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述 的异吲哚类化合物。
[0025] 本发明对得到的异吲哚类化合物的结构鉴定方法，包括以下步骤：
[0026](1)本发明制备得到白色柱状结晶（氯仿-甲醇），旋光值[a]24. 8D-5. 45(溶剂 为甲醇C 0.25)，ESI~MS显示离子峰（[M+l])366,表明其分子量为365, HRES頂S(实测 值 388. 1159[M+Na]+，计算值 388. 1160)，在 IR 谱中有明显的羰基 1686cm1，在 1624,1542， 1498cm 1显示有苯环存在，还有2932,1470,1038,920cm 1 (次甲二氧基），结合其氢谱、碳谱 数据，可推得分子式为C21H19NO5，不饱和度为13。
[0027] (2) 1HMNR低场区有八个质子信号，其中四个为芳香质子信号，有两个相互偶合 (7. 20,6. 86, J = 8. 1)，表明为芳香苯上相临氢；有两个呈单峰7. 28和6. 65 (各为1个H)， 另外两组质子信号，6. 03 (为-OCH2O-中两个H)，5. 54,4. 42 (为-CH2上两个H)，高场区有二 组甲基峰3.89 (3H，s)，3.73 (3H，s)，还有一个单峰2.82 (3H，s)为氮原子上甲基峰，及一组 多重峰3.30 (2H，m)为一个亚甲基峰.结合13CNMR、HSQC谱，HMBC谱，表明该化合物中应含 有两个苯环。
[0028] (3)在HSQC谱及HMBC谱中，可知S 7. 28的氢与S 105.8的碳直接相关，并与 S 151. 5,155. 1，123. 3,170. 5,146. 2,104. 5 远程相关，S 6. 65 的氢与 S 104. 5 的碳直接 相关，并与 S 151. 5,155.1，123. 3,146. 2,105. 8, 75.1 远程相关，S 3. 89 的氢与 S 56. 6 的 碳直接相关，并与S 105. 8,151. 5远程相关；S 3. 73的氢与S 56. 6的碳直接相关，并与 S 155. 1，104. 5的碳远程相关；S 2. 82的氢与S 25. 2的碳直接相关，并与S 75. 1，170. 5 的碳远程相关；S 5. 54,4. 42的氢与S 104. 9的碳直接相关，并与S 149. 8, 75. 1，135. 8， 116. 0,146. 2的碳远程相关；S 7. 21的氢与S 116. 0的碳直接相关，并与S 145. 0,109. 5， 150. 3,123. 2的碳远程相关；S 6. 86的氢与S 109. 5的碳直接相关，并与S 123. 3,135. 8， 145. 0,150. 3的碳远程相关；S 6. 03的氢与S 103. 1的碳直接相关，并与S 145. 3,150. 3的 碳远程相关；S 3. 31的氢与S 36. 7的碳直接相关，并与S 75. 1，123. 3,145. 0,135. 8,149. 8 的碳远程相关。
[0029] (4)其碳谱氢谱如表1:
[0030] 表1 THE NMR (300Hz) DATA OF UCD3OD，S ppm，J IN Hz)
[0031]
[0032] 综上分析，确定了新化合物的结构式为式1，经文献检索证实该化合物为一种新化 合物。
[0033] -种上述异吲哚类化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。
[0034] 该异吲哚类化合物的抗艾滋病活性实验如下：
[0035] 对本发明异吲哚类化合物做HIV感染细胞的保护作用试验
[0036] (1)样品对C8166宿主细胞的细胞毒性检测：4X IO5AiL C8166细胞悬液100 y L与 不同的待测化合物溶液混合，设三个重复孔。同时设置不含化合物的对照孔，37°C，5% C02 培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800ELISA仪测定OD值，测定波长为595nm， 参考波长为630nm。计算得到CC50值（50% Cytotoxic Concentration)，即对50%的正常 T淋巴细胞系C8166产生毒性时的化合物浓度。
[0037] (2)样品对HIV-IIIIB诱导C8166细胞病变（CPE)的抑制试验：将8X 105/mL C8166细胞50 y L/孔接种到含有100 y L/孔倍比稀释化合物的96孔细胞培养板上，然后 加入50 y L的HIV-1IIIB稀释上清（M. 0.1 . 0