. 0016)，设3个重复孔，同时设置不含化合物 的正常细胞对照孔，37°C，5% C02培养3天，倒置显微镜下（100X)计数合胞体的形成。 EC50(50% Effective Concentration)为抑制合胞体形成50%时的化合物浓度。
[0038] (3)根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法计算出化合物抑制病毒 的50%有效浓度（EC50)，50%抑制细胞生长浓度（CC50)及抗HIV-I活性的治疗指数TI值 (Therapeutic index)为：TI = CC50/EC50〇
[0039] (4)经对C8166宿主细胞的细胞毒性检测，以及对HIV-1IIIB诱导C8166细胞病变 (CPE)的抑制试验，异吲哚类化合物（Isoindole LYS)具有较好的anti-HIV-1活性，EC50 值为 3. 24±0. 15 y g/mL，治疗指数（TI)为 61. 73 (见表 2)。
[0040] 表 2 :化合物 Isoindole LYS 活性 [0041 ]
[0042] 以上结果揭示了本发明化合物结构新颖且活性好，可作为抗艾滋药物的先导性化 合物，在制备抗艾滋药物中有良好的应用前景。
[0043] 本发明与现有技术比较，有以下优点：
[0044] 本发明开发了一种新的异吲哚类化合物，该化合物结构新颖且活性好，可作为抗 艾滋药物的先导性化合物，在制备抗艾滋药物中有良好的应用前景，同时提供了新的异吲 哚类化合物来源，丰富了异吲哚类化合物的种类。
[0045] 本发明利用液相制备柱进行异吲哚类化合物高效分离，步骤简单、效率高、直观、 重现性好、出新率高，高效液相色谱分析表明，采用该方法制备的异吲哚类新化合物纯度可 高达98%以上。 【【附图说明】】
[0046] 图1为本发明化合物（Isoindole LYS)的ES頂S图；
[0047] 图2为本发明化合物（Isoindole LYS)的核磁共振碳谱（13C NMR);
[0048] 图3为本发明化合物（Isoindole LYS)的核磁共振氢谱（1H NMR);
[0049] 图4为本发明化合物（Isoindole LYS)的HSQC图；
[0050] 图5为本发明化合物（Isoindole LYS)的HMBC图；
[0051] 图6为本发明化合物（Isoindole LYS)的COSY图；
[0052] 图 7 为本发明化合物（Isoindole LYS)的主要 HMBC(H - C)和1H-1H C0SY(-)相 关。 【【具体实施方式】】
[0053]本发明一种异吲哚类化合物，其分子式为C21H19NO5，命名为I so indo I e LYS，结构式 为：
[0054]
[0055] 本发明的制备方法如下：
[0056] a、浸膏提取：将紫堇根粗粉碎到30~40目后用有机溶剂超声提取3次，每次 IOOmin并过滤，合并提取液，旋蒸干其中的有机溶剂，得浸膏A ;
[0057] b、萃取：在浸膏A中加入2% HCl进行多次研磨，至生物碱反应较弱即所测pH值 接近中性为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，保留酸水层，萃取3次，合并 酸水层，用氨水碱化至pH 9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至 氯仿层无色，合并萃取物，并静置挥干氯仿，得浸膏B ;
[0058] c、硅胶柱分离：将浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B重量0. 8~1. 2倍 的80~100目硅胶拌样，上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏B重量的 5~10倍量，用体积比为1:0~1 :2的有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监 测，合并相同洗脱液部分，再将洗脱液上反相柱进一步分离，用体积浓度10~100%的甲醇 水溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同80:20部分洗脱液部分；
[0059] d、高效液相色谱分离：将反相柱分离后的洗脱液以20~80%的甲醇为流动相， 流速10~16ml/min，21. 2X250mm，5iim的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相经高 效液相色谱进一步分离纯化，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L，收集15. 2~ 16. 4min的色谱峰；
[0060] e、将目标洗脱部分经浓缩干燥后，即得异吲哚类化合物（Isoindole LYS)。
[0061] 实施例1 :
[0062] 称取塞北紫堇根14kg，粉碎到30~40目后用95 %乙醇超声提取3次，每次IOOmin 并过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的乙醇，得乙醇浸膏A，乙醇浸膏用2% HCI多次 研磨，每次研磨至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，保 留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽 滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿 中，挥干氯仿，得氯仿浸膏B 136g ;
[0063] 将上述136g氯仿浸膏B用氯仿溶解，再以80~100目硅胶122g拌样，160~200 目硅胶IlOOg湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，之后用氯仿-甲醇系统洗脱，依次用 不同比例的洗脱液（100:0,95:5,90:10,80:20, 70:30,60:40, 30:70,1:1，1:2)进行梯度洗 脱，每250mL收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾 显色，合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为90:10的氯仿-甲醇有机溶剂溶 液的洗脱液经浓缩后重20. 2g ;
[0064] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积浓度为10~100 %的甲醇水溶 液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显 色，合并斑点相近的组份，取以体积含量20%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至5ml左 右，再以20%的甲醇为流动相，流速10ml/min，利用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样 50 y L，收集15. 2-15. 5min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合 物（Isoindole LYS)。
[0065] 实施例2 :
[0066] 称取塞北紫堇根10kg，粉碎到30~40目后用60 %丙酮超声提取3次，每次 lOOmin，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的丙酮，得丙酮浸膏A，丙酮浸膏A用2% HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留 并合并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取 多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿 浸膏 B (100g);
[0067] 取上述总氯仿浸膏B，以80~100目硅胶120g拌样，500g的160~200目硅胶 湿法装柱，上样后，首先采用纯正己烷洗脱，之后用正己烷-甲醇系统洗脱，依次用不同比 例的洗脱液（1〇〇:〇, 95:5,90:10,80:20, 70:30,60:40, 30:70,1:1，1:2)进行梯度洗脱，每 250mL收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色， 合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为80:20的正己烷-甲醇有机溶剂溶液的 洗脱液经浓缩后重16. Ig ;
[0068] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10~100 %的甲醇水 溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化 秘钾显色，合并斑点相近的组份；取以体积含量30%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩 至5ml左右，再以40%的甲醇为流动相，流速12ml/min，用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L， 收集15. 4-15. 7min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物 (Isoindole LYS)〇
[0069] 实施例3 :
[0070] 称取塞北紫堇根12kg，粉碎到30~40目后用40%丙酮和60%乙醇的混合溶剂超 声提取3次，每次lOOmin，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的混合溶剂，得浸膏A， 浸膏用2% HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸 液3次，保留并合并酸水层，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液 用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干 氯仿，得氯仿浸膏B (12Ig);
[0071] 取上述总氯仿浸膏B，以80~100目硅胶121g拌样，850g的160~200目硅胶 湿法装柱，上样后，首先采用纯石油醚洗脱，之后用石油醚-丙酮系统洗脱，依次用不同比 例的洗脱液（1〇〇:〇, 95:5,90:10,80:20, 70:30,60:40, 30:70,1:1，1:2)进行梯度洗脱，每 250mL收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色， 合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为80:20的石油醚-丙酮有机溶剂溶液的 洗脱液经浓缩后重18. 2g ;
[0072] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10~100%的甲醇水 溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化 秘钾显色，合并斑点相近的组份；取以体积含量40%甲醇水溶液洗脱得到的洗