脱液浓缩 至5ml左右，再以60%的甲醇为流动相，流速14ml/min，用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L， 收集15. 6-15. 9min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物 (Isoindole LYS)〇
[0073] 实施例4:
[0074] 称取塞北紫堇根15kg，粉碎到30~40目后用95 %甲醇超声提取3次，每次 lOOmin，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的甲醇，得甲醇浸膏A，甲醇浸膏A用2% HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留 酸水层并合并，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取 多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿 浸膏 B(147g);
[0075] 取上述总氯仿浸膏B，以80~100目硅胶134g拌样，1300g的160~200目硅胶 湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，之后用氯仿-甲醇系统洗脱，依次用不同比例的 洗脱液（100:0，95:5，90:10，80:20，70:30，60:40，30:70，I: I，1:2)进行梯度洗脱，每 250mL 收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并 斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为95:5的氯仿-甲醇有机溶剂溶液的洗脱液 经浓缩后重15. 3g;
[0076] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10~100 %的甲醇水 溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘 钾显色，合并斑点相近的组份；取以体积含量20%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至 5ml左右，再以80%的甲醇为流动相，流速14ml/min，利用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L， 收集15. 6-15. 9min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物 (Isoindole LYS)〇
[0077] 实施例5 :
[0078] 称取塞北紫堇根16kg，粉碎到30~40目后用95 %甲醇超声提取3次，每次 lOOmin，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的甲醇，得甲醇浸膏A，甲醇浸膏A用2% HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留 酸水层，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍 直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿浸膏 B(162g);
[0079] 取上述总氯氯仿浸膏B，以80~100目硅胶129. 6g拌样，160~200目硅胶1620g 湿法装柱，上样后，首先采用纯氯仿洗脱，之后用氯仿-丙酮系统洗脱，依次用不同比例的 洗脱液（100:0，95:5，90:10，80:20，70:30，60:40，30:70，I: I，1:2)进行梯度洗脱，每 250mL 收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色，合并 斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为80:20的氯仿-丙酮有机溶剂溶液的洗脱液 经浓缩后重16. 5g ;
[0080] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10~100 %的甲醇水 溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘 钾显色，合并斑点相近的组份；取以体积含量40%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩至 5ml左右，再以50%的甲醇为流动相，流速16ml/min，利用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L， 收集16. 1-16. 4min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物 (Isoindole LYS)〇
[0081] 实施例6:
[0082] 称取塞北紫堇根11kg，粉碎到30~40目后用70 %丙酮超声提取3次，每次 lOOmin，过滤，合并提取液，回收溶剂，旋蒸干其中的丙酮，得丙酮浸膏A，丙酮浸膏A用2% HCI多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸提取液，用等体积的氯仿萃取酸液3次，保留 酸水层并合并，用氨水碱化至pH为9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取 多遍直至氯仿层无色，合并萃取物，回收氯仿，将萃取物置于敞口器皿中，挥干氯仿，得氯仿 浸膏 B(109g);
[0083] 取上述总氯仿浸膏B，以80~100目硅胶109g拌样，160~200目硅胶650g湿法 装柱，上样后，首先采用纯乙酸乙酯洗脱，之后用乙酸乙酯-丙酮系统洗脱，依次用不同比 例的洗脱液（1〇〇:〇, 95:5,90:10,80:20, 70:30,60:40, 30:70,1:1，1:2)进行梯度洗脱，每 250mL收集一个组分，旋转蒸发回收溶剂，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化秘钾显色， 合并斑点相近的组份，得到9个部分，其中体积比为90:10的乙酸乙酯-丙酮有机溶剂溶液 的洗脱液经浓缩后重16. 6g ;
[0084] 用反相材料C-18装柱，洗脱液上反相柱，以体积含量为10~100 %的甲醇水 溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，薄层色谱（TLC)点样监测，用改良碘化 秘钾显色，合并斑点相近的组份；取以体积含量35%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液浓缩 至5ml左右，再以50%的甲醇为流动相，流速16ml/min，用21. 2X250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制备柱分离纯化单体，其中紫外检测器检测波长为254nm，每次进样50 y L， 收集16. 1-16. 4min之间的色谱峰，多次累加合并后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物 (Isoindole LYS)〇
[0085] 上述实施例仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明的保护范围，本 领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明的保 护范围。
【主权项】
1. 一种异吲哚类化合物，其特征在于其结构式为：2. -种权利要求1所述的异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于所述的异吲哚类化 合物是以干燥的紫堇根为原料，经浸膏提取、萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得的。3. 根据权利要求2所述的一种异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于具体包括以下 步骤： a、 浸膏提取：将紫堇根粗粉碎后用有机溶剂超声提取3次，每次lOOmin，过滤，合并提 取液，旋蒸干其中的有机溶剂，得浸膏A; b、 浸膏萃取：在浸膏A中加入2%HC1进行多次研磨，至生物碱反应较弱为止，合并酸 提取液，用等体积的氯仿萃取酸提取液，保留酸水层，萃取3次，合并酸水层，用氨水碱化至 pH9-10,静置，将碱化后的酸提取液抽滤，滤液用氯仿萃取多遍直至氯仿层无色，合并萃取 物，并静置挥干氯仿，得浸膏B; c、 硅胶柱分离：将浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B重量0. 8~1. 2倍的 80~100目硅胶拌样，上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，用量为浸膏B重量的5~ 10倍量，用体积比为1:〇~1 :2的有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测， 合并相同洗脱液部分，再将洗脱液上反相柱进一步分离，用体积浓度10~100%的甲醇水 溶液梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同洗脱液部分； d、 高效液相色谱分离：将反相柱分离后的洗脱液经高效液相色谱进一步分离纯化，根 据紫外线检测器谱峰收集目标洗脱部分； e、 将目标洗脱部分经浓缩干燥后，即得。4. 根据权利要求3所述的一种异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤a中 紫堇根粗粉碎到30~40目。5. 根据权利要求3所述的一种异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤a和 步骤c中的有机溶剂为醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚、乙酸乙酯中的一种或几种。6. 根据权利要求3所述的一种异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤c中 收集的洗脱液为80:20部分。7. 根据权利要求3所述的一种异吲哚类化合物的制备方法，其特征在于所述步骤d中 高效液相色谱分离是以20~80%的甲醇为流动相，流速10~161111/111111，21.2\250111111， 5ym的ZorbaxPrepHTGF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样 50yL，收集15. 2~16. 4min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异吲哚类化合物。8. -种权利要求1所述的异吲哚类化合物在制备抗艾滋病药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种异吲哚类化合物及其制备方法和应用，该化合物的分子式为C21H19NO5，命名为Isoindole？LYS，该异吲哚类化合物是以干燥的紫堇根为原料，经浸膏提取、浸膏萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得的。本发明异吲哚类化合物在制备抗艾滋病药物中的应用比较广泛，可作为抗艾滋药物的先导性化合物，在制备抗艾滋药物中有良好的应用前景，同时提供了新的异吲哚类化合物来源，丰富了异吲哚类化合物的种类。本发明利用液相制备柱进行异吲哚类化合物高效分离，步骤简单、效率高、直观、重现性好、出新率高，高效液相色谱分析表明，采用该方法制备的异吲哚类新化合物纯度可高达98％以上。
【IPC分类】A61P31/18, C07D491/113
【公开号】CN105085537
【申请号】CN201510347119
【发明人】李吉昌, 聂建华, 李平辉, 冷小冰
【申请人】中山职业技术学院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年6月19日