> (3)用超低温真空浓缩设备对酶解液进行浓缩，浓缩温度44°C，至浓缩液质量百分比浓度达35%时转至反应罐，其中超低温真空浓缩设备所使用的循环栗为低剪切力的螺杆栗，以充分保留胃蛋白酶的活性；
(4)调节浓缩液pH至6.5，温度42°C，搅拌进行转蛋白反应2h ;
(5)将转蛋白反应液升温至90°C并维持lOmin后转入脱色罐中，向脱色罐夹套通冷却水降温至60°C，再加入反应液2% (w:v, g/ml)的粉末活性炭搅拌脱色60min，脱色液经
0.45 μπι过滤器预过滤后再经0.22 μm精密过滤器过滤得无菌滤液，无菌滤液于进风温度200°C、出风温度90°C、雾化压力60bar条件下喷雾干燥得胶原蛋白肽粉500Kg。
[0025]经检测所得胶原蛋白肽水分4.5%、灰分0.1%、总氮16.3%、分子量居于1638Da与5808Da之间的占68%，游离氨基酸含量1.25%。
[0026]实施例4
一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其步骤如下:
(1)称取1500Kg的鲜白鲢鱼皮，冲洗去除异物，用5.5倍鱼皮重的0.3%氢氧化钙溶液浸泡7h，冲洗至近中性，再用6倍鱼皮重的0.3%梓檬酸溶液浸泡5h，冲洗至近中性；
(2)将洗好的鱼皮投入反应罐，加入3750Kg纯净水，开启搅拌，用稀盐酸调节混合物pH至3.8，向反应罐夹套通蒸汽升温至40°C左右，待混合物温度与pH恒定后加入4.5Kg胃蛋白酶，维持起始pH与温度搅拌反应10h ;
(3)用超低温真空浓缩设备对酶解液进行浓缩，浓缩温度30°C，至浓缩液质量百分比浓度达30%时转至反应罐，其中超低温真空浓缩设备所使用的循环栗为低剪切力的转子栗，以充分保留胃蛋白酶的活性；
(4)调节浓缩液pH至6.4，温度45°C，搅拌进行转蛋白反应1.5h ;
(5)将转蛋白反应液升温至88°C并维持20min后转入脱色罐中，向脱色罐夹套通冷却水降温至67°C，再加入反应液2.5% (w:v, g/ml)的粉末活性炭搅拌脱色50min，脱色液经
0.45 μπι过滤器预过滤后再经0.22 μm精密过滤器过滤得无菌滤液，无菌滤液于进风温度192°C、出风温度94°C、雾化压力40bar条件下喷雾干燥得胶原蛋白肽粉315Kg。
[0027]经检测所得胶原蛋白肽水分4.7%、灰分0.12%、总氮16.6%、分子量居于1638Da与5808Da之间的占63%，游离氨基酸含量1.47%。
[0028]实施例5
一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其步骤如下:
(1)称取1800Kg的鲜白鲢鱼皮，冲洗去除异物，用4.5倍鱼皮重的0.4%碳酸氢钠溶液浸泡9h，冲洗至近中性，再用6倍鱼皮重的0.2%草酸溶液浸泡5.5h，冲洗至近中性；
(2)将洗好的鱼皮投入反应罐，加入3500Kg纯净水，开启搅拌，用稀盐酸调节混合物pH至4.1，向反应罐夹套通蒸汽升温至43°C左右，待混合物温度与pH恒定后加入2.7Kg胃蛋白酶，维持起始pH与温度搅拌反应12h ;
(3)用超低温真空浓缩设备对酶解液进行浓缩，浓缩温度33°C，至浓缩液质量百分比浓度达30%时转至反应罐；
(4)调节浓缩液pH至6.1，温度43°C，搅拌进行转蛋白反应lh ; (5)将转蛋白反应液升温至87°C并维持lOmin后转入脱色罐中，向脱色罐夹套通冷却水降温至65°C，再加入反应液3% (w:v，g/ml)的粉末活性炭搅拌脱色30min，脱色液经
0.45 μπι过滤器预过滤后再经0.22 μm精密过滤器过滤得无菌滤液，无菌滤液于进风温度198°C、出风温度92°C、雾化压力45bar条件下喷雾干燥得胶原蛋白肽粉358Kg。
[0029]经检测所得胶原蛋白肽水分4.9%、灰分0.23%、总氮16.7%、分子量居于1638Da与5808Da之间的占65%，游离氨基酸含量1.38%。
[0030]实施例6
一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其步骤如下:
(1)称取2200Kg的鲜白鲢鱼皮，冲洗去除异物，用6倍鱼皮重的0.2%氢氧化钾溶液浸泡7h，冲洗至近中性，再用4倍鱼皮重的0.15%盐酸溶液浸泡3.5h，冲洗至近中性；
(2)将洗好的鱼皮投入反应罐，加入3300Kg纯净水，开启搅拌，用稀盐酸调节混合物pH至4.3，向反应罐夹套通蒸汽升温至44°C左右，待混合物温度与pH恒定后加入2.2Kg胃蛋白酶，维持起始pH与温度搅拌反应17h ;
(3)用超低温真空浓缩设备对酶解液进行浓缩，浓缩温度38°C，至浓缩液质量百分比浓度达34%时转至反应罐；
(4)调节浓缩液pH至6.4，温度41°C，搅拌进行转蛋白反应1.2h ;
(5)将转蛋白反应液升温至85°C并维持20min后转入脱色罐中，向脱色罐夹套通冷却水降温至63°C，再加入反应液1% (w: V, g/ml)的粉末活性炭搅拌脱色60min，脱色液经
0.45 μπι过滤器预过滤后再经0.22 μm精密过滤器过滤得无菌滤液，无菌滤液于进风温度193°C、出风温度90°C、雾化压力53bar条件下喷雾干燥得胶原蛋白肽粉407Kg。
[0031 ] 经检测所得胶原蛋白肽水分4.1%、灰分0.35%、总氮16.4%、分子量居于1638Da与5808Da之间的占67%，游离氨基酸含量1.79%。
【主权项】
1.一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:步骤如下: (1)将新鲜白鲢鱼皮清洗去除杂物后，先用碱溶液脱脂，再用酸溶液脱除杂蛋白，漂洗至近中性； (2)将预处理好的白鲢鱼皮加水，调节pH至3.5-4.5，温度至40~45°C，加入胃蛋白酶进行酶解反应，反应时间10~18h，反应过程中维持pH及温度恒定； (3)对上述胃蛋白酶酶解液进行超低温真空浓缩； (4)控制反应条件进行转蛋白反应得到大分子胶原蛋白肽溶液，后处理得高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽。2.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:所述的脱脂为用0.2^0.4%碱溶液(w: V，g/ml)浸泡6_10h脱脂，冲洗至近中性；所述的脱除杂蛋白为用0.1%~0.3%酸溶液(w:v，g/ml)浸泡3~6h脱除杂蛋白；所述脱脂后先冲洗至中性再脱除杂蛋白。3.根据权利要求2所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:脱脂所用碱溶液的量为起始原料新鲜白鲢鱼皮重量的4~6倍，脱除杂蛋白所用酸溶液的量为起始原料新鲜白鲢鱼皮重量的4~6倍。4.根据权利要求1或2所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:碱为氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或两种以上的混合，酸为盐酸、硝酸、磷酸、柠檬酸、草酸中的一种或两种以上的混合。5.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:步骤(2)中加水量为起始原料新鲜白鲢鱼皮质量1.5-2.5倍，胃蛋白酶的用量为起始原料新鲜白鲢鱼皮质量的0.1-0.3%。6.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:步骤(3)中超低温浓缩温度控制在30~45°C，最终浓缩液质量百分比浓度控制在30%~35%。7.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:步骤(4)中调节反应体系pH 6.0-6.5，温度40~45°C，进行转蛋白反应，反应时间l~2h。8.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:步骤(3)中的整个超低温真空浓缩过程在无剪切力或低剪切力工况下进行，以保留胃蛋白酶的活性。9.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于:所述的后处理为将转蛋白反应液经灭酶、脱色脱臭、除菌过滤、喷雾干燥后得胶原蛋白肽粉。10.根据权利要求1所述的制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法，其特征在于: 灭酶温度85~90°C，时间10~20min ； 脱色脱臭用活性炭添加量为反应液的1%~3% (w: V，g/ml )，温度60~70 °C，时间30?60min ； 除菌过滤采用0.45 μ m+0.22 μ m组合式过滤器，将脱色液经0.45 μ m过滤器预过滤后再经0.22 μ m精密过滤器过滤得无菌滤液； 喷雾干燥进风温度190~200°C，出进风温度90~95°C，雾化压力40~60bar。
【专利摘要】本发明涉及一种制备高分子量白鲢鱼皮胶原蛋白肽的方法。该方法步骤如下：（1）将新鲜白鲢鱼皮清洗去除杂物后，先用碱溶液脱脂，再用酸溶液脱除杂蛋白，漂洗至近中性；（2）将预处理好的白鲢鱼皮加水，调节pH至3.5~4.5，温度至40~45℃，加入胃蛋白酶进行酶解反应，反应时间10~18h，反应过程中维持pH及温度恒定；（3）对上述胃蛋白酶酶解液进行超低温真空浓缩；（4）控制反应条件进行转蛋白反应得到大分子胶原蛋白肽溶液，后处理得。该方法通过控制条件下的转蛋白反应在蛋白质水解的基础上再进行蛋白质的合成获得大分子胶原蛋白肽，分子量分布集中，原辅料利用率高，工艺简单，加工成本低。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105420324
【申请号】CN201510977882
【发明人】何秋生, 陈春松, 任涛, 李向阳, 张凤娇, 黎彩, 汪兰, 吴文锦
【申请人】武汉梁子湖水产品加工有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月23日