备，例如参见国际专利申请No .WO 2002/000196。
[0202] -些合适的赋形剂的实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿 拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、 水、糖浆和甲基纤维素。制剂可以另外包括:润滑剂如滑石、硬脂酸镁和矿物油;湿润剂;乳 化剂和悬浮剂;防腐剂，例如苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯;甜味剂;和调味剂。可通过使用 本领域已知的工序来配制本发明的组合物，以便在施用至患者之后提供活性成分的快速释 放、持续释放或延迟释放。
[0203] 所述组合物可配制为单位剂型，各剂量包含约5至约1000 mg(Ig)，更通常约100至 约500mg的活性成分。术语"单位剂型"是指适合作为人受试者和其它哺乳动物的单一剂量 的物理上分立的单位，每一个单位包含与合适的药物赋形剂结合的经计算为产生所需的治 疗效果的预定量的活性材料。
[0204]在一些实施方案中，本发明的组合物包含约5mg至约50mg的活性成分。本领域普通 技术人员应明白，这包括包含约5mg至约I Omg、约I Omg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至 约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg或约45mg至 约50mg的活性成分的化合物或组合物。
[0205]在一些实施方案中，本发明的组合物包含约50mg至约500mg的活性成分。本领域普 通技术人员应明白，这包括包含约50mg至约I OOmg、约I OOmg至约150mg、约150mg至约200mg、 约200mg至约250mg、约250mg至约300mg、约350mg至约400mg或约450mg至约500mg的活性成 分的化合物或组合物。
[0206]在一些实施方案中，本发明的组合物包含约500mg至约I ,OOOmg的活性成分。本领 域普通技术人员应明白，这包括包含约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约 650mg、约650mg 至约 700mg、约 700mg 至约 750mg、约750mg 至约800mg、约800mg 至约850mg、约 850mg至约900mg、约900mg至约950mg或约950mg至约I，OOOmg的活性成分的化合物或组合 物。
[0207] 活性化合物可以在宽剂量范围内有效且通常以药学有效量被施用。然而，应理解， 实际上施用的化合物的量将通常由医师根据相关的情况来确定，包括待治疗的病状、所选 择的施用途径、施用的实际化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者的症状的严重程度 等。
[0208] 为制备固体组合物例如片剂，将主要的活性成分与药物赋形剂混合以形成包含均 一的本发明化合物混合物的固体预配制组合物。当将这些预配制组合物称为均一的时，活 性成分通常均匀地分散在整个组合物中，使得该组合物可以容易地细分成同样有效的单位 剂型，例如片剂、丸剂和胶囊。然后将该固体预配制剂细分成包含例如约0.1至约1000 mg的 本发明活性成分的上述类型的单位剂型。
[0209] 本发明的片剂或丸剂可以被包衣或以其它方式配混，以提供赋予延长作用的优点 的剂型。例如，片剂或丸剂可以包括内剂量和外剂量组分，后者是以在前者上的包层的形 式。两种组分可以被肠溶层分离，肠溶层用来抵抗在胃中的崩解并允许内组分完整地进入 十二指肠或延迟释放。许多材料可以用于这样的肠溶层或包衣，这样的材料包括许多聚合 酸以及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素的材料的混合物。
[0210] 可掺入化合物和组合物以供口服或注射施用的液体形式包括水溶液、适当调味的 糖浆剂、水悬浮液或油悬浮液，以及含有食用油例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油以及 酏剂和类似药物媒介物的调味乳液。
[0211] 用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水溶剂或有机溶剂或其混合物 中的溶液和悬浮液以及粉末。液体或固体组合物可以包含如上所述的合适的药学上可接受 的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过口服或鼻呼吸途径施用，用于获得局部或全身效 应。组合物可以通过使用惰性气体来雾化。雾化溶液可以直接从喷雾装置中呼吸，或喷雾装 置可以附接于面罩帐篷或间歇性正压呼吸机器。溶液、悬浮液或粉末组合物可以口服施用 或从以适当方式递送制剂的装置通过鼻施用。
[0212] 施用至患者的化合物或组合物的量将根据所施用的药物、施用目的例如预防或治 疗、患者的状态、施用方式等而改变。在治疗应用中，可以足以治愈或至少部分地控制疾病 和其并发症的症状的量将组合物施用至已经罹患疾病的患者。有效的剂量将取决于待治疗 的疾病病状以及主治临床医师根据诸如疾病的严重程度、患者的年龄、体重和一般状态等 因素的判断。
[0213] 施用至患者的组合物可为上述药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规灭菌 技术来灭菌，或可以进行无菌过滤。水溶液可以原样包装使用或被冻干，冻干制剂在施用之 前与无菌水性载体组合。化合物制剂的pH将通常介于3和11之间，更优选地从5至9且最优选 地从7至8。应理解，前述赋形剂、载体或稳定剂中的某些的使用将导致药物盐的形成。
[0214] 化合物的治疗剂量可以根据例如用于治疗的特定用途、化合物的施用方式、患者 的健康和状态以及处方医师的判断而变化。化合物在药物组合物中的比例或浓度可以根据 包括剂量、化学特性(例如，疏水性)和施用途径在内的许多因素而变化，因素。例如，化合物 可以在包含约0.1至约10%w/v的化合物的生理缓冲水溶液中提供，用于胃肠外施用。一些 典型的剂量范围是约lyg/kg至约lg/kg体重/天。在一些实施方案中，剂量范围是约0.0Img/ kg至约100mg/kg体重/天。剂量可能取决于诸如以下的变量:疾病或病症的类型和进展程 度、特定患者的总体健康状态、所选择的化合物的相对生物效力、赋形剂的配方以及其施用 途径。有效的剂量可以从源自体外或动物模型测试系统的剂量响应曲线外推。
[0215] 本发明的组合物还可以包括一种或多种另外的药剂，例如化疗剂、类固醇、抗炎化 合物或免疫抑制剂，它们的实例在上文列出。
[0216] 在一些实施方案中，化合物或其药学上可接受的盐作为眼用组合物施用。因此，在 一些实施方案中，方法包括施用化合物或其药学上可接受的盐和眼科上可接受的载体。在 一些实施方案中，眼用组合物是液体组合物、半固体组合物、插入剂、膜、微粒或纳米微粒。
[0217] 在一些实施方案中，眼用组合物是液体组合物。在一些实施方案中，眼用组合物是 半固体组合物。在一些实施方案中，眼用组合物是局部用组合物。局部用组合物包括但不限 于液体和半固体组合物。在一些实施方案中，眼用组合物是局部用组合物。在一些实施方案 中，局部用组合物包括水溶液、水性悬浮液、软膏或凝胶。在一些实施方案中，眼用组合物局 部施用于眼睛前面、上眼睑下方、下眼睑上和在盲囊（cul-de-sac)中。在一些实施方案中， 眼用组合物是灭菌的。灭菌可以在准备使用时通过已知的技术例如溶液的灭菌过滤或通过 加热安瓿中的溶液来完成。本发明的眼用组合物还可以包含适合于眼用制剂的制备的药物 赋形剂。这样的赋形剂的实例是防腐剂、缓冲剂、螯合剂、抗氧化剂和用于调节渗透压的盐。
[0218] 如本文使用，术语"眼科上可接受的载体"是指可以容纳和释放化合物或其药学上 可接受的盐且与眼睛可相容的任何材料。在一些实施方案中，眼科上可接受的载体是水或 水溶液或悬浮液，但还包括油，例如用于制备软膏的那些和例如用于眼用插入剂中的聚合 物基质。在一些实施方案中，组合物可以是包括化合物或其药学上可接受的盐的水悬浮液。 液体眼用组合物，包括软膏和悬浮液两者，可以具有适合于所选择的施用途径的粘度。在一 些实施方案中，眼用组合物具有在约1，〇〇〇至约30,000厘泊范围内的粘度。
[0219] 在一些实施方案中，眼用组合物还可以包括以下中的一种或多种:表面活性剂、佐 剂、缓冲剂、抗氧化剂、张力调节剂、防腐剂(例如，EDTA、BAK (苯扎氯铵）、亚氯酸钠、过硼酸 钠、聚季铵盐-1)、增稠剂或粘度调节剂(例如，羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚乙烯醇、聚 乙二醇、乙二醇400、丙二醇羟甲基纤维素、羟丙基-瓜尔胶、透明质酸和羟丙基纤维素）以及 类似物。制剂中的添加剂可以包括但不限于氯化钠、碳酸氢钠、山梨酸、尼泊金甲酯、对羟基 苯甲酸甲酯、氯己定、蓖麻油和过硼酸钠。
[0220]水性眼用组合物(溶液或悬浮液)通常并不包含生理学上或眼科上有害的成分。在 一些实施方案中，将纯水或去离子水用于组合物中。PH可以通过加入任何生理学上和眼科 上可接受的pH调节酸、碱或缓冲剂来调节至在约5.0至8.5范围内。眼科上可接受的酸的实 例包括乙酸、硼酸、乳酸、磷酸、盐酸以及类似物，且碱的实例包括氢氧化钠、磷酸钠、硼酸 钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、氨基丁三醇、三羟甲基氨基甲烷以及类似物。盐和缓冲剂包 括柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠、氯化铵和前述酸和碱的混合物。
[0221] 在一些实施方案中，所述方法涉及形成或供应与眼睛的外表面接触的治疗剂的贮 库(depot)。贮库是指不会被泪液或其它眼睛清除机制迅速除去的治疗剂的供给源。这允许 通过单一应用在眼睛的外表面上的流体中存在连续持久的高浓度治疗剂。不希望受任何理 论束缚，据信吸收和渗透可能取决于溶解的药物浓度以及外部组织与包含药物的流体的接 触持续时间两者。当通过清除眼用流体和/或吸收到眼睛组织中除去药物时，更多的药物从 贮库提供(例如溶解)到补充的眼用流体中。因此，贮库的使用可以更容易地促更难溶的治 疗剂施加到眼组织中。在一些实施方案中，贮库可以保留高达八个小时或更久。在一些实施 方案中，眼用贮库形式包括但不限于水性聚合物悬浮液、软膏和固体插入剂。
[0222] 在一些实施方案中，眼用组合物是软膏或凝胶。在一些实施方案中，眼用组合物是 油型递送媒介物。在一些实施方案中，组合物包括其中添加了活性成分（通常以0.1 %至 2%)和赋形剂的石油或羊毛脂基质。常见基质可包括但不限于矿物油、矿脂及其组合。在一 些实施方案中，软膏以带的形式施用到下眼睑上。
[0223] 在一些实施方案中，眼用组合物是眼用插入剂。在一些实施方案中，眼用插入剂是 生物学惰性的、柔软的、生物可侵蚀的、粘弹性的、在暴露于治疗剂之后对灭菌稳定的，抵抗 来自空气传播细菌的感染、具有生物可侵蚀性、生物相容性和/或粘弹性。在一些实施方案 中，插入剂包括眼科上可接受的基质，例如聚合物基质。基质通常是聚合物，且治疗剂通常 分散在其中或结合至聚合物基质。在一些实施方案中，治疗剂可以通过溶解或共价键的水 解从基质缓慢地释放。在一些实施方案中，聚合物是生物可侵蚀的（可溶的），且其溶解速率 可以控制分散在其中的治疗剂的释放速率。在另一形式中，聚合物基质是生物可降解的聚 合物，其例如通过水解分解以由此释放结合至其或分散在其中的治疗剂。在另外的实施方 案中，基质和治疗剂可以被另外的聚合物包覆层围绕以进一步控制释放。在一些实施方案 中，插入剂包括生物可降解的聚合物，例如聚己酸内酯（PCL)、乙烯/乙酸乙烯酯共聚物 (EVA)、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚氨酯、尼龙或聚(dl-丙交酯-共聚-乙交酯）(PLGA)或这些中 的任何的共聚物。在一些实施方案中，治疗剂分散到基质材料中或分散到聚合之前的用于 制备基质材料的单体组合物中。在一些实施方案中，治疗剂的量是约0.1%至约50%或约 2%至约20%。在另外的实施方案中，使用生物可降解的或生物可侵蚀的聚合物基质，使得 不必除去用过的插入剂。当生物可降解的或生物可侵蚀的聚合物降解或溶解时，治疗剂被 释放。
[0224]在另外的实施方案中，眼用插入剂包括聚合物，包括但不限于在Wagh等人， "Polymers used in ocular dosage form and drug delivery systems(用于目艮用剂型和 药物递送系统的聚合物)"，Asian J.Pharm.，第12-17页(2008年I月）中所描述的那些，其通 过引用整体并入本文。在一些实施方案中，插入剂包括选自以下的聚合物:聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯聚合物或共聚物(例如，来自Rohm或Degussa的Eudragit? 的聚合物家族）、羟甲基纤维素、聚丙烯酸、聚(酰胺-胺)树状高分子、聚(二甲基硅氧烷）、聚 氧化乙烯、聚（丙交酯-共聚-乙交酯）、聚（2-羟基乙基甲基丙烯酸酯）、聚（乙烯醇）或聚（富 马酸丙二醇酯）。在一些实施方案中，插入剂包括Gelfoam⑩R。在一些实施方案中，插入剂 是450kDa聚丙烯酸-半胱氨酸缀合物。
[0225] 在一些实施方案中，眼用组合物是眼用膜。适合于此类膜的聚合物包括但不限于 Wagh等人(如上）中所描述的那些。在一些实施方案中，膜是软质隐形眼镜，例如由与二甲基 丙烯酸乙二醇酯交联的N，N_二乙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸的共聚物制成的软质隐形眼镜。
[0226] 在一些实施方案中，眼用组合物包括微球或纳米微粒。在一些实施方案中，微球包 括明胶。在一些实施方案中，微球被注射至眼睛的后段、脉络间隙中、巩膜中、玻璃体内或视 网膜下。在一些实施方案中，微球或纳米微粒包括聚合物，包括但不限于Wagh等人(如上）中 所描述的那些，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，聚合物是壳聚糖、聚羧酸例 如聚丙烯酸、白蛋白微粒、透明质酸酯、聚衣康酸、聚(丁基)氰基丙烯酸酯、聚己酸内酯、聚 (异丁基)己内酯、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)或聚(乳酸）。在一些实施方案中，微球或纳米微粒 包括固体脂质微粒。
[0227] 在一些实施方案中，眼用组合物包括离子交换树脂。在一些实施方案中，离子交换 树脂是无机沸石或合成的有机树脂。在一些实施方案中，离子交换树脂包括但不限于Wagh 等人(如上）中所描述的那些，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，离子交换树脂 是部分中和的聚丙稀酸。
[0228] 在一些实施方案中，眼用组合物是水性聚合物悬浮液。在一些实施方案中，治疗剂 或聚合物悬浮剂悬浮在水介质中。在一些实施方案中，含水的聚合物悬浮液可以被配制成 使得它们在眼睛中保持与其在施用至眼睛之前所具有的粘度相同的或基本上相同的粘度。 在一些实施方案中，它们可以被配制成使得在接触泪液时凝胶化增加。
[0229] 标记化合物和测定方法
[0230] 本发明的另一个方面涉及本文描述的某些化合物的标记型式(放射性标记的、荧 光标记的等），其不仅可用于成像技术，而且还可用于体外和体内测定两者，用于定位和定 量包括人的组织样品中的JAK，和通过抑制标记化合物的结合来鉴定JAK配体。因此，本发明 包括包含这样的标记化合物的JAK测定。
[0231] 本发明还包括同位素标记化合物。"同位素标记"或"放射性标记"的化合物是其中 一个或多个原子被具有与通常在自然界中发现的（即，天然存在的）原子质量或质量数不同 的原子质量或质量数的原子置换或取代的本文描述的化合物。可以结合在本文描述的化合 物中的合适的放射性核素包括但不限于 2H(又写为D，氘）、3H(又写为T，氚）、nC、13C、 14C、13N 、1%、15〇、17〇、18〇、1中、 355、36(：1、8如、7如、7(^、 7如、1231、1241、1251和1311。掺入本发明放射性 标记化合物中的放射性核素将取决于该放射性标记化合物的具体应用。例如，对于体外金 属蛋白酶标记和竞争测定，掺入咕、 14(：、828^1251、1311、353或的化合物通常会最有用。对于放 射成像应用， nC、18F、125I、123I、124I、 131I、75Br、76Br 或 77BriI常会最有用。
[0232]应理解，"放射性标记"或"标记化合物"是掺入至少一种放射性核素的化合物。在 一些实施方案中，放射性核素选自由3H、14C、125I、35S和 82Br组成的组。
[0233] 本发明还可以包括用于将放射性同位素掺入本文描述的化合物中的合成方法。用 于将放射性同位素掺入有机化合物中的合成方法是本领域熟知的，且本领域普通技术人员 将容易地识别适用于本文描述的化合物的方法。
[0234] 本发明的标记化合物可以用于筛选测定以鉴定/评估化合物。例如，可以通过追踪 标记监测其与JAK接触时的浓度变化来评估标记的新合成的或鉴定的化合物（即，测试化合 物)结合JAK的能力。例如，可以评估测试化合物(标记的)减少已知结合JAK的另一种化合物 (即，标准化合物）的结合的能力。因此，测试化合物与标准化合物竞争结合JAK的能力直接 与其结合亲和力相关联。相反地，在一些其它筛选测定中，标准化合物是经标记的，而测试 化合物是未标记的。因此，监测标记的标准化合物的浓度以评估在标准化合物和测试化合 物之间的竞争，并由此确定测试化合物的相对结合亲和力。
[0235]试剂盒
[0236] 本发明还包括可用于例如治疗或预防JAK相关的疾病或病症例如癌症的药物试剂 盒，其包括容纳包含治疗有效量的活性化合物的药物组合物的一个或多个容器。如果需要 的话，这样的试剂盒还可以包括各种常规的药物试剂盒部件中的一个或多个，例如，诸如具 有一种或多种药学上可接受的载体的容器、其它容器等，这对于本领域技术人员而言是显 而易见的。试剂盒中也可包括用作插页或标签的说明书，指示施用组分的量、施用指南和/ 或组分混合指南。
[0237] 将通过具体实施例更详细地描述本发明。以下实施例为了说明的目而提供，且并 不意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到，可以改变或修改各种非 关键的参数以产生基本上相同的结果。 实施例
[0238] 实施例1:(R)-3-环戊基- 3-[4-(2-羟基-5-氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并[2,3_d]嘧 啶-4-基)-1Η-吡唑-1-基]丙腈
[0240] 步骤l.(R)-3_环戊基-3-[4-(2_甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1Η-吡唑-1_基]丙臆
[0242] 将4_氯_2_甲氧基-7H-P比略并[2，3_d]啼啶（0 ·4g，2 · 1 8mmo1 ,Toronto Research Chemicals)和(R)-3-环戊基-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-1Η-吡 唑-1-基]丙腈(0.824 8,2.61111111〇1，如0找丄6?.，2009，11(9)，1999-2002中所描述的制备） 溶解在1，4-二噁烷(4mL)中，并加入水(2mL)中的碳酸钾(0.903g，6.54mmol)。将混合物脱气 并加入四（三苯膦)钯(0)(0.126g，0.109mmol)。将反应混合物加热至100°C，持续16h。将反 应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取物经硫酸钠 干燥、倾析和浓缩。用快速柱色谱法（用二氯甲烧中的〇 _ 1 〇 % M e 0 H的梯度洗脱）纯化产物 (670π^，91%)</Η NMR(300MHz，CD30D) :S8.59(s，lH)，8.35(s，lH)，7.24(d，lH)，6.81(d， 1H)，4.47(dt，lH)，4.04(s，3H)，3.21(dd，lH)，3.10(dd，1H)，2·62-2·44(ι?，1H),2.02-1.86 (m，lH)，1.81-1.20(m，7H) ;LCMS(M+H)+:337.0。
[0243] 步骤2.(R)-3_环戊基-3-[4_(5-碘-2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-lH-吡唑-1-基]丙腈
[0245] 向3-环戊基-3-[4_(2-甲氧基-7H-吡咯并[2,3-(1]嘧啶-4-基)-1!1-吡唑-1-基]丙 腈(0.532g，1.58mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液加入N-碘代琥珀酰亚胺(0.36g，1.6mmol)。将 反应物搅拌30min并在真空下除去溶剂。残留物通过快速柱色谱法（用己烷中的0-65%乙酸 乙酯的梯度洗脱）纯化以得到黄色固体(25011^，34%)。1!1匪1?(30010^，〇)(：13)310.31(1^ s，lH)，8.27(s，lH)，8.23(s，lH)，7.29(s，lH),4.34-4·21(m，lH)，4.06(s，3H)，3.14(dd， lH)，3.03-2.90(m，lH)，2.66-2.49(m，lH),2.02-1.17(m，8H);LCMS(M+H) +:463.0。
[0246] 步