一种非肽类凋亡抑制蛋白拮抗剂及其合成方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种能够诱导细胞调亡的新型小分子抗癌的非肤药物，具体地说， 是一种非肤类调亡抑制蛋白括抗剂，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 癌症治疗对人类来说一直是巨大的挑战，目前癌症治疗方法包括手术切除、化疗、 放射性治疗、临终关怀等，但无论是哪种方式都很难彻底治愈。在过去的几十年间，随着医 药技术的进步，癌症治疗手段也在不断进步和发展。但是，现有的抗癌药物有着各种各样的 局限性，运也是癌症治疗中需要逾越的巨大障碍。
[0003] 当今应用在癌症临床治疗的大部分细胞毒疗法(包括化疗和放射治疗)都是基于 诱导癌细胞调亡。细胞调亡指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细 胞调亡与细胞坏死不同，它并不是病理条件下自体损伤，而是为更好地适应生存环境而主 动争取的一种死亡过程。调亡通路功能素乱是癌症重要的病理学特征，而癌细胞对各种细 胞毒刺激产生耐受，从而使得细胞调亡机制失效，是当今许多癌症治疗临床应用失败的原 因。过去二十年的研究表明，调亡抑制蛋白（lAPs)是细胞调亡的关键调节子，W调亡抑制蛋 白为祀点，开发能够诱导细胞调亡的新型小分子抗癌药物成为癌症研究的热点。与肤类药 物相比，构象受限的非肤模拟物能够更有效地克服自然肤和肤模拟物的局限性，例如细胞 穿透性差、体内稳定性差W及生物利用率低。因此，开发非肤且高效的调亡抑制蛋白括抗 剂，在癌症治疗中具有巨大的应用前景。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明的目的是提供一种具有较好抗癌效果的非肤类调亡抑制蛋 白括抗剂本发明还提供该括抗剂的制备方法。
[0005] 针对上述问题，本发明提供的第一个技术方案是运样的：
[0006] -种非肤类调亡抑制蛋白括抗剂，其结构式如式1所示：
[0007]
[000引 其中；
[0009] Ri选自下述取代基的其中之一：
[0010]
[0011] R2选自下述取代基的其中之一：
[0012]
[0013] 上述X选自F、C1、化、Me、0Me的其中之一；
[0014] Y选自 S或 0;
[0015] 式1。
[0016] 本发明的第二个技术方案是提供该非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，该方 法依次包括下述步骤：
[0017] 1)-10~15°c下，将甲横酷氯、DMAP、有机碱加入至中间体A的氯代控溶液中，揽拌2 ~60分钟，反应液用氯代控稀释，依次经过弱酸洗、弱碱洗、饱和食盐水洗涂，干燥，浓缩，无 需进一步纯化，得到中间体B;在-10~15°C下，将N址加入至Boc-切S-OH的溶液中，悬浮液揽 拌1~60分钟的反应液，再将中间体B的溶液加入至反应液中，混合室溫揽拌0.5~10小时， 浓缩，分别收集有机相和残留液，残留液用水稀释，调节抑值至酸性，采用有机溶剂萃取后， 合并有机相后，再经水洗涂，干燥，减压浓缩，所得粗产品过柱纯化，得到淡黄色油状中间体 C；
[001引其中，所述的甲横酷氯、014口、中间体4、化山80(3-切3-0哺勺摩尔比为:0.9~5:0.05 ~3:1:1.6~10:0.8~5;
[0019] 2)将金属催化剂加入至中间体C的极性溶液中，悬浮液在此中揽拌过夜，反应完毕 后，过滤，滤液减压浓缩，得到淡黄色油状中间体D;-10~15°C下，将缩合剂加入至中间体D 的氯代控溶液中，再加入有机碱，混合液室溫揽拌4~72小时，反应完毕后，将反应液浓缩至 一半体积，依次经过弱酸洗、弱碱洗、饱和食盐水洗涂，干燥，浓缩，纯化，得到无色油状物中 间体E;
[0020] 其中，所述的缩合剂、中间体D的摩尔比为:0.8~20:1;
[0021 ] 3)-10~15 °C下，将TIPS加入至中间体E的氯代控溶液中，再加入TFA，混合液揽拌 0.5~10小时，蒸干溶剂，收集水相层，残留物用水稀释，再用乙酸洗涂两次，再与收集到的 水相层合并，干燥，得到中间体F;将其溶于MeCN/出0中，加入BoC2〇、有机碱，混合液室溫揽拌 过夜，浓缩，分别收集有机相和残留液，残留液用水稀释，调节pH值至酸性，采用有机溶剂萃 取后，合并有机相后用水洗涂，洗剂、干燥，得到中间体G;
[0022] 其中：所述的TIPS、中间体E、BoC2〇摩尔比为:0.1~10:1:0.9~3;
[0023] 4)-10~15°C下，将中间体G溶于有机溶剂中，加入芳香胺、缩合剂和添加剂，然后 加入有机碱，混合液室溫揽拌过夜，然后反应液依次弱酸洗、弱碱洗、饱和食盐水洗涂，干 燥，浓缩所得粗产品过柱纯化，得到无色油状物中间体Η;
[0024] 其中，所述的中间体G、芳香胺、缩合剂、添加剂的摩尔比为1:0.9~10:0.9~20: 0.1~20;
[0025] 5)-10~15 °C下，将TFA加入至中间体Η的氯代控溶液中，混合液揽拌0.1~5小时， 浓缩得到中间体I;
[0026] 6)在惰性气体的保护下，将叔下氧幾基保护的醒加入至中间体I的溶液中，再加入 足量的干燥剂，室溫揽拌1~20小时，过滤，浓缩，得到粗产品Jd-10~15°C下，将中间体J溶 于重蒸的氯代控中，加入还原剂。反应揽拌过夜，反应完毕后，加入饱和碳酸氨钢溶液泽灭 反应，然后用有机溶剂萃取多次，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涂，干燥剂干燥，浓 缩，得到产品Κ"-10~15°C下，将中间体K溶于氯代控中，加入TFA，混合液揽拌0.1~5小时， 浓缩，再纯化，冷冻干燥，得到白色固体成品L。
[0027] 其中，所述的中间体I、叔下氧幾基保护的醒、还原剂的摩尔比为：1:0.95~5:0.95 ~5。
[0028] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的有机碱为Ξ乙胺、 或DBU、或DIEA、或N-甲基吗嘟。
[0029] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的有机金属催化为 雷尼儀水悬浮液、或钮催化剂。
[0030] 优选的，上述的缩合剂为B0P、或DCC、或抓CI、或DIC、或PyBOP、或TBTU、或皿TU、或 HATU、或TATU。
[0031] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的添加剂为册化、或 册OBt、或册Su。
[0032] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的芳香胺为二苯基 甲胺、或苯甲胺、或5,6,7,8-四氨-1-糞胺、或(R)-2,3-二氨-1H-巧-1-胺、或（S)-糞-2-基 (苯基）甲胺、或2-苯基乙胺、或2-(立氣乙基)苯甲胺、或4-苯基-1，2,3，-嚷二挫-5-胺、或3- 甲基-1-苯基-1H-化挫-5-胺、或(4-氣代)苯甲胺、或(4-氯代)苯甲胺、或(4-漠代)苯甲胺、 或(4-甲基)苯甲胺、或(4-甲氧基)苯甲胺、或2-巧喃甲胺、或2-嚷吩甲胺。
[0033] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的叔下氧幾基保护 的氨基醒为N-叔下氧幾基-k丙氨醒、或(S)-2-(叔下氧幾基)氨基下醒、或(S)-2-((叔下氧 幾基）甲基氨基)丙醒、或(S)-2-((叔下氧幾基）甲基氨基)下醒。
[0034] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的干燥剂为硫酸儀、 硫酸钢、氯化巧、分子筛。
[0035] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的还原剂为Ξ乙酷 氧基棚氨化钢、氯基棚氨化钢。
[0036] 优选的，上述的非肤类调亡抑制蛋白括抗剂的制备方法，所述的中间体A的结构式 为：
[0037] 本发明提供的最后一个技术方案是非肤类调亡抑制蛋白括抗剂作为抗肿瘤药物 的应用。
[0038] 与现有技术相比，本发明的提供的技术方案与XIAP-BIR3的结合亲和力强，非肤特 征更加明显，是一种新型、非肤类、高效的XIAP括抗剂，具有较好抗癌效果，具有良好的应用 前景。
【附图说明】
[0039] 图1是化合物L1的1h NMR检测谱图；
[0040] 图2是化合物L2的1h NMR检测谱图；
[0041 ]图3是化合物L3的1h NMR检测谱图；
[0042] 图4是化合物L3与XIAP-BIR3竞争性结合抑制曲线。
【具体实施方式】
[0043] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但是不构成 对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本 发明的权利要求保护范围之内。
[0044] 所有试剂未经特别说明，均为市售分析纯，无进一步纯化，直接使用。无水无氧反 应的玻璃仪器在使用前，在烘箱中干燥，反应在Ar保护下进行。溶剂重蒸均在Ar保护下进 行，THF在金属钢和二苯甲酬的条件下干燥，二氯甲烧、乙酸乙醋用氨化巧干燥。柱层析使用 63~200目硅胶，薄层层析使用Merck TLC silica gel 60 F254塑料色谱板，用254nm紫外 光照、或舰蒸气、或2%巧Ξ酬的乙醇溶液显色检测。核磁共振谱使用化uker AVANCE III 400醒R谱仪测定，化学位移值Wppm为单位记录。质谱使用LCT Premier XE型飞行时间质 谱仪测定。旋光值用JASC0 P-1010旋光仪测定。
[0045] 高效液相色谱(HPLC)条件：（1)制备型HPLC:Perkin Elmer Series 200 UV/VIS检 测器;Perkin Elmer Series 200二相累;真空除气器;Gilson FC203b馈分接收仪；（2)分析 型HPLC:Perkin Elmer Series 225自动进样器；Perkin Elmer Series 220 UV/VIS检测 器;Perkin Elmer Series 200四相累；真空除气器。流动相：（1)流动相A:水+0.045%TFA; (2)流动相B: 10 % 水+90 % 乙腊+0.038 % TFA。
[0046] 实施例1
[0047] 中间体A的合成方法如下：
[004引
[0051]将 Ξ 乙胺（38mL，0.273mol)加入至k谷氨酸（20.0邑，0.140111〇1)和苯甲醒（17.4邑， O.ieOmol)的甲醇溶液(200mL)中。混合物室溫揽拌1小时后，将溶液溫度降低至(TC，然后将 化肌4(5.67g，0.150mol)缓慢加入至反应液中。揽拌2小时后，将反应液倒入冰的4M HC1溶 液巧OmL)中。将所形成的悬浮液减压浓缩和加热至固体全部溶解。冷却一段时间后，过滤得 到的固体便是化合物1。无需纯化，可直接进行下一步反应。将1的水溶液(300mL)加热至回 流，揽拌过夜。将反应液冷却至室溫，用二氯甲烧萃取3次，有机相用硫酸儀干燥，过滤，减压 浓缩，粗产品过柱纯化(流动相:从环己烧/乙酸乙醋= 1/1至二氯甲烧/甲醇= 15/1)，得到 无色油状物2 (17.4g，Ξ步总产率为58 % )
[0052] 1h 醒R(400MHz，CDCl3):5ll.l0(br，lH)，7.35-7.22(m，5H)，5.17(d，J = 14.8Hz, lH),4.05-3.98(m,2H),2.70-2.61(m,lH),2.56-2.48(m,lH),2.35-2.24(m,lH),2.21-2.14
[0053] (S)-1-苄基-5-氧代化咯烧-2-簇酸叔下醋(3)
[0化4]
[00对在Ar保护和0°C下，将草酷氯（6.40mL，70.0 mmo 1)的乙腊溶液（5