一步快速和监控肿瘤的免疫检测条的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，共分6个区，第一区加样垫，第二区固相化标记抗体，第三区检测区T，为包被抗体喷涂区带，T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体，第四区对照区C，C区固相化非特异性抗体，第五区吸水区，所述的吸水区为纸纤维片，第六区硝基纤维层析膜，T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比，用检测定量仪可以测出待测抗原浓度范围。本发明中的检测条具有如下技术效果：特异性高；灵敏性高；试验区(T)颜色深浅与肿瘤抗原浓度呈线性关系；能够一步快速检测。
【专利说明】一步快速和监控肿瘤的免疫检测条
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，属于生物诊断【技术领域】。
【背景技术】
[0002]根据流行病统计，每70名妇女中有一人患卵巢肿瘤。患者存活率为30%。乳房肿瘤每年有数十万以上患者。而肠胃道肿瘤患者比例更高。目前，筛检测方法如下；卵巢肿瘤CA-125酶联法，乳房肿瘤CA-15-3酶联法，肠胃道肿瘤CA-199酶联法。筛检阳性者再以昂贵的方法做CT或MRI确诊。肿瘤指标的提升显示肿瘤发生或扩大；肿瘤指标的下降提示治疗的成功。
[0003]CA-125、CA-15-3, CA-199酶联法分别作为卵巢肿瘤、乳房肿瘤和肠胃道肿瘤的诊断和监控在美国和一些国家作为经典立法已经有若干年。但是尚没有一步法快速诊断和监控的报道。现有的酶联法具有如下不足之处:1)检测时间长，酶联法需要3小时出结果；2)保存时间短，保存要求高。需冰箱保存，而且只有6个月-12个月有效期。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种一步快速和监控肿瘤的免疫检测条。
[0005]本发明是通过检测血液中与肿瘤相关的指标进行一步快速和监控肿瘤，与肿瘤相关的指标包括卵巢肿瘤CA-125、乳房肿瘤CA-15-3和肠胃道肿瘤CA-199。
[0006]本发明的免疫检测条共分6个区，第一区加样垫，第二区固相化标记抗体，第三区检测区T，为包被抗体喷涂区带，T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体，第四区对照区C，C区固相化非特异性抗体，第五区吸水区，所述的吸水区为纸纤维片，第六区硝基纤维层析膜。T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比，用检测定量仪扫描或照相T区颜色，再以软件可以测出待测抗原浓度范围。所述的待测物质为与肿瘤相关的抗原，包括用于检测卵巢肿瘤的CA-125、用于检测乳房肿瘤的CA-15-3或用于检测肠胃道肿瘤的CA-199。
[0007]所述的固相化标记抗体区的标记为可见颗粒标记抗体,如金标、硒标或碳标。
[0008]所述的对照区C区为硝基纤维素膜上包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG。
[0009]当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-125时，所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-125单克隆抗体，所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体，与标记抗体相配对的抗CA-125单克隆抗体。
[0010]当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-15-3时，所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-15-3单克隆抗体，所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体，与标记抗体相配对的抗CA-15-3单克隆抗体。
[0011]当检测条用于检测卵巢肿瘤的CA-199时，所述的第二区固相化标记抗体为固相化标记抗CA-199单克隆抗体，所述的检测区T区固相化特异性抗体为包被抗体，与标记抗体相配对的抗CA-199单克隆抗体。[0012]本发明的工作原理如下:待测样滴加于第一区加样垫，借或不借助展开剂上行至第二区固相化标记抗体区，血样中如存在抗原CA-125或CA-15-3或CA-199，则与标记抗体形成“抗原-标记抗体”复合物。该复合物按毛细管原理在检测条的第6区上上行，行至第3区检测区，与T区一条固相包被线的另一特异抗体形成“标记抗体-抗原-固相包被抗体”复合沉淀线。该沉淀线的色带深浅与抗原血样中浓度有线性关系。上行至第4区对照区上，与C区的固相包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG相遇，因为单克隆抗体都属于小鼠单克隆抗体，因此不管抗原存在与否，C区总会有一条沉淀线出现，此条色带一般作为质量控制，如果C区色带不出现，则说明检测条失活。
[0013]在检测时间15分钟，将层析检测盒放置于QKTECH4000金标定量分析仪中读取结
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[0014]检测条的制备方法:
[0015]1、标记抗体的制备:将所需抗体加入所需量胶体金溶液,搅拌10分钟后，加入1/10体积的1%小牛血清蛋白液作稳定剂，高速离心，取得玫瑰红色沉淀物，即标记抗体。
[0016]2、将上述沉淀物溶解于缓冲剂(JAJInternationalInc, SanDiego, CA, USA 产品)。中，铺于玻璃纸上，真空抽干；
[0017]3、包被抗体制备:将与标记抗体相对应的另一抗体溶液用喷雾方法划线于硝基纤维膜上，于37摄氏度烘干20分钟；
[0018]4、装配:将上述各组分贴在有胶面的塑料薄板上，上下两端再贴上吸水纸。切割成条，再装入塑壳之中。
[0019]免疫检测条的肿瘤抗原配对抗体
[0020]经研发和制作，并用定量分析仪分析，本发明的肿瘤抗原配对抗体一步法研制结果汇总于表1。
[0021]表1肿瘤抗原配对抗体一步法研制结果
【权利要求】
1.一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，其特征在于，所述的免疫检测条共分6个区，第一区加样垫，第二区固相化标记抗体，第三区检测区T，为包被抗体喷涂区带，T区固相化与第二区抗体相对应的特异性抗体，第四区对照区C，C区固相化非特异性抗体，第五区吸水区，所述的吸水区为纸纤维片，第六区硝基纤维层析膜，T区的颜色深浅与待测抗原含量成正比，用检测定量仪可以测出待测抗原浓度范围，所述的待测物质为与肿瘤相关的抗原，包括用于检测卵巢肿瘤的CA-125、用于检测乳房肿瘤的CA-15-3或用于检测肠胃道肿瘤的CA-199。
2.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，其特征在于，所述的第二区固相化标记抗体区的标记为可见颗粒标记抗体。
3.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，其特征在于，所述的可见颗粒标记为金标、硒标或碳标。
4.根据权利要求1所述的一步快速和监控肿瘤的免疫检测条，其特征在于，可置予一种外壳，以利于检测程序。
【文档编号】G01N33/577GK103604925SQ201310606257
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月26日 优先权日:2013年11月26日
【发明者】惟钊·卢, 詹姆斯·儆翊·卢, 胡成龙 申请人:卢氏实验室公司, 南京路始生物科技有限公司