专利名称：：gM-阴性EHV突变体的制作方法gM-阴性EHV突变体本申请是中国申请01805141.3的分案申请，该母案于2001年2月15日以国际申请号PCT/EPO1/01672提交，于2002年8月16日进入中国国家阶段，本分案采用了与该母案一致的发明名称发明领域本发明涉及马疱渗病毒(EquineHerpesViruses，EHV),其中蛋白gM基本缺失或其中gM被修饰，并且其免疫调节能力无功能。本发明进一步的方面涉及编码所述病毒的核酸，包含这些病毒或核酸的药物组合物及其用途。本发明也涉及增强由EHV疫苗所诱发的抗野生型EHV感染的免疫应答的方法，涉及EHV感染的预防和治疗方法以及将野生型EHV感染的动物与用本发明EHV处理的动物区分的方法。发明背景马疱渗病毒1(EHV-l)是a-疱渗病毒亚一牛(^/;/^/ze/77^vzW"ae」的一个成员，是马的病毒诱导性流产的主要原因，并能引起呼吸和神经病症。EHV-1毒抹Ab4p的完整DNA序列已被确定(Telford,E.A.R.等，1992);然而，仅确定有少数几个基因和基因产物与EHV的毒性相关。采用了两种不同的方式以控制EHV-1的感染。首先，开发了经修饰的活疫苗(MLVs),包括在欧洲和美国广泛使用的病毒林RacH(Mayr，A.等,1968;Hubert,P.H.等，1996)。其次，评估灭活疫苗和独立表达的病毒糖蛋白的免疫原性和保护潜能。用重组杆状病毒表达的糖蛋白中，糖蛋白(g)B,C，D和H在鼠模型中诱导对后续EHV-1攻击的部分保护(Awan，A.R.等，1990;Te丽i，D.等，1994;Osterrieder,N.等，1995;Strokes,A.等，1996)。然而，使用MLVs比灭活疫苗和亚单位疫苗更有优势。MLVs对于诱导细胞介导的免疫应答是高效的，而细胞介导的免疫应答最有可能提供抗疾病的保护(Allen,G.P.等，1995;Mumford,J.A.等，1995)。疱渗病毒糖蛋白主要涉及感染的早期，病毒粒子从细胞中的释放，以及通过相邻细胞间融合导致的病毒粒子的直接细胞到细胞传播。目前已确立了ll种单纯疱渗病毒l型(HSV-1)编码的糖蛋白，定名为gB，gC,gD,gE，gG，gH，gl，gJ,gK，gL,和gM。缺乏gC,gE，gG，gl，gJ,和gM的HSV-1突变体是具有活性的，显示这些基因对培养细胞的复制是非必需的。HSV-1和马疱渗病毒1的核苷酸序列对比表明，所有已知的HSV-1糖蛋白在EHV-1中都是保守的。根据目前的命名法，这些糖蛋白都根据其HSV-1同系物定名。已知EHV-1的gC，gE，和gl不是细胞培养物生长所必需的，而gB和gD对于病毒在培养细胞中的生长是必需的。其他EHV-1糖蛋白对于病毒在培养细胞中复制的作用仍未知(Flowers,C.C.等，1992)。利用入gtll表达文库和抗纯化EHV-1的单克隆抗体(MAbs)对EHV-1的六种包膜糖蛋白进行作图(Allen,G.P.等，1987)。此外，转录分析和蛋白分析表明糖蛋白gB，gC，gD，gG，gH和gK在EHV-l感染的细胞中表达。糖蛋白gM是最近被详细分析的HSV-1糖蛋白(由基因UL10编码，Braines,J.D.等，1991;Baines,J.D.等，1993)。其是被报道的唯一的在所有疱渗病毒亚科中都保守的非必需糖蛋白，对人和鼠巨细胞病毒以及，疱疹病毒亚科(G(37w附aAe77esWn'wae)成员EHV-2，herpesvirussaimiri,和Epstein-Barr病毒中的这种糖蛋白已有描述。如同许多疱奢病毒糖蛋白一样，HSV-1的gM存在于病毒粒子和被感染细胞的膜中。只缺少gM的HSV-1突变体的效价比野生型病毒效价降低约10倍，并且在鼠模型中表现出毒性降低(Baines,J.D.等，1991;MacLean,C.A.等,1993)。EHV-1的gM同系物(gp21/22a;从现在起作为EHV-1gM)最初由Allen和Yeargan说明(Allen,G.R等，1987),证明是一种病毒包膜的主要组分。进一步的研究表明基因52，即与HSV-1UL10同源的基因，编码450个氨基酸的EHV-1gM多肽(Pilling,A.等，1994;Telford,E.A.R.等，1992)。EHV-1gM代表一种多疏水蛋白，其包含8个预期的跨膜结构域，并有^Jt表明其作为M/15000蛋白存在于感染的细胞和纯化的病毒粒子中(Pilling,A.等，1994;Telford,E.A.R.等，1992)。1996年Osterrieder等将大肠杆菌lacZ基因插入到EHV-1毒抹RacLll的gM基因(开放阅读框52)中，把帝有这种基因的病毒突变体(LllAgM)的穿透特性与亲本EHV-1RacLll的穿透特性相比，从实验中得出结论EHV-lgM对于病毒穿透进入耙细胞以及所述病毒在细胞到细胞的传播有重要作用。1997年，Neubauer等通过对被免疫小鼠脾脏中的病毒中和抗体和EHV-1特异性T细胞的检验，表明上述EHV-1的gM插入突变体是減毒的，并诱导保护性免疫。本发明要解决的技术问题是提供新的修饰的马疱疹病毒，当用于预防和治疗EHV感染时，所述马疱渗病毒表现显著增强的免疫原性。发明公开对于上述技术问题的解答通过杈利要求中定义的说明和实施方案实现。我们惊讶地发现如果蛋白gM基本缺失或所述蛋白被修饰，从而使其本可能具有的免疫调节能力无功能，则对于马疱渗病毒的保护性免疫力会有显著的增强。因此，这是首次表明蛋白gM调节EHV的免疫原性。有意思的是，先前讨论的病毒突变体UlAgM和HAgM-Ins也诱导亲本毒抹RacLll和RacH的免疫原性'尽管Osterrieder等，1996和Neubauer等，1997的作者没有用当时可得的抗体检测HAgM-Ins病毒的gM，但HAgM-Ins突变体仍表现与产生gM的亲本毒抹相似的免疫调节潜能。其原因可能是，尽管在公开的实验中Western印迹证明了lacZ的插入，但HAgM-Ins中gM的残留部分得以表达。因此gM的这一残留部分一定与gM的免疫调节活动有关。因此，本发明首次提供了一种EHV，其蛋白gM基本缺失或所述蛋白被修饰，从而其在病毒宿主中的免疫调节能力无功能。一个方面，本发明涉及马疱渗病毒，其中蛋白gM基本缺失。另一个同样重要的方面，本发明涉及马疱渗病毒，其中所述蛋白被修饰并且无功能。此处所用术语"基本缺失"是因为相邻必需蛋白UL9同系物基因(基因53)的位置，其方向以及与编码gM蛋白的基因的重叠，因此需要保留最短的gM基因的核苷酸序列以使基因53能够表达，从而保留病毒活性。一个优选的实施方案涉及EHV，其中gM基因的至少70%缺失，而一个更优选的实施方案中对一种EHV要求了杈利，其中gM基因的至少80%缺失，而一个更优选的实施方案中对一种EHV要求了杈利，其中gM基因的至少90%缺失d术语"无功能，，蛋白gM应被理解是所述蛋白相关于病毒-宿主间相互作用的免疫调节力。本发明的EHV与其他表达功能性gM的EHV毒株间免疫原性的差异，可通过兽医病毒学现有领域普通专家可得的标准动物模型进行确定。确定EHV表达功能性或非功能性gM的一个可能方法在实施例1中给出。所述方法提供了一种精确并且直接的实验方案，用于确定修饰的目的EHV毒抹与其他毒抹之间免疫调节能力的差异，所述其他毒株与目的毒株相比，差异仅在于其他毒株表达完整的未修饰的功能性gM蛋白。实施例1中所述方法特别合适，因为在BALB/c小鼠中EHV毒株的行为与天然宿主中单个病毒的相一致(Mayr，A.等，1968;vanWoensel,P.A.M.等，1995;Colle,C.F.等，1996;Hubert,RH.等,1996;Matsumura,T.等,1996)。对于从EHV中缺失蛋白gM或使其无功能，可有多种方法(Sambrook，J.等，1989)。非限制性例子包括在编码蛋白gM的基因中的缺失、突变或插入。所述病毒中相应的完整或部分核苷酸序列的缺失可能导致gM蛋白的完全缺失或无功能表达。通过在该基因或其调节区域中突变核苷酸序列或插入额外的核苷酸，也可获得同样的结果。在上述两个方面的一个优选实施方案中，本发明涉及EHV，其根据本发明在编码蛋白gM的基因中因缺失、突变或插入而改变。gMORF与UL9ORP和启动子序列重叠(位置94389到97052，Ori结合蛋白，Telford等，1992)。由UL9ORF编码的蛋白对于病毒生长是必需的，如在HSV-1中例示(Carmichael等，1988;Malik等，1992)。因此，一个更优选的实施方案中，本发明涉及根据本发明的EHV，其特征在于编码蛋白gM的基因被缺失或修饰，并且编码UL9同系物的基因(基因53)的表达不受影响。术语"不受影响"并不涉及UL9的特定数量或质量特征，而仅仅指该基因的表达不受影响，只要病毒表达所述蛋白，并且所述蛋白以对于病毒活性基本足够的量存在。本发明公开了一种实施本发明最优选的EHV，其中病毒抹EHV-1Ab4p的核苷酸93254到94264(Tdford，E.A.R等，1992)或其他毒株中相应位置被缺失，其中的核苷酸编号仅为举例。共有1352个核苷酸的gMORF上这1010个核苷酸的缺失，导致任何可检测的gM多肽的基本缺失。这种gM基因核苷酸的几乎完全缺失仍然产生活病毒，所述活病毒基本不表达gM蛋白衍生物，因此所有其他EHV-1基因的表达不受影响。这种部分的缺失不影响UL9ORF的表达。上述核苷酸的位置参照Telford等，1992(GenBank/EMBL数据库(接入号M86664))针对EHV-1毒株Ab4p的编号。这些核苷酸位置决不仅限于Ab4pEHV-1毒株中定义的确切位置，而只以举例的方式用来指出在这些位置的核苦酸或其他EHY毒株中相应于gM基因这些位置的核苷酸。对于不同的EHV病毒，优选核酸的位置编号可能有所不同，但对于a-疱疹病毒科的病毒分子生物学领域专家可通过其相对于所述序列的其他核苷酸的位置，容易地识别这些优选的核苷酸。与gM基因相邻的基因的功能性表达对于病毒的活性是重要的。根据本发明最优选的EHV毒株是EHV-1毒抹HAgM-3bl，其保藏在ECACC(欧洲细胞培养物保藏中心，Salisbury,UK)，保藏号99101536。本发明特別适用于EHV的1型和4型，因为这二者亲源关系极近(Telford,E.A.R.等，1992和1998)。本发明的EHV特别适用于基因治疗，适用于携带一般性的异源物质，尤其适合于携带外源抗原用于活疫苗(对于EHV作为异源载体，参见EP507179，WO9827216，WO9400587，WO9827216)。当本发明的EHV在动物中表达异源物质时，对于与gM相关的免疫特性没有影响。将针对其它病原体具有相关免疫特性的相应核苷酸序列插入本发明EHV病毒的基因组后，该抗原被表达时，EHV特别适用于针对所述其他病原体进行免疫。疱渗病毒载体疫苗属于现有技术(参见Schmitt,J.等，1999;Peeters,B.等，1997,Yoloyama等，1998)。因此，在优选实施方案中本发明也涉及携有一或多种异源基因的本发明EHV。本发明另一方面也涉及编码本发明EHV的核酸。所述核酸适用于进一步改变EHV或用于重组产生本发明的EHV。它们也可用于产生基于核酸的疫苗。由于表达修饰的无功能gM或根本不表达gM的EHV具有增强的免疫特性，本发明的EHV特别适合作为预防和治疗EHV感染的药物组合物的活性成分。因此，另一方面，本发明涉及包含本发明EHV的药物组合物。本发明的核苷酸也可用于制备DNA载体疫苗。这些疫苗中，核苷酸直接给予动物或通过除起始病毒以外的其他载体间接给予。核苦酸疫苗和载体疫苗是现有技术中众所周知的，因此不进一步地详述。一个实施方案中，本发明涉及一种包含本发明核酸的药物组合物。本发明还涉及一种包含本发明EHV的药物组合物。包含本发明EHV的药物组合物一个非限制性实例可通过以下方法制备将感染的细胞培养物上清与一种稳定剂(如亚精胺和/或BSA(牛血清白蛋白))混合，接着通过其他方法使该混合物冻干或脱水。接种之前，所述混合物在水相(如盐水，PBS(磷酸緩沖盐溶液))或非水相溶液(如油乳液，基于铝的佐剂)中重新水合。EHV和其核普酸特别运合用于制备药物组合物。"药物组合物，，基本上包含一种或多种下述成分，所述成分可修饰用其给药的生物，或在其表面内或表面上生活但不受制于抗生素或抗寄生虫剂的生物的生理功能(如免疫功能)，还包含用于其它目的的其他组分，所述目的例如但不限于，加工特性，无菌性(sterility)，稳定性，通过胃肠或胃肠外途径(如口服、鼻内、静脉、肌内、皮下、经皮或其他适当的途径)给药的便利性，给药后的耐受性，控释特性。其他实施方案中，本发明涉及增强马疱疹病毒疫苗所诱导的抗野生型病毒感染的免疫应答的方法，其特征在于所述疫苗包含本发明的马疱疹病毒。另一方面涉及一种预防和/或治疗动物的方法，其特征在于本发明的一种药物组合物被给予所述动物。现有EHV活疫苗的另一方面是其与野生型病毒区分的能力。本发明的EHV至少在一个重要的特性上不同于野生型分离林。其提供一种显著改变的gM蛋白。gM基本缺失或者被修饰到一定程度，使得该特异性抗原靶与野生型病毒的gM显著不同。一个优选实施方案涉及区分野生型马疱瘆病毒感染的动物和用本发明修饰的马疱渗病毒处理的动物的方法，其特征在于确认病毒野毒林的gM蛋白或在修饰病毒中表达的gM蛋白或所述蛋白的基本缺失。一个更优选的实施方案涉及上述提及的方法，其特征在于a)目的样品被加入一种分离的gM或其经修饰的衍生物中，b)加入特异于所述分离的gM或其经修饰的衍生物的抗体，c)确定所述抗体的结合。一种更优选的实施方案涉及区分野生型马疱渗病毒感染的动物和用本发明改变的马疱渗病毒处理的动物的方法，其特征在于确认编码病毒野毒抹的gM蛋白的核酸与编码修饰的gM蛋白的核酸或所述核酸的缺失之间的差异。本发明另一个方面涉及试剂盒，所述试剂盒可实施区分野生型马疱疹病毒感染的动物和本发明改变的马疱瘆病毒处理的动物的优选方法。一个方便使用的试剂盒优选包含一种或多种必需的分析工具，緩冲液，标记和解读工具，溶剂以及机械装置。优选的特异性分析工具是分离的野生型蛋白gM,分离的修饰蛋白gM，特异于野生型蛋白gM的抗体，特异于分离的修饰蛋白gM的抗体，以及与编码野生型蛋白gM的核苷酸结合的核苷酸特异性探针和与编码修饰蛋白gM的核苷酸结合的核普酸特异性探针。Allen,G.P"Yeargan,M.,Costa,L.R.R.andCross,R.,1995.MajorhistocompatibilitycomplexclassI-restrictedcytotoxicT-lymphocyteresponsesinhorsesinfectedwithequineherpesvirus1.J.Virol.69，606-612.Allen,G.P"Yeargan,M.R.，1987.Useof入gtllandmonoclonalantibodiestomapthegenesforthesixmajorglycoproteinsofequineherpesvirus1.丄Virol.61,2454-2461.Awan，A.R.，Chong,Y.-C.andField,H.J.，1990.Thepathogenesisofequineherpesvirustype1inthemouse:Anewmodelforstudyinghostresponsestotheinfection.J,Gen.Virol.71，1131-1140.Baines,J.D.andRoizman,B.，1991.TheopeningreadingframesUL3,UL4,UL10andUL16aredispensableforthereplicationofherpessimplexvirus1incellculture.J.Virol.65，938-944.Baines,J.D.andRoizman,B.，1993.TheUL10geneofherpessimplexvims1encodesanovelviralglycoprotein,gM,whichispresentinthevirionandintheplasmamembraneofinfectedcells.J.Virol.67，1441-1452.Carmichael，E.P.，KosovskyM.J.，andWeller，S.K.，1988.Isolationandcharacterizationofherpessimplexvirustype1hostrangemutantsdefectiveinviralDNAsynthesis.J,Virol.62(1),91-99.Day,L，1999.Characterizationofselectedglycoproteinsofequineherpesvirus-1:immuneresponsesinthemurinemodel.PhDthesis,DepartmentofMicrobiology,UniversityofLeeds,UK.FlowersC.C.andO'Callaghan,D丄，1992.Theequineherpesvirustype1(EHV隱l)homologofherpessimplexvirustype1US9andthenatureofamajordeletionwithintheuniqueshortsegMentoftheEHV-1KyAstraingenome.Virology190,307-315.Hubert,P.H.，Birkenmaier，S.，Rziha，H.J.andOsterrieder，N.,1996.Alterationsintheequineherpesvirustype-1(EHV-1)strainRacHduringattenuation.J.Vet.Med.B43,1-14.Kyhse-Andersen，J,1984.Electroblottingofmultiplegels:asimpleapparatuswithouttankforrapidtransferofproteinsfrompolyacrylamidegelstonitrocellulose.J.Biochem.Biophys.Methods10，203-210.Laemmli，U.K.,1970.CleavageofstructuralproteinsduringtheassemblyoftheheadofbacteriophageT4.Nature227,680-685.MacLean，C.A.,Robertson,L.M.andJamieson，F.E.，1993.CharacterizationoftheULlOgeneproductofherpessimplexvirustype1andinverstigationofistroleinvivo.J.Gen.Virol.74,975-983.Malik,A.K.，Martinez,R.，Muncy，L，Carmichael，E.P.andWeller，S.K.,1992.Geneticanalysisoftheherpessimplexvirustype1UL9gene:isolationofaLacZinsertionmutantandexpressionineukaryoticcells.Virology190(2),702-715.Mayr，A.，Pette，J.，Petzoldt，K.andWagener，K.，1968.UntersuchungenzurEntwicklungeinesLebendimpfstoffesgegendieRhinopneumonitis(Stutenabort)derPferde,.J.Vet.Med.B15，406-418.Meindl,A.andOsterrieder，N.，Theequineherpesvirus1Us2homologencodesanonessentialmembrane-associatedvirioncomponentJ.Virol"73(4):3430-7,1999.Mumford，J.A.，Hannant，D.A.,Jessett，D./M.，O'Neill，T.，Smith,K.C.andOstlund，E.N.，1995.Abortigenicandneurologicaldiseasecausedbyexperimentalinfectionwithliquidherpesvirus-1.In"Proceedings7thInternationalConferenceofEquineInfectiousDisease"(H.NakajimaandW.Plowright,Eds.)pp.261-175.R&WPubl.Newmarket,U.K..UnitedKingdom.Neubauer，A.，Beer,M.，Brandmuller，C.，Kaaden，O.-R.,andOsterrieder,N.，1997.Equineherpesvirus1mutantsdevoidofglycoproteinBorMareapathohenicformicebutinduceprotectionagainstchallengeinfection.Virology239,36-45.Osterrieder,N.，Neubauer,A.，Brandmiiller，C.，Braun，B.，Kaaden，O.-R.andBaines，J.D.，1996.Theequineherpesvirus1glycoproteingp21/22a,theherpessimplexvirustype1gMhomolog,isinvolvedinviruspenetrationandcell-to-cellspreadofvirions.Journalofvirology,June1996,p.4110-4115.Osterrieder,N.，Wagner,R.，Brandmuller,C.，Schmidt,P"Wolf，H.andKaaden，O.-R.,1995.ProtectionagainstEHV-1challengeinfectioninthemurinemodelaftervaccinationwithvariousformulationsofrecombinantglycoproteingpl4(gB).Virology208,500-510.Peeters，B.，Biendowska-Szewcyk，K.,Hulst，M.，Giellens，A.andKimman，T"1997.Biologicallysafe,non-transmissiblepseudorabiesvirusvectorvaccineprotectspigsagainstbothAujeszky'sdiseaseandclassicalswinefever.J.Gen.Virol.78,3311-3315.Pilling,A.，Davison,A.J.，Telford,E.A.R.andMeredith,D.M.,1994.Theequineherpesvirustype1glycoproteinhomologoustoherpessimplexvirustype1glycoproteinMisamajorconstituentofthevirusparticle.J.Gen.Virol.75，439-442.Sambrook,J.，Fritsch，D.F.andM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ocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>1、模拟物感染的动物(第IO组)与免疫动物的对比下表证实，用模拟物免疫的动物的平均体重与所有其他的组相比，在攻击感染后有统计学上显著的降低(第3天)或统计学上极其显著的降低(第4到13天)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>l=#r-验统计2=从第1天到第13天的统计；第0天时，所有计算都相同(重量设定为100%)*=为统计学显著的(<0.05)**=为统计学上极其显著的(<0.0001)2、HAgM-3bl免疫的动物(第7组，105PFU/每只动物)与RacH(第1组，1()5pFU)和HAgM-Ins(第4组，1()5pFU)免疫的动物，在感染攻击后阻止体重降低的效力参数方面的比较下表中给出的结果表明，无论免疫使用的是何种病毒，在高剂量病毒免疫的组中，平均体重没有统计学上显著的差异。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>2=从第1天到第13天的统计；第0天时，所有计算都相同(重量设定为100%)*=为统计学显著的(<0.05)**=为统计学上极其显著的(<0.0001)3、HAgM-3bl免疫的动物(第8组，104PFU/每只动物)与RacH(第2组，1()SpFU)和HAgM-Ins(笫5组，10"PFU)免疫的动物，在感染攻击后阻止体重降低的效力参数方面的比较。下表显示了对接受10"PFU/每只动物的小鼠组的统计学分析，显示第8组动物(1(^PFUHAgM-3bl)和第5组动物(HAgM-Ins)在第1天和第11到第13天，其平均体重的差异在统计学上显著。但RacH免疫的动物(第2组)与HAgM-3bl免疫的动物(第8组)相比，在感染之后所有的天中，其平均体重差异都有显著或极其显著的降低。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>1=检验统计2=从第l天到第13天的统计；第O天时，所有计算都相同(重量设定为100%)*=为统计学显著的(<0.05)**=为统计学上极其显著的(<0.0001)4、HAgM-3bl免疫的动物(第9组，1()3pFU/每只动物)与RacH(第3组，1()3pFU)和HAgM-Ins(第6组，1()3pFU)免疫的动物，在感染攻击后阻止体重降低的效力参数方面的比较下表显示了用最低剂量免疫的结果。总结来说，接种最低剂量HAgM-3bl的动物与接种相同剂量的HAgM-Ins或RacH的动物相比，在第4天到第9天表现(极其)显著的较高平均体重。此外，在感染攻击后第l天到第3天，RacH免疫的动物与HAgM-3bl免疫的动物相比，其体重有显著的降低。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>1—会-险统计2=从第l天到第13天的统计；第0天时，所有计算都相同(重量设定为100%)*=为统计学显著的(<0.05)**=为统计学上极其显著的(<0.0001)权利要求1、一种马疱疹病毒，其中蛋白gM基本缺失。2、一种马疱渗病毒，其中蛋白gM被修饰并且无功能。3、一种杈利要求1或2的马疱渗病毒，其特征是蛋白gM適过编码蛋白gM的基因中的缺失、突变或插入而被基本缺失或修饰。4、杈利要求1到3中任一项的马疱夸病毒，其特征是编码蛋白gM的基因被缺失或修饰，并且编码UL9同系物的基因(基因53)的表达未受到影响。5、杈利要求1到4中任一项的马疱疹病毒'其中病毒株EHV-1Ab4p的核苷酸93254到94264或其他EHV毒株中相应区段被缺失，其中的核苷酸编号仅为举例。6、马疱渗病毒HAgM-3bl抹，其保藏号为EACC99101536。7、杈利要求1到6中任一项的马疱渗病毒，其中所述病毒是型或4型马疱渗病毒。8、杈利要求1到7中任一项的马疱渗病毒，所述马疱疹病毒带有一个或多个异源基因。9、一种核酸，其编码杈利要求到8中任一项的马疱疹病毒'10、一种药物组合物，其包含杈利要求1到8中任一项的马疱疹病毒。11.一种药物组合物，所述药物組合物包含杈利要求9的核酸。12、杈利要求1到8中任一项的马疱渗病毒的用途，其用于制备一种药物組合物。13、杈利要求9的核酸的用途，其用于制备一种药物組合物。14、一种方法，所述方法可增强马疱渗病毒疫苗所诱导的抗野生型感染的免疫应答，该方法的特征是所述疫苗包含杈利要求1到7中任一项的马疱渗病毒。15、一种预防和/或治疗动物的方法，所述方法的特征是给予所述动物以杈利要求10或11的药物组合物。16、一种方法，所述方法用于区分野生型马疱渗病毒感染的动物和杈利要求1到7中任一项的经修饰的马疱渗病毒处理的动物，其特征是确认野生型病毒的蛋白gM或经修饰病毒中表达的蛋白gM或经修饰病毒中蛋白gM的基本缺失。17、杈利要求16的方法，其特征是a)目的样品被加入一种分离的gM或其修饰的布f生物中，b)加入特异于所述分离的gM蛋白或其修饰的衍生物的抗体，c)确定所述抗体的结合。18、一种用来实施杈利要求16和17的方法的试剂盒，其特征是所述试剂盒包含分离的蛋白gM或其分离的修饰衍生物和/或抗体，所述抗体或者特异于野生型gM蛋白或者特异于经修饰的蛋白gM。19、一种方法，所述方法用于区分野生型马疱疹病毒感染的动物和杈利要求1到7中任一项的条饰的马疱疹病毒处理的动物'其特征是确认编码病毒野毒抹蛋白gM的核酸和編码经修饰的gM蛋白的核酸或其基本缺失之间的差异。20、一种用于实施杈利要求19的方法的试剂盒，其特征是所述试剂盒包含一或多种核苷酸序列特异性探针，所述探针或者结合编码野生型蛋白gM的核苷酸，或者结合编码经修饰的gM蛋白的核苷酸。全文摘要本发明涉及马疱疹病毒(EquineHerpesViruses，EHV)，其中蛋白gM被基本缺失或修饰，并且其免疫调节能力无功能。本发明进一步的方面涉及编码所述病毒的核酸，包含这些病毒或核酸的药物组合物及其用途。本发明也涉及增强由EHV疫苗所诱发的抗野生型EHV感染的免疫应答的方法，涉及EHV感染的预防和治疗方法以及将野生型EHV感染的动物与用本发明EHV处理的动物区分的方法。文档编号C12N7/00GK101230336SQ20081000929公开日2008年7月30日申请日期2001年2月15日优先权日2000年2月17日发明者克努特·埃尔伯斯,克里斯琴·西博尔特,尼古劳斯·奥斯特里德申请人:贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司