专利名称：用恶臭假单胞菌kt2442合成pha的方法
技术领域：
本发明涉及生物领域中PHA制备方法，具体地，涉及用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法。
背景技术：
聚轻基脂肪酸酯(PHA,polyhydroxyalkanoates):是近20多年迅速发展起来的生物高分子材料——聚羟基脂肪酸酯(PHA)，是很多微生物合成的一种细胞内聚酯，是一种天然的高分子生物材料。因为PHA同时具有良好的生物相容性能、生物可降解性和塑料的热加工性能。因为同时可作为生物医用材料和生物可降解包装材料，这已经成为近年来生物材料领域最为活跃的研究热点。PHA还具有非线性光学性、压电性、气体相隔性很多高附加值性能。天然的或合成的生物可降解的高分材料往往有很高的水蒸气透过性，这在食品保鲜中是不利的。而PHA则具有良好的气体阻隔性，使其可能应用在较长时间的鲜品保鲜包装上。因为水汽的穿透是保鲜包装中的重要指标，PHA在这一点上的性能是完全可以和现在的PET、PP等产品等相比的。另一方面，PHA还具有较好的水解稳定性，将PHA用75°C的自动洗碗机总洗20个循环，PHA制成杯的形状和分子量都没有发生变化，表明PHA可以很好地用于器具生产。此外与其它聚烯烃类、 聚芳烃类聚合物比，PHA还具有很好的紫外稳定性。PHA还可作为生物可降解的环保溶剂的来源，如乙基轻基一酸EHB (ethy 13—hydroxy一butyrate)是水溶性的,聚有低挥发性,可以用于清洁剂、胶)粘剂、染料、墨水的溶剂。正因为PHA汇集了这些优良的性能，使其可以在包装材料、粘合材料、喷涂材料和衣料、器具类材料、电子产品、耐用消费品、农业产品、自动化产品、化学介质和溶剂等领域中得到应用。PHA因其良好的生物降解性和生物相容性在药物缓释体系中发挥着越来越重要的作用。最早的PHA作为药 物释放包裹微球的研究是1983年对于PHB的研究，之后随着PHBV的发展，PHA的药物包裹研究带来了很大的进展。研究表明可通过调节PHA的单体组成、分子量、药物包裹量、包裹颗粒大小实现药物的可控速率释放。此外，很多学者还利用PCL等其他聚合物与PHA进行混合包裹药物的研究也取得了一定的成果。PHA既是一种性能优良的环保生物塑料，又具有许多可调节的材料性能，其随着成本的进一步降低以及高附加值应用的开发，将成为一种成本可被市场接受的多应用领域生物材料。由于它是一个组成广泛的家族，其从坚硬到高弹性的性能使其可以适用于不同的应用需要。PHA的结构多样化以及性能的可变性使其成为生物材料中重要的一员。相对于PLA，PHA发展的历史很短，发展的潜力更大，其应用的空间也更大。但是现有技术中制备PHA的方法复杂，成本也比较高。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法。
本发明提供一种用恶臭假单胞菌KT2442合成的PHA方法，包括如下步骤:步骤一，取恶臭假单胞菌KT2442置于LB培养基中混合，进行培养，得到含有菌种的种培养液；步骤二，将所述种培养液、碳源加入本培养基中，进行培养，分离，速冻，干燥，精制，即得最终产物PHA。优选的，步骤一中，所述恶臭假单胞菌KT2442与LB培养基的质量比为1:100。优选的，步骤一中，所述培养时间为24小时，培养温度为30°C。优选的，步骤二中，所述种培养液、碳源及本培养基的质量比为1:2:100。优选的，步骤二中，所述培养具体为:在本培养的不同阶段，分别在培养基中加辛烷酸、葡萄糖进行培养，得到PHA。优选的，步骤二中，所述辛烷酸与葡萄糖的质量比为1:3。优选的，步骤二中，所述辛烷酸培养过程中分三次添加，分别为开始阶段、18小时、24小时。优选的，步骤二中，所述辛烷酸三次添加量分别为:0.15g、0.2g、0.15g。优选的，步骤二中，所述精制包括如下步骤:
(a)取干燥后的PHA放入氯仿溶液中，过滤，加热，获得粗制PHA;(b)将粗制的PHA加入丙酮和甲醇混合液中，加热，获得最终产物PHA。优选的，步骤二中，所述培养时间为72小时，培养温度为30°C。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果:(I)本发明PHA具有环保、可调节性能，高弹性的性能，应用广泛，发展的潜力更大，其应用的空间也更大。(2)本发明方法简单，容易操作，成本低，其产品分解性能强，玻璃化温度低，具有良好的柔软性和黏着性，可用于医药领域，具有较好的应用前景。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。实施例本实施例提供一种用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，包括如下步骤:步骤一，取Ig恶臭假单胞菌KT2442置于IOOgLB培养基中混合，培养温度为30°C，进行培养24小时，得到含有菌种的种培养液，LB培养基的组成见表I所示:步骤二，将第一组Ig种培养液和0.15g辛烷酸和第二组Ig种培养液和1.5g葡萄糖分别加入IOOg本培养基进行培养，当第一组进行到18小时后加入0.2g辛烷酸，当进行到24小时后加入0.15g辛烷酸进行培养，分离，速冻，干燥，取干燥后的IgPHA放入60ml氯仿进行溶解，过滤，加热30°C，获得粗制PHA，将Ig粗制的PHA加入60ml丙酮和甲醇混合液中，加热30°C，培养72小时，获得最终产物PHA，其中本培养基的组成见表2所示:表I
权利要求
1.一种用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤一，取恶臭假单胞菌KT2442置于LB培养基中混合，进行培养，得到含有菌种的种培养液； 步骤二，将所述种培养液、碳源加入本培养基中，进行培养，分离，速冻，干燥，精制，即得最终产物PHA。
2.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤一中，所述恶臭假单胞菌KT2442与LB培养基的质量比为1:100。
3.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤一中，所述培养时间为24小时，培养温度为30°C。
4.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述种培养液、碳源及本培养基的质量比为1:2:100。
5.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述培养具体为:在本培养的不同阶段，分别在培养基中加辛烷酸、葡萄糖进行培养，得到 PHA0
6.如权利要求5所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述辛烷酸与葡萄糖的质量比为1:3。
7.如权利要求5所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述辛烷酸培养 中分三个阶段添加，分别为开始阶段、18小时、24小时。
8.如权利要求7所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述辛烷酸三次添加量分别为:0.15g、0.2g、0.15g。
9.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述精制包括如下步骤: (a)取干燥后的PHA放入氯仿溶液中，过滤，加热，获得粗制PHA； (b)将粗制的PHA加入丙酮和甲醇混合液中，加热，获得最终产物PHA。
10.如权利要求1所述的用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，其特征在于，步骤二中，所述培养时间为72小时，培养温度为30°C。
全文摘要
本发明提供了一种用恶臭假单胞菌KT2442合成PHA的方法，包括如下步骤步骤一，取少量的恶臭假单胞菌KT2442置于LB培养基中混合，进行培养，得到含有菌种的种培养液；步骤二，将步骤一得到的种培养液、碳源加入本培养基中，进行培养，分离，速冻，干燥，精制，得到最终产物PHA。本发明利用培养废水中的恶臭假单胞菌KT2442，调节碳源的供给，在培养过程中分别添加关连基质辛烷酸及非关连基质葡萄糖，从而得到了最终产物PHA，本发明产品分解性能强，玻璃化温度低，具有良好的柔软性和黏着性，可用于医药领域，具有较好的应用前景。
文档编号C12R1/40GK103215318SQ201310158930
公开日2013年7月24日 申请日期2013年5月2日 优先权日2013年5月2日
发明者王志雄 申请人:王志雄