提纯琥珀酸的制作方法
【专利摘要】描述了一种用于提纯琥珀酸的过滤过的发酵液的工艺。该工艺涉及使用一种非官能化的色谱树脂将琥珀酸与原过滤过的发酵液中的其他有机酸类和盐类分离。该操作可以或者以一种等度洗脱进行以产生游离琥珀酸，或者以一种梯度或二元洗脱进行以生产琥珀酸盐。
【专利说明】提纯琥珀酸
[0001] 优先权权益
[0002] 本申请要求于2012年5月7日提交的临时申请序列号61/643, 405的优先权权益。 发明领域
[0003] 本发明涉及一种用于从发酵液中分离琥珀酸和/或二元琥珀酸盐的工艺。具体地 说，本发明涉及一种提纯琥珀酸和/或其盐的方法，该方法涉及在非官能化树脂上使用色 谱法。
[0004] 背景
[0005] 琥珀酸及其衍生物是有用的平台化学品，被广泛应用于聚合物、燃料添加剂、油 墨、化妆品的制造，并且用作食品和药品中的添加剂。例如，琥珀酸可以作为一种进料用于 生产颜料、溶剂、洗涤剂、金属镀层和聚丁二酸丁二醇酯聚合物，这些聚丁二酸丁二醇酯聚 合物可用于取代例如软包装、农用薄膜和堆肥袋等应用中的常规塑料。
[0006] 琥珀酸传统上由有限的、昂贵的并且引起污染问题的石油化学产品生产。由于应 用的多样化，生产生物琥珀酸的替代方法已经在过去的几年里受到关注。一种已经得到了 许多关注的更加环保的方法是通过厌氧菌由葡萄糖发酵生产琥珀酸。琥珀酸的发酵生产可 以被看作是一种绿色技术，不仅因为可再生底物用于其生产，而且在发酵时C02被结合进琥 珀酸中。因此，发酵琥珀酸为合成树脂、可生物降解的聚合物和化学中间体的制造提供了一 种绿色的、生物衍生的原料。
[0007] 尽管琥珀酸的发酵生产与基于石油化学的工艺相比具有几个优点，但是为了生物 技术工艺能与石油化学生产竞争，希望将生产成本减到最少。（见例如，James McKinlay等 人，"生物基玻拍酸盐工业展望（Prospects for a Bio-based Succinate Industry)，"应 用微生物学与生物技术（Am.M_Bm.BIOTEaim).，（2007)76:727-740 ;通过引用结合在此。） 总生产成本的约60%是由下游处理产生的，例如发酵液中的产物的隔离和提纯。从发酵液 中提纯琥珀酸是开发一种成功的、有成本效益的用于回收酸的工艺中的关键步骤。
[0008] 历年来，已经开发出了各种各样的方法来隔离琥珀酸。这些技术涉及使用超过 滤、用氢氧化钙或氨沉淀、结晶、电渗析、液液萃取、吸附以及离子交换色谱法。（见，Tanja Kurzrock等人，"从发酵液中回收玻拍酸（Recover of Succinic Acid from Fermentation fcoth)，"综述（Review)，生物技术快报（BIQTECHm(X；Y LETTEK)，（2010)32:331-339 ;通过引用结 合在此。）多种杂质（包括盐类、有机酸类和剩余生物质）都能抑制纯琥珀酸的隔离或者含 有琥珀酸的流的下游处理。因为这一点，已经提出了多种不同的解决方案用于提纯琥珀酸， 但是这些解决方案都有缺点。
[0009] 例如，其他人已经探索的一些处方具有的一个问题是常规离子交换解决方案分离 所希望的琥珀酸的相对有限的能力。离子交换还没有被证明是一种可以转化为商业规模操 作的可行的处理技术。迄今为止，还没有示出树脂具有对琥珀酸的足够大的容量以提供一 种有效的吸附工艺。因此，吸附色谱法已经受到对琥珀酸的选择性和容量两者的限制。对 于发酵流，可以应用使用离子交换除去盐类，但是需要使用酸类和碱类使树脂再生，并且只 有在较低水平盐类存在时才是有效的。如果发酵液中的盐含量高，则离子交换系统会受到 妨碍并且因为低的通过量而是无效率的。因此，离子交换树脂对于将盐从其他有机酸类中 分离出来将是较低效率的。因而，这在具有高水平盐类的情况下不是有效的。此外，传统的 离子交换技术不能容易地分离存在于发酵液中的不同的有机酸。电去离子（EDI)因为与膜 污染相关的问题不能将不同的有机酸分离至对于高通过量的应用可行的程度。其他方法例 如反应萃取需要有机溶剂和昂贵的试剂。
[0010] 尽管所有这些技术已经取得了一些成功，它们已经受到或者成本、副产物废弃物 产生或规模经济的限制。因此，由于这些原因，存在对更好的或更直接的回收琥珀酸的方法 的需要，这些方法可以简化工艺并且减少下游处理的成本以及废弃物。
[0011] 发明概述
[0012] 本发明描述了一种在发酵液中提纯或者琥珀酸或者二元琥珀酸盐去掉杂质的方 法。具体地说，该工艺涉及过滤一种发酵液；调整其pH以产生一种具有小于或等于约3. 0 的pH值的含有琥珀酸盐的滤液；使该酸化的滤液选择性地在从约20°C至约100°C范围内的 操作温度下通过一个具有非官能化树脂的色谱柱，这样使得获得至少两种不同的馏分，其 中的至少一种含有游离琥珀酸或琥珀酸盐。
[0013] 在另一方面中，本发明描述了一种从发酵液中提纯游离琥珀酸的方法，该方法涉 及：过滤一种发酵液以产生澄清液；使所述澄清液达到或酸化至小于3. 0的pH值；将该澄 清滤液在为所采用的特定树脂预定的操作温度下引入到一个具有非官能化树脂的连续色 谱装置中以分离游离琥珀酸；以及使该琥珀酸结晶。
[0014] 该工艺的一个优点是可以使游离酸结晶以在一个单一结晶后产生具有90%或更 高纯度的产物。为了分离一种二元琥珀酸盐，在色谱分离过程中该游离酸可以随后用一种 无机强碱洗脱。
[0015] 在另一方面中，本发明描述了一种用于生产琥珀酸盐的方法。该方法涉及：过滤一 种发酵液以产生含有琥珀酸盐的滤液，该滤液具有小于3. 0的pH ;在高达约70°C的温度下 通过一个液相色谱柱在非官能化树脂上对该滤液进行处理，用一种强碱或有机溶剂洗脱以 形成琥珀酸盐。
[0016] 进一步地，另一个优点是可以隔离二元物种（例如琥珀酸二铵）的流，这允许可能 的直接转化为多种含氮衍生物，包括N-甲基琥珀酰胺、N-甲基吡咯烷酮、吡咯烷酮和N-乙 烯基吡咯烷酮。作为一个特征，本发明公开了一种更容易，更简单且更具成本效益的方式来 获得一种用于在下游处理中转化的更清洁的前驱体物质。
[0017] 在本发明的另一方面中，可以采纳上述高通过量或连续分离的概念。可以实施一 个模拟移动床（SMB)色谱系统用于初步应用。
[0018] 本发明提纯工艺的附加特征和优点将在以下的详细说明中披露。应当理解的是上 述概述以及以下的详细说明和实例都仅仅是本发明的代表，并且旨在提供用于理解所要求 保护的本发明的综述。
[0019] 附图简要说明
[0020] 图1是代表根据本发明的一个实施例的处理步骤的流程图。
[0021] 图2是根据本发明的一种迭代的来源于等度分离的脉冲试验的图解说明，其中使 来自pH为2的发酵液的滤液在约50°C的温度下通过一个柱。
[0022] 图3示出了像图2中的在约60°C的温度下进行的等度分离的脉冲试验的曲线图。
[0023] 图4示出了像图2中的在约75°C的温度下进行的等度分离的脉冲试验的曲线图。
[0024] 图5示出了像图2中的在约90°C的温度下进行的等度分离的脉冲试验的曲线图。
[0025] 图6A、6B和6C描绘了一系列等度分离的脉冲试验的曲线图，这些等度分离各自在 60°C的温度下进行，但是具有不同的进料pH值：图6A是在2. 5的pH下；图6B是在3. 0的 pH下；图6C是在4. 3的pH下。
[0026] 图7示出了像图3中的在约60°C的温度下进行的等度分离的脉冲试验的曲线图。 该曲线图示出了琥珀酸的明显峰及其与其他有机酸类的分离。
[0027] 图8示出了根据本发明的另一实施例的来源于在操作温度为约40°C和进料pH为 2下使用一种碱（例如，NaOH)的梯度或二元洗脱的脉冲试验的曲线图。
[0028] 图9示出了像图8中的在温度为25°C和进料pH为2下进行的二元洗脱的脉冲试 验的曲线图。
[0029] 图10A示出了在温度为25°C和进料pH为2下进行的使用NH40H的二元洗脱的脉 冲试验的曲线图。
[0030] 图10B示出了像图10A中的梯度洗脱的脉冲试验的曲线图，但是具有后期添加的 碱来证明琥珀酸盐在环境温度下确实像盐一样洗脱，具有一个尖锐峰。
[0031] 图11示出了根据本发明的一种迭代的适于洗脱琥珀酸（质子化的）的模拟移动 床色谱系统的示意性图示。
[0032] 图12是适于洗脱去质子化的琥珀酸盐（例如，琥珀酸二铵）的模拟移动床色谱系 统的示意性图示。
[0033] 详细说明
[0034] 部分I-定义
[0035] 在详细说明本发明之前，应当理解的是术语用于说明具体的实施例并且不旨在是 限制性的。除非上下文明确地另外指明，如在本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数 形式"一个（a)"、"一个（an)"和"该（the)"包括复数的指代物。除非在上下文中另有定 义，所有在此使用的技术和科学术语都具有本发明所涉及领域的普通技术人员所通常理解 的它们的通常含义。
[0036] 如在此使用的术语"发酵"指的是有机酸类、醇类和其他感兴趣的化学物质的生物 转化和生物生产的工艺。该术语包括一种或多种单独、顺序或一起并且在微生物的任何生 长状态（静止、平稳、复制等）下发生的转化或生产工艺。
[0037] 术语"发酵液"指的是一种液体介质，其中微生物对有机碳源进行转化以生产感兴 趣的其他有机物质。
[0038] 术语"碳源"指的是任何能够被微生物代谢的碳资源，其中该来源包含至少一个碳 原子。碳的来源可以包括例如各种碳水化合物如右旋糖、葡萄糖、果糖、鹿糖、淀粉类等，醇 类，有机酸类和它们相应的盐类，或者来自植物或动物的油类、脂肪类和甘油三酸酯类。
[0039] 术语"床体积"或"柱体积"指的是填充物质和间隙液体的总体积。润湿柱内限定 数量的吸附剂所必需的溶剂的最小体积可以根据该吸附剂的性质来改变（例如，相比于每 500mg的硅胶吸附剂60 A约600 Ul，每l〇〇mg的硅胶吸附剂60人约120 yl)。
[0040] 术语"色谱分离度"指的是从一个色谱柱出来的相邻分析物之间的分离程度。
[0041] 术语"等度洗脱"指的是一种液相色谱（LC)分离，其中移动相的组成在整个分离 过程中保持恒定。等度洗脱典型地在其对固定相的亲和力不是非常不同的多个样本组分的 分离中是有效的。
[0042] 术语"梯度洗脱"指的是其中在色谱分析过程中移动相的组成变化或改变的分离。 具体地说，术语"二元洗脱"指的是使用两种不同种类的洗脱介质的分离。
[0043] 部分II-说明
[0044] 本发明部分地描述了一种由源于发酵液的游离有机酸类生产化学原料分子的工 艺。如在此使用的术语"游离有机酸"指的是一种当在溶液中时处于其质子化状态（即，处 于或小于其pKa值）的有机酸化合物。本发明的分离工艺可以用来回收或者游离酸或其盐。 根据本发明的工艺，游离酸的分离是一种等度洗脱，而盐的生成是一种梯度或二元洗脱。一 种等度洗脱法对于一种高容量且有成本效益的从其他有机酸类、糖类和盐类等中分离琥珀 酸的方式是有用的。
[0045] 本发明工艺采用了一个疏水性的、非官能化的树脂床来进行色谱提纯。特别感兴 趣的是本发明工艺从存在于发酵液滤液中的其他有机酸类、盐类和溶解的糖类中分离或者 游离琥珀酸或琥珀酸盐的能力。取决于色谱条件，提纯后的琥珀酸或二元琥珀酸盐的流之 一可以被隔离。可以选择性地操作分离工艺以通过改变洗脱条件来隔离或者琥珀酸或者二 元琥珀酸盐。操作温度可以是在从约20°C至约100°C的范围内。在根据本发明的取决于所 采用的特定色谱树脂的某些实施例中，在高温下对琥珀酸进行隔离，并且在较低的温度下 用二元洗脱对二元琥珀酸盐进行隔离。分离的操作温度是由平衡结合常数、峰形和琥珀酸 对杂质的分离度所确定的。
[0046] 这种提纯是有利的，因为它提供了一种稳健的方法以在一个步骤中从残留的盐 类、含氮杂质和其他有机酸类中隔离出全部的琥珀酸盐流，同时避免了其他提纯方法具有 的一些固有问题，例如电渗析膜的污染、有机溶剂的使用、低的离子交换树脂容量和结晶的 灵敏度。考虑到常规离子交换树脂需要使用酸类/碱类进行再生并且在吸附过程中已经显 示出的对琥珀酸的差的容量的缺点，一种新的、更合理化的用于使用色谱法的提纯工艺的 方法将被认识到。
[0047] 与常规离子交换色谱法不同，非官能化树脂床不交换盐类，它们也不需要再生。因 此，当或者以不连续批次，或者最佳地，连续过程色谱法进行分离时，本发明工艺同时节约 了时间和成本。
[0048] 具体地，该用于从一种发酵液中提纯琥珀酸的工艺涉及：过滤一种发酵液；调整 pH以产生一种具有小于或等于约3. 0的pH值的含有琥珀酸的滤液；使该酸化的滤液在对 于所采用的特定树脂优化的操作温度下通过一个采用非官能化树脂的色谱系统，例如模拟 移动床（SMB)系统。特定非官能聚（苯乙烯-二乙烯基苯）（PS-DVB)树脂的操作温度是通 过采集关于平衡结合常数、保留时间和峰分离度的经验数据来确定的。作为一个实例，对于 一种非管能化的色谱树脂例如XAD-4,操作温度可以是或者a)大于50°C以生产一种游离琥 珀酸或者b)小于50°C以生产一种琥珀酸的盐；这样使得获得至少两种不同的馏分。然而， 其他树脂可以或者允许或要求操作温度扩展至更高或更低，例如，高达约65°C或约70°C用 于生产二元琥珀酸盐。
[0049] 此工艺提供了一种可能的方式以在一个单一的操作中提纯琥珀酸流去掉大多数 典型地在发酵液中发现的其他污染物。本发明的一个优点是可以在层析接着结晶的一个循 环中产生高纯度90% )的琥珀酸或其盐，而无需在前的提纯。通过优化，该工艺可以获 得可能与例如约92 %或95%，高达约97 %或99 %-样高的纯度水平。
[0050] 根据本发明分离工艺的一个特征，琥珀酸的明显峰出现在3个床体积之内。典型 地，该明显峰是在约1. 0与约2. 75个床体积之间观察到。可以容易地将盐类和其他有机酸 类以及副产物化合物与所希望的琥珀酸提取物分离。此特征可以导致琥珀酸/琥珀酸盐的 '清洁'流（即，彡85%或90%)的隔离，其中产物损失极少。从过滤后的发酵液中可以获 得至少约68%或70% (典型地，约72%或75% )的游离酸和盐形式的回收率。来自原滤液 的回收率可以为约80 %、85 %或更多，并且通过优化，可以从初始原料中以约90 %至95 % 或更高产率回收或者酸或者盐形式。
[0051] A.
[0052] 在某种程度上，本发明有助于难以提纯有机物种的色谱分离技术的改进。与常规 方法相比，本发明方法更有利，因为它可以是比当前工艺更有效并且更有成本效益的。本发 明的一个特征涉及探索一种操作状态，该操作状态通过在色谱工艺之前和期间平衡包括温 度、pH和洗脱条件的几个参数产生。
[0053] 根据本发明的一个特征，我们采纳液相色谱（LC)技术在一个单一操作中提纯琥 珀酸的流去掉大多数典型地在发酵液中发现的其他污染物。LC典型地利用了包含在柱中的 不同类型的固定相（即吸附剂），一个将移动相和样品组分移动通过该柱的泵，以及一个能 够提供样品组分的特征保留时间和反映每一种通过该检测器的分析物的量的面积计数的 检测器。分析物的保留时间依据其与固定相相互作用的强度、所使用移动相的组成和流量 以及柱的尺寸而改变。在此，采用较大直径的柱和较大的粒径来避免压力。
[0054] 如前所述，已经探寻了各种方法来提纯琥珀酸，包括反应萃取、电渗析、结晶和离 子交换，但是每种方法都遇到问题。为了克服此类问题，本发明采用了非官能化树脂。非官 能化树脂不是通过离子电荷来结合不同的物种；相反，非官能化树脂通过平衡亲水和疏水 亲合力起作用。在所描述的实施例中，吸附树脂是未修饰的并且被认为是疏水性的树脂。因 此，疏水性有机物种可以与它们结合并且被保留在水性体系内。
[0055] 由于该树脂不是官能化的，进料物质pH的调整对于琥珀酸具有对树脂的亲和力 是必要的。因此，来自发酵液的原滤液应该是酸性的，具有小于约3的pH值。过滤后的发 酵液可以或者具有原始酸性的pH值或者可以被处理以酸化至小于3的pH。具体地，该滤液 具有在约1.0至约3.0范围内的pH值。典型地，该pH为约1.2或2.0直到约2. 8或2. 9， 该pH希望地是在从约1. 3或1. 5至约2. 5或2. 7的范围内。
[0056] 在这些实施例中，在琥珀酸的分离中所采用的一类树脂可以被归类为吸附剂聚 (苯乙烯-二乙烯基苯）（PS-DVB)树脂。聚苯乙烯与二乙烯基苯交联。由于其在1-14的 pH范围内的稳定性，PS-DVB树脂是一种有吸引力的吸附剂用于各种类型化合物的萃取和 分离。已知PS-DVB树脂具有多个高度保留非极性化合物而差地保留极性化合物的疏水性 表面。
[0057] 疏水型PS-DVB树脂是可从多个供应商（例如，陶氏化学公司（Dow Chemi ca 1 Company),罗门哈斯公司（Rohm&Haas Co.)，三菱化学公司（Mitsubishi Chemical Corporation),漂莱特公司(Purolite Corporation),朗盛公司(Lanxess Corporation) 等）商购的。取决于制造商和每种类型树脂的特定规格，树脂可以具有多种不同的孔径大 小和表面积，它们会影响这些树脂的物理和化学性质、分离品质以及因此不同方案所需要 的温度。可以使用一种具有在约120m2/g或150m2/g直到约1100m2/g或1200m 2/g之间范 围内的表面积的树脂。典型地，该树脂的表面积是在约150m2/g或200m2/g至约800m 2/g 或1000m2/g之间。在特别适用于某些有机溶液（例如，玉米糖浆、果汁、HFCS、多酚类或天 然提取物）的树脂中，该树脂具有约250或300m2/g至约600或750m2/g的表面积。平均 孔径可以在约50 A或100 A至约600 A或700 A之间的范围内；典型地，在约100 A或 150 A至约450 A或500 A之间。树脂颗粒的平均直径可以在约300 li m或350 li m至约 750 i! m或800 i! m之间的范围内；典型地，在约400 i! m或500 i! m至约650 i! m或700 i! m之 间。这些树脂具有在约0. 90或0. 95ml/g至约1. 40或1. 52ml/g范围内的孔隙率；典型地， 约 0? 97ml/g 至约 1. 18 或 1. 25ml/g。
[0058] 由于吸附树脂具有非极性或疏水性倾向，这意味着它们容易吸附可高度溶于水的 有机化合物。例如，一类来自罗门哈斯公司（Rohm&Haas)的商业离子交换树脂是安柏莱特 ? (AMBERLITE?) XAD?聚合物吸附剂，这些吸附剂是基于高度交联的、大网络聚苯乙烯聚合 物的非常多孔的球形聚合物。取决于其中使用它们的环境，它们的高的内表面积可以吸附 并且然后解吸多种不同的物种。例如，在极性溶剂如水中，聚合物吸附剂具有非极性或疏水 性行为并且可以吸附微溶的有机物种。这种疏水性在苯乙烯吸附剂的情况下是最明显的。 (相比之下，在非极性溶剂，例如烃类等中，大多数吸附剂具有轻微极性或亲水性特性并且 因此将吸附具有一定极性程度的物种。这种极性在丙烯酸类吸附剂和酚类吸附剂的情况下 是最明显的。）表1总结了安柏莱特?品牌树脂的一些物理和化学属性。
[0059] 表 1.
[0060]
【权利要求】
1. 一种用于从发酵液中提纯琥珀酸的工艺，该工艺包括：过滤一种发酵液；调整pH以 产生一种具有小于或等于约3. 0的pH值的含有琥珀酸盐的滤液；使所述酸化的滤液选择性 地在从约20°C至约100°C范围内的操作温度下通过一个具有非官能化树脂的色谱柱，这样 使得获得至少两种不同的馏分，其中的至少一种含有琥珀酸或琥珀酸盐。
2. 根据权利要求1所述的工艺，其中所述操作温度是或者a)大于50°C以产生一种游 离琥珀酸或者b)小于50°C以产生一种琥珀酸的盐。
3. 根据权利要求2所述的工艺，其中游离琥珀酸的所述操作温度是在约50°C至约90°C 之间。
4. 根据权利要求2所述的工艺，其中游离琥珀酸的所述操作温度是在约55°C至约85°C 之间。
5. 根据权利要求2所述的工艺，其中琥珀酸的盐的所述操作温度是在约20°C至约50°C 之间。
6. 根据权利要求2所述的工艺，其中琥珀酸的盐的所述操作温度是在约22°C至约45°C 之间。
7. 根据权利要求1所述的工艺，进一步包括使一种游离琥珀酸结晶。
8. 根据权利要求7所述的工艺，其中在一个单一结晶后所述游离琥珀酸具有>90%的 纯度。
9. 根据以上权利要求中任一项所述的工艺，其中所述琥珀酸的一个明显峰出现在3个 床体积之内。
10. 根据以上权利要求中任一项所述的工艺，其中琥珀酸的一个明显峰出现在约1.0 与约2. 75个床体积之间。
11. 根据权利要求1所述的工艺，其中所述滤液具有在约1. 〇至约3. 0范围内的pH。
12. 根据权利要求11所述的工艺，其中所述滤液具有在从约1. 5至约2. 8范围内的pH。
13. 根据权利要求2所述的工艺，其中一个生产游离琥珀酸的操作是去离子水的等度 洗脱。
14. 根据权利要求2所述的工艺，其中一个生产盐的操作是去离子水和水性强碱的二 元洗脱。
15. 根据权利要求14所述的工艺，其中所述生产盐的操作是一种去离子水和有机溶剂 的二元洗脱。
16. 根据权利要求15所述的工艺，其中所述有机溶剂选自由甲醇、乙醇和丙酮组成的 组。
17. 根据权利要求1所述的工艺，其中所述非官能化树脂是一种疏水性的聚苯乙烯-二 乙烯基苯（PS-DVB)。
18. 根据权利要求1所述的工艺，其中所述色谱柱是一个连续分离装置的一部分。
19. 根据权利要求18所述的工艺，其中所述连续分离装置是一种模拟移动床（SMB)系 统。
20. 根据权利要求1所述的工艺，其中所述树脂具有对琥珀酸比对在该发酵液中发现 的其他杂质更大的亲和力。
21. 根据权利要求1所述的工艺，其中将所述琥珀酸与存在于所述滤液中的其他有机 酸类、盐类和糖类分离。
22. -种用于生产琥珀酸盐的方法，该方法包括：过滤一种发酵液以产生含有琥珀酸 盐的滤液，所述滤液具有小于3. 0的pH ;在最高达70°C的温度下通过一个液相色谱柱在一 种非官能化树脂上对所述滤液进行处理，用一种强碱或有机溶剂洗脱以形成琥珀酸盐。
23. 根据权利要求22所述的方法，其中所述强碱是一种无机碱。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中所述无机碱是NH3，并且所述琥珀酸盐是琥珀酸 二铵。
25. 根据权利要求22所述的方法，其中所述温度是在约20°C与约45°C之间。
26. 根据权利要求22所述的方法，其中游离琥珀酸或琥珀酸盐的一个明显峰出现在3 个床体积之内。
27. 根据权利要求22所述的方法，其中所述树脂具有对琥珀酸比对在该发酵液中发现 的其他杂质更大的亲和力。
28. 根据权利要求22所述的方法，其中所述色谱柱是一个连续色谱装置的一部分。
29. -种用于从发酵液中提纯琥珀酸的方法，该方法包括：过滤一种发酵液以产生澄 清液；使所述澄清液到达或酸化至小于3. 0的pH值；将所述澄清滤液在为所采用的特定树 脂预定的操作温度下引入到一个具有非官能化树脂的连续色谱装置中以分离游离琥珀酸； 以及使所述琥珀酸结晶。
30. 根据权利要求29所述的方法，其中将所述琥珀酸与在所述澄清液中的其他有机酸 类、糖类和盐类分离。
31. 根据权利要求29所述的方法，其中在一个单一结晶后所述结晶产生具有至少90% 纯度的琥珀酸。
32. 根据权利要求29所述的方法，其中所述游离琥珀酸的分离显示出至少两个明显的 色谱峰在3个床体积之内。
33. 根据权利要求29所述的方法，其中所述游离琥珀酸的分离显示出在约1. 0与2. 75 个床体积之间的一个琥珀酸峰。
34. 根据权利要求29所述的方法，其中所述分离是一种等度洗脱。
35. 根据权利要求29所述的方法，其中所述操作温度是在约20°C与100°C之间。
【文档编号】C12P7/40GK104284982SQ201380022442
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年4月17日 优先权日:2012年5月7日
【发明者】J·G·索普, 米切尔·舒尔茨, T·P·宾德 申请人:阿彻丹尼尔斯米德兰德公司