一种坚强芽孢杆菌gy-49及其筛选方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种坚强芽孢杆菌GY-49，其分类命名为坚强芽孢杆菌GY-49（ Bacillusfirmus GY-49），保藏编号为CCTCCNO：M2014347，该菌株已于2014年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心。本发明还公开一种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法。本发明还公开坚强芽孢杆菌GY-49在缺氧条件下废水处理中的应用。本发明还公开了坚强芽孢杆菌GY-49在厌氧处理高浓度氮、COD废水方面的应用。本发明还公开一种应用菌剂。本发明的菌株能耐受较高硝酸盐和COD，且在完全缺氧条件下具有高效的反硝化能力及CODCr脱除能力，能有效的去除废水中的硝酸盐氮并降低COD含量。CCTCC NO：M 201434720140721
【专利说明】-种坚强芽孢杆菌GY-49及其筛选方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于环境应用微生物领域，具体涉及了一种坚强芽孢杆菌GY-49及其筛 选方法和应用。
【背景技术】
[0002] 随着水产养殖业的发展，水产养殖废水中的高浓度氮素、COD的去除已成为当今养 殖业污染防治的重要内容。生物脱氮、除COD工艺因具有处理效果好、处理成本低、操作管 理方便等有点而得到广泛的应用。
[0003] 然而，大多数生物脱氮与除COD不能同时进行。主要由于生物脱氮过程大多在无 氧的条件下进行反硝化作用将含氮物质转化为N 2排放，而COD的脱除一般依赖与微生物的 有氧呼吸作用将有机质转化为CO2。当前在养殖废水的处理过程中要用厌氧菌剂脱氮和好 氧菌剂除C0D，在无氧的条件下微生物生长及代谢缓慢，且好氧菌剂不能发挥应有的作用甚 至导致好氧菌剂的死亡，在有氧的条件下厌氧菌剂不能进行反硝化作用有效的脱除氮素且 增氧成本高，由于生长及代谢环境的不同造成两种菌剂不能同时使用。由此，导致水产养殖 废水处理过程中的资源浪费、成本增大，处理效率低等缺点。
【发明内容】
[0004] 发明目的：本发明的第一个目的是提供一种坚强芽孢杆菌GY-49。本发明的第二 个目的是提供了上述坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，本发明的第三个目的是提供了坚强 芽孢杆菌GY-49在缺氧条件下废水处理中的应用。本发明的第四个目的是提供了上述坚强 芽孢杆菌在高氮、高COD废水处理中的应用。本发明的第五个目的是提供了一种应用菌剂。
[0005] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种坚强芽孢 杆菌GY-49,其分类命名为坚强芽孢杆菌GY-49 UaciBm Zfemz1S GY-49)，保藏编号为 CCTCC NO :M 2014347,该菌株已于2014年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心（武汉大学第一附属小学对 面），邮编：430072。
[0006] 本发明坚强芽孢杆菌) GY-49的分离过程为：取自江苏省南京 市的栖霞区万寿村菜地地表下深度为ΚΓ15 cm的土壤；先用80°C水浴样品30分钟牛肉膏 蛋白胨培养基培养分离纯化筛选出芽孢；再用反硝化培养基培养筛选出的反硝化菌株，分 离纯化最终筛选出一株具有厌氧反硝化脱除COD的菌株。
[0007] -种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，包括以下步骤： 1) 芽孢杆菌的筛选：采集的土壤样品稀释得到菌悬液，将菌悬液涂布于制备好的牛肉 膏蛋白胨培养基平板上，然后倒置于30°C培养箱中培养48 h，挑取不同形态的、生长良好的 单菌落反复划线，纯化分离菌株，并将所获得的单菌落转接至的牛肉膏蛋白胨培养基斜面 上，30°C恒温培养48 h，置于4°C冰箱保存备用，即为芽孢杆菌； 2) 反硝化及脱COD细菌的筛选：将筛选出来的芽孢杆菌在反硝化培养基平板上划线培 养48h，观察菌株是否在反硝化培养基中生长，检测培养前后培养基总氮与COD&的变化，最 终筛选出坚强芽孢杆菌GY-49。
[0008] 上述反硝化培养基由以下成分组成=NaNO3 0. 6 g，柠檬酸三钠4. I g，MgS04*7H20 0. I g，KH2PO4 I. 5 g，微量元素溶液I mL，水定容至I L，调pH到7. 0-7. 5。
[0009] 上述微量元素溶液由以下成分组成=Na2EDTA 63. 7 g，ZnSO4 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g， MnCl2 ·4Η20 5.1 g,FeSO4 ·7Η20 5.0 g, Na2MoO4 ·4Η20 LI g,CuSO4 ·5Η20 1.6 g,CoCl2 ·6Η20 1. 6 g，水定容至I L，调pH 7. 0。
[0010] 上述牛肉膏培养基由以下成分组成：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KNO3 30g， NaCl 10. 0 g，KCl 5· 0 g，MgSO4 · 7H20 2· 5 g，蒸馏水 I L，ρΗ7· 0-7. 5,定容至 I L，pH 7· 0?7· 5。
[0011] 上述的坚强芽孢杆菌GY-49在缺氧条件下废水处理中的应用。
[0012] 上述的坚强芽孢杆菌GY-49在厌氧处理高浓度氮、COD废水方面的应用。
[0013] 一种应用菌剂，将上述的坚强芽孢杆菌GY-49接种于牛肉膏培养基中发酵培养得 到的菌体即为坚强芽孢杆菌GY-49的应用菌剂。
[0014] 上述的牛肉膏培养基由以下成分组成：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KNO3 30g， NaCl 10. 0 g，KCl 5· 0 g，MgSO4 · 7H20 2· 5 g，蒸馏水 I L，ρΗ7· 0-7. 5,定容至 I L，pH 7· 0?7· 5 有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是： 1、坚强芽孢杆菌) GY-49且在无氧条件下可以快速生长，且对高氮、 高COD含量的废水具有高效的脱氮，降低COD的能力。
[0015] 2、使用该菌株对废水脱氮，降低COD工艺简单、脱氮效果稳定，处理效率高，且最 终产物为N 2和CO2，对环境没有二次污染。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1为坚强芽抱杆菌（ifeciBiAs ) GY-49菌落形态。
[0017] 图2为菌株在实验室模拟高氮、高COD废水中的0D600、总氮、CODtt的含量变化。
[0018] 图3为菌种在养殖废水中0D600、总氮、CODtt的含量变化。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过具体的实施例对本发明进一步说明，应当指出，对于本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干变型和改进，这些也应视为属于 本发明的保护范围。
[0020] 实施例1 : 1.材料准备 (1).菌源 菌源：江苏省南京市的栖霞区万寿村菜地地表下深度为1(T15 cm的土壤。
[0021] (2).培养基 (1)牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，KCl 5.0 g，MgS04*7H20 2.5 g，水定容至I L，调节pH 7·(Γ7·2。
[0022] (2)LB培养基：蛋白胨10.0 g，酵母粉5.0 g，NaCl 10.0 g，水定容至I L，调节 pH 7. 0?7· 2。
[0023] (3)反硝化培养基=NaNO3 0· 6 g，柠檬酸三钠 4. I g，MgSO4 · 7H20 0· I g，KH2PO4 1.5 g，微量元素溶液I mL，水定容至I L，调pH到7. 0-7. 5。
[0024] 微量元素溶液：Na2EDTA 63. 7 g，ZnSO4 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g，MnCl2 · 4H20 5. I g， FeSO4 · 7H20 5. 0 g，Na2MoO4 · 4H20 I. I g，CuSO4 · 5H20 I. 6 g，CoCl2 · 6H20 I. 6 g，水定容 至 I L，调 pH 7. 0。
[0025] 各培养基均在121°C条件下灭菌20 min ;以上培养基制备固体平板时添加2%的琼 脂。
[0026] (3) ·实验仪器
【权利要求】
1. 一种坚强芽孢杆菌GY-49,其特征在于，其分类命名为坚强芽孢杆菌GY-49 GY-49)，保藏编号为CCTCC NO:M 2014347,该菌株已于 2014年 7 月 21 日保藏于中国典型培养物保藏中心。
2. 权利要求1所述的一种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，其特征在于，包括以下步 骤： 1) 芽孢杆菌的筛选：采集的土壤样品稀释得到菌悬液，将菌悬液涂布于制备好的牛肉 膏蛋白胨培养基平板上，然后倒置于30°C培养箱中培养48 h，挑取不同形态的、生长良好的 单菌落反复划线，纯化分离菌株，并将所获得的单菌落转接至的牛肉膏蛋白胨培养基斜面 上，30°C恒温培养48 h，置于4°C冰箱保存备用，即为芽孢杆菌； 2) 反硝化及脱COD细菌的筛选：将筛选出来的芽孢杆菌在反硝化培养基平板上划线培 养48h，观察菌株是否在反硝化培养基中生长，检测培养前后培养基总氮与C0D&的变化，最 终筛选出坚强芽孢杆菌GY-49。
3. 根据权利要求2所述的一种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，其特征在于，所述反 硝化培养基由以下成分组成：NaN03 0. 6 g，柠檬酸三钠4. 1 g，MgS04 ? 7H20 0. 1 g，KH2P041.5 g，微量元素溶液1 mL，水定容至1 L，调pH到7. 0-7. 5。
4. 根据权利要求3所述的一种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，其特征在于，所述微 量元素溶液由以下成分组成：Na2EDTA 63. 7 g，ZnS04 2. 2 g，CaCl2 5. 5 g，MnCl2 ? 4H20 5. 1 g，FeS04 ? 7H20 5. 0 g，Na2Mo04 ? 4H20 1. 1 g，CuS04 ? 5H20 1. 6 g，CoCl2 ? 6H20 1. 6 g，水定 容至1 L，调pH 7. 0。
5. 根据权利要求2所述的一种坚强芽孢杆菌GY-49的筛选方法，其特征在于，所述牛肉 膏培养基由以下成分组成：牛肉膏5. 0 g，蛋白胨10. 0 g，KN03 30g，NaCl 10. 0 g，KCl 5. 0 g，MgS04 ? 7H20 2. 5 g，蒸馏水 1 L，pH7. 0-7. 5,定容至 1 L，pH 7. 0?7. 5。
6. 权利要求1所述的坚强芽孢杆菌GY-49在缺氧条件下废水处理中的应用。
7. 权利要求1所述的坚强芽孢杆菌GY-49在厌氧处理高浓度氮、COD废水方面的应用。
8. -种应用菌剂，其特征在于，将权利要求1所述的坚强芽孢杆菌GY-49接种于牛肉膏 培养基中发酵培养得到的菌体即为坚强芽孢杆菌GY-49的应用菌剂。
9. 根据权利要求8所述的一种应用菌剂，其特征在于，所述牛肉膏培养基由以下成分 组成：牛肉膏 5.0 g，蛋白胨 10.0 g，KN03 30g，NaCl 10.0 g，KCl 5.0 g，MgS04.7H20 2.5 g，蒸馏水 1 L，pH7. 0-7. 5,定容至 1 L，pH 7. 0?7. 5。
【文档编号】C12Q1/04GK104403968SQ201410633066
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月11日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】胡南, 高远, 高浩峰, 王鹏胤, 杨立志 申请人:南京工业大学