乳仔猪用复配酶及其制备方法_2

文档序号:8346462阅读:来源:国知局
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[0024] 酶解大豆分离蛋白的制备方法为:配制浓度为10-13%大豆分离蛋白溶液加热到 30-45°C,调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0. 1-1%的蛋白酶保温酶解0. 5-1. 5小时, 酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。
[0025] 羊肚菌酶解粉制备方法如下:
[0026] (1)羊肚菌子实体干燥粉碎;
[0027] (2)水溶均质:将粉碎的羊肚菌子实体加入不锈钢筒中,加入子实体3-6倍重量的 水,浸泡3-5小时,然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨,胶体磨操作条件为:调整胶体磨 定子与转子的间隙为〇. 5-1微米,胶体磨流量为0. 4-1吨/小时;
[0028] (3)升温酶解:将经过胶体磨处理的羊肚菌子实体液混合液转移到不锈钢酶解罐 中加热到50-60°C,调整pH到4. 5-6. 0,加入羊肚菌子实体重量0. 05-0. 1 %的纤维素酶、 0. 01-0. 1%的0-葡聚糖酶、0.01-0. 1 %的蛋白酶,保温酶解0.5-1. 5小时,酶解过程中不 断搅拌。
[0029] (4)干燥:酶解后的醪液过滤后干燥获得羊肚菌酶解粉。
[0030] 所述干燥可以采用常规喷雾干燥、冷冻干燥等干燥形式。
[0031] 所述冻干保护剂由脱脂奶粉、海藻糖和麦芽糊精组成。
[0032] 本发明胶囊产品包含的植物乳杆菌优选CGMCC NO. 9405。
[0033] 上述植物乳杆菌胶囊产品制备方法如下:
[0034] 1)制备芯材:向经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5% 的水苏糖和5-8%的羊肚菌酶解粉,然后与冻干保护剂溶液混合,-50°C下预冻0. 5h,然后 在真空冷冻干燥机中冻干l〇_18h,冻干后研磨粉碎制成芯材;
[0035] 所述发酵液与冻干保护剂溶液的比例为1:1. 4-0.8;所述冻干保护剂溶液由脱脂 奶粉、海藻糖和麦芽糊精溶液组成;三种溶液的体积比为脱脂奶粉:海藻糖:麦芽糊精= 3:1:0? 5;
[0036] 所述脱脂奶粉、海藻糖和麦芽糊精溶液的浓度分别为:脱脂奶粉5%,海藻糖1%, 麦芽糊精2%。
[0037] 2)包被:将芯材悬浮在流化床中,壁材喷雾包被,从一个喷头中喷入壳聚糖、甘油 和海藻糖的混合液,从另一个喷头中喷入黄原胶、卡拉胶和酶解大豆分离蛋白的混合液,喷 雾速度控制相同,包被过程中流化床内温度在25-38 °C之间,30分钟后即形成胶囊。此干燥 方法采用专利201120503311. 1中设备处理。
[0038] 所述中温a -淀粉酶具有以下特性:
[0039] (1)该酶温度适应范围较宽,温度在55_75°C之间活性较高,最适作用温度为 65。。;
[0040] 热稳定性:该酶在65°C条件下保存24h仍具有80-83%酶活,70°C条件下保存12h 仍具有50-60%以上酶活。
[0041] (2)该酶最适反应pH值为5.0,在pH值4. 0-6.0之间均有较高酶活力;
[0042] 酸稳定性:在pH4_6下保存18h后仍有80%以上的酶活。
[0043] (3)酶活性:菌株304通过发酵制备的酸性中温a-淀粉酶酶活力为7000-9600U/ ml,特别适合液化工艺与糖化工艺并存的工业化需求。
[0044] 所述中温a-淀粉酶,采用液体发酵法培养获得。
[0045] 本发明提供的产中温a-淀粉酶的菌株具体为枯草芽孢杆菌304(Bacillus SUbtilis)304。该菌株已于2013年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称 CCTCC,地址为:中国.武汉.武汉大学),保藏号为CCTCC N0:M 2013600。
[0046] 所述枯草芽孢杆菌304由一株分离自酸性土壤的产中温a-淀粉酶的枯草芽孢杆 菌出发菌株经紫外线-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变筛选获得,菌株特点如下:所述菌株在 固体平板上菌落颜色为乳白色,表面干燥褶皱,色暗不透明,边缘整齐,镜检为长杆状,革兰 氏染色呈阳性,周生鞭毛,芽孢呈椭圆形。
[0047] 本发明乳仔猪用复配酶的制备方法如下:
[0048] 将所述甘草、植物制剂和生姜提取物分别超微粉碎,然后与木聚糖酶,纤维素酶, e-葡聚糖酶,淀粉酶,酸性蛋白酶,果胶酶,甘露聚糖酶,植物乳杆菌胶囊均匀混合后密封 包装即得成品乳仔猪用复配酶。
[0049] 所述乳仔猪专用酶适用于饲料加工厂和养殖场自配饲料,使用时应与饲料中的其 它原料混合均匀,可事先将本发明与少量饲料混合均匀,再混合到大批饲料中,直接饲喂。 建议每吨全价料添加量为:100-150g。
[0050] 有益效果:
[0051] 本发明以中温a -淀粉酶采用梯度降温和梯度升温的发酵工艺,同时予以追加接 种和适时补料,使得本发明所产中温a-淀粉酶活力高、耐受温度高、稳定性强、适于工业 化生产。酶活力为9500U/ml。中温a-淀粉粗酶液样品于40-90°C下保存不同的时间后 测定酶活,结果显示,样品在65°C条件下保存24h仍具有83%酶活,70°C条件下保存12h仍 具有60%以上酶活。
[0052] 本发明产品中采用植物制剂、生姜提取物、甘草科学复配,有效减缓了酶制剂的回 潮;同时可增强复合酶的耐冻、耐热性能,保持相同的酶活力,其耐热温度可提高l〇_15°C, 耐冷冻温度可降低5-10°C,有效防止了复合酶在运输、保存和使用过程中酶活力的损失,延 长了复合酶的保质期,达到同样的酶活力,同类产品保质期可延长3-5个月。
[0053] 本发明产品添加的植物制剂既可延长复合酶制剂的保质期,又可提高饲养畜禽的 免疫力,有效防止畜禽流行性疾病的发生。
[0054] 本发明提供的乳酸菌微胶囊,其壁材中添加了改性大豆分离蛋白,改性大豆分离 蛋白比大豆分离蛋白乳化能力提高25%、胶凝能力提高15-25%,改性大豆分离蛋白黄原 胶和卡拉胶及壳聚糖的配合使用,凝胶强度提高了 10%以上,增强了胶囊的耐胃酸性;胶 囊采用改性大豆分离蛋白,具有很好的肠溶性,胶囊到达肠道后在1-1. 5小时内即可完全 崩解释放出植物乳杆菌,并迅速增殖成为优势菌群,从而达到抑制病原菌生长等作用。
[0055] 本发明产品中保护剂与酶制剂、植物制剂和生姜提取物共同协同作用,使得复合 酶的酶活力和效力最大限度的发挥,并相应的提高了饲料的利用率和动物的生长率,增强 了动物的食欲和抗病能力,延长了产品的保质期和保护了环境。
【具体实施方式】
[0056] 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明,本发明中所用的技术手段 均为本领域技术人员所公知的方法。另外,实施方案应理解为说明性的,而非限制本发明的 范围,本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言,在不背离本 发明实质和范围的前提下,对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也 属于本发明的保护范围。
[0057] 本发明所提供的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj_2014,该菌株保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No. 9405,保藏地 址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研宄所,邮编100101,保藏日期 2014年7月2日。
[0058] 实施例1
[0059] 本发明所用植物乳杆菌CGMCC No. 9405的选育过程如下:
[0060] 原始出发菌种一试管活化一硫酸二乙酯(DES)诱变一亚硝基胍(NTG)诱变一等离 子体诱变一平板初筛一摇瓶复筛一传代稳定性试验。
[0061] 本发明所采用的出发菌株在MRS葡萄糖培养基中,其乳酸的生产速率为1.5g/L/ d,当培养基pH为3. 5时几乎停止生长,对亚硝酸钠的分解速率为0. 34mg/h/kg白菜。出发 菌株由李政采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料,采集时间2013年9月15日。
[0062] 为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率,依次采用DES和NTG 技术对该菌种进行诱变,诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛,然后采用500mL摇瓶发 酵,生物传感器分析仪对高产菌进行复筛,选育优良的植物乳杆菌菌株,然后做传代实验, 评价其遗传稳定性。
[0063] 植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明:经过连续传代十次,各项性能指标都 比较稳定,遗传性较好,性状没有回复,因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的 菌株。
[0064] 经验证发现:该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d,该菌株经过71小时 发酵后乳酸浓度达到95g/L ;能够在pH为1. 80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快,分解 能力达到9. 8mg/h/kg (自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1. lmg/h/kg),能够耐1 % 胆盐。
[0065] 1)DES诱变选育
[0066] a.在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L 一环(出发菌),接入装有50mL培养 基MRS (无琼脂,葡萄糖20g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培养12h左右,使菌体处于 对数生长前期。
[0067] b.取5mL菌液,5000rpm离心10min收集菌体,用生理盐水洗绦2次。
[0068] c.用pH7. 0磷酸缓冲液稀释成107个/mL菌悬液。
[0069] d.取32mL pH7. 0的磷酸钾缓冲液、8mL菌悬液、0. 4mL DES在预先放入转子的 150mL三角瓶中充分混合,使DES最终浓度为1 % (v/v)。
[0070] e?在 37°C 摇床中 150rpm 反应 30min,取 lmL 混合液,加入 0? 5mL 25
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