一种高产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法。
【背景技术】
[0002] 叶酸是B族维生素，参与体内DNA、RNA及蛋白质的合成，在机体代谢过程中发挥 着非常重要的作用。孕妇、乳母、婴幼儿、老人、素食主义者这几类人群都很容易摄取叶酸不 足，进而导致巨幼红细胞贫血、记忆力衰退等疾病。叶酸能够部分共享代谢途径，高摄入叶 酸可以纠正因叶酸缺乏引起的贫血以及最终可能发展成的神经系统破坏。服用含有叶酸的 食物中，可能会对叶酸和维生素B12的状态同时改善。
[0003] 通过食物获得的天然叶酸，因加热等原因导致其利用率不到40%。尽管已有市售 叶酸片，但因其化学合成而不具有还原性，长期服用尚存在一些问题。
[0004] 豆浆是人们喜爱且常见的饮食，但是因大豆中的抗营养因子存在，豆浆营养不能 很好的被利用，且豆浆作为植物制品不含叶酸。有研究提出，发酵豆制品可以较好的生成叶 酸。能再生叶酸的益生菌-乳酸菌具有调节机体肠道正常菌群、保持微生态平衡、降低血清 胆固醇、提高免疫力等多项功能。表1为各种乳酸菌总叶酸产量。由表1可以看出能够产 叶酸的菌大多并不能应用于食品工业的生产，因此探寻一种新的高产叶酸的益生菌具有积 极的作用，研制一款高产叶酸并且能长期食用的产品具有很大的社会价值和研究意义。
[0005] 表1常见的各种乳酸菌总叶酸产量。
[0006]
【发明内容】
[0007] 本发明为了克服现有技术不足，研究一种通过产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵 乳的制作方法，通过该制作方法制得富含叶酸的乳酸菌豆浆发酵乳。
[0008] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0009] -种通过产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法，包括以下步骤：
[0010] 步骤a，菌种活化，将菌种清酒乳杆菌LZ217(LactobacillussakeiLZ217)、用MRS 培养基进行活化，传代3次后使用。
[0011] 本发明中清酒乳杆菌LZ217(LactobacillussakeiLZ217)，保藏于中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNO. 10259,保藏地址：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，保藏时间2014年12月29日。
[0012] 步骤b，接入菌种准备，收集生长到对数期的清酒乳杆菌LZ217,离心，弃去上清液 后收集菌体；在无菌环境下加入纯净水制成菌种悬液；以1%的接入量接种到牛奶培养基 中，置于人工气候箱培养，如上传代3次后使用。
[0013] 步骤c，制作豆浆发酵乳，将准备好的乳酸菌按1 %的接种量接入凉好的新鲜豆浆 中，向豆浆中加入葡萄糖和果糖后加盖封口，并置于恒温培养箱中培养。
[0014] 进一步，所述方法还包括菌种悬液的制备方法，将离心后所收集到的菌体加入 0. 9%的生理盐水吹洗，将吹洗后的悬浊液离心，收集沉淀，如此重复吹洗3次，将最后一次 的悬浊液离心两次，弃上清液，收集沉淀，补入纯净水将沉淀吹打均匀制成菌株悬浊液。
[0015] 进一步，所有的离心速度均为6000r/min，离心时间为lOmin。
[0016] 进一步，所述方法还包括豆浆制作：浸泡，大豆于100°C热水中热烫4至5min，再 按1:3的比例放于0. 2%NaHC03溶液中浸泡16h(浸泡终点以大豆的状态来确定，当水面 上有少量泡沫，豆皮平滑而涨紧，将豆搓成两半后。子叶表面平滑，中心部位与边缘色泽一 致.沿横向剖面易于断开，表明浸泡时间已够）；制浆，将用浸泡剂浸泡的大豆捞出。在清 水中漂洗后沥干，以豆：热水=1:8的比例放入榨汁机中榨汁。三层纱布过滤，去豆浆渣。
[0017] 进一步，所述方法还包括牛奶培养基的配方：奶粉80g，葡萄糖20g，果糖5g，纯净 水 1L，pH6. 0。
[0018] 进一步，恒温培养箱的培养温度均为37°C，培养时间为1天。
[0019] 进一步，步骤c中，匍甸糖的添加量为每升衆2〇g，果糖的添加量为每升衆5g。
[0020] 本发明的有益效果主要体现在：本发明利用所筛选得到的高产叶酸的乳酸菌菌 株，发酵豆浆，得到叶酸含量较高的豆浆发酵乳，而且通过本发明制得的产品安全无毒，易 于吸收，风味上佳，能较好的替代目前市面上的叶酸补充物质。
[0021] 具体包括：
[0022] 通过本发明能够获得富含叶酸的乳酸菌豆浆发酵乳。通过产叶酸的乳酸菌发酵豆 乳既明显提高了叶酸的产量又保留了豆乳的传统营养功能。并且本发明所产产品中的叶酸 为天然叶酸，避免了化学合成叶酸补充物的副作用，且叶酸的含量较其它产品显著增高，可 以替代传统工业化学合成的叶酸。本发明方法的应用，使得乳酸菌发酵所产的产物叶酸具 有还原性，更易被人体吸收，同时为人体补充了益生菌，有益于维持肠道健康。通过产叶酸 的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法发酵条件明确，时效较快，产物稳定、安全，实现 了豆浆、叶酸及乳酸菌的营养功能三合一。
【附图说明】
[0023] 图1为实施例1中清酒乳杆菌LZ217发酵豆浆的叶酸产量图。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此：
[0025] 实施例1 :
[0026] 活化培养基：MRS，MRS固体培养基（不含Tween-3160);叶酸检测培养基（购于北 京陆桥公司）；
[0027] 黄豆，全脂奶粉、蔗糖0. 5mol/L，食用葡萄糖，食用果糖，娃哈哈纯净水，生理盐水。
[0028] 1菌种活化
[0029] 菌种LactobacillussakeiLZ217 (以下称LZ217)，用MRS液体培养基进行活化， 传代3次后使用。
[0030] 2接入菌种准备
[0031] 收集生长到对数期的清酒乳杆菌LZ217,6000r/min离心lOmin，弃去上清液后收 集菌体；在无菌环境下将洗好的菌体加入纯净水制成菌种悬液；以1%的接入量接种到牛 奶培养基中，置于人工气候箱37°C培养1天，如上传代3次后使用。
[0032] 3豆浆制作
[0033] 浸泡：大豆于100°C热水中热烫4至5min，再按1:3的比例放于0. 2%NaHC03溶 液中浸泡16h(浸泡终点以大豆的状态来确定，当水面上有少量泡沫，豆皮平滑而涨紧，将 豆搓成两半后。子叶表面平滑，中心部位与边缘色泽一致.沿横向剖面易于断开，表明浸泡 时间已够）；
[0034] 制浆：将用浸泡剂浸泡的大豆捞出。在清水中漂洗后沥干，以豆：热水=1:8的比 例放入榨汁机中榨汁。三层纱布过滤，去豆浆渣。
[0035] 4制作豆浆发酵乳
[0036] 将准备好的乳酸菌按1 %的接种量接入凉好的新鲜豆浆中，向豆浆中按葡萄糖 20g/L和果糖5g/L的添加s；添加后加盖封口，并置于37Cj1旦温培养箱中培养1天。
[0037] 5叶酸检测及产品感官评定
[0038] 按国标GB/T5009. 211-2008为标准进行叶酸产量检测，并通过外观色泽、组织 状态、口感和风味评定对产品进行感官评价。表2为豆浆发酵乳的感官评价。
[0039] 表2豆浆发酵乳的感官评价。
[0040]
[0041] 乳酸菌LZ217发酵所得的豆浆发酵乳产生的叶酸含量很高，达到956ng/mL，具体 如图1所示。结果表明，相较于普通豆浆，通过乳酸菌LZ217制得的豆浆发酵乳叶酸含量显 著增加，而且所产叶酸为天然无毒的，产物形式具备还原性，更易于吸收，可以替代传统工 艺化学合成的叶酸补充剂。
[0042] 虽然本发明已由较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟知此技 艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，可作些许的更动与润饰，因此本发明的保护范围当 视权利要求书所要求保护的范围为准。
【主权项】
1. 一种高产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法，其特征在于，包括以下步 骤： 步骤a，菌种活化，将菌种清酒乳杆菌LZ217 (Lactobacillus sakei LZ217)、用MRS培 养基进行活化，传代3次后使用； 步骤b，接入菌种准备，收集生长到对数期的清酒乳杆菌LZ217,离心，弃去上清液后收 集菌体；在无菌环境下加入纯净水制成菌种悬液；以1%的接入量接种到牛奶培养基中，置 于人工气候箱培养，传代3次后使用； 步骤c，制作豆浆发酵乳，将准备好的乳酸菌按1 %的接种量接入凉好的新鲜豆浆中， 向豆浆中加入葡萄糖和果糖后加盖封口，并置于恒温培养箱中培养。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括菌种悬液的制备方 法，将离心后所收集到的菌体加入0. 9%的生理盐水吹洗，将吹洗后的悬浊液离心，收集沉 淀，如此重复吹洗3次，将最后一次的悬浊液离心两次，弃上清液，收集沉淀，补入纯净水将 沉淀吹打均匀制成菌株悬浊液。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，离心速度为6000r/min，离心时间为 IOmin04. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括豆浆制作：浸泡，大 豆于100°C热水中热烫4至5min，再按1:3的比例放于0. 2% NaHC03溶液中浸泡16h ;制 浆，将用浸泡剂浸泡的大豆捞出，在清水中漂洗后沥干，以豆：热水=1:8的比例放入榨汁 机中榨汁，三层纱布过滤，去豆浆渣。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括牛奶培养基的配方 为奶粉80g，葡萄糖20g，果糖5g，纯净水1L，pH6. 0。6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，恒温培养箱的培养温度均为37°C，培 养时间为1天。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤c中，葡萄糖的添加量为每升豆 浆20g/L，果糖的添加量为每升豆浆5g/L。
【专利摘要】本发明提供了一种高产叶酸的乳酸菌菌株制作豆浆发酵乳的制作方法，将所筛选得到的菌种清酒乳杆菌<i>LZ</i>217（<i>Lactobacillus？sakei</i>？LZ217）接种到新鲜豆浆中，在37℃恒温发酵箱中发酵，得到的豆浆发酵乳富含天然叶酸，消除了传统工业生产化学合成叶酸的副作用，且叶酸的含量较其它产品显著增高，另外本发酵豆乳发酵合成的叶酸具有还原性，能更好的被人体吸收，可以有效的补充人体所需的叶酸，一定程度上缓解了叶酸缺乏引起的各种身体不适。CGMCC NO.1025920141229
【IPC分类】A23C11/10
【公开号】CN105028661
【申请号】CN201510311918
【发明人】顾青, 蔡柒月, 于跃
【申请人】浙江工商大学
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月8日