专利名称：肟衍生物及其作为药物活性试剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明的目的是新型的肟衍生物及其可药用盐。本发明还涉及用于制造这些通式I化合物的方法，包含所述化合物的药物组合物以及它们在制造用于治疗例如癌症的疾病的药物中的用途。
癌症是超过心脏和脑血管疾病的主要死因之一，因而人们花费巨大的费用和时间进行很多研究以攻克癌症。但是，尽管有多种疗法，例如外科手术，放射疗法和化学疗法，对于改良的抗癌疗法仍然有极大的需求。这些疗法中，化学疗法是癌症治疗的主要领域之一。大多数药物主要是通过影响DNA以表达它们的毒性，进而伤害肿瘤细胞以显示其效果。但是，由于缺乏选择性，它们不能充分区分肿瘤细胞和正常细胞，因而在正常细胞中表现出的有害反应限制了它们在治疗中的用途。迄今，还没有发现满意的药物，因此非常需要有毒性降低的、耐受性更好的且具有高治疗效果的抗癌药物。
依照本发明的化合物是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，因而显示出抗增殖和诱导分化活性，该活性导致抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡和抑制侵入。
转录调节是细胞分化、增殖和凋亡中的一个主要事件。一组基因的转录活化决定了细胞的命运，因此转录是通过多种因子严密调节的。该过程中涉及的一个调节机制是DNA三级结构的变化，这种变化通过调节转录因子和它们的目标DNA片断的可接近性而影响转录。核小体的完整性是通过核心组蛋白的乙酰化情况而调节的。在低乙酰化状态下，核小体被紧密压缩，从而不允许进行转录。另一方面，通过核心组蛋白的乙酰化，核小体被松弛，从而可以进行转录。组蛋白的乙酰化情况是由组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的活性之间的平衡支配的。最近，已经发现HDAC抑制剂在几种癌细胞中能够阻止生长并诱导凋亡，所述癌细胞包括结肠癌细胞、T-细胞淋巴瘤细胞和红白血病细胞。考虑到凋亡是癌症进展的关键因子，HDAC抑制剂作为凋亡的有效诱导剂有希望成为用于癌症治疗的试剂(Koyama，Y.等，Blood 96(2000)1490-1495)。
EP-A 0 847 992描述了一酰化的邻苯二胺衍生物作为细胞分化诱导剂。相同类型的化合物也是EP-A 0 242 851的主题。这些申请中描述的化合物几乎都是用苯甲酸衍生物一酰化的邻亚苯基衍生物。WO 03/013484公开了N-一酰化的碳环、但是非芳香族的或杂芳香族除外的邻苯二胺作为抗增殖和分化诱导剂。但是，仍然需要提供具有改善的治疗性质的化合物，例如活性、耐受性、选择性、稳定性得以改进的且低毒性和/或较少副作用等的化合物。
一酰化的邻苯二胺作为制备相应的苯并咪唑用的前体是本领域中已知的，其制备方法描述于如下文件中，例如DE-A 2 062 265；FR 2 167954；Rastogi，R.和Sharma，S.，Indian J.Chem.，Sect.B，21B(5)(1982)485-487；Moll，R.等，Z.Chem.17(1977)133-134；和Hassan，H.等，Indian J.Chem.39B(2000)764-768。
已经发现通式I化合物是HDAC抑制剂，这种化合物具有抗增殖和诱导分化活性，该活性导致抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡和抑制侵入。因此，这些化合物可用于治疗人或动物的疾病，例如癌症。可以治疗的肿瘤实例有但不限于结肠癌，乳腺癌(包括晚期乳腺癌)，肺癌(例如腺癌，并且包括非小细胞肺癌)，包括晚期疾病的前列腺癌，胰腺癌，淋巴系的造血肿瘤(hematopoetic tumors)(例如急性淋巴白血病，B-细胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤)，骨髓白血病(例如，急性髓性白血病(AML))，甲状腺滤泡癌，脊髓发育不良综合症(MSD)，间叶细胞源的肿瘤，黑素瘤，畸胎瘤，成神经细胞瘤，神经胶质瘤，皮肤的良性肿瘤(例如角化棘皮瘤)，肾癌，卵巢癌，膀胱癌和表皮癌。
因此，本发明涉及通式I的新型化合物
通式I其中R1是氢或C1-C4-烷基；R2是芳基，杂芳基或杂环基；这些基团都可以任选被如下基团取代一次或几次烷基；卤素；-O-烷基；-NH(烷基)；-N(烷基)2；或R1和R2连同它们所结合的碳原子一起形成环状烃；以及其可药用的盐。
本发明的目的是通式I化合物，它们的可药用盐，还有它们的对映异构体形式，非对映异构体和外消旋体；上述化合物的制备，包含它们的药物及其制造，以及上述化合物作为组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的抑制剂并因而在控制或预防如上所述疾病和障碍，或者在制造相应药物中的用途。
本说明书所用通用术语的如下定义无论所讨论的术语是单独出现的还是以组合形式出现的都是适用的。
术语“卤素”表示氟，氯，溴或碘。
术语“C1-C4-烷基”表示含有1到4个碳原子的饱和直链或支链烷基，例如甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，异丁基，2-丁基，叔丁基。
术语“烷基”表示含有1到12个碳原子的饱和直链或支链烃，例如甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，异丁基，2-丁基，叔丁基，戊基，己基等。该烷基可以任选被一取代或多取代，取代基是卤素，优选氟，例如三氟甲基或五氟乙基等。
术语“芳基”表示芳香族6到10元的单环或双环烃，例如苯环或萘环等。
术语“杂芳基”表示5或6元单环芳香烃，其中一个或两个碳原子被氧、氮或硫所取代。其实例为咪唑基，吡唑基，噻唑基，噁唑基，吡啶基，嘧啶基等。
术语“杂环基”表示6到10元的单环或双环非芳香族的或部分芳香族的烃，其中一个或两个碳原子被氧或氮取代。其实例为吗啉基，哌啶基，2，3-二氢-苯并呋喃基，苯并[1，3]间二氧杂环戊烯基，2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯基或2，3-二氢-1H-吲哚基等。
此处使用的术语“环状烃”表示由R1和R2连同它们所结合的碳原子一起形成的9或10元的双环非芳香族或部分芳香族的烃。其实例为1，2，3，4-四氢-亚萘基，亚茚满基等。
术语“可药用的盐”是指保持了通式(I)化合物生物效力和性质的常规酸加成盐或碱加成盐，这些盐是从合适的无毒有机或无机酸或者有机或无机碱形成的。酸加成盐的实例包括那些衍生自无机酸的盐，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，以及衍生自有机酸的盐，所述有机酸如对甲苯磺酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸等。碱加成盐的实例包括衍生自铵，钾，钠和氢氧化季铵，例如氢氧化四甲基铵的盐。将药物化合物(即药物)化学改性成盐是药物化学家熟知的技术，其目的是获得改善的物理和化学稳定性，吸湿性，流动性和化合物的溶解度。参见例如Ansel，H.等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第6版，1995，196和1456-1457页。
本发明的一种实施方案是通式I的化合物，其中R1是氢；R2是吡啶基；2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基；苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基；或苯基，该苯基可以任选被如下取代基取代一次或几次卤素；-O-烷基；-NH(烷基)；或-N(烷基)2；及其可药用的盐。
这样的化合物如5-(3，4-二氯-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-亚苄基氨基氧甲基-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-氯-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(3，4-二甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-氟-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(2-氟-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(3-甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-三氟甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-三氟甲基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-二乙基氨基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-二丁基氨基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-(吡啶-3-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(吡啶-4-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-(吡啶-2-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
本发明的另一实施方案是通式I的化合物，其中R1是C1-C4-烷基；R2是苯基或2，3-二氢-苯并呋喃-4-基，它们任选被如下取代基取代一次或几次卤素；烷基；或-O-烷基；及其可药用的盐。
这样的化合物如5-[1-(4-丙基-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(2-甲基-2，3-二氢-苯并呋喃-4-基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(2，4-二氯-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(3，4-二氯-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(3，4-二甲氧基-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(1-苯基-亚乙基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-[1-(4-氟-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
本发明的再一实施方案是通式I的化合物，其中R1和R2连同它们所结合的碳原子一起形成环状烃；以及其可药用的盐。
这样的化合物如5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺盐酸盐；5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺甲磺酸盐；或5-(茚满-1-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
可以通过任何已知的可用于制备化学相关化合物的方法，来制备通式(I)的肟衍生物或其可药用盐。当用于制备通式(I)的肟衍生物或其可药用盐时，这样的方法是作为本发明的又一特征而提供的，并且用如下代表性的实施例来举例说明，其中，除非另外声明，R1和R2具有如上定义的含义。原材料可以通过有机化学标准方法获得。这样的原材料的制备方法描述于相应的实施例中。替代性的必要原材料可以通过类似于所述方法的方法来获得，这是在有机化学家的普通技术之内的。
一种优选的方法，并且也是本发明的另一实施方案，为用于制造通式I化合物的方法，其中(a)将通式II化合物
(通式II)其中R1和R2如上所定义，和通式III化合物反应， (通式III)，其中Y表示氢或合适的氨基保护基；(b)Y中的氨基保护基，如果存在，将其断开，得到通式I化合物；并且(c)将所述通式I化合物从反应混合物中分离出来，如果需要，将其转化成可药用的盐。
此处使用的“氨基保护基”是肽化学中已知的。这样的保护基如苄氧羰基(通过氢化或用氢溴酸的乙酸溶液断开)，叔丁氧羰基(用强酸断开，例如三氟乙酸(纯的，或二氯甲烷溶液)，或者盐酸(HCl)的二噁烷溶液)，9-芴甲氧羰基(用二级胺例如哌啶断开)。
所述反应典型地包括两步一罐式程序。第一步中，在活化剂存在下，在惰性溶剂或稀释剂中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氢呋喃(THF)中，通过通式II的羧酸盐的反应而将其活化。
酸的合适的活性衍生物为，例如酰卤化物，如通过该酸和无机酸氯化物，例如亚硫酰氯或二氯草酸反应形成的酰氯；混合酸酐，如通过该酸和诸如氯甲酸异丁酯的氯甲酸酯反应形成的酸酐；活性酯，如通过该酸和诸如五氟苯酚的酚反应形成的酯；通过该酸和N-羟基苯并三唑反应形成的活性酯；酰基叠氮化物，如通过该酸和诸如二苯基磷酰基叠氮化物的叠氮化物反应形成的叠氮化物；酰腈，如通过该酸和诸如二乙基磷酰腈的氰化物反应形成的氰化物；或者该酸和碳二亚胺，例如和N-3-二甲基氨基丙基-N-乙基碳二亚胺或二环己基碳二亚胺的反应产物；或者该酸和N，N′-羰基二咪唑的反应产物；或者该酸和尿鎓(uronium)盐，例如和O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基-尿鎓四氟硼酸盐的反应产物；或者该酸和磷基试剂，例如和双-(2-氧代-3-噁唑烷基)-磷酰氯的反应产物。反应是在-30℃到60℃的温度范围内，方便地在0℃或低于0℃的温度下进行的。
第二步中，将化合物III加入到含有活化酸的溶液中。如果Y是保护基，则最后必须将其断开(方法见上)以得到通式I的化合物。
这些方法是本领域技术人员熟知的。原则上，例如Houben-Weyl在Methoden der organischen Chemie，XV/1和XV/2卷中所述的如多肽化学中所使用的所有合成酰胺的方法也都是可用的。未保护的苯二胺的一酰基化反应描述于EP 0 974 576中。
通式II的化合物可以通过断开通式IV化合物的R3基而制备， 其中R3是烷基，所述烷基具有此前所给出的含义。R3的实例为甲基和乙基。反应是在碱存在下，例如在氢氧化锂，氢氧化钠或氢氧化钾存在下，在惰性溶剂或稀释剂中，例如在甲醇，乙醇，二噁烷，THF，水中进行的。
通式IV的化合物可以通过如下方法制备，例如通过通式V的肟 和通式VI的化合物的取代反应， 其中LG是适合用于该取代反应的离去基团；LG的实例为Br，Cl，I，甲苯磺酸酯，甲磺酸酯。
反应是在惰性溶剂中进行的，例如在二氯甲烷，丙酮，二甲基甲酰胺(DMF)，THF，乙腈，乙酸乙酯，二甲亚砜(DMSO)中进行，并且优选在碱存在下进行，所述碱如碳酸钾(K2CO3)，氢氧化钠(NaOH)，氢化钠(NaH)。在某些情况下，向反应混合物中加入碘化钾或四丁基铵硫酸氢盐可能具有有利的效果。如果必要，将反应混合物加热。
许多通式V的化合物是可商购的。在其他情况下，可以用已知的方法制备，例如相应醛或酮VII 和羟胺或盐酸羟胺在惰性溶剂中并且优选在碱存在下的缩合反应，所述惰性溶剂如乙醇，甲醇，水，二噁烷，而所述碱如吡啶，氢氧化钾，氢氧化钠，乙酸钠。如果必要，将反应混合物加热。
一些通式VI的化合物在文献中有描述。例如，5-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯描述于例如Curtin，M.L.等，J.Med.Chem.41(1998)74-95中。
通式(I)的化合物可以包含一个或几个手性中心，并且可以以外消旋或光学活性形式存在。可以按照已知的方法将外消旋体分离成对映异构体。可以通过结晶分离的优选的非对映异构体盐是从外消旋混合物通过和光学活性酸反应而形成的，所述光学活性酸如D-或L-酒石酸，扁桃酸，苹果酸，乳酸或樟脑磺酸。而且，通过分析型、半制备或制备级色谱，使用合适的光学活性固定相，用合适的洗脱液可以将外消旋化合物分离成它们的对映异构体。合适的光学活性固定相包括但不限于二氧化硅(例如ChiraSper，Merck；Chiralpak OT/OP，Baker)，纤维素酯或氨基甲酸酯(例如Chiracel OB/OY，Baker)或其他(例如Crownpak，Daicel或Chiracel OJ-R，Baker)。
通式I化合物和它们的可药用加成盐具有有价值的药理学性质。已经发现它们具有抗增殖和诱导分化活性，该活性导致抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡和抑制侵入。因此，这些化合物可用于治疗人或动物的疾病，例如癌症。因而本发明的另一实施方案是通式I化合物用于治疗癌症的用途。还有一种实施方案是通式I化合物用于制造相应的用于抑制肿瘤生长的药物的用途。
本发明化合物作为HDAC抑制剂的活性是用细胞乙酰化试验证实的。其中在PC3细胞中监测组蛋白的乙酰化反应。高乙酰化和化合物对组蛋白脱乙酰酶的抑制作用相关。用平行对照组来监测细胞生存力，对化合物的细胞毒性进行评估。
将PC3细胞，人前列腺癌细胞系，在384孔微滴定板上以1800细胞每孔的密度接种于RPMI 1640中(包含5％FCS，2mM谷氨酰胺以及青/链霉素)。
48h后，在37℃下加入预先稀释的化合物，使其终浓度为1μM。将化合物预先用二甲亚砜(DMSO)稀释，使DMSO的终浓度为0.5％每孔。
在培育24h后，通过加入细胞增殖试剂WST-1(Roche MolecularBiochemicals)来测定细胞生存力。在60分钟后，测量光密度(OD)(450nm对690nm)。
测量后，制备用于ELISA反应的细胞层。吸出培养液并将细胞在-20℃下在乙醇中固定60分钟。在用PBS/吐温冲洗后，加入封闭液(PBS/5％FCS/吐温)，并将细胞层再次冲洗。在37℃下在60分钟内将乙酰化组蛋白H3或H4的抗体(兔多克隆IgG，Upstate Biotechnologie)以1∶200的稀释比加入。使用山羊抗兔IgG(H+L)人IgG吸附的HRP的结合物(Dako)作为第二抗体(1∶2000稀释)。将细胞冲洗3次并使过氧化物酶底物ABTS在37℃下反应30-60分钟。测量405nm处的OD值。
在减去空白OD值后，用如下公式计算乙酰化的百分比(平均O.D.乙酰化/平均O.D.DMSO对照)/(平均O.D.WSTI/平均O.D.DMSO对照)×100％
还可以通过如下试验进一步评估本发明化合物的效果对8-10周大的雄性NMRI nu/nu-小鼠(每组15只)皮下注射5×106PC-3前列腺癌细胞。第10天，将瘤体积约150mm3的动物随机分配到治疗组。将测试化合物以在7.5％明胶-0.22％ NaCl-悬浮液中的微悬浮体形式给药，基于实际体重，给药体积为10ml/kg。从约第10天到第27天每天进行口服治疗一次，每周治疗5-7次。
肿瘤体积用如下等式确定肿瘤体积＝1/2ab2，其中″a″和″b″分别是肿瘤的长、短直径。
本发明的另一实施方案是一种药物，该药物含有此前所述的通式I化合物作为活性成分，如果需要，还含有可药用的辅料。所述药物，例如药物制剂形式的药物，可以口服给药，例如以片剂，包衣片剂，糖锭剂，硬和软明胶胶囊，溶液剂，乳剂或悬浮剂形式口服。但是，还可以进行直肠给药，例如以栓剂形式，或者可以肠胃外给药，例如以注射液形式。
上述药物制剂可以通过用药学惰性的无机或有机载体加工本发明化合物而获得。例如，可以使用乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其盐等，作为用于片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的这种载体。软明胶胶囊的合适载体为，例如植物油，蜡，脂肪，半固体和液体多元醇等。但是，根据活性物质的性质，软明胶胶囊通常不需要载体。制造溶液或糖浆的合适载体为，例如水，多元醇，甘油，植物油等。栓剂的合适载体为，例如天然或硬化油，蜡，脂肪，半液体或液体多元醇等。
此外，药物制剂可以包含防腐剂，增溶剂，稳定剂，湿润剂，乳化剂，甜味剂，着色剂，食用香料，用于改变渗透压的盐，缓冲剂，掩蔽剂或抗氧化剂。还可以包含其他有治疗价值的物质。
优选的药物制剂包括如下制剂a)片剂配方(湿法造粒)
制造方法1、混合1、2、3和4项，并用纯水造粒。
2、在50℃下干燥颗粒。
3、让颗粒通过合适的研磨设备。
4、加入第5项并混合3分钟；在合适的压力机上压缩。
b)胶囊配方
制造方法1、在合适的混合器中混合1、2、和3项30分钟。
2、加入4和5项并混合3分钟。
3、填充到合适的胶囊中。
其剂量根据各种因素而定，例如给药方式，种类，年龄和/或个体的健康情况。
提供如下实施例和参照是为了有助于理解本发明，本发明的真正范围由所附权利要求阐述。应当理解，可以对所述的方法进行更改而不偏离本发明的精神。
除非另外声明，在如下实施例中(i)蒸发是在真空条件下用旋转蒸发仪进行的，并且处理程序是在通过过滤除去残余固体，例如干燥的试剂之后进行的；(ii)操作是在环境温度下，即在18-25℃的温度范围内，并且在诸如氩气或氮气的惰性气体气氛中进行的。
(iii)柱色谱(采用快速程序)和高压液相色谱(HPLC)是在获自E.Merck，Darmstadt，Germany的Merck Kieselgel二氧化硅或MerckLichroprep RP-18反相二氧化硅上进行的；(iv)给出产率仅用于说明，而不必是可获得的最大值；(v)熔点是用Mettler SP62自动熔点仪，油浴装置或Kofler热板装置测定的；(vi)通式I产物的结构是用核(通常是氢核)磁共振(NMR)和质谱技术(使用APCI的Micromass Platform II机器或使用电喷的Micromass Platform ZMD)；(vii)中间体一般没有完全表征，其纯度是通过薄层色谱估计的；(viii)使用如下缩略语DMF N，N-二甲基甲酰胺；DMSO 二甲亚砜；THF 四氢呋喃；MeOH 甲醇；HCl 盐酸；NaH 氢化钠；CH2Cl2二氯甲烷；H2SO4硫酸
sat. 饱和的sol. 溶液h 小时d 天rt室温eq当量mp熔点[℃]MW calc′d分子量，计算的[g/mol]MW found 分子量，用质谱法测定的[g/mol]实施例15-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2羧酸甲酯向500mg(2.13mmol)5-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯和381mg(2.13mmol)2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-甲醛肟的2ml二氯甲烷溶液中加入2.0ml2.2M氢氧化钠水溶液和902mg(2.55mmol)四丁基铵硫酸氢盐，同时剧烈搅拌。10分钟后，再加入2.0ml 2.2M氢氧化钠水溶液和902mg(2.55mmol)四丁基铵硫酸氢盐。将上述程序再重复一次。20分钟后加入8ml饱和碳酸氢盐水溶液。水相用乙酸乙酯萃取3次，合并的有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥。蒸发溶剂，并对残余物进行硅胶色谱(己烷/乙酸乙酯4∶1，然后3∶1)，得到214mg(0.64mmol)5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸甲酯；MW[M+H]的精确计算值334.07；用质谱法测定的MW[M+H]334.2。
实施例25-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸向200mg(0.60mmol)5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸甲酯的2.4ml THF溶液中加入1.2ml 1M LiOH水溶液，并将反应混合物加热到70℃ 5h。加入水，将混合物酸化并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水洗涤并用Na2SO4干燥，蒸发溶剂，得到190mg(0.59mmol)5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸；MW[M+H]的精确计算值320.06；用质谱法测定的MW[M+H]320.2。
实施例35-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺将100mg(0.31mmol)5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸、65mg(0.47mmol)1-羟基苯并三唑、92mg(0.47mmol)N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺和65μl(0.47mmol)三乙胺的3ml二氯甲烷溶液的溶液搅拌15分钟。在加入68mg(0.63mmol)苯二胺后，将反应混合物搅拌过夜。蒸发溶剂，残余物经制备型HPLC得到88mg(0.21mmol)5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺(17)；MW[M+H]的精确计算值410.12；用质谱法测定的MW[M+H]410.2。
1H-NMR(400MHz，(CH3)2SO)δ＝9.67(s，1H)，8.18(s，1H)，7.85(m，1H)，7.20(m，1H)，7.14-7.09(m，3H)，6.97(m，1H)，6.91(m，1H)，6.77(m，1H)，6.58(m，1H)，5.29(s，2H)，4.90(s，2H)，4.26(m，4H)实施例4以和实施例3所述的类似方式，并且使用如文献中所述的已知方法(例如在标准著作中所述的，例如Houben-Weyl，Methoden der OrganischenChemie，Georg Thieme Verlag，Stuttgart；Organic R eactions，John Wiley &Sons，Inc.，New York)，制备如下化合物
参考文件目录Ansel，H.等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第6版，1995，196和1456-1457页Curtin，M.L.等，J.Med.Chem.41(1998)74-95DE-A 2 062 265EP O 974 576EP-A 0 242 851EP-A 0 847 992FR 2 167 954Hassan，H.等，Indian J.Chem.39B(2000)764-768Houben-Weyl，在Methoden der organischen Chemie，XV/1和XV/2卷，Georg Thieme Verlag，StuttgartKoyama，Y.等，Blood 96(2000)1490-1495Moll，R.等，Z.Chem.17(1977)133-134Organic Reactions，John Wiley & Sons，Inc.，New YorkRastogi，R.和Sharma，S.，Indian J.Chem.，Sect.B，21B(5)(1982)485-487WO 03/01348权利要求
1.一种通式I化合物 通式I其中R1是氢或C1-C4-烷基；R2是芳基，杂芳基或杂环基；这些基团都可以任选被如下基团取代一次或几次烷基；卤素；-O-烷基；-NH(烷基)；-N(烷基)2；或R1和R2连同它们所结合的碳原子一起形成环状烃；以及其可药用的盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1是氢；R2是吡啶基；2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基；苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基；或苯基，该苯基可以任选被如下取代基取代一次或几次卤素；-O-烷基；-NH(烷基)；或-N(烷基)2；及其可药用的盐。
3.根据权利要求1或2的化合物，5-(3，4-二氯-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-亚苄基氨基氧甲基-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-氯-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(3，4-二甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-氟-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(2-氟-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(3-甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯-6-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-三氟甲氧基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-三氟甲基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-二乙基氨基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(4-二丁基氨基-亚苄基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-(吡啶-3-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(吡啶-4-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-(吡啶-2-基亚甲基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
4.根据权利要求1的化合物，其中R1是C1-C4-烷基；R2是苯基或2，3-二氢-苯并呋喃-4-基，它们任选被如下取代基取代一次或几次卤素；烷基；或-O-烷基；及其可药用的盐。
5.根据权利要求1或4的化合物，5-[1-(4-丙基-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(2-甲基-2，3-二氢-苯并呋喃-4-基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(2，4-二氯-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(3，4-二氯-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-[1-(3，4-二甲氧基-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(1-苯基-亚乙基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；或5-[1-(4-氟-苯基)-亚乙基氨基氧甲基]-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
6.根据权利要求1的化合物，其中R1和R2连同它们所结合的碳原子一起形成环状烃；以及其可药用的盐。
7.根据权利要求1或6的化合物，5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺；5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺盐酸盐；5-(茚满-2-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺甲磺酸盐；或5-(茚满-1-亚基氨基氧甲基)-噻吩-2-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺。
8.用于制造通式I化合物的方法，其中(a)将通式II化合物 (通式II)其中R1和R2如权利要求1所定义，和通式III化合物反应， (通式III)，其中Y表示氢或合适的氨基保护基；(b)Y中的氨基保护基，如果存在，将其断开，得到通式I化合物；并且(c)将所述通式I化合物从反应混合物中分离出来，如果需要，将其转化成可药用的盐。
9.一种含有一种或多种权利要求1到7任何一项所要求的化合物和可药用赋形剂的药物。
10.一种用于抑制肿瘤生长的根据权利要求9的药物。
11.权利要求1到7任何一项的化合物用于治疗癌症的用途。
12.权利要求1到7任何一项的化合物用于制造相应的用于抑制肿瘤生长的药物的用途。
全文摘要
本发明的目的是通式I化合物，它们的可药用盐，还有它们的对映异构体形式，非对映异构体和外消旋体；上述化合物的制备，包含它们的药物及其制造，以及上述化合物作为组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的抑制剂并因而在控制或预防如上所述疾病和障碍，或者在制造相应药物中的用途。
文档编号A61K31/44GK1771247SQ200480009270
公开日2006年5月10日 申请日期2004年4月2日 优先权日2003年4月4日
发明者G·费尔蒂希, F·赫廷, M·库毕斯, A·林贝格, U·赖夫, M·魏德纳 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司