核仁蛋白抑制剂的医药用途
【专利摘要】本发明提出一种核仁蛋白抑制剂的用途，所述用途为用于制备治疗或预防肠病毒感染的医药。
【专利说明】核仁蛋白抑制剂的医药用途
【技术领域】
[0001]本发明关于一种核仁蛋白(nucleolin，NCL)抑制剂的医药用途，且特别是用于制备治疗或预防肠病毒感染的医药的用途。
【背景技术】
[0002]肠病毒是一群特定正向单股RNA病毒的总称。肠病毒为经由消化道感染、复制，再扩散至全身各处，其于分类上属于微小核糖核酸病毒科
至今，已发现肠病毒至少有六十多型，分别为:小儿麻痹病毒心)1至3型、A群克沙奇病毒(CrOxsacAieFirw1S X) I 至 22、24 型、B 群克沙奇病毒(CbxSacAieFirw1S i?) I 至 6型、埃可病毒(AcAorirw1S) I至9、11至27、29至33型、及肠病毒68至71型,请参阅AnnuRev Microbiol.1996; 50: 1-24。
[0003]于所有类型的肠病毒中，肠病毒71型为最晚发现的，但其核酸序列已完全了解，请参阅Virus Res.1995; 39(2-3): 195-205。肠病毒71型与其它类型的肠病毒一样，虽然从消化道感染、复制，但却鲜少导致消化道相关的症状。目前，肠病毒71型感染的临床治疗主要有:支持性疗法、及免疫球蛋白注射疗法。“支持性疗法”是遵照感染者呈现的症状来决定投予的药物，如:感染者若发烧时，投予其退烧药物；感染者若并发有脑膜炎时，则投予其降脑压药物。“免疫球蛋白注射疗法”是于感染者出现中枢神经系统等严重症状时始采用的。依此可知，目前肠病毒71型感染的临床治疗手段略显不足。
[0004]本发明人与其研究团队相信对肠病毒71型或其它类型的肠病毒的感染机制了解不够是导致这些病毒感染的治疗手段不足的主因。换言之，若能充分了解肠病毒感染的机制，将有助于肠病毒感染的治疗。至今的文献报导，仅证实少数几个细胞表面接受体与肠病毒附着于细胞或进入至其内有关联，如:B类清道夫接受体2型(scavenger receptorclass B member 2, SCARB_2)、P型选择素醣蛋白配体 l(P_selectin glycoprotein ligandI, PSGL-1),请参阅Front Microbiol.2012; 3: 105。因此,如能进一步发现新的与肠病毒感染有关的细胞表面接受体，利用此发现开发更多种医药不仅可提供肠病毒感染的临床治疗多样化的选择，甚至 有机会大幅抑制肠病毒的感染。
【发明内容】
[0005]本发明其中一个目的在于提供一种新的治疗或预防肠病毒感染的医药。
[0006]于是，为实现上述及/或其它目的，本发明提出一种核仁蛋白抑制剂用于制备治疗或预防肠病毒感染的医药的用途。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1为一免疫沉淀分析的结果，以呈现与肠病毒71型病毒颗粒进行免疫沉淀分析后的细胞膜萃取物的组成；图中简写分别为:M，蛋白质分子量标准液；IP-EV，与肠病毒71型病毒颗粒进行免疫沉淀分析后的细胞膜萃取物。[0008]图2为一病毒覆盖蛋白质分析的结果，以说明神经胺酸酶处理后的细胞膜萃取物与肠病毒71型病毒颗粒的结合。
[0009]图3为免疫沉淀分析的结果，以显示细胞膜萃取物中的核仁蛋白与肠病毒71型病毒颗粒的结合；图中简写为:IP_EV，与肠病毒71型病毒颗粒进行免疫沉淀分析后的细胞膜萃取物。
[0010]图4为酵素连结免疫吸附分析的结果，以证实纯核仁蛋白与肠病毒71型病毒颗粒的结合。
[0011]图5为流式细胞技术的结果，以验证纯核仁蛋白对肠病毒71型病毒颗粒与RD细胞结合的阻止。
[0012]图6为免疫荧光分析的结果，以呈现肠病毒71型与RD细胞上的细胞表面接受体核仁蛋白的结合。
[0013]图7为流式细胞技术的结果，以说明核仁蛋白抗体与B类清道夫接受体2型抗体对肠病毒71型结合至RD细胞的抑制。
[0014]图8为流式细胞技术的结果，以显示核仁蛋白抗体对肠病毒71型结合至RD细胞的阻却为浓度依赖的关系。
[0015]图9为西方点墨法的结果，以证实核仁蛋白及B类清道夫接受体2型的抑制表达。
[0016]图10为流式细胞技术的结果，以验证核仁蛋白的抑制表达可降低细胞表面接受体核仁蛋白的表达。
[0017]图11为流式细胞技术的结果，以呈现核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型品系MP4与细胞结合的影响。
[0018]图12为流式细胞技术的结果，以说明核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型品系6356与细胞结合的影响。
[0019]图13为西方点墨法的结果，以显示核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型病毒颗粒与细胞结合的减少程度。
[0020]图14为定量PCR的结果，以说明核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型感染细胞的影响。
[0021]图15为CCID5tl值分析的结果，以验证核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型感染细胞的影响。
[0022]图16为流式细胞技术的结果，以说明核仁蛋白的抑制表达对不同血清型的肠病毒71型与细胞结合的影响。
[0023]图17 (A)为流式细胞技术的结果，以说明NIH-3T3细胞于转染后表达有人类核仁蛋白。
[0024]图17 (B)为西方点墨法的结果，以显示NIH-3T3细胞于转染后表达有人类核仁蛋白。
[0025]图18 (A)为流式细胞技术的结果，以证实L929细胞于转染后表达有人类核仁蛋白。
[0026]图18 (B)为西方点墨法的结果，以验证L929细胞于转染后表达有人类核仁蛋白。
[0027]图19为流式细胞技术的结果，以呈现不同血清型的肠病毒71型结合至转染有含人类核仁蛋白基因的质粒的NIH-3T3细胞。[0028]图20为流式细胞技术的结果，以说明不同血清型的肠病毒71型结合至转染有含人类核仁蛋白基因的质粒的L929细胞。
[0029]图21为细胞病变效应的结果，以显示不同细胞于肠病毒71感染后是否有细胞病变效应。
【具体实施方式】
[0030]为让本文更能明显易懂，特别针对本文使用的用语予以定义，分述于下:
用语“治疗”，意指给药至一受感染的个体，以达到降低、减缓或终止感染的增加或蔓延、或降低感染、或治愈感染的目的。
[0031]用语“预防”，意指给药至一未受感染的个体，以达到防范感染、或降低、或减缓感染的增加或蔓延的目的。
[0032]用语“抑制剂”，意指一可抑制特定因子活性的物质。因此，文中“核仁蛋白抑制剂”可抑制核仁蛋白的活性，“B类清道夫接受体2型抑制剂”可抑制B类清道夫接受体2型的活性，“P型选择素醣蛋白配体I抑制剂”可抑制P型选择素醣蛋白配体I的活性。
[0033]用语“抗体” ，意指一由二条H链和二条L链以双硫键键结而成，并可辨识、中和特定抗原的Y型蛋白。因此，文中“核仁蛋白抗体”可辨识并中和核仁蛋白，文中“B类清道夫接受体2型抗体”可辨识并中和B类清道夫接受体2型，文中“P型选择素醣蛋白配体I抗体”可辨识并中和P型选择素醣蛋白配体I。
[0034]用语“可溶性接受体(soluble receptor)”,意指一可与特定因子结合的非穿膜接受体。因此，文中“核仁蛋白可溶性接受体”可与核仁蛋白结合，文中“B类清道夫接受体2型可溶性接受体”可与B类清道夫接受体2型结合，文中“P型选择素醣蛋白配体I可溶性接受体”可与P型选择素醣蛋白配体I结合。
[0035]用语“拮抗剂(antagonist)”，意指一可与特定因子竞争的物质。因此，文中“核仁蛋白拮抗剂”可与核仁蛋白竞争，文中“B类清道夫接受体2型拮抗剂”可与B类清道夫接受体2型竞争，文中“P型选择素醣蛋白配体I拮抗剂”可与P型选择素醣蛋白配体I竞争。
[0036]用语“小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)”,意指一长度约为 20-25 个核苷酸，且可特异地干扰特定基因表达的双股RNA。因此，文中“核仁蛋白小干扰RNA”可特异地干扰核仁蛋白基因的表达，文中“B类清道夫接受体2型小干扰RNA”可特异地干扰B类清道夫接受体2型基因的表达，文中“P型选择素醣蛋白配体I小干扰RNA”可特异地干扰P型选择素醣蛋白配体I基因的表达。
[0037]本发明是依一项不可预料的发现完成的，其中醣蛋白质粒学(glycoproteomics)的研究结果显示肠病毒71型可与细胞表面接受体核仁蛋白结合，并透过此接受体进入至细胞内。根据上述发现，再进一步证实阻断细胞表面接受体核仁蛋白即可有效抑制肠病毒71型黏附于及/或进入至细胞。
[0038]于是，本发明其中一个实施方式揭露一种核仁蛋白抑制剂的用途，此用途为用于制备治疗或预防肠病毒感染的医药。本实施方式的核仁蛋白抑制剂可给药至一需治疗或预防的个体内。在个体内，核仁蛋白抑制剂可透过抑制肠病毒结合至个体的细胞表面来达到治疗或预防的效果；更具体地说，系透过抑制肠病毒进入个体的细胞内来达到治疗或预防的效果。[0039]在本实施方式中，核仁蛋白抑制剂的实例可以为但不限于:核仁蛋白抗体、核仁蛋白可溶性接受体、核仁蛋白拮抗剂、或核仁蛋白小干扰RNA。
[0040]在本实施方式中,肠病毒可以为但不限于:肠病毒71型。从下文实施例可知,肠病毒71型的血清型可以为但不限于:MP4、C2、B4、C4、*B5。
[0041]目前的文献报导已指出某些物质可有效地抑制肠病毒的感染，所以这种习用的物质可有目的地添加至本实施方式的医药。因此，本实施方式的医药尚含有但不限于:B类清道夫接受体2型抑制剂、或P型选择素醣蛋白配体I抑制剂。而，B类清道夫接受体2型抑制剂的实例可以为但不限于:B类清道夫接受体2型抗体、B类清道夫接受体2型可溶性接受体、B类清道夫接受体2型拮抗剂、或B类清道夫接受体2型小干扰RNA ；P型选择素醣蛋白配体I抑制剂的实例可以为但不限于:P型选择素醣蛋白配体I抗体、P型选择素醣蛋白配体I可溶性接受体、P型选择素醣蛋白配体I拮抗剂、或P型选择素醣蛋白配体I小干扰RNA。
[0042]须提出的是，本实施方式的医药可依个体的实际需求呈现不同的剂型，如:锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、乳剂、酊剂、静脉注射液、干粉注射液、悬液注射液、或干粉悬液注射液。而且,本实施方式的医药可依个体的实际需求来决定投予的剂量、方式、或频率。
[0043]通过以下述实施例，予以详细说明本发明上述的实施方式。
[0044]实验方法与材料 《细胞与病毒的培养》
RD (Rhabdomyosarcoma)人类横纹肌瘤细胞、L929小鼠纤维母细胞、及NIH-3T3小鼠胚胎纤维母细胞种植于外加1%青霉素-链霉素(penicillin streptomycin)和10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS )的 DMEM 培养基(Dulbecco，s Modified Eagle Medium,购自Gibco)。这些细胞置于含5% 二氧化碳的37°C培养箱中培养。临床上分离得到的肠病毒71型的品系 89N-0363(B4)、6356(C2)、94N-2873(C4)、M448(B4)及 MP4 (小鼠适应品系)为国立成功大学医学检验生物技术学系王贞仁教授所提供的。这些病毒在RD细胞内繁殖。繁殖时，先将细胞种植于外加1%青霉素-链霉素和10%胎牛血清的DMEM培养基，再置于35°C培养箱中培养，直到90%的细胞病变效应(cytopathic effect)发生。接着，收集培养基的病毒上清液,并利用溶斑形成分析测定病毒含量(titer)。
[0045]《溶斑形成分析(Plaqueforming assay)))
种植RD细胞于24孔培养盘的孔内，并培养至少16小时。以病毒生长培养基连续稀释病毒后，接种至各孔内(100 μ I/孔)。经I小时的培养后，添加900 μ I外加2%胎牛血清的1%甲基纤维素(methylcellulose)DMEM培养基至各孔内，并于35°C下再培养72小时。接着，移除培养基的上清液，并以4%甲醒(formaldehyde)固定剩余的细胞30分钟。最后，以5%结晶紫(crystal violet)对固定后的细胞染色。
[0046]《蛋白质的过度表达(overexpression)与抑制表达(knockdown)》
利用引物对(序列各为:5 ? -catRaattcatRRtRaaRctcRer-3 ’、5’ -gactctagaacaaccccacgaacg-3’,底线标记处各代表EcoRI与XbaI的剪切位)扩增RD细胞的cDNA来取得人类核仁蛋白基因表达区域的全长。将得到的DNA片段黏合至表达质粒 p3XFLAG-Myc_CMV_25 (购自 Sigma-Aldrich)。小发夹 RNA (short hairpin RNA, shRNA)为购自 中央研究院国家型干扰性核醣核酸核心设施。以TurboFect转染试剂(购自Thermo)转染质粒DNA至细胞内，并将转染后的细胞培养至含G418 (购自Sigma-Aldrich)的培养基48小时，以筛选出所需的细胞。核仁蛋白抗体和B类清道夫接受体2型抗体为购自Abeam。肠病毒71型抗体是购自Millipore。
[0047]《酵素连结免疫吸附分析(Enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA)))
以1%BSA缓冲液稀释肠病毒71型病毒颗粒、或核仁蛋白重组蛋白(购自Abnova)(100ng/mL)后，添加至96孔微量测试盘的孔内。经2小时培养后，以于PBS的0.5% Tween20缓冲液清洗各孔去除未黏结的蛋白质。接着，初级抗体(核仁蛋白抗体或肠病毒71型抗体)添加至各孔内，并于37°C下作用I小时。经清洗后，加入抗小鼠或大鼠的IgG-HRP抗体至各孔内。经HRP受催化下，使用ELISA测读机(购自PerkinElmer)测量各孔发出的讯号强度。
[0048]《流式细胞技术(Flowcytometry)》
以FACS缓冲液(于IXPBS的0.l%NaN3、4%FCS)清洗细胞二次后，将细胞与初级抗体于4°C下共同反应I小时。接着，于FACS缓冲液清洗后，添加抗小鼠或大鼠的Alexa 488结合的IgG抗体至细胞内，并另于4°C下作用30分钟。最后，利用FACSCalibur (购自BDBiosciences)测量细胞发出的讯号强度。
[0049]《病毒结合分析》
先于4°C下以IOXCCID5ci剂量的肠病毒71型感染RD细胞。以FACS缓冲液清洗未结合的病毒三次后，以4%多聚甲醒(paraformaldehyde)固定细胞10分钟。接着，加入肠病毒71型抗体至固定后的细胞，并于4°C下作用I小时。以抗小鼠FITC结合的抗体对细胞染色，并利用FACSCalibur测量细胞发出的讯号强度。
[0050]《病毒感染分析》
种植3X105个RD细胞于6孔培养盘的孔内，并添加IOXCCID5ci剂量的病毒于其中。经I小时培养后，清洗各孔去除未结合的病毒，剩余的病毒再与细胞在病毒培养基内经不同时间点共同培养。用RNA萃取套组(购自Geneaid)萃取培养后的病毒的总量RNA,再利用LightCycler RNA Master Hybprobe 套组(购自 Roche)对萃取到的 RNA 定量。
[0051]《免疫沉淀分析(Immunoprecipitationassay)与西方点墨法(Westernblotting)))
将目标抗体与蛋白质G琼脂珠(购自Sigma-Aldrich)于4°C下作用2小时。经清洗后，蛋白质破碎物(lmg/mL)加入到作用后的混合物中，并于4°C下反应16小时。清洗所得的混合物去除未结合的蛋白质；而剩余的蛋白质先经甘胺酸-盐酸(PH2.7)洗提，再以0.1N氢氧化钠中和。中和后的产物的上清液与SDS样品缓冲液混合，于95°C下进行变性反应5分钟，并于10%或12%的SDS-PAGE胶体上分离。于胶体转溃到PVDF (poly vinylidenefluoride)膜后，先以含5%牛奶的PBST缓冲液块缓处理PVDF膜，再于4°C下与初级抗体作用至隔夜。之后，PVDF膜于室温下与HRP结合的次级抗体反应I小时。最后，利用LAS-3000化学荧光系统(购自Fujifilm Holding C0., Ltd)侦测膜发出的讯号强度。
[0052]《免疫突光分析(Immunofluorescenceassay)))
种植IXlO5个RD细胞于腔室培养玻片后，添加或未添加IOXCCID5ci剂量的病毒至玻片，并于4°C下培养I小时。以PBS清洗玻片去除未结合的病毒,再利用4%甲醒固定玻片5分钟。接着，先以初级抗体于37°C下对细胞染色2小时，后以次级抗体于相同温度下对细胞再次染色I小时。最后，透过封片胶将盖玻片覆盖于腔室培养玻片上，并于400X放大倍率下以共聚焦显微镜(购自OLYMPUS)观察玻片。
[0053]实验结果
《核仁蛋白为与肠病毒71型结合的细胞表面接受体的确认》
首先，确认与肠病毒71型病毒颗粒结合的细胞表面接受体。先萃取RD细胞或SK-N-SH人类神经胚胎瘤细胞的细胞膜，并以朝鲜槐凝集素(Maackia amurensis agglutinin, MAA)/接骨木凝集素(Sambucus nigra agglutinin, SNA)琼脂管柱纯化萃取物。唾液酸(sialicacid)会影响细胞表面接受体与肠病毒71型的结合,遂以神经胺酸酶(neuraminidase)处理纯化后的萃取物去除α 2-3唾液酸化醣蛋白和α 2-6唾液酸化醣蛋白。将剩余的细胞膜萃取物与肠病毒71型病毒颗粒进行免疫沉淀分析来获得与肠病毒71型病毒颗粒结合的细胞表面接受体。于免疫沉淀分析产物胶体电泳后，可观察到数个条带于胶图上；尤其如图1所示，位于95至130kDa位置的条带最为显著。请参照图2，病毒覆盖蛋白质分析(virus-overlay protein binding assay, VOPBA)的结果也说明神经胺酸酶处理后的细胞膜萃取物与肠病毒71型病毒颗粒的结合。上述图1和图2上的这些条带另利用质谱仪(mass spectrometry, MS)分析其组成,而于这些组成中，核仁蛋白最为引起注意。
[0054]其次，利用免疫沉淀分析来评估细胞膜萃取物中的核仁蛋白与肠病毒71型病毒颗粒的结合。如第3图所示，萃取物中的核仁蛋白可于唾液酸存在或不存在下与肠病毒71型病毒颗粒结合。请参照图4,说明纯核仁蛋白以浓度依赖(dose-dependent)的关系结合至肠病毒71型病毒颗粒；且如图5所示，纯核仁蛋白还可降低肠病毒71型病毒颗粒与RD细胞的结合。
[0055]再者，如图6所示，共聚焦显微镜观察到RD细胞上的细胞表面接受体核仁蛋白与肠病毒71型的共定位 (colocalization),此意谓着肠病毒71型能与细胞表面接受体核仁蛋白结合。请参照图7，B类清道夫接受体2型抗体与核仁蛋白抗体均成功阻止肠病毒71型结合至RD细胞。请再参照图8，核仁蛋白抗体系以浓度依赖的关系达到这种阻止效果。
[0056]《核仁蛋白的抑制表达对肠病毒71型结合或感染至细胞的影响》
为评估核仁蛋白于肠病毒71型感染的角色，透过小发夹RNA来完成RD细胞内核仁蛋白的抑制表达。此外，RD细胞内B类清道夫接受体2型的抑制表达亦同时完成，以作为对照。如图9所示，B类清道夫接受体2型的抑制表达不会影响核仁蛋白的表达，反之亦然。而且，如图10所示，更确定核仁蛋白的抑制表达会减少细胞表面接受体核仁蛋白的表达。请另参照图11、12，核仁蛋白的抑制表达能减少约60至70%的肠病毒71型与细胞的结合。图13显示的西方点墨法的结果及其定量结果更说明这种结合的减少程度。此外，如图14所示，定量PCR结果指出于病毒感染3小时或6小时后，经核仁蛋白抑制表达的细胞所含的病毒RNA减少约20至35%。
[0057]为进一步证实核仁蛋白与B类清道夫接受体2型的抑制表达对肠病毒71型感染及后续复制的影响，取感染后的细胞的上清液并测定其CCID5tl值。请参照图15，经核仁蛋白与B类清道夫接受体2型的抑制表达的细胞CCID5tl值均显著地低于野生型细胞。
[0058]为再进一步证实核仁蛋白调控的肠病毒71型感染是否为血清特异性的，以不同血清型的肠病毒71型，如MP4、B4、B5、C2与C4感染经核仁蛋白的抑制表达的细胞。请参照图16，所测试的血清型的肠病毒71型对经核仁蛋白的抑制表达的细胞均有相对低的结合能力。
[0059]《核仁蛋白过度表达对肠病毒71型结合或感染至非感受细胞的影响》
利用转染含人类核仁蛋白基因的质粒至非感受细胞L929细胞与NIH-3T3细胞，来让这些细胞表达人类核仁蛋白。如图17 (A)及17 (B)，NIH-3T3细胞于转染后表达有人类核仁蛋白，且所表达的蛋白质位于细胞表面。同样地，如图18 (A)及18 (B)，L929细胞于转染后表达有人类核仁蛋白，且所表达的蛋白质位于细胞表面。另如图19、20所示，转染后的细胞实质上有较未转染的细胞高的肠病毒71型结合能力。
[0060]此外，分别观察RD细胞、转染有含杂乱(scramble)序列的质粒的NIH-3T3细胞、以及转染有含人类核仁蛋白基因的质粒的NIH-3T3细胞于肠病毒71型感染后是否有细胞病变效应发生。如图21所示，于感染9小时后，RD细胞及转染有含人类核仁蛋白基因的质粒的NIH-3T3细胞均可见到细胞病变效应；反观，转染有含杂乱序列的质粒的NIH-3T3细胞则没有见到细胞病变效应。
[0061]综合上述实施例，细胞表面接受体核仁蛋白可协助肠病毒结合至及/或进入细胞。再者，上述实施例更证实核仁蛋白抑制剂，如所采用的核仁蛋白抗体、或核仁蛋白小干扰RNA，可降低肠病毒至细胞表面的结合，并进一步地阻断病毒颗粒进入到细胞内。由此可知，核仁蛋白抑制剂具有作为治疗肠病毒感染的医药的潜力，并可单独或搭配其它物质来治疗肠病毒的感染。
[0062]以上所述，仅为本发明的较佳实施例，但不能以此限定本发明实施的范围；故，凡依本发明申请专利范围及发明说明书内容所作的简单的等效改变与修饰，皆仍属本发明专利涵盖的范围内。
【权利要求】
1.一种核仁蛋白(nucleolin, NCL)抑制剂在用于制备治疗或预防肠病毒感染的医药中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述核仁蛋白抑制剂为核仁蛋白抗体、核仁蛋白可溶性接受体(soluble receptor)、核仁蛋白拮抗剂(antagonist)、或核仁蛋白小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述肠病毒为肠病毒71型。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述肠病毒71型的血清型为MP4、C2、B4、C4、或B5。
5.如权利要求3所述的用途，其中所述核仁蛋白抑制剂为核仁蛋白抗体、或核仁蛋白小干扰RNA。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述核仁蛋白抑制剂用以抑制所述肠病毒结合至需该治疗或预防的个体的细胞表面。
7.如权利要求6所述的用途，其中所述核仁蛋白抑制剂用以抑制所述肠病毒进入该细胞内。
8.如权利要求1所述的用途，其中所述医药还含有: 一 B类清道夫接受体 2 型(scavenger receptor class B member 2, SCARB-2)抑制剂。
9.如权利要求8所述的用途，其中所述B类清道夫接受体2型抑制剂为B类清道夫接受体2型抗体、B类清道夫接受体2型可溶性接受体、B类清道夫接受体2型拮抗剂、或B类清道夫接受体2型小干扰RNA。
10.如权利要求1所述的用途，其中所述医药尚还有: 一 P 型选择素醣蛋白配体 I (P-selectin glycoprotein ligand I, PSGL-1)抑制剂。
11.如权利要求10所述的用途，其中所述P型选择素醣蛋白配体I抑制剂为P型选择素醣蛋白配体I抗体、P型选择素醣蛋白配体I可溶性接受体、P型选择素醣蛋白配体I拮抗剂、或P型选择素醣蛋白配体I小干扰RNA。
【文档编号】A61K45/00GK103948922SQ201410089623
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】张权发, 苏珮谊 申请人:张权发