本发明涉及化妆品领域，具体涉及复合脂质体及其制备方法和应用。
背景技术：
：脂质体是一种由排列有序的磷脂双分子层组成的多层微囊结构，其结构类似生物膜。囊泡内为内水相，通常用于包裹水溶性药物的场所；磷脂双分子层为疏水层，通常用于包裹脂溶性药物。脂质体具有很多优良的性质，如降低药物毒性、提高药物的稳定性、缓释性、透皮吸收效率高、可以携带药物进入细胞等。最近，有关脂质体用于化妆品行业和食品行业的文献报道也越来越多。大部分的活性药物存在水溶性差，吸收率低，剂量低等缺点，较难普遍适用于化妆品领域。且由于人体皮肤具有天然的屏障功能，药物的透皮渗透吸收及主动吸收会受到明显的影响和制约，从而大大降低或削弱药物应具有的生物学作用和疗效。脂质体与生物膜结构类似，利用脂质体包裹技术能够增加药物进入皮肤角质层的透过量，避免药物因透过皮肤量过少而失去功效。同时脂质体能够持续停留在皮肤角质层，对表皮缓慢释放药物，提高药物的持续性功效。且脂质体本身无毒性，在体内能自主完成生物降解，也不产生皮肤刺激性，是皮肤美容及化妆品应用的理想载体。然而，现有的脂质体在体外存在易氧化、药物渗漏，脂质体颗粒间容易发生自发地聚集导致体系分层、产生沉淀等一系列热力学不稳定的问题，导致脂质体在实际应用中存在困难。此外，脂质体在储存过程中还会存在粒径增大的问题，粒径过大的脂质体难以穿透皮肤，从而使药物功效降低。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种具有协同增效的美白能力且稳定性高的复合脂质体及其制备方法和应用。为了实现上述目的，本发明一方面提供一种复合脂质体的制备方法，该方法包括：(1)在有机溶剂中，将光甘草定及其类似物中的一种或多种、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物进行混合；(2)将步骤(1)所得混合物中的有机溶剂除去以得到薄膜状剩余物；(3)在含白金的含水溶剂存在下使得步骤(2)所得薄膜状剩余物形成脂质体；其中，所述脂肪酸类化合物为c8-c20的脂肪酸及其盐中的一种或多种。本发明第二方面提供了由上述方法制得的复合脂质体。本发明第三方面提供了上述脂质体在制备美白和抗氧化产品中的应用。本发明第四方面提供了含有上述脂质体的化妆品。本发明的复合脂质体中的有效活性成分光甘草定及其类似物与白金之间具有良好的协同效应，能够获得协同增效的美白效果。特别是，将本发明的由磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物形成的脂质体作为上述有效活性成分的载体时，能够表现出特别低的细胞毒性，便于输送和应用。具体实施方式在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。本发明一方面提供一种复合脂质体的制备方法，该方法包括：(1)在有机溶剂中，将光甘草定及其类似物中的一种或多种、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物进行混合；(2)将步骤(1)所得混合物中的有机溶剂除去以得到薄膜状剩余物；(3)在含白金的含水溶剂存在下使得步骤(2)所得薄膜状剩余物形成脂质体；其中，所述脂肪酸类化合物为c8-c20的脂肪酸及其盐中的一种或多种。本发明的发明人惊喜地发现，将光甘草定及其类似物中的一种或多种与白金组合使用时，能够获得协同增效的美白和抗氧化效果。尤其是与本发明的由磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物形成的脂质体作为上述有效活性成分的载体时，能够表现出特别低的细胞毒性。根据本发明，步骤(1)中，在有机溶剂中，将所述光甘草定及其类似物、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物进行混合，可以使得所述光甘草定及其类似物、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物在有机溶剂中溶解，也可以使得它们彼此充分接触。其中，所述光甘草定及其类似物优选为光甘草定和/或甘草黄酮。根据本发明，所述磷脂可以为本领域常规用于制备脂质体的任何磷脂类化合物，可以是天然磷脂(卵磷脂、脑磷脂、心磷脂等)，也可以是合成磷脂，例如所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(dmpc)、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇中的一种或多种。考虑到所述磷脂与本发明的胆固醇、脂肪酸类化合物之间的配合作用，优选地，所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种，更优选为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种。根据本发明，所述脂肪酸类化合物对于脂质体具有一定的改性作用，特别是在以特定的用量与特定用量比例的本发明的磷脂和胆固醇配合下，能够制得稳定性提高的脂质体，而且这样的脂质体可以以更高的药物包封率包封药物，也利于脂质体在化妆品等方面的应用。所述脂肪酸类化合物为c8-c20的脂肪酸及其盐中的一种或多种，其中，c8-c20的脂肪酸的盐可以是其碱金属盐、碱土金属盐等。优选地，所述脂肪酸类化合物为辛酸、辛酸钠、辛酸钾、辛酸钙、辛酸镁、癸酸、癸酸钠、癸酸钾、癸酸钙、癸酸镁、月桂酸、月桂酸钠、月桂酸钾、月桂酸钙、月桂酸镁、十四烷酸、十四烷酸钠、十四烷酸钾、十四烷酸钙、十四烷酸镁、棕榈酸、棕榈酸钠、棕榈酸钾、棕榈酸钙、棕榈酸镁、硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸钾、硬脂酸钙、硬脂酸镁、油酸、油酸钠、油酸钾、油酸钙、油酸镁、亚油酸、亚油酸钠、亚油酸钾、亚油酸钙、亚油酸镁、花生酸、花生酸钠、花生酸钾、花生酸钙和花生酸镁中的一种或多种，更优选为硬脂酸钠、硬脂酸钾、硬脂酸镁、棕榈酸钠、棕榈酸钾、棕榈酸钙和棕榈酸镁中的一种或多种。优选地，所述磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物的用量的重量比为100：10-70：1-50，优选为100：20-60：2-30，优选为100：20-55：5-25，优选为100：25-45：8-20，更优选为100：30-45：8-15。其中，优选地，所述光甘草定及其类似物与磷脂的重量比为5-25：100，优选为8-20：100，更优选为10-15：100。根据本发明，尽管所述有机溶剂可以采用能够基本溶解所述光甘草定及其类似物、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物的任何种类的、且易于除去的有机溶剂，但是为了便于所述光甘草定及其类似物、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物能够在更为适宜的溶剂气氛中获得更好的结合，以获得稳定性更高、粒径更为适合的脂质体，优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂为第一有机溶剂与第二有机溶剂的混合物。其中，所述第一溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、正丁醇和乙酸乙酯中的一种或多种，优选为甲醇和/或乙醇。所述第二溶剂为氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、乙醚和四氢呋喃中的一种或多种，优选为氯仿和/或二氯甲烷。根据本发明，优选地，所述第一有机溶剂与第二有机溶剂的重量比为100：10-100，优选为100：30-90，更优选为100：40-85。根据本发明，所述有机溶剂的用量可以在较宽范围内变动，优选地，所述有机溶剂的用量使得，所述光甘草定及其类似物、磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物的总浓度为2-10重量％，优选为2.5-6重量％，例如为2.9-4.7重量％。根据本发明，步骤(2)中，通过将步骤(1)所得混合物中的有机溶剂除去，便可获得薄膜状剩余物，这样在步骤(3)加入水后，就可促使脂质体的形成。其中，该有机溶剂的除去可以在减压条件下进行，优选地，步骤(2)中，除去有机溶剂的温度为50-100℃。这样的过程例如可以将步骤(1)所得混合物置于反应容器中，采用旋转蒸发仪在减压条件下进行，从而在反应容器壁面上便可形成薄膜状剩余物。根据本发明，步骤(3)中，所述含白金的含水溶剂可以是白金在水中的分散体，也可以是含有少量其他不影响本发明的脂质体的成形的其他溶剂的水溶液与白金的分散体，优选采用水。所述白金是铂金属，优选为粒度为5-200nm的白金粒子。该白金在含水溶剂中的浓度可以在较宽范围内变动，为了便于脂质体的形成，优选地，步骤(3)中，所述含白金的含水溶剂中，所述白金的含量为10-1000ppm(重量/重量)，优选为50-500ppm。优选地，步骤(3)中，所述磷脂和所述含白金的含水溶剂的用量的重量比为1：20-100，优选为1：30-80，更优选为1：40-60。采用该用量下的含水溶剂，可以获得粒径更为适合的脂质体。根据本发明，优选地，步骤(3)包括：将所述含白金的含水溶剂与步骤(2)所得薄膜状剩余物进行加热处理，而后再进行均质处理。其中，所述加热处理的条件优选包括：温度为40-80℃，时间为0.5-3h。所述均质处理的条件优选包括：先在5,000-20,000rpm的转速下分散10-50min，而后在500-1500bar且20-60hz的频率超声下高压匀质2-6次。所述匀质处理例如可以在ika均质机、ika高压均质机中进行。本发明第二方面提供了由上述方法制得的复合脂质体。本发明的上述方法能够获得稳定性较高的，毒性较低的，具有协同增效的美白和抗氧化能力的复合脂质体。优选地，所述复合脂质体中，以干重计，所述光甘草定及其类似物的含量为1.5-10重量％，所述白金的含量为0.01-0.1重量％。其中，所述复合脂质体中，优选地，所述光甘草定及其类似物包含于所述脂质体的磷脂双分子层的疏水夹层中，所述白金包含于所述脂质体的中部(中部腔体内)。本发明第三方面提供了上述脂质体在制备美白和抗氧化产品中的应用。本发明第四方面提供了含有上述脂质体的化妆品。本发明的复合脂质体中的有效活性成分光甘草定及其类似物与白金之间具有良好的协同效应，能够获得协同增效的美白和抗氧化效果。特别是，将本发明的由磷脂、胆固醇和脂肪酸类化合物形成的脂质体作为上述有效活性成分的载体时，能够表现出特别低的细胞毒性，便于输送和应用。以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例和对比例中：白金粒子是购自mijinanotechco.,ltd.的粒度为5-200nm的白金粒子。光甘草定购自青海省青海湖药业有限公司。实施例1-30本实施例用于说明本发明的脂质体及其制备方法。(1)将10g总用量的磷脂、胆固醇、脂肪酸类化合物和光甘草定溶解于溶剂中(它们的种类和各自所占重量份见表1所示)；(2)将所得溶液于茄型瓶中采用旋转蒸发仪进行减压旋转蒸发，减压旋转蒸发的条件包括：温度为60℃，转速为90rpm，时间约为30min；以除去溶剂，得到薄膜状剩余物；(3)将含白金粒子的水(重量是磷脂的50倍，白金粒子的浓度见表1所示)加入到上述茄型瓶以与薄膜状剩余物接触，并采用旋转蒸发仪于65℃、90rpm下旋转加热1h；(4)将所得混合物于ika均质机中设置10,000rpm下均质约10min，再经过ika高压均质机于1000bar且50hz下循环均质3次(总时长约20min)，得到脂质体；其中，仅实施例2(其他的实施例都采用上面描述的操作参数)中：步骤(2)减压旋转蒸发的条件包括：温度为80℃，转速为100rpm，表压为50kpa，时间约为30min；步骤(3)含白金粒子的水(重量是磷脂的60倍)加入到上述茄型瓶以与薄膜状剩余物接触，并采用旋转蒸发仪于55℃、150rpm下旋转加热1.5h；步骤(4)ika均质机中在15,000rpm下均质5min，再经过ika高压均质机于1000bar且50hz频率下循环均质3次(总时长约15min)，得到脂质体。对比例1根据实施例1所述的方法，不同的是，不采用白金粒子和光甘草定，从而得到脂质体。对比例2根据实施例1所述的方法，不同的是，不采用光甘草定，从而得到脂质体。对比例3根据实施例1所述的方法，不同的是，不采用白金粒子，从而得到脂质体。对比例4根据实施例1所述的方法，不同的是，不采用硬脂酸钠，从而得到脂质体。表1测试例1光甘草定包封率测定：以甲醇为溶剂配制系列浓度梯度的光甘草定标准液，利用紫外分光光度计在280nm下，以甲醇为参比液分别测定不同浓度的光甘草定标准溶液的吸光度，制作光甘草定浓度-吸光度标准曲线。取适量的脂质体溶液，采用微滤离心法得到游离药物的水溶液，用甲醇稀释一定倍数，利用紫外分光光度计在280nm波长下，以甲醇为参比液，测定样品溶液的吸光度。以甲醇且相同的稀释倍数将脂质体溶液、空白脂质体溶液进行稀释并测定其吸光度，通过光甘草定标准曲线换算药物含量，采用公式(1)计算光甘草定的包封率。白金包封率测定：以纯水为溶剂配制系列浓度梯度的白金粒子标准液，利用紫外分光光度计在205nm下，以纯水为参比液分别测定不同浓度的白金粒子标准溶液的吸光度，制作白金粒子浓度-吸光度标准曲线。取适量的脂质体溶液，用水稀释一定倍数，利用紫外分光光度计在205nm波长下，以纯水为参比液，测定样品的吸光度。以水且相同的稀释倍数将脂质体溶液、空白脂质体溶液进行稀释并测定吸光度，通过白金粒子标准曲线换算药物含量，采用公式(1)计算白金粒子的包封率：包封率(％)＝(1－w未包/w总)×100％(1)，其中，w未包和w总分别表示脂质体游离的药量和总投料量。结果如表2所示：表2测试例2测量上述脂质体的起始粒径，以及将上述脂质体在室温(约25℃)下放置两周后测试其粒径，其结果见表3所示。其中，粒径变化率为：(两周后的粒径-起始粒径)/起始粒径×100％。表3通过表3的结果可以看出，本发明的脂质体具有更好的稳定性，经过长时间放置后，有的粒径甚至具有降低的趋势。测试例3：体外对hacat(人表皮角质化)细胞的毒性实验测试细胞的培养条件：将hacat细胞培养于含10重量％胎牛血清的dmem高糖培养基中，37℃、5重量％co2饱和湿度培养箱孵育。测试方法：取出细胞培养瓶，吸除培养液，加入pbs溶液洗净细胞后吸除pbs溶液；向细胞培养瓶加入胰酶(trypsin-edta胰酶，gbico)，分散细胞；取1ml细胞悬液用于细胞计数，计算后添加100μl稀释好的细胞悬液于96孔板中，使其浓度为1.0×104cells/well，放入co2培养箱培养24h；分别取1μl样品溶液(样品包括光甘草定和上述脂质体)于对应的96孔板中，使各孔的样品溶液浓度分别为10μg/ml(脂质体的用量使得光甘草定的含量为该设置浓度)，同时设置空白孔(加入1μl的95％乙醇)，将细胞培养孔放入培养箱培养48h；将96孔板倾倒含样品的培养基后，每孔加入100μl稀释10倍的cck-8试剂(jm754)，于co2培养箱中培养2～2.5h；取出96孔板，用酶标仪在450nm处测定吸光度，按照以下公式计算细胞存活率：细胞存活率＝(细胞总数-死亡细胞数)/细胞总数*100％。结果见表4所示。表4通过表4的数据可以看出，本发明的药物组合物形成的脂质体具有较低的毒性，特别是采用优选的脂质体下，毒性更低。测试例4：体体外对b16细胞(黑色素细胞)的美白作用实验测试细胞的培养条件：将b16细胞培养于含10重量％胎牛血清的dmem高糖培养基中，37℃、5重量％co2饱和湿度培养箱孵育。测试方法：将b16细胞从细胞培养瓶中剥离后计数，添加稀释好的细胞悬液于6孔板中，放入co2培养箱培养24h；吸除6孔板中原有的培养基，每孔加入等量的pbs清洗一次；每孔加入1.98ml含msh(促黑激素，购自calbiochbm公司)的dmem溶液，同时设置空白孔，即空白孔加入不含msh的dmem溶液，将培养板放入co2培养箱培养约2.5h；配制一定浓度的样品溶液，于6孔板中每孔加入20μl样品溶液，同时设置阴性对照(即仅含msh不含样品溶液)，使每孔中样品溶液的浓度依次为2μg/ml，将培养板放入co2培养箱培养72h；吸除6孔板中的培养基，用pbs清洗一次，用等量的胰酶处理每孔细胞后回收细胞至离心管中；取1/9～1/5上述细胞液至离心管中并离心弃去液体，加入1重量％tritonx-100(聚乙二醇辛基苯基醚)的pbs溶液，震荡，使用bca蛋白定量试剂盒进行总蛋白定量；将剩余的细胞悬液离心后弃去液体，用pbs清洗，根据蛋白定量结果加入一定量的1mnaoh，使溶液总蛋白浓度相同，于60℃加热2min，往96孔板上样，405nm下测定od值。结果见表5所示。表5单位蛋白黑色素含量，％无msh空白组100含msh空白组240样品浓度2μg/ml实施例1165实施例2167实施例3160实施例4174实施例5155实施例6158实施例7152实施例8177实施例10168实施例11154实施例12152实施例13182实施例14177实施例15175实施例16184实施例17170实施例18175实施例19185实施例20177实施例25170实施例26162实施例29188实施例30160对比例1238对比例2225对比例3195对比例4190光甘草定200通过表5的数据可以看出，本发明的药物组合物能够获得协同增效的美白效果，特别是采用优选的脂质体下，美白效果更佳。以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。当前第1页12