ll结果，右图示统计结果。图B 示hsa-miR-487a促进肝癌细胞的迀移能力。左图示划痕愈合结果，右图示统计结果；
[0033] 图12示体内抑制hsa-miR-487a可减少体内抑制肿瘤的生长与肺部转移。图A左 侧示将各肝癌细胞系注射到不同裸鼠皮下，一个月后处死切取同等大小瘤块种植在另一只 裸鼠肝脏中，再一月后处死取样本照片。右侧示各组肿瘤大小统计。可见抑制hsa-miR-487a 可减少肝癌瘤块的生长速度，而过表达hsa-miR-487a则加速其生长速度。图B示裸鼠肺组 织石蜡固定切片后进行苏木精-伊红染色法染色代表图。图中可见hsa-miR-487a相对高 表达组肺组织中出现了更多的转移结节。图C示各组中出现肝内转移的裸鼠比例。图D示 各组中出现肺内转移的裸鼠比例；
[0034] 图13示组织中hsa-miR-487a与ki67表达有关。采用免疫组织化学检测裸鼠肿 瘤中细胞增殖能力标志物Ki67的表达水平。图A，B示裸鼠 HCCLM3组与!fepG2组肝癌组织 中ki67的表达水平。图B示人的高表达hsa-miR_487a与低表达hsa-miR_487a的肝癌组 织中ki67表达水平。
[0035] 图 14 不 Vivo-Morpholino 分子结构不意图。Morpholino 分子交由 Gene Tool 公司合成（该公司官网为：http://www. gene-tools, com/)图中分子结构示意图为 Vivo-Morpholino结构，其中决定Morpholino功能的为图中B标记的碱基序列；
[0036] 图15不Morpholin〇-Anti-hsa_miR-487a抑制肝内肿瘤增殖与肺转移。米 用Luciferase标记的HCC建立原位成瘤模型，在裸鼠原位成瘤模型建立以后， Morpholin〇-Anti-hsa_miR-487a 与其对照 Morpholino-Control 经过尾静脉注射每周两 次，每周进行活体荧光检测一次，6周后处死收取样本。图A示6周时各组活体荧光检测结 果。图中可见 Morpholino-Control 组中焚光显著强于 Morpholin〇-Anti-hsa_miR-487a 组。图B示各组每周活体荧光检测肿块光子流量（Total Flux)，其值高低代表肿块的大 小。图C左图示图A中裸鼠肝脏组织与肿瘤组织，图C右图示肿瘤体积统计图。图中可见 Morpholino-Control 组中肿块大小明显大于 Morpholin〇-Anti-hsa_miR-487a 组。图 D 左 图示图A中裸鼠肺组织活体荧光成像结果图，右图为各组肺中出现转移的裸鼠数统计图。 图中可见 Morpholino-Control 组中肺转移数目明显多于 Morpholin〇-Anti-hsa_miR-487a 组。图E示各组裸鼠肺组织石蜡固定后切片，采用苏木精-伊红染色法染色结果图。
【具体实施方式】
[0037] 以下结合附图对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定 和覆盖的多种不同方式实施。
[0038] 本文中吗啉代核酸为Vivo-Morpholino递送载体。本文中hsa-miR_487a为人源 性的。
[0039] 概述
[0040] 在下面具体的实施例中，首先在实施例1中通过对从中南大学湘雅医院纳入30例 在湘雅医院行肝细胞癌手术切除的肝癌组织通过Exiqon公司的芯片分析三种参见癌组 织中及癌旁组织中的miRNAs表达谱。从该表达谱中如图1所示，挑选出在3种肝癌亚型 (SHCC，SLHCC，NHCC)中均为高表达的hsa-miR-487a进行后续的研宄。在实施例2中，对从 中南大学湘雅医院纳入的多例行肝切除肿块的患者的对新鲜的肝癌组织及相应的邻近非 瘤肝组织，分别对该肝组织进行突光实时定量PCR检测和原位杂交实验，所得结果列于图 3~5中。可发现在实施例1中所得分析结果与对病患肝癌组织统计结果相同。均证实了 hsa-miR-487a在各型肝癌细胞和患者组织中均为高表达。
[0041] 实施例3通过对肝癌患者术后各项指标进行统计，发现患者术后组织中 hsa-miR-487a高表达者的预后较差，而hsa-miR-487a低表达者则预后各项指标较好。充分 说明了 hsa-miR-487a能反映出肝癌患者预后康复效果，是否存在癌细胞转移或再生的可 能。所得结果列于图6和表格1~7中。实施例4对hsa-miR-487a进行各项体外实验，以 进一步证实其所具有的对肝癌的增殖抑制和转移抑制作用。结果列于图7~11中。在以 上实验结果的支持下，对hsa-miR-487a进行体内实验。实验过程及所得结果如实施例5所 示。实施例5中通过将hsa-miR-487a结合至vivo-Morpholino上，结合后的结构如图14所 示。图14中hsa-miR-487a中的η = 23。通过动物实验发现，以此方式给药后，能有效的抑 制癌细胞在肝脏内再次增殖或转移至其他组织中，能用于肝癌早、中和晚期的各项治疗中， 尤其能起到抑制肝癌细胞的生长和转移。提高术后的康复，防止肝癌复发。同时通过实施 例6,采用常规方法将hsa-miR-487a制成试剂盒，可以将其用于检测术后病人或潜在肝癌 患者是否存在该基因的高表达，以检测出病人是否已患肝癌。也可用于检测术后病人是否 肝癌复发和/或肝癌转移。
[0042] 本发明的一方面提供了一种药物组合物，其中含有小分子核酸hsa-miR_487a。通 过上述实施例中的各项实验可知，小分子核酸hsa-miR-487a具有抑制肝癌细胞增殖和转 移的作用。当将hsa-miR-487a与适当的载体相结合后，即可作用于动物体，进而发挥对肝 癌的治疗效果。显然hsa-miR_487a也可加入其他具有治疗肝癌作用的药物中，起到增加其 疗效或协同其发挥疗效的作用。hsa-miR-487a的给药方式以能使其发挥抑制肝癌细胞增殖 和转移的效果即可。hsa-miR-487a可以与任何常用的基因给药载体相结合，从而对患者体 内肝癌细胞的生长此时抑制作用。
[0043] 小分子核酸hsa-miR-487a具有SEQ ID NO: 1所示的序列。
[0044] 优选的递送载体为吗啉代核酸。以该载体进行给药在实施例5中已经证明对动物 体具有抑制转移和增殖的作用。
[0045] 本发明的另一方面还提供了一种小分子核酸hsa-miR_487a在制备治疗肝癌的药 物中的应用。在上述实施例中可知hsa-miR-487a会在肝癌患者组织或肝癌细胞中存在高 表达。这种高表达，可以用于制备具有检测作用的试剂盒。该试剂盒可以通过对人体组织 进行检测，通过PCR扩增该组织，以获取其中hsa-miR-487a的表达量，从而确定提供该受试 样品的人体是否存在肝癌。从而提高肝癌早期的筛查，以利于病患能尽早得到治疗，以免延 误病情。当然该应用也包含含hsa-miR-487a基团或其部分基团的药物，给药后，达到抑制 肝癌细胞增殖或转移的作用，从而达到治疗肝癌的作用的应用。
[0046] 优选的小分子核酸hsa-miR-487a具有SEQ ID N0:1所示的序列。该序列的核酸， 检测效果较准确。
[0047] 更优选的小分子核酸hsa-miR_487a被制成与递送载体相连接的药物。通过载体 给药为核酸给药的常规方法，该给药方式可以为病毒载体、胆固醇、壳聚糖或脂质体。优选 为纳米粒子级的给药载体。更优选为吗啉代核酸。此时给药后疗效稳定。
[0048] 小分子核酸hsa-miR-487a在治疗药物中的应用中所得的药物，可以用于治疗以 下病例：肝癌的生长期或肝癌转移期。此处的肝癌生长期包括肝癌发病的早期、中期和晚 期。肝癌转移期指肝癌发生转移的时期，该期包括肝癌在生长期中的任何一期中发生的转 移。
[0049] hsa-miR-487a还可用于预防术后肝癌复发和转移的预防中。通过人体给药，可以 有效的抑制试验动物体内hsa-miR-487a的表达，从而达到抑制肝癌复发和转移的作用。可 参见实施例5。
[0050] 实施例
[0051] 以下各实施例中所用试剂的配方可参看miRCURY-LNA-microRNA-ISH-Optimizati on-Kit-manual. pdf 第 14-15 页 Table2 和 Table3〇
[0052] 以下各实施例中，患者纳入均照此进行。从中南大学湘雅医院2003年1月至2013 年12月的550例行肝肿块切除的患者被纳入，其中32例患者术后病检证实为胆管癌排除， 54例证实为血管瘤被排除，剩余444例肝细胞癌患者根据其手术时间在2008年1月前与 2008年1与月后分为两组数据，预期采用200例患者进行研宄，根据2:1比例抽取样本进入 训练队列（Training cohort)与验证队列（Validation cohort).其中训练队列最终女入 患者132例，验证队列纳入患者66例。
[0053] Edu细胞增殖试验通过采用Edu试剂盒中所附说明书中的具体操作步骤进行。
[0054] Vivo-Morpholino合成和Vivo-Morpholino设计与合成过程可参考参考文献部分 的相关文献中所公开的内容。
[0055] 本发明中所采用的hsa-miR_487a并抑制其作用的Morpholino序列为：Morpholi n〇-Anti-hsa-miR-487a:GATGTCCCTGTATGATTCGTCAT〇
[0056] hsa_miR-487a 单独序列如 S