（546μL，0. 546mmol)。将 形成的黄色溶液室温搅拌1. 5小时。减压浓缩溶剂，将含水残余物在乙酸乙酯和饱和NaHC03 水溶液之间进行分配。将有机层用饱和NaHC03水溶液洗涤并将水层用乙酸乙酯反萃取。将 合并的有机相干燥（Na2S04)并将溶剂浓缩至小的体积（2mL)。将产物小心地通过快速色谱 纯化（Biotage系统，SNAP筒装二氧化硅100g，洗脱剂：在8柱体积内从正己烷/乙酸乙 酯75/25到正己烷/乙酸乙酯50/50梯度洗脱）以便将两种非对映异构体分离，得到无色 油状的标题化合物（〇. 147g，90% )。
[0446] 可以用TharInvestigatorSFC系统，采用如下条件来获得最佳的分离：
[0447] 柱：CHIRALPACKIB250xl0mm(5μπι)
[0448] 助溶剂：正己烷/2-丙醇1/1
[0449] 等度洗脱：C02/助溶剂90/10
[0450] 流速10ml/minT柱：40°C;注射体积：80μ1 ;检测器波长：210nm
[0451] 运行时间：8. 5min;周期：3min;注射量：14_16mg
[0452] (样品制备：将800mg粗品化合物溶于4mlMeOH)
[0453] 4NMR(300MHz，CDC13)δ5· 25-5. 34 (m，2H)，3· 70 (t，J= 5. 9Hz，2H)，1· 47-1. 85(m ，7H)，1. 42(d，J= 6. 8Hz，3H)。
[0454] 步骤 11: (5S，6R) -5, 6-二（硝基氧基）庚基 3-甲基-3- (2, 4, 5-三甲基-3, 6-二 氧代环己-1，4-二烯基）丁酸酯（化合物8)的合成
[0455]向冷却至0°C的3-甲基-3-(2, 4, 5-三甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二烯-1-基） 丁酸（在实施例1，步骤2中制备）（146mg，0.583mmol，leq)和（lR，2S)-6-羟基-1-甲 基-2-(硝基氧基）己基硝酸酯（140mg，0· 583mmol)在干燥012(：12中的溶液中加入 EDC(117mg，0. 612mmol，1.05eq)和催化量的DMAP。将反应液在该温度下搅拌5小时，然后 用水、HC1 0. 1M、水和盐水洗涤。将有机溶液干燥（Na2S04)，过滤并蒸发。将残余物通过快 速色谱纯化（Biotage SP4系统，SNAP筒装二氧化硅100g，洗脱剂：在8柱体积内从正 己烷/乙酸乙酯80/20到正己烷/乙酸乙酯70/30梯度洗脱）得到黄色油状标题化合物 (210mg, 76% )〇
[0456] NMR ( 3 0 0MHz, CDC 1 3) 55.32-5. 17(m,2H), 3. 99(t,J =6. 2, 2H), 2. 98(s, 2H), 2. 14(s, 3H), 1. 98 - 1. 94(m, 6H), 1. 76 -1. 45(m,15H), 1. 43 (s, 6H)，1. 39(d,J = 6. 7, 3H)。
[0457] 实施例9
[0458] (4-(硝基氧基）丁基4-(4, 5-二甲氧基-2-甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二烯 基）-4-苯基丁酸酯（化合物9)的合成
[0459]
[0460] 步骤1:4- (2, 5-二羟基-3, 4-二甲氧基-6-甲基苯基）-4-苯基丁酸的合成 [0461 ]
[0462]该反应按照Mitsuru等人，J. Med.Chem.Soc.，1989, 32, 2214-2221所述的条件进 行。
[0463] 将醚合三氟化硼（0. 23ml;1. 59mmol)在60°C下于10分钟内滴加到2, 3-二甲氧 基 _5_ 甲基苯_1，4_ 二醇（1.00g;5. 49mmol)和y-苯基-y- 丁内酯（0·89g;5· 49mmol) 在甲苯（55ml)中的混合物中。将混合物继续搅拌3小时然后减压蒸除溶剂。将残余物通 过快速色谱纯化（Biotage系统，SNAP筒装二氧化硅100g，在10柱体积内从9%到60% EtOAc的正己烷溶液）得到浅黄色固体状标题化合物（0. 80g;收率：42% )。
[0464] 4MMR(300MHz，CDCl3)S7.44-7.10(m，5H)，5.42(m，2H)，4.49(m，lH)，3.99- 3. 81 (m，6H)，2. 77 - 2. 47 (m，2H)，2. 47 - 2. 29 (m，2H)，2. 10 (s，3H)。
[0465] 步骤2:4-(4, 5-二甲氧基-2-甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二烯-1-基）-4-苯 基丁酸的合成
[0466]
[0467] 向4_(2, 5-二羟基-3, 4-二甲氧基-6-甲基苯基）-4_苯基丁酸（0. 40g; 1. 15mmol)在CH3CN:H20 1:1 (40ml)中的溶液中加入硝酸铈铵（1. 63g;2. 89mmol)。将混合 物室温搅拌3小时，然后倒入H20(30ml)中。加入Et20(20ml)，将两相分离并将有机层用 Et20(2X20ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用似2504干燥并浓缩得到400mg标题化 合物，不进行进一步的纯化。
[0468] 步骤3: (4_(硝基氧基）丁基4_(4, 5-二甲氧基-2-甲基-3, 6-二氧代环 己-1，4-二烯基）-4-苯基丁酸酯（化合物9)的合成
[0469] 向4-(4, 5-二甲氧基-2-甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二烯-1-基）-4-苯基丁 酸（0. 40g57mmol)和4-羟基丁基硝酸酯（在实施例6,步骤1、2和3中合成）（0. 10mg; 0· 57mmol)的CH2Cl2(4ml)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC) (0. 16g86mmol)和催化量的DMAP。将溶液于0°C搅拌30分钟并于室温搅拌4小时，然 后用NaH2P045%溶液（5ml)、H20(5ml)和盐水洗涤。将有机层用似2504干燥并减压浓缩。将 残余物通过快速色谱纯化（BiotageSP1仪器，SNAP筒装二氧化硅25g，Hex/Et0Ac8:2,10 柱体积）得到红色油状标题化合物（95mg;收率：36% )。
[0470] NMR(300MHz,CDC13)δ7. 38 - 7. 15 (m, 5Η) , 4. 49 (m, 2Η) , 4. 35 (t,J =7. 7, 1H) , 4. 11 (t,J= 6. 0, 2H) , 3. 98 (s, 6H) , 2. 74 - 2. 52 (m, 1H) , 2. 52 - 2. 25 (m, 3H), 2. 09 (s, 3H), 1. 89 - 1. 66 (m, 4H)。
[0471] 实施例10:体外抗氣化剂活件（TBARS试验）
[0472] 在大鼠肝微粒体中进行NADPH-诱导的膜脂的脂质过氧化之后，通过可见光谱 检测2-硫代巴比妥酸反应性物质（TBARS)来评价化合物（1)(实施例1)、其前体（3-甲 基-3-(2, 4, 5-三甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二烯-1-基）丁酸，记载于实施例1的步骤 2(中间体2))和参比抗氧化剂化合物的抗氧化性能。
[0473] 通过在HEPES/蔗糖缓冲液（10mM，250mM，pH7. 4)中差速离心（8000g，20分钟； 120000g，1小时）从雄性Wistar大鼠（200-250g)制备肝微粒体膜并保存在-80°C下。在 37°C下、在含有微粒体膜（2mg蛋白/mL)、抗坏血酸钠（100μΜ)和待测化合物的DMS0溶液 的Tris-HCl/KCl(100mM/150mM,pH7. 4)中孵育。
[0474] 通过加入ADP-FeCljPNADPH(方法A)或2. 5μMFeSO4 (方法B)引发脂质过氧化 (按照BoschiD.等人，J.Med.Chem. 2006, 49:2886-2897 所述的方法）。在 5、15 和 30 分 钟从孵育混合物取样并用三氯乙酸（TCA) 10%w/v处理。
[0475] 脂质过氧化通过用分光光度法（543nm)测定主要由丙二醛（MDA)组成的TBARS来 评价。TBARS浓度（以nmol/mg蛋白质表达）通过插值法用MDA标准曲线得到。待测化合 物的抗氧化活性利用孵育30分钟之后所得到的数值，以相对于对照样品的TBARS生成抑制 百分数的形式进行评价。IC5。值通过非线性回归分析计算得到。
[0476] 结果报告于表1，表明化合物（1)以浓度依赖型方式抑制TBARS的生成，其效力 (IC5(]= 28μΜ)与众所周知的抗氧化剂化合物如阿魏酸或咖啡酸、依达拉奉或褪黑激素相 当。
[0477]
[0478] 结果用在37°C下孵育30分钟后抑制TBARS生成的IC5。表示。
[0479] 方法A:抑制由ADP-FeCljPNADPH诱导的大鼠肝脏脂质过氧化。
[0480] 方法B:抑制由FeS04和抗坏血酸诱导的大鼠肝脏脂质过氧化。
[0481] 3在ImM浓度下测试；
[0482] bChegaev，K.等人，J.Med.Chem. 2009, 52:574 - 578
[0483] cChegaev，K.等人，J.PinealRes. 2007, 42:371 - 385
[0484] 实施例11:在高滲盐水诱导的兔子眼内压（Ι0Ρ)增加中降低眼内压的活件
[0485] 在眼内压升高的动物模型中评估化合物（1)(实施例1)降低眼内压（Ι0Ρ)的活 性。
[0486] 实验中使用体重为1. 8-2.OKg的成年雄性新西兰大白兔。
[0487] 将动物用20mg/ml/kg的戊巴比妥钠麻醉。通过向玻璃体两边注射0. 1ml高渗盐 水溶液（5% )诱导眼内压的增加（Krauss等人，2011，Orihashi等人，2005)。
[0488] 在注射高渗盐水前（基础值）和注射30、60、90、120、240和360分钟后用1'〇11〇-?611 XL测量眼内压。在注射高渗盐水后，立即以滴眼液的形式灌输载体（5%Cremophor-EL; 0. 3 %DMS0, 0. 2mg/ml苯扎氯铵（BAC)的PBS溶液，pH6. 0)或本发明化合物。眼睛被 随机分配到不同的治疗组。载体或本发明化合物以所需剂量直接灌输到结膜袋中。在 每组的压力测量临进行前，在每只眼中灌输一滴用盐水1:1稀释的0.2%盐酸奥布卡因 (Novesine,Sandoz)〇
[0489] 结果如表2所示，化合物（1)降低眼压的活性用局部给药后60分钟和120分钟时 的眼内压测量平均值来表示。
[0490]
[0491] 实施例12
[0492] (S)-5,6-二（硝基氧基）己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环 己-1，4-二烯基）丁酸酯（化合物15 ;化合物（10)的（S)-异构体）的合成
[0493]
[0494] 步骤1: (5S) -5, 6-二（硝基氧基）己基4-硝基苯甲酸酯的合成
[0495] 在_78°C下，向搅拌着的发烟硝酸（7. 7mL，91. 8mmol，10eq)的二氯甲烷（60mL)溶 液中加入硫酸（4mL)并且在搅拌5分钟后加入（5S)-5, 6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯（在 实施例8的步骤2中制备）（5. 2g，9. 2mmol)的二氯甲烷（30mL)溶液，将反应液在该温度下 搅拌30分钟。然后将粗品混合物倒在冰上，将有机层萃取，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥， 蒸发得到浅黄色油状标题化合物（6. 8g，100% )。得到的残余物不经进一步纯化直接用于 下一步骤。
[0496] 4匪1?(30冊!^，〇0(：13)5 8.32((1，了 = 8.9取，2!〇,8.26-8.15(111，2!〇,5.39- 5. 25 (m, 1H), 4. 78 (dd,J= 12. 9, 3. 1Hz, 1H), 4. 52 (dd,J= 12. 9, 6. 4Hz, 1H), 4. 46 - 4. 35 (m, 2H)，1. 97 - 1. 77 (m, 4H), 1. 77 - 1. 49 (m, 2H)。
[0497] 步骤2: (2S)-6-羟基己烷-1，2-二基二硝酸酯的合成：
[0498] 向搅拌着的（5S)-5, 6-二（硝基氧基）己基4-硝基苯甲酸酯（在步骤1中制备） (6. 8g，18. 2mmol)在1/1乙醇/THF(各30mL)混合物中的溶液中于0°C下加入2M氢氧化钠 溶液（9.lmL，2eq)并将反应液搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯和水（各lOOmL)稀释并 萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。将油状残余物通过柱色谱纯 化（SNAP100,从4/6乙酸乙酯/正己烷到60/40乙酸乙酯/正己烷的梯度系统）得到无 色油状标题化合物（3. 82g，93% )。
[0499]NMR(300MHz,CDC13)δ5. 32 (qd,J= 6. 7, 3. 0Hz, 1H) , 4. 77 (dd,J= 12. 9, 3. 0Hz, 1H), 4. 49(dd,J= 12. 9, 6. 6Hz, 1H), 3. 68 (d,J= 5. 5Hz, 2H), 1. 89 -1. 71 (m, 2H), 1. 70 - 1. 48 (m, 5H), 1. 46 (s, 1H)。
[0500] 步骤3: (S) _5, 6_二（硝基氧基）己基3_甲基-3-(2, 4, 5_二甲基_3, 6_二氧代 环己-1，4-二烯基）丁酸酯的合成
[0501] 向冷却至0°C的搅拌着的3-甲基-3-(2, 4, 5-三甲基-3, 6-二氧代环己-1，4-二 烯-1-基）丁酸（201mg;0· 80mmol)(按照实施例1，步骤1和2的描述制备）和（2S) -6-羟 基己烷-1，2-二基二硝酸酯（181mg;0· 80mmol)(在步骤2中制备）的DCM(5ml)溶液中加 入EDAC(137mg;0. 89mmol)和催化量的DMAP。将反应液于0°C下搅拌过夜。然后将粗产物用 水、HC1 1N、水和盐水洗涤，干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速色谱纯化[Cy/Et0Ac:0%至 20% (1CV)，20%至40% (7CV)，40%至60% (2CV)]得到246mg黄色油状标题化合物（收 率：67· 1% ) 〇
[0502] 4 匪R(300MHz,丙酮）δ5. 49 (qd，J= 6. 6, 2. 6Hz，1H)，5. 01 (dd，J= 13. 0, 2. 6Hz, 1H), 4. 73 (dd,J= 13. 0, 6. 3Hz, 1H), 4. 00 (t,J= 6. 3Hz, 2H), 2. 95 (s, 2H), 2. 13 (s, 3H), 1. 94 (s,J= 6. 3Hz, 6H),L90 - 1. 79 (m, 2H),L70 - 1. 58 (m, 2H), 1. 52 (dt,J= 8. 0, 5. 7Hz, 2H), 1. 43 (s, 6H)。aD2°= +2. 2 (0· 44%MeOH)
[0503]实施例13
[0504] (R)-5,6-二（硝基氧基）己基3-甲基-3-(2,4,5-三甲基-3,6-二氧代环 己-1，4-二烯基）丁酸酯（化合物16 ;化合物10的（R)-异构体）的合成
[0505]
[0506] 步骤1: (5R) -5, 6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯的合成
[0507] 向剧烈搅拌着的可商购获得的"ADmixβ"（112. 5g)在1:1水/叔丁醇（822mL) 中的溶液中于〇°C下加入己-5-烯基4-硝基苯甲酸酯（在实施例8,步骤1中制备） (20. 00g，80. 23mmol)。将混合物于4°C(冷藏室）剧烈搅拌21小时。将混合物冷却至0°C 并加入乙酸乙酯（450mL)，然后缓慢地分批加入焦亚硫酸钠（33.lg)。将混合物于0°C搅拌 30分钟，然后室温搅拌1小时。将有机相分离并将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃 取液用盐水洗涤，干燥（Na2S04)并减压蒸除溶剂。将滤液通过短的硅胶垫纯化，用乙酸乙酯 洗脱得到米白色固体状标题化合物（20. 5g，90. 2% )。
[0508] NMR(300MHz,CDC13)δ8. 30 (dt,J= 9. 0, 2. 0Hz, 2H), 8. 21 (dt,J= 9· 0, 2·OHz，2H)，4· 39 (t，J= 6. 6Hz，2H)，3· 80-3. 62 (2H，m)，3· 47 (1H，m)，2· 59 (bs，1H)，2· 4 2 (bs，1H)，1· 90-1. 75 (2H，m)，1· 73-1. 45 (4H，m)。
[0509] 步骤2: (5R) -5, 6-二（硝基氧基）己基4-硝基苯甲酸酯的合成
[0510] 在_78°C下，向搅拌着的发烟硝酸（7. 7mL，91. 8mmol，10eq)的二氯甲烷（60mL)溶 液中加入硫酸（4mL)并且在搅拌5分钟后加入（5R)-5, 6-二羟基己基4-硝基苯甲酸酯（在 步骤1中制备）（5. 2g，9. 2mmol)的二氯甲烷（30mL)溶液，将反应液在该温度下搅拌30分 钟。然后将粗品混合物倒在冰上，将有机层萃取，用水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到 浅黄色油状标题化合物（6. 8g，100% )。得到的残余物不经进一步纯化直接用于下一步骤。
[0511] 4匪1?(30冊!^，〇0(：13)5 8.32((1，了 = 8.9取，2!〇,8.26-8.15(111，2!〇,5.39- 5. 25 (m, 1H), 4. 78 (dd,J= 12. 9, 3. 1Hz, 1H), 4. 52 (dd,J= 12. 9, 6. 4Hz, 1H), 4. 46 - 4. 35 (m, 2H)，1. 97 - 1. 77 (m, 4H), 1. 77 - 1. 49 (m, 2H)。
[0512] 步骤3: (2R)-6-羟基己烷-1，2-二基二硝酸酯的合成：
[0513] 向搅拌着的（5R)-5, 6-二（硝基氧基）己基4-硝基苯甲酸酯（在步骤2中制备） (6. 8g，18. 2mmol)在1/1乙醇/THF(各30mL)混合物中的溶液中于0°C下加入2M氢氧化钠 溶液（9.lmL，2eq)并将反应液搅拌2小时。将反应液用乙酸乙酯和水（各100mL)稀释并 萃取。将有机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发。将油状残余物通过柱色谱纯 化（SNAP100,从4/6乙酸乙酯/正己烷到60/40乙酸乙酯/正己烷的梯度系统）得到无 色油状标题化合物（3. 50g，86% )。
[0514]NMR(300MHz,CDC13)δ5. 32 (qd,J= 6. 7, 3. 0Hz, 1H) , 4. 77 (dd,J= 12. 9, 3. 0Hz, 1H), 4. 49(dd,J= 12. 9, 6. 6Hz, 1H), 3. 68 (d,J= 5. 5Hz, 2H), 1. 89 -1. 71 (m, 2H), 1. 70 - 1. 48 (m, 5H), 1. 46 (s, 1H)。
[0515] 步骤4: (R) _5, 6_二（硝基氧基）己基3_甲基-3-(2, 4, 5_二甲基_3, 6_二氧代 环己-1，4-二烯基）丁