：10mlX1瓶。
[0068] 试剂四：液体：350ulX2支，4号稀释液：10mlX1瓶。二者按1:14稀释。
[0069] 试剂五：粉针X1支，用70_80°C热双蒸馏水75ml溶解。
[0070] 试剂六：粉针X1支，加蒸馏水75ml溶解。
[0071] 显色剂的配制：按照试剂五：试剂六：冰乙酸=3:3:2的体积比配制。
[0072] 操作步骤：（1)分别在测定管和对照管加试剂一 1. 0ml; (2)分别在测定管加肝脏 匀浆离心液l〇ul、皮肤匀浆离心液30ul，分别在对照管加蒸馏水10ul、30ul; (3)分别在测 定管和对照管加试剂二、试剂三、试剂四各1. 〇ml; (4)用漩涡混匀器充分混匀，置37°C恒温 水浴40min; (5)分别在测定管和对照管加显色剂2ml，混匀，室温放置lOmin，于波长550nm 处，lcm光径比色环，蒸馏水调零，比色。
[0073] 计算公式： 组织匀浆中S0D活力=【(对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度】X2X(反 应液总体积/取样量）/组织中蛋白的含量 MDA测定 测定原理：LP0降解产物中的MDA可与硫代巴比妥酸（TBA)缩合，形成红色产物，在 532nm处有最大吸收峰。
[0074] 试剂的组成与配制： 试剂一：液体：20mlXI瓶，加蒸馏水稀释至100ml; 试剂二：液体：12mlX1瓶，加340ml双蒸馏水混匀； 试剂三：粉剂：1支，将粉剂加入90-100°C的双蒸馏水60ml中，充分溶解后用双蒸馏水 补足至60ml再加冰醋酸60ml，混勾，避光； 标准品：10nmol/ml四乙氧基丙^js5mlXl瓶。
[0075] 操作步骤： (1) 在测定管加入10nmol/ml标准品1. 0ml,在标准空白管加入无水乙醇1. 0ml; (2) 分别在测定管加入肝脏匀浆离心液10ul、皮肤匀浆离心液30ul; (3) 分别在测定空白管加入肝脏匀浆离心液10ul、皮肤匀浆离心液30ul; (4) 分别在测定管、标准空白管、测定管、测定空白管加入试剂一 1. 0ml，混匀； (5) 分别在测定管、标准空白管、测定管、测定空白管加入试剂一 3ml; (6) 分别在测定管、标准空白管、测定管加入试剂三lml，在测定空白管加入50%冰醋酸 lml； (7)漩涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴40min，取出后 流水冷却，然后3500转/分，离心lOmin，取上清，532nm处，lcm光径比色杯，蒸馏水调零，测 各管吸光度值。
[0076] (8)计算公式：组织中MDA含量=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管 吸光度-标准空白管吸光度）X标准品浓度/组织中蛋白含量 3、实验结果与分析 表一小鼠肝脏SOD、MDA含量（X土s)
注：与空白对照组比较，ΛΡ〈〇. 05，ΛΛΡ〈0. 01 ;与模型组比较，*P〈0. 05〃P〈0. 01。
[0077] 从表一可见：与空白组比较，模型组小鼠肝脏SOD活性降低，而MDA含量升高，其 中MDA有显著性差异（P〈0. 01 )。药物组合物（1:2:1:1 )、药物组合物（1:1:1:2)组S0D活 性升高，与模型组比较有显著性差异，药物组合物（1:1:1:1)组S0D活性明显升高，与模 型组比较差异极显著。对于MDA含量，与模型组比较，药物组合物（1:1:1:1 )、药物组合物 (1:1:1:2)组MDA活性有极显著差异，综上所述，本发明所述药物组合物在给药后小鼠肝脏 S0D含量均增加、MDA含量均降低，其中药物组合物（1:1:1:1)组效果最为显著。
[0078] 表二小鼠皮肤SOD、MDA含量（X土s)
注：与空白对照组比较，ΛΡ〈〇. 05，ΛΛΡ〈0. 01 ;与模型组比较，*P〈0. 05〃P〈0. 01。
[0079] 从表二可见：对于SOD含量，与模型组比较，药物组合物药物组合 物（2:1:1:1 )、药物组合物（1:2:1:1 )、药物组合物（1:1:1:2)组均有所增加，且药物组合 物（1:1:1:1)具有极显著差异，与空白组比较，上述组合S0D含量均有所增加，且药物组 合物（1:1:1:1)具有极显著差异，而对于MDA含量，药物组合物（1:1:1:1)、药物组合物 (2:1:1:1)、药物组合物（1:2:1:1)、药物组合物（1:1:2:1)均有所下降，其中本发明所述药 物组合物（1:1:1:1)组效果最明显。综上所述，本发明所述药物组合物（1:1:1:1)组对小鼠 皮肤SOD、MDA含量影响最显著。
[0080] 毒性试验 利用家兔进行急性刺激实验，将样品水溶液白兔一侧眼睛内，对侧眼睛滴入蒸馏水作 对照，分别于滴药后6h、24h、48h进行观察，眼刺激平均指数48h后为0。说明本发明所述药 物组合物无毒性及不良反应，使用安全。
[0081] 实施例15 分别以实施例2、实施例3、实施例4、实施例5和实施例6制备得到的药物组合物进 行试验，试验方法通实施例14,结果均显示本发明制备得到的药物组合物对小鼠皮肤S0D、 MDA含量影响显著。
【主权项】
1. 一种药物组合物，其特征在于所述的药物组合物包括白芷、山药和茯苓，重量比为 1~3:1~3:1~3〇2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物还包括丹参，所 述的药物组合物中白芷、山药、茯苓和丹参的重量比为1~3 :1~3 :1~3 :1~3。3. 根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物中白芷、山药、茯 苓和丹参的重量比为2:2:2:2。4. 一种权利要求1~3任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于包括预处理、粗 粉碎、超微粉碎及混配工序，具体包括： A、 预处理：将各原料中的杂物剔除，经精选、清洗、晾晒、干燥至含水率< 3%备用； B、 粗粉碎：将原料白芷、山药、茯苓和丹参分别用粗粉碎机粉碎，过80~140目筛备用； C、 超微粉碎：将粗粉碎后的各原料分别经超微粉碎得到各原料的超微细粉； D、 混配：按配方配比将各原料超微细粉混配均匀得到目标物。5. 根据权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于所述的超微细粉的粒径 为 6~12μπι。6. -种权利要求1~3任一所述的药物组合物的制剂，其特征在于所述的药物组合物中 加入药学上可以接受的辅料制成散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、蜜丸剂或外敷剂。7. -种权利要求1~3任一所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物在 制备美白养颜药物或化妆品中的应用。8. 根据权利要求7所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物服用方法 为用开水或蜂蜜兑服，一日三次，服用剂量为2g/次。9. 根据权利要求7所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的药物组合物中加入蜂 蜜、牛奶或40~60度的白酒外敷15~25min。
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物及其制备方法、制剂与应用，所述的药物组合物包括白芷、山药和茯苓，重量比为1～3：1～3：1～3；制备方法包括预处理、粗粉碎、超微粉碎及混配工序；制剂为所述的药物组合物中加入药学上可以接受的辅料制成散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、蜜丸剂或外敷剂；应用为所述的药物组合物在制备美白养颜药物或化妆品中的应用。本发明所述的药物组合物按照精确设定的组方混配制成，根据原药物理、化学性质及所含活性成分进行配伍达到美白养颜的功效作用，并具有生物利用度高、活性成分溶出快、药物吸收效果好且副作用小的特点。
【IPC分类】A61K36/8945, A61K8/97, A61Q19/00, A61P17/00, A61Q19/02
【公开号】CN105362591
【申请号】CN201510912778
【发明人】刘宝
【申请人】普洱淞茂制药股份有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月11日