0041]1.1仪器
[0042]仪器为磁力搅拌器;数显磁力搅拌器;加热套；电子天平;真空减压干燥机;冷冻干燥机。
[0043]1.2试药
[0044]叶酸(folicacid，^97%);N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC 99% ) ；DSPE-PEG-NH2；吡啶；二甲基亚砜；氯化钠；甲醇；Te粉(99 % ); NaBH4(AR级)；巯基丙酸(AR级)；CdCl2.2.5H20(AR级)；石油醚(AR级)；高纯N2;实验用水为电阻率大于18ΜΩ.cm的超纯水。
[0045]2.荧光量子点合成方法:
[0046]水溶性CdTe量子点的制备:取Te粉0.1276g(lmmol)，加入0.15723g NaBH4，加入5mL超纯水，通高纯犯反应得到无色的无氧NaHTe溶液，通犯保存备用，即得新鲜制备的碲氢化钠溶液。将0.4566g CdCl2.2.5H20溶于30mL蒸馏水中，加入350yL巯基丙酸，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值为12。用高纯犯将溶液在密闭体系中脱氧保护，在适当的搅拌速度下，向溶液中加入200yL新制备的无氧NaHTe溶液，将反应液加热至96°C回流lh，即得到尺度较为均一的CdTe纳米粒子溶液(绿色荧光)。
[0047]3.叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的合成方法:将62.5mg叶酸与1mLDMSO置于反应瓶中反应，加入250mg DSPE-PEG(2000)-NH2和250yL吡啶，在81.5mgDCC的催化下得到反应液，通过旋转蒸发除掉吡啶，再加入31.25mL超纯水通过透析、微孔滤膜过滤，最后冷冻干燥得到黄色叶酸脂质材料(Folate-PEG-DSPE)。
[0048]4.叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针的制备方法:按照配比DPPC:胆固醇:mPEG(2000) -DSPE: Fo Iate-PEG-DSPE = 85:10:5:0.5,总量为 20mg，称取各脂质材料置于 250mL 茄形瓶中，经氯仿:甲醇=2:1混合有机溶剂溶解，通过旋转蒸发，形成一均匀薄膜，在真空干燥器中40°C干燥lh，再加入绿色荧光量子点水溶液8mL水化，经Sepharose CL-4B凝胶分离，得到脂质体溶液后，通过脂质体挤压仪(10nm碳酸酯膜)挤压过膜3次即得叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针。
[0049]实施四
[0050]1.仪器与试药
[0051]1.1仪器
[0052]仪器为磁力搅拌器;数显磁力搅拌器;加热套；电子天平;真空减压干燥机;冷冻干燥机。
[0053]1.2试药
[0054]叶酸(folicacid，^97%);N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC 99% ) ；DSPE-PEG-NH2；吡啶；二甲基亚砜；氯化钠；甲醇；Te粉(99 % ); NaBH4(AR级)；巯基丙酸(AR级)；CdCl2.2.5H20(AR级)；石油醚(AR级)；高纯N2;实验用水为电阻率大于18ΜΩ.cm的超纯水。
[0055]2.荧光量子点合成方法:
[0056]水溶性CdTe量子点的制备:取Te粉0.1276g(lmmol)，加入0.15723g NaBH4，加入5mL超纯水，通高纯犯反应得到无色的无氧NaHTe溶液，通犯保存备用，即得新鲜制备的碲氢化钠溶液。将0.4566g CdCl2.2.5H20溶于30mL蒸馏水中，加入350yL巯基丙酸，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值为12。用高纯犯将溶液在密闭体系中脱氧保护，在适当的搅拌速度下，向溶液中加入200yL新制备的无氧NaHTe溶液，将反应液加热至96°C回流lh，即得到尺度较为均一的CdTe纳米粒子溶液(绿色荧光)。
[0057]3.叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的合成方法:将62.5mg叶酸与1mLDMSO置于反应瓶中反应，加入250mg DSPE-PEG(2000)-NH2和250yL吡啶，在81.5mgDCC的催化下得到反应液，通过旋转蒸发除掉吡啶，再加入31.25mL超纯水通过透析、微孔滤膜过滤，最后冷冻干燥得到黄色叶酸脂质材料(Folate-PEG-DSPE)。
[0058]4.叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针的制备方法:按照配比DPPC:胆固醇:mPEG(2000) -DSPE: Folate-PEG-DSPE = 75:10:4:0.5，总量为 20mg，称取各脂质材料置于 250mL 茄形瓶中，经氯仿:甲醇=2:1混合有机溶剂溶解，通过旋转蒸发，形成一均匀薄膜，在真空干燥器中40°C干燥lh，再加入绿色荧光量子点水溶液8mL水化，经Sepharose CL-4B凝胶分离，得到脂质体溶液后，通过脂质体挤压仪(10nm碳酸酯膜)挤压过膜3次即得叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针。
[0059]实施五
[0060]1.仪器与试药
[0061]1.1仪器
[0062]仪器为磁力搅拌器;数显磁力搅拌器;加热套；电子天平;真空减压干燥机;冷冻干燥机。
[0063]1.2试药
[0064]叶酸(folicacid，^97%);N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC 99% ) ；DSPE-PEG-NH2；吡啶；二甲基亚砜；氯化钠；甲醇；Te粉(99 % ); NaBH4(AR级)；巯基丙酸(AR级)；CdCl2.2.5H20(AR级)；石油醚(AR级)；高纯N2;实验用水为电阻率大于18ΜΩ.cm的超纯水。
[0065]2.焚光量子点合成方法:
[0066]水溶性CdTe量子点的制备:取Te粉0.1276g(lmmol)，加入0.15723g NaBH4，加入5mL超纯水，通高纯犯反应得到无色的无氧NaHTe溶液，通犯保存备用，即得新鲜制备的碲氢化钠溶液。将0.4566g CdCl2.2.5H20溶于30mL蒸馏水中，加入350yL巯基丙酸，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值为12。用高纯犯将溶液在密闭体系中脱氧保护，在适当的搅拌速度下，向溶液中加入200yL新制备的无氧NaHTe溶液，将反应液加热至96°C回流lh，即得到尺度较为均一的CdTe纳米粒子溶液(绿色荧光)。
[0067]3.叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的合成方法:将62.5mg叶酸与1mLDMSO置于反应瓶中反应，加入250mg DSPE-PEG(2000)-NH2和250yL吡啶，在81.5mgDCC的催化下得到反应液，通过旋转蒸发除掉吡啶，再加入31.25mL超纯水通过透析、微孔滤膜过滤，最后冷冻干燥得到黄色叶酸脂质材料(Folate-PEG-DSPE)。
[0068]4.叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针的制备方法:按照配比DPPC:胆固醇:mPEG(2000) -DSPE: Folate-PEG-DSPE = 85:20:5:1,总量为 20mg，称取各脂质材料置于 250mL 茄形瓶中，经氯仿:甲醇=2:1混合有机溶剂溶解，通过旋转蒸发，形成一均匀薄膜，在真空干燥器中40°C干燥Ih，再加入绿色荧光量子点水溶液8mL水化，经Sepharose CL-4B凝胶分离，得到脂质体溶液后，通过脂质体挤压仪(10nm碳酸酯膜)挤压过膜3次即得叶酸靶向荧光量子点脂质体纳米探针。
[0069]如图1所示，上述实施例所得荧光脂质体纳米探针在日光下为白色溶液，在365nm紫外灯下呈绿色荧光。经荧光分光光度计检测其荧光光谱，其激发范围宽，290-420nm范围内均可激发，其最大激发波长为341nm，发射光谱对称，最大发射波长为538nm。
[0070]以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
【主权项】
1.一种新型荧光脂质体纳米探针，其特征在于:该荧光脂质体纳米探针包含水溶性CdTe量子点、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。2.根据权利要求1所述的一种新型荧光脂质体纳米探针，其特征在于:所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的重量混合比例为75?85:10?20:4?5:0.5?I。3.根据权利要求2所述的一种新型荧光脂质体纳米探针，其特征在于:所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺与叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的重量混合比例为80:15:4.5:0.5ο4.根据权利要求1所述的一种新型荧光脂质体纳米探针，其特征在于:所述的水溶性CdTe量子点的制备方法包括以下步骤:取Te粉0.1276g，加入0.15723g NaBH4,加入5mL超纯水，通高纯N2反应得到无色的无氧NaHTe溶液备用;将0.4566g CdCb.2.5H2O溶于30mL蒸馈水中，加入350yL巯基丙酸，用0.lmol/LNaOH溶液调节pH值为12，然后用高纯N2在密闭体系中进行脱氧保护，加入200yL所述的无氧NaHTe溶液，将反应液加热至96°C回流lh。5.根据权利要求1所述的一种新型荧光脂质体纳米探针，其特征在于:所述的叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的制备方法包括以下步骤:将62.5mg叶酸与1mL DMSO置于反应瓶中反应，加入250mg DSPE-PEG-Nh2和250yL吡啶，在81.5mgDCC的催化下得到反应液，通过旋转蒸发除掉吡啶，再加入31.25mL超纯水通过透析、微孔滤膜过滤，冷冻干燥。6.一种制备权利要求1-5所述的一种新型荧光脂质体纳米探针的方法，其特征在于:包括以下步骤:按配比，称取二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺，用有机溶剂溶解，旋转蒸发，形成薄膜，在40°C的条件下真空干燥I小时，加入所述水溶性CdTe量子点配制的溶液，经凝胶分离，得到脂质体溶液，再经挤压过膜，即得。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于:所述的有机溶剂选自氯仿与甲醇的混合溶剂。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述的氯仿与甲醇的体积比为2:1。9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于:所述水溶性CdTe量子点溶液的浓度为30ymol/Lo10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于:所述的凝胶为Se P h a r ο s e C L - 4 B凝胶;所述的挤压过膜采用具有10nm碳酸酯膜的脂质体挤压仪来进行。
【专利摘要】本发明公开了一种新型荧光脂质体纳米探针，该荧光脂质体纳米探针包含水溶性CdTe量子点、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。本发明的优点是：所得荧光脂质体纳米探针的荧光性能、靶向性、稳定性好且生物相容性高。
【IPC分类】A61K49/00
【公开号】CN105535996
【申请号】CN201610011779
【发明人】杨畅, 胡珺, 王永林, 郑林, 兰燕宇, 李勇军, 王爱民, 陈思颖
【申请人】贵州医科大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月8日