肺癌细胞拮抗剂及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种肺癌细胞拮抗剂及其应用。具体的，本发明公开的肺癌细胞拮抗剂中含有青藤碱和茶皂素。该肺癌细胞拮抗剂对A549、NCI?H1650细胞株的抑制作用，随青藤碱含量的升高有上升的趋势，但是当青藤碱含量提升至60?80μg/ml以上时，抑制效果增长的并不明显。青藤碱和茶皂素的配比，在3?5∶1时，效果较好。
【专利说明】
肺癌细胞括抗剂及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体地涉及一种肺癌细胞枯抗剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 目前常见而又严重威胁着人类生命健康的恶性肿瘤有；肺癌、胃癌、食管癌、肠癌、 肝癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、恶性淋己瘤、前列腺癌等十大肿瘤。不同类型的肿瘤，产生机 理有很大差异，很难有安全、有效的药物具有光谱的抗癌能力，对各种类型的癌症均有抑制 效果。因此，现阶段医药领域的研究重点是开发针对不同癌症类型的，特异性好、安全性高、 疗效确切的肿瘤枯抗剂。
[0003] 1998年7月国际肺癌研究协会（(IA化C)与世界卫生组织（WHO)对肺癌的病理分 类进行了修订，按细胞类型将肺癌分为9种。1.鱗状细胞癌，2.小细胞癌，3.腺癌，4.大细 胞癌，5.腺鱗癌，6.多型性肉瘤样或含肉瘤成份癌，7.类癌，8.唾液腺型癌，9.未分类癌。 临床上最常见的为下列4种；（1)鱗状细胞癌（鱗癌），在肺癌中最为常见。病人年龄大多 在50岁W上，男性占多数。大多起源于较大的支气管，常为中必型肺癌。虽然鱗癌的分化程 度不一，但生长速度尚较缓慢，病程较长，对放射和化学疗法较敏感。通常先经淋己性转移， 血行转移发生较晚。（2)小细胞癌（未分化小细胞癌），发病率比鱗癌低，发病年龄较轻，多 见于男性。一般起源于较大支气管，大多为中必型肺癌。细胞形态与小淋己细胞相似，形如 燕麦穗粒，因此又称燕麦细胞癌。小细胞癌胞浆内含有神经内分泌颗粒。小细胞癌恶性程 度高，生长快，较早出现淋己和血行广泛转移。对放射和化学疗法虽较敏感，但在各型肺癌 中预后较差。（3)腺癌，发病年龄较小，女性相对多见。多数起源于较小的支气管上皮，多为 周围型肺癌，少数则起源于大支气管。早期一般没有明显临床症状，往往在胸部X线检查时 发现，表现为圆形或楠圆形分叶状肿块。一般生长较慢，但有时在早期即发生血行转移，淋 己转移则较晚发生。细支气管肺泡癌是腺癌的一种类型，起源于细支气管黏膜上皮或肺泡 上皮，故又称细支气管肺泡细胞癌。发病率低，女性较多见，常位于肺野周围部分。一般分 化程度较高，生长较慢，癌细胞沿细支气管、肺泡管和肺泡壁生长，而不侵犯泡间隔。淋己和 血行转移发生较晚，但可侵犯胸膜或经支气管播散到其他肺叶。在X线形态上可分为结节 型和弥漫型两类。前者可W是单个结节或多个结节，后者形态类似支气管肺炎。（4)大细胞 癌，此型肺癌甚为少见，约半数起源于大支气管。细胞大，细胞质丰富，胞核形态多样，排列 不规则。大细胞癌分化程度低，常在发生脑转移后才被发现。预后非常差。除此W外，少数 肺癌病例同时存在不同类型的癌肿组织，如腺癌内有鱗癌组织，鱗癌内有腺癌组织或鱗癌 与小细胞癌并存。送一类癌肿称为混合型肺癌。
[0004] 青藤碱（Sinomenine)是从青藤（Sinomenium Acu1:um Rehderett Wilson)的干燥 根提取的。现代药理实验证明，其具有巧风除湿、活血通络、消炎止痛、利尿消肿的作用，目 前多用作抗风湿的特效原料药。
[0005] 茶皂素 （Tea Saponin),又名茶皂式，是从山茶油压棒后的茶巧饼中提取的一种五 环Η聰类化合物，由糖体、式元及有机酸组成。现有研究表明，其对大肠杆菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽抱杆菌、酵母菌有较明显的抑制作用，对白色念珠菌有一定的抑制作用，对绿賊 杆菌无抑制作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种肺癌细胞枯抗剂及其应用。
[0007] 本发明的第一方面提供了 一种肺癌细胞枯抗剂，其中，所述枯抗剂中含有青藤碱。
[0008] 优选地，所述枯抗剂中还含有茶皂素。
[0009] 优选地，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为1-10 : 1-2。
[0010] 更优选地，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为2-4 : 1。
[0011] 最优选地，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为3 : 1。
[0012] 本发明的另一方面提供了一种上述肺癌细胞枯抗剂在治疗肺癌中的应用。
[0013] 优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。
[0014] 本发明的另一方面提供了一种青藤碱在治疗肿瘤中应用。
[001引优选地，所述肿瘤包括肺癌、胃癌、食管癌、肠癌、肝癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、恶 性淋己瘤、前列腺癌。
[0016] 更优选地，所述肿瘤为肺癌。
[0017] 最优选地，所述肿瘤为非小细胞肺癌。
[0018] 本发明还提供了一种治疗肺癌的方法，包括给肺癌病人施用上述的肺癌细胞枯抗 剂。
[0019] 本发明的肺癌细胞枯抗剂，能够有效的抑制非小细胞肺癌细胞株的生长。
【具体实施方式】
[0020] 实验材料
[0021] 本文实施例中所用原料可W从W下途径购得。
[0022] 非小细胞肺癌细胞株A549、NCI-H1650、小细胞肺癌细胞株H446、胃癌细胞株 SGC-7901均购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中必。
[0023] 青藤碱（CAS :6080-33-7)购自上海研域生物科技有限公司、茶皂素 （CAS ; 8047-15-2)购自上海谱振生物科技有限公司。
[0024] 其它试剂或材料均可从市售渠道获得。
[00巧]实验方法
[0026] 1、接种一定数量的细胞在96孔板中，过夜后，加入待测枯抗剂，作用7化后，倒出 培养液，每孔加入100 μ LΗ氯己酸（TCA)，4°C固定化后弃去固定液，蒸傭水轻洗5次，室温 干燥。
[0027] 每孔加入100 μ L的SRB染色液（4mg/mL)，染色15min后弃去染色液用1 %冰醋酸 (HAC)洗5次，室温干燥。每孔加入150μΙ Tris base bufferQOmM)，室温放置15min,酶 标仪测定OD值巧40nm波长）。
[0028] 抑制率（％ )=(对照孔0D值-给药孔0D值）/对照孔0D值X 100 %。
[002引 2、集落形成实验
[0030] 向25cm2培养瓶中分别加入含约200个细胞的悬液，显微镜计数后，再分别加入不 同的含药培养基各5ml，培养一周后，计数集落的个数。
[0031] 集落形成率R=(集落数/种入的细胞数）Xl〇〇%。
[0032] 实施例1枯抗剂的配制
[0033] 按照下表1配比青藤碱和茶皂素，先用10% (v/v)的吐温-80配成母液，使用时再 配制成表1中终浓度。
[0034] 表 1
[0035]
[0036]
[0037] 实施例2对肿瘤细胞的抑制活性
[003引接种一定数量的细胞在96孔板中，过夜后，加入按照实施例1中配制的待测枯抗 剂，A-F组枯抗剂的终浓度分别如表1所示，作用7化后，倒出培养液，每孔加入100 μ L Η 氯己酸（TCA)，4°C固定化后弃去固定液，蒸傭水轻洗5次，室温干燥。
[0039] 每孔加入100 μ L的SRB染色液（4mg/mL)，染色15min后弃去染色液用1 %冰醋酸 (HAC)洗5次，室温干燥。每孔加入150μΙ Tris base buffer(lOmM)，室温放置15min，酶 标仪测定OD值巧40nm波长）。
[0040] 抑制率（％ )=(对照孔0D值-给药孔0D值）/对照孔0D值X 100 %。
[00川表2
[0042]
[0044] 结果如表2所示，结果表明本发明的枯抗剂对非小细胞肺癌细胞株的增殖具有显 著抑制作用，对胃癌细胞株SGC-7901的抑制效果不明显。而且从表2中可W看出，青藤碱 和茶皂素组成的抑制剂的枯抗效果要显著优于青藤碱、茶皂素单独作用的对照组。
[0045] 实施例3抑制细胞集落形成效果
[0046] 向25cm2培养瓶中分别加入约200个A549或NCI-H1650的细胞悬液，显微镜计数 后，再分别加入不同的含药培养基各5ml，培养基中环己胺终浓度为10 μ M/1，培养一周后， 计数集落的个数。
[0047] 集落形成率R=(集落数/种入的细胞数）Χ100%。
[004引检测结果如表3所示。
[0049] 表 3
[0050]
[0052] 不加任何药物的对照组，A549细胞的R值为86. 7% ;NCI-H1650细胞的R值为 74. 6%。
[0053] 表3中的实验结果表明，本发明的肺癌细胞枯抗剂，能够显著抑制非小细胞肺癌 细胞的集落形成。青藤碱和茶皂素的联合作用下，显著优于各自单独作用。枯抗剂对A549、 NCI-H1650细胞株的抑制作用，随青藤碱含量的升高有上升的趋势，但是当青藤碱含量提升 至60-80 μ g/mlW上时，抑制效果增长的并不明显。青藤碱和茶皂素的配比，在3-5 : 1时， 效果较好。
[0054] W上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无 需创造性劳动就可W根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术 人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可W得到的 技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
【主权项】
1. 一种肺癌细胞拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂中含有青藤碱。2. 如权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述拮抗剂中还含有茶皂素。3. 如权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为 1-10 ： 1-2〇4. 如权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为 2-4:1。5. 如权利要求1所述的拮抗剂，其特征在于，所述青藤碱和茶皂素的重量份数比为 3 : 1〇6. 如上述任一权利要求所述的肺癌细胞拮抗剂在治疗肺癌中的应用。7. 如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌。8. 青藤碱在治疗肿瘤中应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、胃癌、食管癌、肠癌、肝 癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、恶性淋巴瘤。10. -种治疗肺癌的方法，其特征在于，给肺癌病人施用权利要求1所述的肺癌细胞拮 抗剂。
【文档编号】A61K31/704GK105878259SQ201410482541
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2014年9月10日
【发明人】杨钟华
【申请人】瑞安市普罗生物科技有限公司