作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的噻吩基－异羟肟酸的制作方法

专利名称：作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的噻吩基－异羟肟酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及取代的噻吩基-异羟肟酸、它们的制备和含与治疗组蛋白脱乙酰酶促活性有关的疾病的这些化合物的药用组合物。
在真核细胞中，DNA与组蛋白紧密相关以形成称为染色体的紧密复合物。组蛋白(通常为高度保守的跨真核细胞类)构建一个蛋白家族，该蛋白在与DNA的磷酸基接触的碱性氨基酸中富集。
存在五种主要类型的组蛋白，H1、H2A、H2B、H3和H4。H2A、H2B、H3和H4的各队共四对一起形成盘状的八聚体(octomeric)蛋白核芯，DNA围绕该核心卷曲(带有碱性氨基酸的组蛋白与DNA的负电荷的磷酸基相互作用)以形成核小体。大约146碱基对的DNA围绕组蛋白质芯包裹以组成核小体颗粒，染色质重复的结构基元。
组蛋白脱乙酰酶(HDACs)为转录辅阻遏物复合物的一部分并且在调节染色质结构中起关键作用。基于它们对在啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)中发现的HDACs的同源性已鉴定三类不同的人HDACs。I型HDACs(HDAC1、2、3和8)与酵母转录调节剂RPD3有关。II型HDACs(HDAC4、5、6、7、9和10)与酵母中另一种脱乙酰酶HDA1类似。III型HDACs与酵母沉默蛋白SIR有关并且在酶促活性方面依赖于NDA。
组蛋白的可逆性乙酰化是基因表达的主要调节剂，后者通过改变转录因子对DNA的进入而起作用。在正常细胞中，组蛋白脱乙酰酶(HDAC)和组蛋白乙酰转移酶(HATs)一起控制组蛋白的乙酰化水平以维持平衡。组蛋白乙酰化作用在转录激活中起关键作用，而组蛋白的脱乙酰化与转录阻遏和基因沉默相关联[对组蛋白脱乙酰化的综述参见Kouzarides Curr.Opin.Genet.Dev.，940-48(1999)，Johnstone RWNat.Rev.Drug Discov.，1287-299(2002)]。基因阻遏可以在神经元衰退、萎缩和退化性疾病中起重要作用。
另外，组蛋白脱乙酰酶已显示通过它们的乙酰化水平改善调节非-组蛋白的活性。这些包括甾体受体例如雌激素和雄激素受体[Wang等，J.Biol.Chem.，27618375-83(2001)，Gaughan等，J.Biol.Chem.，27725904-13(2002)]、转录因子例如p53、E2F和myoD[Luo等，Nature，408377-381(2000)，Ito等，EMBO J，191176-1179(2001)，Sartorelli等，Mol.Cell，4725-734(1999)]，以及胞质蛋白例如α-微管蛋白[Hubbert等，Nature，417455-458(2002)]。
目前有几种已知的天然和合成的HDAC抑制剂。某些天然抑制剂包括(i)trapoxin B、(ii)曲古柳菌素A[Yoshida和Beppu，Exper.CellRes.，177122-131(1988)]和(iii)chlamydocin。合成抑制剂包括辛二酰苯胺异羟肟酸[Richon等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，95，3003-3007(1998)]和丁酸苯基酯[Johnstone RW Nat.Rev.Drug Discov.，1287-299(2002)]。
曲古柳菌素A已显示可引起对大鼠成纤维细胞在细胞周期的G1和G2期(与HDAC在细胞周期中的调节有关)的抑制[Yoshida和Beppu，Exper.Cell Res.，177122-131(1988)]。曲古柳菌素A和辛二酰苯胺异羟肟酸已显示抑制细胞生长，诱导末端分化和预防小鼠体内肿瘤形成[Johnstone RW Nat.Rev.Drug Discov.，1287-299(2002)]。Trapoxin、曲古柳菌素和depudecin已用于通过HDAC介导的染色质改造研究基因调节[Christian A.Hassig，Stuart L.Schreiber，Curr.Opinion in Chem.Biol.，1997，1，300-308；Christian A.Hassig，Jeffrey K.Tong，Stuart L.Schreiber，Chem.& Biol.，1997，4，783-789；Christian A.Hassig，Jeffrey K.Tong，Tracey C.Fleischer，Takashi Owa，PhyllisGrable，Donald E.Ayer，Stuare L.Schreiber，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，1998，95，3519-3524；Ho Jeong Kwon，Takashi Owa，Christian A.Hassig，Junichi Shimada，Stuart L.Schreiber，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，1998，95，3356-3361]。
本发明的一个目的是提供组蛋白脱乙酰酶抑制剂。
因此，一方面，本发明提供式(I)的化合物和这样化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药 其中R1表示芳基或杂芳基，每一个由一个或更多个选自以下的基团任选取代R3、亚烷基二氧基、羧基、氰基、卤代、羟基、硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、-C(＝O)-R3、-C(＝O)-OR3、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR3、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R3、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R3、-OR3、-O-C(＝O)R3、-SH、-SR3、-SOR3、-SO2R3和-SO2-NR4R5；R2表示氢、氯、氰基、氟、烷氧基、烷基或卤代烷基；R3表示芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或R7；R4和R5独立表示选自氢、烷基、链烯基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基的基团，其中所述烷基或链烯基由芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基任选取代；或者基团-NR4R5可形成环状胺；R6表示氢或低级烷基；R7表示烷基、链烯基和链炔基，其中所述烷基、链烯基或链炔基由一个或更多个选自以下的基团任选取代芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、羟基、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SOR8、SO2R8和-SO2-NR4R5；R8表示烷基、链烯基或链炔基，它们由一个或更多个选自芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、羟基和卤素的基团任选取代；或者R8表示芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基；和
Z为O或S。
本发明的第二个方面为包含与药学上可接受的载体或赋形剂混合的式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药的药用组合物。
本发明的第三个方面为用于治疗的式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药。
本发明的第四个方面为式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药在制备用于治疗其中抑制组蛋白脱乙酰酶可预防、抑制或者缓解疾病的病理学和/或症状学的疾病的药物中的用途。
本发明的第五个方面为在患者中用于治疗其中抑制组蛋白脱乙酰酶可预防、抑制或者缓解疾病的病理学和/或症状学的患者的疾病的方法，方法包括给予患者治疗有效量的式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药。
本发明的第六个方面为抑制细胞中的组蛋白脱乙酰酶的方法，方法包括使其中需要抑制组蛋白脱乙酰酶的细胞与式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药接触。
本发明的第七个方面为制备式I的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药的方法。
本发明的第八个方面为制备药用组合物的方法，它包括使式(I)的化合物或其N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物或者前药与药学上可接受的载体或赋形剂混合。
为了本发明的目的，如贯穿本发明的说明书所使用的以下定义应理解为具有以下含义“本发明的化合物”，和等同表达，在上下文这样允许使用时，意指包括如上文描述的通式(I)的化合物、它们的N-氧化物、它们的前药、它们的药学上可接受的盐以及它们的溶剂合物。
“组蛋白脱乙酰酶”和“HDAC”意指从包括(但不限于)组蛋白、转录因子、类固醇受体和微管蛋白的蛋白质的赖氨酸残基除去乙酰基的酶家族的任何一种酶。除非另外指明，术语组蛋白意指任何组蛋白蛋白质，包括来自任何物种的H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。在一个优选实施方案中，组蛋白脱乙酰酶为人HDAC，包括(但不限于)HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7、HDAC-8、HDAC-9和HDAC-10。在另一个优选实施方案中，组蛋白脱乙酰酶衍生于原生动物或者真菌来源。
“患者”包括人和其他哺乳动物。
为了本发明的目的，如以上使用并贯穿本发明说明书的以下化学术语，除非另外指明，应理解为具有以下含义“酰基”意指烷基-CO-基团，其中烷基如本文所述。
“链烯基”作为基团或基团的部分意指含有碳-碳双键并且其可为直形或分支的在链中具有2-12个碳原子，优选具有2-6个碳原子的脂族烃基团。举例说明的链烯基包括乙烯基和丙烯基。
“烷氧基”意指-O-烷基，其中烷基如下定义。举例说明的烷氧基包括甲氧基和乙氧基。
“烷氧基羰基”意指-C(＝O)-O-烷基，其中烷基如下定义。举例说明的烷氧基羰基包括甲氧基羰基和乙氧基羰基。
“烷基”作为基团或基团的部分指在链中具有1-12个，优选具有1-6个碳原子的直形或支链的饱和烃基团。举例说明的烷基包括甲基、乙基、1-丙基和2-丙基。
“烷基氨基”意指-NH-烷基，其中烷基如上定义。举例说明的烷基氨基包括甲基氨基和乙基氨基。
“亚烷基”意指-(CH2)n-，其中n可为1-3。
“亚烷基二氧基”意指-O-亚烷基-O-基团，其中亚烷基如上定义。举例说明的亚烷基二氧基包括亚甲二氧基和亚乙二氧基。
“烷基亚磺酰基”意指-SO-烷基，其中烷基如上定义。举例说明的烷基亚磺酰基包括甲基亚磺酰基和乙基亚磺酰基。
“烷基磺酰基”意指-SO2-烷基，其中烷基如上定义。举例说明的烷基磺酰基包括甲基磺酰基和乙基磺酰基。
“烷硫基”意指-S-烷基，其中烷基如上定义。举例说明的烷硫基包括甲硫基和乙硫基。
“链炔基”作为基团或基团的部分意指含有碳-碳叁键并且其可为直形或分支的在链中具有2-6个碳原子的脂族烃基团。举例说明的链炔基包括乙炔基和丙炔基。
“芳基”作为基团或基团的部分意指(i)6-14个碳原子，优选6-10个碳原子的任选取代的单环或多环芳族碳环部分，例如苯基或萘基，并且在一个实施方案中优选为苯基；或者(ii)任选取代的部分饱和的双环芳族碳环部分，其中苯基与C5-7环烷基或者C5-7环烯基稠合在一起以形成环状结构，例如四氢萘基、茚基或者2，3-二氢化茚基。芳基可由一个或更多个取代基取代。
“芳基链烯基”意指芳基-链烯基-基团，其中芳基和链烯基如前所述。举例说明的芳基链烯基包括苯乙烯基和苯基烯丙基。
“芳基烷基”意指芳基-烷基-基团，其中芳基和烷基部分如前所述。优选的芳基烷基含有C1-4烷基部分。举例说明的芳基烷基包括苄基、苯乙基和萘甲基。
“芳基链炔基”意指芳基-链炔基-基团，其中芳基和链炔基如前所述。举例说明的芳基链炔基包括苯基乙炔基。
“环状胺”意指任选取代的3-8元单环环烷基环系统，其中环碳原子中的一个被氮替代并且其(i)可任选包含一个另外的选自O、S或NR(其中R为氢、烷基、芳基烷基和芳基)的杂原子和(ii)可稠合于另外的芳基或杂芳基环以形成双环系统。举例说明的环状胺包括吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、二氢吲哚。环状胺基团可被一个或更多个取代基取代。
“环烯基”意指包含至少一个碳-碳双键并具有5-10个碳原子的任选取代的非芳族单环或多环环系统。举例说明的单环环烯基环包括环戊烯基、环己烯基或者环庚烯基。环烯基可被一个或更多个取代基取代。
“环烯基烷基”意指环烯基-烷基-基团，其中环烯基和烷基部分如前所述。举例说明的环烯基烷基包括环戊烯基甲基、环己烯基甲基或者环庚烯基甲基。
“环烷基”意指3-12个碳原子，优选为3-8个碳原子，更优选为3-6个碳原子的任选取代的饱和单环或双环环系统。举例说明的单环环烷基环包括环丙基、环戊基、环己基和环庚基。环烷基可被一个或更多个取代基取代。
“环烷基烷基”意指环烷基-烷基-基团，其中环烷基和烷基部分如前所述。举例说明的单环环烷基烷基包括环丙基甲基、环戊基甲基、环己基甲基和环庚基甲基。
“二烷基氨基”意指-N(烷基)2基团，其中烷基如上定义。举例说明的二烷基氨基包括二甲基氨基和二乙基氨基。
“卤代”或“卤素”意指氟、氯、溴或碘。优选为氟或氯。
“卤代烷氧基”意指-O-烷基，其中烷基由一个或更多个卤原子取代。举例说明的卤代烷基包括三氟甲氧基和二氟甲氧基。
“卤代烷基”意指被一个或更多个卤原子取代的烷基。举例说明的卤代烷基包括三氟甲基。
“杂芳基”作为基团或基团的部分意指(i)5-14个环原子，优选5-10个环原子的任选取代的芳族单环或多环有机部分，其中一个或更多个环原子是不为碳的元素，例如氮、氧或硫(这样基团的实例包括苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、异噁唑基、异喹啉基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、1，3，4-噻二唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基)；(ii)任选取代的部分饱和的多环杂碳环部分，其中杂芳基和环烷基或环烯基稠合在一起以形成环状结构(这样基团的实例包括4-氮杂全氢茚基)。杂芳基可被一个或更多个取代基取代。
“杂芳基链烯基”意指杂芳基-链烯基-基团，其中杂芳基和链烯基部分如前所述。举例说明的杂芳基链烯基包括吡啶基乙烯基和吡啶基烯丙基。
“杂芳基烷基”意指杂芳基-烷基-基团，其中杂芳基和烷基部分如前所述。优选的杂芳基烷基含有低级烷基部分。举例说明的杂芳基烷基包括吡啶基甲基。
“杂芳基链炔基”意指杂芳基-链炔基-基团，其中杂芳基和链炔基部分如前所述。举例说明的杂芳基链炔基包括吡啶基乙炔基。
“杂环烷基”意指(i)4-8个环原子的包含一个或更多个选自O、S或NR的杂原子的任选取代的环烷基；(ii)任选取代的部分饱和的多环杂碳环部分，其中芳基(或者杂芳基环)和杂环烷基稠合在一起以形成环状结构(这样基团的实例包括二氢苯并呋喃基、二氢吲哚基和四氢喹啉基)；(iii)4-8个环成员的包含C(＝O)NR和C(＝O)NRC(＝O)的环烷基(这样基团的实例包括琥珀酰亚胺基和2-氧代吡咯烷基)。杂环烷基可被一个或更多个取代基取代。
“杂环烷基烷基”意指杂环烷基-烷基-基团，其中杂环烷基和烷基部分如前所述。
“低级烷基”作为基团，除非另外指明，意指可为直形或分支的在链上具有1-4个碳原子的脂族烃基团，例如甲基、乙基、丙基(正丙基或异丙基)或者丁基(正丁基、异丁基或者叔丁基)。
“药学上可接受的盐”意指生理学上或毒理学上可耐受的盐并且合适时包括药学上可接受的碱加成盐和药学上可接受的酸加成盐。例如(i)当本发明的化合物包含一个或更多个酸性基团时，例如羧基，可形成的药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、镁和铵盐，或者与有机胺例如二乙胺、N-甲基-葡糖胺、二乙醇胺或氨基酸(例如赖氨酸)等形成的盐；(ii)当本发明的化合物包含碱性基团时，例如氨基，可形成的药学上可接受的酸加成盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐等。
“前药”意指体内经代谢途径(例如经水解、还原或氧化)可转化为式(I)的化合物的化合物。例如含有羟基的式(I)的化合物的酯前药经体内水解可转化为母体分子。含有羟基的式(I)化合物的合适的酯为例如乙酸酯、枸橼酸酯、乳酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水杨酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、富马酸酯、马来酸酯、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸酯、2，5-二羟基苯甲酸酯、羟乙磺酸酯、二-对甲苯酰酒石酸酯、甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯、环己基氨基磺酸酯和喹尼酸酯(quinates)。作为另一个实例，含有羧基的式(I)化合物的酯前药经体内水解可转化为母体分子[酯前药的实例为由F.J.Leinweber，Drug Metab.Res.，18379(1987)描述的那些酯前药]。
“饱和的”与不含有任何碳-碳双键或碳-碳叁键的化合物和/或基团有关。
环状基团指以上，即芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基并且环状胺可被一个或更多个取代基取代。合适的任选的取代基包括酰基(例如-C(＝O)CH3)、烷氧基(例如-OCH3)、烷氧基羰基(例如-C(＝O)-OCH3)、烷基氨基(例如-NHCH3)、亚烷基二氧基(例如-O-CH2-O-)、烷基亚磺酰基(例如-SOCH3)、烷基磺酰基(例如-SO2CH3)、烷硫基(例如-SCH3)、氨基、氨基烷基(例如-CH2NH2)、芳基烷基(例如-CH2Ph或者-CH2-CH2-Ph)、氰基、二烷基氨基(例如-N(CH3)2)、卤代、卤代烷氧基(例如-OCF3或-OCHF2)、卤代烷基(例如-CF3)、烷基(例如-CH3或者-CH2CH3)、羟基、甲酰基和硝基。在一个实施方案中，任选的取代基可另外选自芳基(任选由烷氧基、卤代烷氧基、卤素、烷基或卤代烷基取代)、杂芳基(由烷氧基、卤代烷氧基、卤素、烷基或卤代烷基任选取代)、杂环烷基、氨基酰基(例如CONH2、CONHCH3)、氨基磺酰基(例如SO2NH2、SO2NHCH3)、酰基氨基(例如NHC(＝O)CH3)、磺酰基氨基(例如NHSO2CH3)、杂芳基烷基、环状氨基(例如吗啉)、酰氧基、杂芳氧基、芳基烷氧基(例如苄氧基)和杂芳基烷氧基。
本发明的化合物可以一种或更多种几何异构体、光学异构体、对映体、非对映体和互变异构体形式存在，包括(但不限于)顺式和反式形式、E-和Z-形式、R-、S-和内消旋形式、酮基-和烯醇-形式。除非另外指明，对于一个具体的化合物包括所有这样的异构体形式，包括它们的外消旋和其它的混合物。合适时，通过使用或采纳已知方法(例如层析技术和重结晶技术)，可从它们的混合物中分离这样的异构体。合适时，通过使用或采纳已知方法(例如不对称合成)，可制备这样的异构体。
关于以上式(I)，以下描述具体和优选的实施方案。
当R1为由一个或更多个卤代烷基取代的芳基或杂芳基时，所述卤代烷基优选选自三氟甲基。当R1为由一个或更多个卤代烷氧基取代的芳基或杂芳基时，所述卤代烷氧基优选选自三氟甲氧基或二氟甲氧基。
R1可具体代表任选取代的苯基。对于R1的优选基团包括苯基或4-甲氧基苯基。
R1也可具体代表任选取代的单环杂芳基、优选为任选取代的咪唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、噻吩基和嘧啶基，更优选为任选取代的咪唑基、吡唑基、吡啶基和嘧啶基，特别为2-咪唑基、3-吡唑基、2-吡啶基和2-嘧啶基。在一个实施方案中，R1为任选取代的4-咪唑基。优选地，当R1为杂芳基时，通过R1的环碳原子，并且在一个实施方案中通过与杂原子相邻的环碳原子连接到上式(I)的噻吩基是优选的。优选的任选的取代基包括烷基(优选为低级烷基)和卤代烷基(优选为三氟甲基)。当任选的取代基为烷基时，烷基可被取代，优选被芳基或杂芳基取代，而后者又依次可如在上文描述的那样被任选取代。特别优选的取代基为芳基烷基和杂芳基烷基。在一个实施方案中，R1表示1-(2-苯基乙基)-1H-吡唑-3-基、1-苄基-1H-吡唑-3-基、4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基、吡啶-2-基、5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、2-甲基-2H-吡唑-3-基、1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基、2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-4-基、5-三氟甲基异噁唑-3-基、3-甲基[1，2，4]噁二唑-5-基或者噻吩-2-基。
R2可具体表示氢。
当R2为烷基时，所述烷基优选选自低级烷基，优选为甲基。当R2为烷氧基时，所述烷氧基优选选自低级烷氧基，优选为甲氧基。当R2为卤代烷基时，所述卤代烷基优选选自三氟甲基。
在一个实施方案中，R3和R8独立选自烷基、链烯基、链炔基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基链炔基、环烷基烷基、环烯基烷基、杂环烷基烷基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基和杂环烷基。
在一个实施方案中，R3和R8独立选自烷基，优选为低级烷基，优选为甲基或乙基。
在一个实施方案中，R4和R5独立选自氢、烷基、链烯基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、环烷基烷基、杂芳基、杂环烷基或杂芳基烷基；或者基团-NR4R5可形成环状胺；在另一个实施方案中，R4和R5独立选自氢、烷基、链烯基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；或者基团-NR4R5可形成环状胺；在另一个实施方案中，R4和R5独立选自氢和烷基(优选为低级烷基，优选为甲基)。
在一个实施方案中，R7为烷基、链烯基、链炔基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、杂芳基烷基、与杂原子连接的链烯基、与杂原子连接的炔基、环烷基烷基、环烯基烷基或者杂环烷基烷基。
在一个优选的实施方案中，R1被烷基、链烯基或链炔基取代，优选被烷基或链烯基，优选被烷基(优选为C1-3烷基)取代，后者任选被一个或更多个选自以下的基团取代，包括芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、羟基、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SOR8、SO2R8和-SO2-NR4R5。在一个特别优选的实施方案中，所述烷基、链烯基或链炔基被选自以下的基团取代芳基、杂芳基、环烷基、环烯基和杂环烷基，并且任选被选自以下的基团进一步取代羟基、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SOR8、SO2R8和-SO2-NR4R5。在另一个优选的实施方案中，所述烷基、链烯基或链炔基被选自-C(＝Z)-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8和-NR6-C(＝O)-NR4R5的基团取代，并且在一个来自-C(＝Z)-NR4R5和-NR6-C(＝Z)-R8的实施方案中，优选其中Z为O，其中R4、R5或R8为如在此定义的环状基团和/或优选其中R4和R6独立选自氢。在另一个优选的实施方案中，R5或R8基团可选自任选取代的芳基、杂芳基、杂环烷基或者烷基(优选为C1-3烷基)，它们被任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基取代，并且优选选自如在下文定义的基团-(CH2)m-Ar。
在另一个实施方案中，R1可被在下文定义的基团X取代。
在一个实施方案中，R1选自被烷基(优选为C1-3烷基，尤其是甲基)取代的3-吡唑基，所述烷基被-(CO)-NR4R5基团或者-(SO2)-NR4R5基团，优选被-(CO)-NR4R5基团取代。在这个实施方案中，R4优选为氢。在这个实施方案中，R5优选为任选取代的芳基、杂芳基、杂环烷基或者烷基(尤其是甲基或乙基)，它们被任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基取代，并且优选R5为任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基。在这个实施方案中，烷基取代基优选存在于3-吡唑基的1-位。因此，在一个实施方案中，R1表示3-吡唑基并且本发明的化合物由式(Ia)表示
其中Ar为任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基；Y为H、CF3或者烷基，优选为H；G为CO或SO2，优选为CO；R4优选为H；n为0、1或2，优选为0；和m为1、2或3，优选为1。
在另一个实施方案中，R1选自被烷基(优选为C2-4烷基，尤其是乙基)取代的3-吡唑基，所述烷基被OR8或者NR4R5取代。在这个实施方案中，R8或R5优选选自任选取代的芳基、杂芳基和杂环烷基，并且选自被任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基取代的烷基(优选为C1-3烷基)。在一个实施方案中，R4为氢或烷基，优选为氢。因此，在这个实施方案中，本发明的化合物由式(Ib)或(Ic)表示 其中Ar和Y如以上定义；m为2、3或4，优选为2；n为0、1、2或3；和R4为氢或烷基，优选为氢。
在另一个实施方案中，本发明的化合物由式(Id)表示
其中基团X选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、-C(O)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(O)-R8、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SO2-NR4R5和烷基(优选为C1-3烷基)，所述烷基由选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、-C(O)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(O)-R8、-NR6-SO2-R8、-OR8和-SO2-NR4R5的基团取代，其中R4、R5、R6和R8如先前定义。在基团X中，R4和R6优选选自氢和烷基，优选为氢，并且R5和R8优选选自任选取代的芳基、杂芳基、杂环烷基或者烷基(优选为C1-3烷基)，它们由任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基取代。基团X优选选自-(CH2)nCONR4(CH2)mAr，-(CH2)nSO2NR4(CH2)mAr，-(CH2)nNR6CO(CH2)mAr，-(CH2)nNR6SO2(CH2)mAr，-(CH2)nNR4(CH2)mAr，-(CH2)nO(CH2)mAr，和-(CH2)nAr；Ar、R4和R6如以上定义；n为0、1、2或3；和m为0、1、2、3或4。
在一个实施方案中，在基团X中m的值为0、1、2或3，并且这在此称作基团X1。在式(Id)的化合物中，优选X为基团X1。
在另一备选实施方案中，R1为2-吡啶基并且本发明的化合物由式(Ie)表示
其中X如以上定义，并且可被连接在吡啶的5或6位，优选在5位；和q为1或2，优选为1，其中X优选为-(CH2)nCONR4(CH2)mAr，优选其中n为1，和优选其中R4为H，在另一备选实施方案中，R1表示2-咪唑基并且本发明的化合物由式(If)表示 其中X和Y如以上定义，尤其是其中Y为H或者烷基(优选为甲基)。
在另备选实施方案中，本发明的化合物由式(If)表示，其中Y为CF3并且基团X由H替代。
在另一备选实施方案中，R1表示4-咪唑基并且本发明的化合物由式(Ig)表示 其中X如以上定义。
在另一备选实施方案中，R1表示2-嘧啶基并且本发明的化合物由式(Ih)表示
其中X和q如以上定义，并且取代基X连接在嘧啶环的5或6位。
在本发明的化合物中，尤其是如由式(Ia)-(Ih)表示的化合物中芳基优选为苯基；杂芳基优选为喹啉基(包括N-氧化物)、异喹啉基(包括N-氧化物)、吡啶基(包括N-氧化物)、噁二唑基、噻二唑基、咪唑基、吲哚基、吲唑基、吡咯基或苯并呋喃基；和杂环烷基优选为(i)任选取代的饱和多环杂碳环部分，其中芳基或杂芳基环和杂环烷基稠合在一起以形成环状结构，更优选为二氢苯并[1，4]二氧芑基，或者(ii)在氮上由芳基、芳烷基、杂芳基烷基或者杂芳基取代的哌嗪基。
可存在于芳基、杂芳基或者杂环烷基上的任选取代基优选选自卤素、CF3、OCF3、烷基、酰氨基、芳烷基、芳氧基、芳基、环状氨基、杂芳基、亚烷基二氧基和氨基磺酰基。
由Ar表示的杂芳基或者杂环烷基可以通过碳原子连接，或者在另一备选实施方案中通过杂原子连接，例如1-咪唑基或者1-哌嗪基。
在一个实施方案中，本发明的化合物为1. 5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；2. 5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；3. 5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；4. 5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；和这样化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药。
在一个优选的实施方案中，本发明的化合物为
1. 5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；2. 5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；3. 5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；4. 5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；5. 5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；6. 5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；7. 5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；8. 5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；9. 5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；10. 5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；11. 5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；12. 5-[5-(2-苄氧基-乙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；13. 5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；14. 5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；15. 5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；16. 5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；17. 5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；18. 5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；
19. 5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；20.喹啉-2-羧酸{2-[3-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡唑-1-基]-乙基}-酰胺；21. 5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；22. 5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；23. 5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；24. 5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；25. 2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苯乙基-酰胺；26. 2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苄基酰胺；27. 5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；28. 5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；29. 5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；30. 5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；31. 5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；32. 5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；33. 5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；
和这样化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药。
按照在文献中和在本文件的生物活性部分中描述的试验，本发明提供抑制HDAC活性的化合物。这些化合物的治疗用途与已知至少部分由HDAC活性介导的或者已知其症状被HDAC抑制剂(例如曲古抑菌素-A、N-辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoyl anilide hydroxamicacid)、Trapoxin和depudecin)缓解的任何疾病有关。例如，这些化合物对于治疗癌症、牛皮癣、纤维增生疾病(例如肝纤维变性)、平滑肌细胞增生疾病(例如动脉硬化、再狭窄)、和通过免疫调节可治疗的炎性疾病病症(例如类风湿性关节炎、自身免疫性糖尿病、狼疮、变态反应)、神经变性性疾病(例如亨庭顿氏病)、涉及血管生成的疾病(例如癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、视网膜病例如糖尿病性视网膜病、与年龄有关的黄斑变性、间质性角膜炎、红眼性青光眼(rubeoticglaucoma))、真菌和寄生虫感染(例如疟疾、原虫感染)和造血细胞疾病(例如贫血、镰状细胞性贫血、地中海贫血)。
因此，在一个实施方案中，本发明打算治疗由增加的细胞增殖引起的疾病。这些疾病包括(但不限于)原发性的和不同起源的转移癌症(包括由病毒感染例如EBV、HIV、B和C型肝炎以及KSHV引起的那些癌症)、由成肌纤维细胞增生和增加产生细胞外基质蛋白引起的肝、肺、肾、心脏和皮肤的纤维化[Niki等，Hepatology，29858-67(1999)]、炎性疾病和心肌细胞肥大[Lu等，PNAS，974070-4075(2000)]。
在另一个实施方案中，本发明的目的也是治疗包括(但不限于)疟疾、弓形体病和球虫病的原虫感染。
在另一个实施方案中，本发明的目的是治疗由导致组蛋白低乙酰化的扩大的聚谷胺酰胺重复引起的疾病，包括(但不限于)神经变性性疾病例如亨庭顿氏病。
式I的化合物可被使用或者与一种或更多种另外的药物和/或方法(例如在癌症的情况下的放射疗法)联合给予以用于治疗以上提及的疾病，这些组分处于相同的制剂中或者处于用于同时或者连续给药的分开的制剂中。另外的药物可以是或可以不是HDAC抑制剂。
例如，通过使用或者采用在此描述的方法，可以制备本发明的噻吩基-异羟肟酸。通过已知的有机合成方法，例如由R.C.Larock在Comprehensive Organic Transformations，VCH publishers，1989中描述的那些方法也可以制备它们。
保护在用于制备式(I)的化合物的中间体中的反应活性官能团(例如羟基、氨基、硫代或者羧基)以避免它们不必要地参与导致形成式(I)化合物的反应可以是必要的。可以使用常规的保护基团，例如由T.W.Greene和P.G.M.Wuts在“Protective Groups in OrganicChemistry”John Wiley和Sons.1999中描述的那些保护基团。在以下提供的反应流程中，R1-R21的所有定义应理解为包括这样的保护的官能团。
式(I)化合物的制备如在反应流程1中显示的那样，从式(II)的相应羧酸可制备式(I)的化合物
反应流程1 因此，例如，在步骤1中，在二异丙基乙胺存在下，于惰性溶剂例如二甲基甲酰胺中，并且在约室温的温度下，使式(II)的化合物，其中R1和R2如上所定义，与O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺和合适的偶合剂，例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐反应。在步骤2中，在甲醇中和在约室温的温度下，使生成的式(III)的产物，其中R1和R2如上所定义，与酸催化剂例如对-甲苯磺酸反应，得到式(I)的化合物，其中R1和R2如上所定义。
或者，通过式(II)的化合物与其它的O-保护的羟胺例如O-(三甲基甲硅烷基)羟胺、O-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-羟胺或者O-苄基羟胺反应，随后使用合适的试剂例如四-正丁基氟化铵或者在钯(O)催化剂存在下的氢脱除保护，可制备式(I)的化合物。
或者，通过式(II)的化合物与N，O-二保护的羟胺例如O-2，4-二甲氧基苄基-N-2，4，6-三甲氧基苄基羟胺反应，随后使用合适的酸例如在二氯甲烷中的10％三氟乙酸脱除保护，可制备式(I)的化合物。
或者，通过式(II)的化合物与羟胺反应，可制备式(I)的化合物。
如在反应流程2中显示的那样，从相应的酯(IV)也可以制备式(I)的化合物反应流程2 因此，在碱例如三乙胺、甲醇钠或者氢氧化钾存在下，于质子溶剂例如甲醇或乙醇中并且使用助溶剂例如N，N-二甲基乙酰胺(如果需要)，在从室温至高达溶剂的回流温度的温度下，式(IV)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R9为低级烷基(优选为甲基和乙基)，可以与羟胺盐酸盐反应，得到式(I)的化合物，其中R1和R2如上所定义。
通过本发明其它化合物的相互转换也可以制备式(I)的化合物。
作为一个实例，使用标准烷基化条件，通过用合适的烷基、芳基烷基-或者杂芳基烷基-卤化物，优选为溴化物，使相应的式(I)化合物烷基化，其中R1为包含未取代的亚氨基的杂芳基(例如R1为1H-吡唑-3-基)，可制备式(I)的化合物，其中R1为含有被烷基、芳基烷基或者杂芳基烷基取代的氮原子的杂芳基(例如R1为1-苄基-1H-吡唑-3-基)。例如在碱例如碱金属碳酸盐如碳酸钾或者碱金属氢化物如氢化钠存在下，于惰性溶剂例如四氢呋喃、二甲基甲酰胺或者二甲基亚砜中，在约0℃-100℃的温度下，可实施烷基化。
作为另一个实例，通过式(I)化合物的氧化，其中R1为相应的非氧化杂芳基，可制备式(I)的化合物，其中R1为包含N-氧化物基团的杂芳基(例如吡啶-N-氧化物)。优选在或者高于室温下，例如在约60-90℃的温度下，通过与过氧化氢和有机酸例如乙酸的混合物反应，可以便利地实施氧化作用。或者，于惰性溶剂例如氯仿或二氯甲烷中，在约室温-回流的温度下，优选在升高的温度下，通过与过酸例如过乙酸或者间-氯过氧苯甲酸反应，可以实施氧化作用。或者在钨酸钠存在下，于室温-约60℃之间的温度下，通过与过氧化氢反应，可以实施氧化作用。
或者，在溶剂例如二氯甲烷和甲醇中，使用单过氧邻苯二甲酸镁六水合物可以实施氧化反应。
通过使用或采用在此描述的方法或者在文献中已知的那些方法，可以制备起始原料和中间体。
式(II)中间体的制备如在反应流程3中显示的那样，从式(1)的化合物可以制备式(II)的中间体反应流程3 因此，在质子溶剂例如甲醇或乙醇中，于回流温度下，式(1)的化合物，其中R1和R2如上所定义，可以与碱水溶液例如氢氧化钠溶液反应，得到式(II)的酸，其中R1和R2如上所定义。
如在反应流程4中显示的那样，从式(IV)的化合物也可以制备式(II)的中间体反应流程4
因此，在质子溶剂例如甲醇或乙醇中，于室温至高达回流温度的温度下，式(IV)的化合物，其中R1、R2和R9如上所定义，可以与碱水溶液例如氢氧化钠溶液反应，得到式(II)的化合物，其中R1和R2如上所定义。
如在反应流程5中显示的那样，从式(2)的化合物也可以制备式(II)的中间体反应流程5 因此，于惰性溶剂(例如乙醚或者四氢呋喃)中，在约室温至-80℃的温度下，式(2)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R10为氢、溴或者碘，可与有机锂(例如丁基锂)反应，随后与二氧化碳反应，得到式(II)的化合物，其中R1和R2如上所定义。
式(IV)中间体的制备如在反应流程6中显示的那样，从式(2)的化合物可以制备式(IV)的中间体反应流程6 因此，于惰性溶剂(例如乙醚或者四氢呋喃)中，在约室温至-80℃的温度下，式(2)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R10为氢、溴或者碘，可与有机锂(例如丁基锂)反应，随后与式R9-O-C(＝O)-Cl的烷基氯代甲酸酯反应，其中R9如上所定义(例如氯代甲酸甲酯或者氯代甲酸乙酯)，得到式(IV)的化合物，其中R1、R2和R9如上所定义。
或者，二氧化碳可用于替代氯代甲酸烷基酯，得到式(IV)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R9为氢。
式(1)中间体的制备如在反应流程7中显示的那样，从式(3)的化合物可以制备式(1)的化合物反应流程7 因此，于惰性溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺或者N-甲基-2-吡咯烷酮中，在从约100℃至高达溶剂的回流温度的升高的温度下，式(3)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R11为氯、溴或者碘，可与氰化亚酮反应，得到式(1)的化合物，其中R1和R2如上所定义。
或者，在钯(O)催化剂例如四(三苯基膦)钯(O)存在下，于惰性溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达回流温度的温度下，通过式(3)的化合物与氰化锌反应，可制备式(1)的化合物。
式(3)中间体的制备如在反应流程8中显示的那样，从式(4)的化合物可以制备式(3)的中间体
反应流程8 因此，通过式(4)的化合物，其中R1和R2如上所定义，与合适的卤化剂例如溴、碘、N-氯代琥珀酰亚胺、N-溴代琥珀酰亚胺或者N-碘代琥珀酰亚胺反应，可以制备式(3)的化合物，其中R1和R2如上所定义和R11为氯、溴或者碘。
用于制备式(II)、(IV)、(1)和(4)的化合物的通用方法通常合成方法可用于式(5)的化合物，其中R12为氢、羧基、C(＝O)OR9或者氰基 应该理解式(5)为包括式(II)、(IV)、(1)和(4)的化合物的通式。
如在反应流程9中显示的那样，从式(6)的化合物可以制备式(5)的化合物
反应流程9 因此，式(6)的化合物，其中R2、R11和R12如上所定义，可以与式(7)的化合物偶合，其中R1如上所定义和R13与R14独立为氢或者低级烷基，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如四(三苯基膦)钯(O)和合适的碱例如碳酸铯存在下，于合适的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。
或者，使用式(8)的化合物，其中R1如上所定义，可以实施偶合反应。
如在反应流程10中显示的那样，从式(11)的化合物也可以制备式(5)的化合物
反应流程10 因此，式(11)的化合物，其中R1如上所定义和R15为氯、溴、碘或者三氟甲磺酰氧基，可以与式(9)的化合物反应，其中R2和R12如上所定义和R13与R14独立为氢或者低级烷基，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如四(三苯基膦)钯(O)和合适的碱例如碳酸铯存在下，于合适的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。
或者，使用式(10)的化合物，其中R2和R12如上所定义，也可实施偶合反应。
通过使式(12)的化合物 其中R2和R12如上所定义，与合适的卤化剂例如溴、碘、N-氯代琥珀酰亚胺、N-溴代琥珀酰亚胺或者N-碘代琥珀酰亚胺反应，可制备式(6)的化合物，其中R2、R11和R12如上所定义。
从商业来源可以得到式(7)的化合物，其中R1、R13和R14如上所定义。或者，通过例如式(13)的有机金属试剂R1-M(13)其中R1如先前定义和M为金属原子例如锂或镁，与三甲基硼酸酯(或者三乙基硼酸酯)反应，可以得到式(7)的化合物，其中R1如上所定义和R13与R14两者为甲基(或者乙基)。
在合适的催化剂例如[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯和合适的碱例如乙酸钾存在下，于合适的溶剂例如二噁烷中，在从约室温至高达80℃的温度下，通过式(11)的化合物，其中R1和R15如上所定义，与二硼酸二频哪醇酯(bis(pinacolato)diboron)反应，可制备式(8)的化合物，其中R1如上所定义。
或者，在催化剂例如乙酸钯和合适的碱例如乙酸钾存在下，于合适的溶剂例如二甲基亚砜中，在从约室温至高达80℃的温度下，通过式(11)的化合物，其中R1和R15如上所定义，与二硼酸二频哪醇酯反应，可制备式(8)的化合物，其中R1如上所定义。
从商业来源可以得到(例如5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸)或者由本领域技术人员可制备式(9)的化合物。或者按照反应流程11可以制备式(9)的化合物反应流程11 因此，式(14)的化合物，其中R2和R12如上所定义和R10为氢、溴或碘，可以与有机锂试剂例如丁基锂反应，随后于惰性溶剂例如四氢呋喃中，在从约-80℃至室温的温度下，与三甲基硼酸酯(或者三乙基硼酸酯)反应，得到式(9)的化合物，其中R2和R12如上所定义且R13和R14两者为甲基(或者乙基)。
在合适的催化剂例如[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯和合适的碱例如乙酸钾存在下，于合适的溶剂例如二噁烷中，在从约室温至高达80℃的温度下，通过式(6)的化合物，其中R2、R11和R12如上所定义，与二硼酸二频哪醇酯反应，可以制备式(10)的化合物，其中R2和R12如上所定义。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(11)和(12)的化合物。
按照反应流程12可制备式(5)的化合物，其中R2如上所定义，R12为氢或氰基和R1为 或 (其中R16为氢、三氟甲基、烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基和R17为氢、烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基，此后描述为式(15a)和(15b)化合物
反应流程12 因此，式(16)的1，3-二酮，其中R2和R16如上所定义，且R12为氢或者氰基，可以与式(17)的肼反应，其中R17如上所定义，得到式(15a)和(15b)的化合物。于质子溶剂例如醇，优选为乙醇中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。应认识到这样的反应可产生两种区域异构体(15a)和(15b)的混合物，其比率依基团R2、R16和R17的性质和反应条件而定。当产生时，通过经典技术例如分级结晶或层析可分离这样的区域异构体。
如在反应流程13中显示的那样，可以制备式(16)的化合物，其中R2和R16如上所定义且R12为氢或者氰基反应流程13 因此，式(18)的化合物，其中R2如上所定义和R12为氢或者氰基，可以与式(19)的化合物反应，其中R16如上所定义和R9为低级烷基，得到式(16)的化合物。于质子溶剂例如醇如甲醇中，在从约室温至高达溶剂的反应温度的温度下，用合适的碱例如甲醇钠可便利地实施该反应。
如在反应流程14中显示的那样，可以制备式(15a)和(15b)的化合物，其中R12为氢、羧基、C(＝O)OR9或者氰基和R16为氢反应流程14 因此，例如在步骤1中，于合适的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，式(18)的化合物，其中R2如上所定义和R12为氢、羧基、C(＝O)OR9或者氰基，可以与叔丁氧基双(二甲基氨基)甲烷反应。在步骤2中，生成的式(20)的中间体，其中R2和R12如上所定义，可以与式(17)的肼反应，其中R17如上所定义，得到式(15a)和(15b)的化合物，其中R2、R12和R17如在上文描述。于质子溶剂例如醇，优选为乙醇中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可便利地实施步骤2。应认识到这样的反应可产生两种区域异构体，其比率依基团R2和R17的性质和反应条件而定。当产生时，通过经典技术例如分级结晶或层析可分离这样的区域异构体。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(17)和(18)的化合物。
如在反应流程15中描述的那样，可制备式(15a)和(15b)化合物，其中R17为烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基、链烯基、链炔基、芳基链烯基、芳基链炔基反应流程15 因此，例如在合适的碱如氢化钠存在下，于惰性溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，式(21)的化合物，其中R2、R12和R16如上所定义，可以与式R17-X的化合物反应，其中R17为烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基、链烯基、链炔基、芳基链烯基、芳基链炔基和X为卤代(优选为溴代)、-OSO2C6H5或者-OSO2CH3。应认识到这样的反应可产生两种区域异构体，其比率依基团R2、R16和R17的性质和反应条件而定。当产生时，通过经典技术例如分级结晶或层析可分离这样的区域异构体。
如在反应流程16中描述的那样，可制备通式(5)的化合物，其中R12为氢、羧基、C(＝O)OR9或氰基和R1为 ，其中R18为氢、三氟甲基、烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基，此后描述为式(22)化合物反应流程16 因此，式(23)的化合物，其中R2和R12如上所定义，可以与式(24)的化合物反应，其中R18如上所定义，得到式(22)的所述化合物。于含水的醇溶剂例如甲醇水溶液中，在乙酸铵存在下，在从约室温至溶剂的约回流温度的温度下，可便利地实施该反应。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(23)和(24)的化合物。
如在反应流程17中显示的那样，可制备通式(5)的化合物，其中R12如上所定义和R1为
，其中R19为氢、三氟甲基、烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或者杂环烷基烷基，此后描述为式(25)化合物反应流程17 因此，式(23)的化合物，其中R2和R12如上所定义，可以与式(26)的化合物反应，得到式(25)的所述化合物。于溶剂例如乙腈中，在乙酸铵存在下，在从约室温至溶剂的约回流温度的温度下，可便利地实施该反应。
使用在文献中描述的和本领域技术人员已知的公开的方法[Wasserman等，J.Org.Chem.，2003，58，4785-4787]，可以制备式(26)的化合物。
如在反应流程18中显示的那样，可制备通式(5)的化合物，其中R2和R12如上所定义和R1为 ，其中R20为氢、C(＝O)OR9、卤代、CHO、CN、NO2、NH2、三氟烷基、烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基，此后描述为式(27)化合物
反应流程18 因此，式(28)的化合物，其中R20和R15如上所定义，可以与式(9)的化合物反应，其中R2、R12、R13和R14如上所定义，得到式(27)的化合物，其中R2、R12和R20如上所定义。在合适的催化剂例如四(三苯基膦)钯(O)和合适的碱例如碳酸铯存在下，于合适的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。
或者，使用式(10)的化合物，其中R2和R12如上所定义，也可实施偶合反应。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(28)的化合物。
如在反应流程19中显示的那样，从式(29)的化合物可以制备式(5)的化合物反应流程19
因此，式(29)的化合物，其中R2和R12如上所定义，可以与式(11)的化合物偶合，其中R15如上所定义，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如二氢二氯双(二叔丁基phosphinito-κP)钯酸盐(2-)存在下，于合适的溶剂例如四氢呋喃和N-甲基吡咯烷酮中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。
使用在文献中描述的和对本领域技术人员已知的公开的方法，可以制备式(29)的化合物。
如在反应流程20中显示的那样，从式(6)的化合物可以制备式(5)的化合物反应流程20 因此，式(6)的化合物，其中R2、R11和R12如上所定义，可以与式(30)的化合物偶合，其中R1如上所定义，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如二氢二氯双(二叔丁基phosphinito-κP)钯酸盐(2-)存在下，于合适的溶剂例如四氢呋喃和N-甲基吡咯烷酮中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，可实施该反应。
使用在文献中描述的和对本领域技术人员已知的公开的方法，可以制备式(30)的化合物。
如在反应流程21中显示的那样，从式(31)的化合物可以制备式(5)的化合物
反应流程21 因此，式(31)的化合物，其中R2、R9和R12如上所定义，可以与式(11)的化合物偶合，其中R15如上所定义，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如三(二亚苄基丙酮)二钯存在下，于合适的溶剂混合物例如N-甲基吡咯烷酮中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，实施反应。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(31)的化合物。
如在反应流程22中显示的那样，从式(6)的化合物可以制备式(5)的化合物反应流程22 因此，式(6)的化合物，其中R2、R12和R15如上所定义，可以与式(32)的化合物偶合，其中R1和R9如上所定义，得到式(5)的化合物，其中R1、R2和R12如上所定义。在合适的催化剂例如三(二亚苄基丙酮)二钯存在下，于合适的溶剂例如N-甲基吡咯烷酮中，在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，实施反应。
从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(32)的化合物。
如在反应流程23中显示的那样，可以制备通式(5)的化合物，其中R2和R12如上所定义和R1为 ，其中R21为氢、三氟烷基、烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基，此后描述为式(33)化合物反应流程23 因此，式(34)的化合物，其中R2和R12如上所定义，可以与式(35)的化合物反应，其中R9和R21如上所定义，得到式(33)的化合物，其中R2和R12如上所定义。于醇溶剂例如乙醇中，和在从约室温至高达溶剂的回流温度的温度下，实施反应。
如在反应流程24中显示的那样，可以制备通式(5)的化合物，其中R12如上所定义和R1为 ，其中R18如上所定义，此后描述为式(36)化合物
反应流程24 因此，式(37)的化合物，其中R2和R12如上所定义，可以与式(38)的化合物反应，其中R18如上所定义，得到式(36)的所述化合物。于含水醇溶剂例如甲醇水溶液中，在乙酸铵存在下，在从约室温至溶剂的回流温度的温度下，可便利地实施该反应。
使用在文献中描述的公开的方法可以制备式(37)的化合物和从商业来源可以得到或者使用在文献中描述的公开的方法[Izawa等，Bull.Chem.Soc.，1983，56，1490-1496]可以制备式(38)的化合物。
应意识到，当存在合适的官能团时，通过一种或者更多种标准合成方法，使用取代、氧化、还原或者裂解反应，式(I)的化合物或者任何上述的中间体例如式(II)、(III)、(IV)、(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(15a)、(15b)、(22)、(25)或者(27)的中间体可以被进一步衍化。具体的取代方法包括常规烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤代、硝化、甲酰化和偶合方法。
例如使用还原性烷基化方法，采用醛或酮和氢硼化物例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠，于溶剂例如卤代烃如1，2-二氯乙烷或者醇如乙醇中，必要时，在酸例如乙酸存在下，于大约环境温度下，可将伯胺(-NH2)基团烷基化。采用醛可类似地将仲胺(-NH-)基团烷基化。
在另一个实例中，经酰化可将伯胺或仲胺基团转化为酰胺基团(-NHCOR’或-NRCOR’)。通过在碱例如三乙胺存在下，于合适的溶剂例如二氯甲烷中与合适的酰氯反应，或者通过在合适的偶合剂例如HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)存在下，于合适的溶剂例如二氯甲烷中与合适的羧酸反应，可以实现酰化。类似地，通过在合适的碱例如三乙胺存在下，于合适的溶剂例如二氯甲烷中与合适的磺酰氯反应，可以将胺基团转化为磺酰胺基团(-NHSO2R’或-NR”SO2R’)。通过在合适的碱例如三乙胺存在下，于合适的溶剂例如二氯甲烷中与合适的异氰酸酯反应，可以把伯或仲胺基团转化为脲基团(-NHCONR’R”或-NRCONR’R”)。
例如，通过于溶剂例如乙酸乙酯或醇如甲醇中，在金属催化剂例如在载体如炭上的钯存在下，使用例如氢催化氢化，经还原硝基(-NO2)基团可得到胺(-NH2)。或者，在酸例如盐酸存在下，通过使用例如金属如锡或铁化学还原，可进行转化。
在另一个实例中，通过于溶剂例如醚如环状醚例如四氢呋喃中，在从-78℃至溶剂的回流温度的温度下，在金属催化剂例如在载体如炭上的钯或者兰尼镍存在下，例如使用氢催化氢化，经还原腈(-CN)可得到胺(-CH2NH2)基团。
在另一个实例中，通过把羧酸基团(-CO2H)转化为相应的酰基叠氮化物(-CON3)、库尔提斯重排和水解生成的异氰酸酯(-N＝C＝O)，可得到胺(-NH2)基团。
在溶剂例如卤代烃如二氯甲烷或者醇如乙醇中，必要时，在酸例如乙酸存在下，在约环境温度下，通过采用胺和硼氢化物例如三乙酰氧基硼氢化钠或氰基硼氢化钠还原胺化，可把醛基团(-CHO)转化为胺基团(-CH2NR’R”)。
在另一个实例中，通过使用维悌希或Wadsworth-Emmons反应，在对本领域技术人员已知的标准条件下，采用合适的正膦或膦酸酯，醛基可转化为链烯基(-CH＝CHR’)。
在合适的溶剂例如甲苯中，通过使用二异丁基氢化铝还原酯基团(例如-CO2Et)或者腈(-CN)，可得到醛基团。
或者，通过使用本领域技术人员已知的任何合适的氧化剂氧化醇基团，可得到醛基团。
通过酸-或碱催化的水解，依R的性质而定，可把酯基团(-CO2R’)转化为相应的酸基团(-CO2H)。如果R为叔丁基，例如通过用有机酸如在含水溶剂中的三氟乙酸处理，或者通过用无机酸如在含水溶剂中的盐酸处理，可以得到酸催化的水解。
于合适的溶剂例如二氯甲烷中，在合适的偶合剂例如HATU存在下，通过与合适的胺反应，可把羧酸基团(-CO2H)转化为酰胺(-CONHR’或-CONR’R”)。
在另一个实例中，通过把一个碳(one carbon)(即-CO2H至-CH2CO2H)转化为相应的酰氯(-COCl)，随后经阿恩特-艾斯特合成，可将羧酸同系物化。
在另一个实例中，通过使用例如复合金属氢化物如在乙醚或四氢呋喃中的氢化铝锂或者在溶剂例如甲醇中的硼氢化钠还原，从相应的酯(例如-CO2R’)或者醛(-CHO)可生成-OH基团。或者，通过使用例如在溶剂如四氢呋喃中的氢化铝锂，或者通过使用在溶剂如四氢呋喃中的硼烷还原相应的酸(-CO2H)，可制备醇。
使用对本领域技术人员已知的条件，可以把醇基团转化为离去基团，例如卤原子或磺酰氧基如烷基磺酰氧基，例如三氟甲磺酰氧基或芳基磺酰氧基如对-甲苯磺酰氧基。例如，醇可以与在卤代烃(例如二氯甲烷)中的亚硫酰氯反应，得到相应的氯化物。碱(例如三乙胺)也可用于这个反应。
在另一个实例中，在膦例如三苯基膦和活化剂如二乙基-、二异丙基或者二甲基偶氮二羧酸酯存在下，在溶剂例如四氢呋喃中，通过苯酚与醇偶合，可将醇或苯酚基团转化为醚基团。或者，通过使用合适的碱例如氢化钠把醇脱质子，随后接着加入烷化剂例如烷基卤化物，可以制备醚基团。
通过任选在低温例如约-78℃下，于溶剂例如四氢呋喃中，用碱例如锂碱如正丁基或叔丁基锂处理，并且然后用亲电试剂猝灭以引入要求的取代基，可以使化合物中的芳族卤素取代基经受卤素-金属互换。因此，例如，通过使用N，N-二甲基甲酰胺作为亲电试剂，可以引入甲酰基。或者，芳族卤素取代基可以经历金属(例如钯或铜)催化反应，以引入例如酸、酯、氰基、酰胺、芳基、杂芳基、链烯基、链炔基、硫代-或氨基取代基。可使用的合适的方法包括由Heck、Suzuki、Stille、Buchwald或Hartwig描述的那些方法。
在与合适的亲核试剂例如胺或醇反应后，芳族卤素取代基也可经历亲核取代。有利地，在微波照射存在下，于升高的温度下，可实施这样的反应。
用常规方法，使用一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂，可配制本发明的组合物。因此，本发明的活性化合物可配制用于口服、颊、鼻内、非肠道(例如静脉内、肌内或皮下)、经皮或者直肠给药，或者以适合于经吸入或吹入给药的形式存在。
对于口服给药，药用组合物可以采取例如通过常规方法用药学上可接受的赋形剂制备的片剂或者胶囊剂的形式，所述赋形剂有例如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或者羟丙基甲基纤维素)、填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或者磷酸钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或者硅胶)、崩解剂(例如马铃薯淀粉或者淀粉羟乙酸钠)或者润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。通过本领域熟知的方法可将片剂包衣。用于口服给药的液体制剂可采取例如溶液剂、糖浆剂或者混旋剂的形式，或者它们可作为临用前用水或其它合适的媒介物构成的干燥产品呈现。通过常规方法用药学上可接受的添加剂例如悬浮剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或者氢化的食用脂肪)、乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)、非水媒介物(例如杏仁油、油状酯或乙醇)和防腐剂(例如甲基或丙基对-羟基苯甲酸酯或山梨酸)，可制备这样的液体制剂。
对于颊给药，组合物可采取用常规方法配制的片剂或者糖锭剂的形式。
本发明的活性化合物可以配制用于经注射的非肠道给药，包括使用常规的插管技术或者输注。用于注射的制剂可以单位剂型例如安瓿或者以多剂量容器呈现，同时加入防腐剂。组合物可采取这样的形式例如混旋剂、溶液剂或者在油或含水媒介物中的乳剂，并且可含有配方试剂例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
或者，活性成分可以在使用前用合适的媒介物例如灭菌无热原水重构成的粉末形式存在。
本发明的活性化合物也可以直肠组合物例如栓剂或者保留灌肠剂的形式配制，例如含有常规栓剂基质如可可脂或者其它的甘油酯。
对于鼻内给药或者经吸入给药，本发明的活性化合物便利地以溶液剂或混旋剂的形式从由患者挤压或抽吸的泵喷雾容器传递或者作为气溶胶喷雾形式从增压容器或喷雾器传递，并使用合适的抛射剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在增压气溶胶的情况下，通过提供以传递计量的量的阀可确定剂量。增压容器或喷雾器可包含活性化合物的溶液剂或混旋剂。胶囊剂和用于吸入或吹入的药筒(例如由明胶制备)可被配制为含有本发明的化合物与合适的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
用于口服、非肠道或颊给予一般成年人用于治疗上述疾病的本发明活性化合物的推荐剂量为每单位剂量0.1-500mg的活性成分，其可给予例如每天1-4次。
现参照以下实施例详细描述本发明。应意识到通过实施例仅描述本发明并且可进行细节的修饰而不背离本发明的范围。
实验采用带有三元共振5mm探针的Varian Unity Inova(400MHz)光谱仪，在环境温度下记录400MHz1H核磁共振光谱(NMR)。在NMR中，化学位移(δ)相对于四甲基硅烷表示为ppm。以下缩写已经被使用br＝宽信号，s＝单峰，d＝双峰，dd＝双重双峰，两个ddd＝双重双峰，dt＝双重三峰，t＝三重峰，td＝三重双峰，q＝四重峰。
使用以下方法之一实施高效液相色谱-质谱(LCMS)实验，以测定保留时间(RT)和相关的物质离子。
方法A在带有阳离子电雾化和使用Higgins Clipeus C185μm100×3.0mm柱和2ml/分钟流速的单波长UV 254nm检测的Micromass Platform LCT光谱仪上实施实验。最初溶剂系统为含有0.1％甲酸的95％水(溶剂A)和含有0.1％甲酸的5％乙腈(溶剂B)用于第一分钟，随后在接着的14分钟内梯度高达5％溶剂A和95％溶剂B。最后的溶剂系统保持恒定另外2分钟。
方法B在带有阳和阴离子电雾化和使用Waters XTerra MS C183.5μm 30×4.6mm柱和2ml/分钟流速的ELS/Diode数组检测的Micromass Platform LC光谱仪上实施实验。溶剂系统第一个0.25分钟为95％溶剂A和5％溶剂B，随后在接着的2分钟内梯度高达5％溶剂A和95％溶剂B，最后的溶剂系统保持恒定另外0.25分钟。
方法C在带有阳和阴离子电雾化和使用Phenomenex Luna C18(2)30×4.6mm柱和2ml/分钟流速的ELS/Diode数组检测的MicromassPlatform LC光谱仪上实施实验。溶剂系统第一个0.50分钟为95％溶剂A和5％溶剂B，随后在接着的4分钟内梯度高达5％溶剂A和95％溶剂B，最后的溶剂系统保持恒定另外0.50分钟。
使用含有C18-7μm 120A硅胶的Genesis HPLC柱(参照16R10985，100mm×22,5mm)实施反相高效液相色谱纯化。
使用Jones FlashmasterII和IST柱(Isolute C18，十八烷基非-管子堵头，吸附剂参照220)实施反相纯化。
在具有层厚度0.2mm，切削到应有的尺寸的Fluka铝粉硅胶/TLC板(20×20cm)上实施TLC分析。
使用Personal Chemistry Smith SynthesizerTM实施微波实验，其使用一个单一模式的共振腔和动力场调谐，它们两者给出再现性和对照。可得到温度40-250℃，并且可达到高达20巴的压力。对于这个处理机可得到两种类型的小瓶，0.5-2.0mL和2.0-5.0mL。
使用Beilstein Autonom软件命名化合物。
实施例1(a)5-(2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[29mg，0.08mmol，参考实施例1(a)]在甲醇(0.8ml)中的溶液用对甲苯磺酸(0.7mg，0.003mmol)处理。把溶液在室温下搅拌1小时，此时t.l.c.[乙酸乙酯/石油醚(b.p.40-60℃)，3∶2，v/v]表明起始原料完全消失。减压蒸发反应混合物并在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用水洗涤有机相，然后经硫酸钠干燥，然后减压蒸发，得到为白色固体的5-(2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(22 mg，96％)。1H NMR(CDCl3)δ7.53(br，1H)，7.23(br，1H)，6.79(br，1H)，4.00(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝6.45分钟；292(M+H)+。
(b)5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(b)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法，制备5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(45mg，91％)。使其经反相制备型HPLC(梯度洗脱，5％乙腈/水-95％乙腈/水于90分钟内)，得到为灰白色固体的更易流动的部分的5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(16mg，32％)。1H NMR(CD3OD)δ7.61(br，1H)，7.49(d，J＝2Hz，1H)，7.32(d，J＝4Hz，1H)，6.53(d，J＝2Hz，1H)，3.99(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝3.96分钟；224(M+H)+。
(c)5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(c)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为淡黄褐色固体的5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(3mg，11％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.36(br，1H)，9.24(s，1H)，7.62(br，1H)，7.54(d，J＝4.0Hz，1H)，7.15(s，1H)。LCMS(方法A)RT＝5.81分钟；278(M+H)+。
(d)5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(d)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为白色固体的5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(80mg，95％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.41(s br，1H)，9.27(br，1H)，7.68(d br，J＝3.9Hz，1H)，7.53(d，J＝3.9Hz，1H)，7.11(s，1H)，4.05(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝6.41分钟；292(M+H)+。
(e)5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺和5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺的混合物[参考实施例1(b)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为淡棕色油的5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(15mg，72％)。1H NMR(CD3OD)δ7.61(d，J＝2.3Hz，1H)，7.52(br，1H)，7.32(d，J＝3.9Hz，1H)，6.58(d，J＝2.3Hz，1H)，3.91(s，3H)。
(f) 5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(e)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为灰白色固体的5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(16mg，95％)。1H NMR[(CD3)2CO]δ10.85(s br，1H)，8.49(br，1H)，7.80(d，J＝3.7Hz，1H)，7.76(br，1H)，7.75(s，1H)。LCMS(方法A)RT＝6.84分钟；279(M+H)+。
(g)5-苯基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-苯基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[80mg，参考实施例1(f)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且在蒸发反应混合物后先后用水、二氯甲烷两次，饱和碳酸氢钠溶液，乙醚两次洗涤得到的白色固体，真空干燥，制备为白色固体的5-苯基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(31mg，54％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.20(s br，1H)，9.10(s br，1H)，7.65(d，J＝8Hz，2H)，7.55(br，1H)，7.47(d，J＝4.0Hz，1H)，7.40(t，J＝8Hz，2H)，7.31(t，J＝8Hz，1H)。LCMS(方法A)RT＝6.29分钟；220(M+H)+。
(h)5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[228mg，0.75mmol，参考实施例1(g)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为黄色固体的5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(14mg，8％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.27(s，1H)，9.16(s，1H)，8.57(ddd，J＝4.9，1.7，0.9Hz，1H)，7.96(dt，J＝7.9，0.9，0.9Hz，1H)，7.87(td，J＝7.9，7.5，1.7Hz，1H)，7.79(d，J＝4.0Hz，1H)，7.62(br，1H)，7.34(ddd，J＝7.5，4.9，0.9Hz，1H)。LCMS(方法A)RT＝4.11分钟；221(M+H)+。
(i)[2，2’]联噻吩基-5-羧酸羟基酰胺 除了使用[2，2’]联噻吩基-5-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(h)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且反应混合物经柱层析，制备为棕色固体的[2，2’]联噻吩基-5-羧酸羟基酰胺(54mg，38％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.27(s br，1H)，9.17(s br，1H)，7.59(d，J＝5.1Hz，1H)，7.55(br，1H)，7.41(d，J＝3.4Hz，1H)，7.30(d，J＝3.7Hz，1H)，7.12(dd，J＝5.1，3.7Hz，1H)。LCMS(方法A)RT＝5.99分钟；226(M+H)+。
(j)5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(i)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为淡黄色固体的5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(78mg，96％)。1H NMR(CD3OD)δ7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.53(br，1H)，7.26(d，J＝4.0Hz，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，2H)，3.82(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝6.39分钟；250(M+H)+。
(k)5-(2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[120mg，0.40mmol，参考实施例1(j)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且使反应混合物经反相HPLC(梯度洗脱，5％乙腈/水-95％乙腈/水于90分钟内)，制备为白色固体的5-(2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(79mg，92％)。1H NMR(CD3OD)δ7.69(d，J＝2.3Hz，1H)，7.54(br，1H)，7.36(d，J＝4.0Hz，1H)，6.64(d，J＝2.3Hz，1H)。LCMS(方法A)RT＝3.49分钟；210(M+H)+。
(l)5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(k)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且通过制备型反相HPLC(梯度洗脱，5％乙腈/水-95％乙腈/水于90分钟内)纯化反应混合物，制备为淡棕色固体的5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(54mg，96％)。1H NMR(CD3OD)δ7.66(d，J＝2.3Hz，1H)，7.52(br，1H)，7.24-7.36(m，6H)，6.62(d，J＝2.3Hz，1H)，5.35(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝6.54分钟；300(M+H)+。
(m)5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[参考实施例1(l)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，制备为淡棕色固体的5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(121mg，97％)。1H NMR(CD3OD)δ7.53(br，1H)，7.39(d，J＝2.3Hz，1H)，7.32(d，J＝4.0Hz，1H)，7.25(m，2H)，7.18(m，1H)，7.12(m，2H)，6.49(d，J＝2.3Hz，1H)，4.37(t，J＝7.2Hz，2H)，3.16(t，J＝7.2Hz，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.02分钟；314(M+H)+。
(n)5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[42mg，0.15mmol，参考实施例1(m)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且用水研磨反应混合物，制备为白色粉末的5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8mg，25％)。1HNMR[(CD3)2SO]δ13.42(s，1H)，11.32(s，1H)，9.21(s，1H)，7.96(s，1H)，7.60(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.85分钟；278(M+H)+。
(o)5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[155mg，0.48mmol，参考实施例1(n)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，过滤生成的沉淀(用甲醇洗涤)，制备为白色固体的5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(65mg，60％)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.60(s，1H)，9.41(s，1H)，7.98(d，J＝4.0Hz，1H)，7.73(d br，J＝4.0Hz，1H)，2.41(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝4.26分钟；226(M+H)+。
(p)5-[1-(2-苄氧基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(2-苄氧基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.15mmol，参考实施例10(a)]在甲醇(400μl)中的溶液用羟胺盐酸盐(70mg，1mmol)和氢氧化钾(84mg，1.5mmol)在甲醇(350μl)中的悬浮液处理。把反应混合物在密封管中搅拌过夜。向反应混合物中加入另外的羟胺盐酸盐(50mg)和氢氧化钾(60mg，1.5mmol)在甲醇(500μl)中的悬浮液。搅拌过周末后，浓缩反应悬浮液，得到黄色蜡状固体，向其中加入枸橼酸/水(1∶1)溶液，然后用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机相，干燥(MgSO4)并蒸发，得到琥珀色树胶状物，使其经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度液20∶80-95∶5，v/v，经75分钟)作为洗脱剂，得到为大理石色玻璃状的5-[1-(2苄氧基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.18(s br，1H)，9.05(s br，1H)，7.81(d，1H)，7.55(表观s br，1H)，7.37(d，1H)，7.22-7.34(m，5H)，6.66(d，1H)，4.48(s，2H)，4.34(t，2H)，3.81(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝6.54分钟；344(M+H)+。
(q)5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[282mg，0.68mmol，参考实施例1(o)]在甲醇(10ml)中的溶液用大孔树脂15离子交换树脂(664mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌过夜，然后过滤，用甲醇把树脂洗涤几次。浓缩有机滤液，得到残余物，将其先后用乙醚和乙酸乙酯研磨。浓缩来自第二次研磨的乙酸乙酯层，得到残余物，使其经反相纯化，使用乙腈和水作为洗脱剂，得到为桃红色树胶状物的5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(31mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.62(d，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.33(d，1H)，7.26(表观t，2H)，7.18(表观d，2H)，7.16(表观t，1H)，6.58(d，1H)，4.15(t，2H)，2.61(t，2H)，2.18(m，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.33分钟；328(M+H)+。
(r)5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[65mg，0.15mmol，参考实施例1(p)]在甲醇(4ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(1.4mg，0.007mmol)处理。把溶液在室温下搅拌过夜，然后减压蒸发至干，得到为棕色固体的5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(46mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.69(d，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.35(d，1H)，6.80-6.87(m，4H)，6.63(d，1H)，4.58(m，1H)，4.47(d，2H)，4.33(dd，1H)，3.94(dd，1H)。LCMS(方法C)RT＝2.90分钟；358(M+H)+。
(s)5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[226mg，0.55mmol，参考实施例1(q)]在二氯甲烷(2ml)中的溶液中加入三氟乙酸(1ml)。把混合物在室温下搅拌4小时，然后真空浓缩。使残余物经反相纯化，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经30分钟)，得到为白色固体的5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(30mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.19(s br，1H)，9.10(s br，1H)，7.68(d，1H)，7.63(d，2H)，7.55(表观s，1H)，7.41(d，2H)，7.35(d，1H)，6.60(d，1H)，4.42(t，2H)，3.24(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.75分钟；382(M+H)+。
(t)5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[152mg，0.35mmol，参考实施例1(r)]在甲醇(10ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(37mg，0.19mmol)处理，把溶液在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物，使之经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，经90分钟)作为洗脱剂，得到5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(78mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.63(d，1H)，7.52(表观s br，1H)，7.32(d，1H)，6.74-6.80(m，3H)，6.59(d，1H)，5.90(s，2H)，5.21(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.60分钟；344(M+H)+。
(u)5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[231mg，0.47mmol，参考实施例1(s)]在甲醇(5ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(6.4mg，0.03mmol)处理，把溶液在室温下搅拌过夜。把反应混合物减压蒸发至干，得到为浅棕色固体的5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(175mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.53(表观s br，1H)，7.43(d，1H)，7.32(d，1H)，7.21(表观d，2H)，7.15(表观d，2H)，6.51(d，1H)，4.39(t，2H)，3.20(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝8.04分钟；398(M+H)+。
(v)5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[120mg，0.29mmol，参考实施例1(t)]在甲醇(10ml)中的溶液用大孔树脂(Amberlyst)15离子交换树脂(100mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌1小时，然后过滤，用甲醇把树脂洗涤几次。浓缩有机滤液，得到残余物，使其经反相纯化，使用乙腈和水(梯度0∶100-100∶0，v/v，以10％间隔)作为洗脱剂，得到为白色固体的5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(30.7mg)。1H NMR(CD3OD)δ11.17(s br，1H)，9.10(s br，1H)，7.66(d，1H)，7.54(表观s br，1H)，7.35(d，1H)，7.21(表观dd，2H)，7.09(表观t，2H)，6.59(d，1H)，4.35(t，2H)，3.11(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.86分钟；332(M+H)+。
(w)5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[214mg，0.54mmol，参考实施例1(u)]在甲醇(10ml)中的溶液用大孔树脂(Amberlyst)15离子交换树脂(100mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌1小时，然后过滤，用甲醇把树脂洗涤几次。浓缩有机滤液，得到残余物，使其经反相纯化两次，每次使用乙腈和水(梯度0∶100-100∶0，v/v，以10％间隔)作为洗脱剂，得到为灰色树胶状的5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(30.5mg)。1HNMR(CD3OD)δ7.70(d，1H)，7.51(表观s br，1H)，7.30-7.36(m，3H)，7.24-7.29(m，3H)，6.61(d，1H)，5.59(q，1H)，1.89(d，3H)。LCMS(方法A)RT＝5.95分钟；314(M+H)+。
(x)5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[96mg，0.24mmol，参考实施例1(v)]在甲醇(2.4ml)中的溶液用大孔树脂15离子交换树脂(180mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌1小时，然后加入浓盐酸(1.5ml)，把混合物搅拌另外1小时。滤出树脂，用二噁烷洗涤两次，浓缩滤液，得到无色玻璃状物。把无色玻璃状物用乙醚、二氯甲烷和甲醇研磨，得到为白色固体的5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(4.8mg)。1H NMR(CD3OD)δ11.22(s br，1H)，10.68(s br，1H)，9.12(s br，1H)，7.91(d，1H)，7.57(表观s br，1H)，7.41(d，1H)，6.75(d，1H)，4.63(sbr，2H)，3.98(d br，2H)，3.74(t br，2H)，3.62(s br，2H)，3.44(d br，2H)，3.14(s br，2H)。LCMS(方法A)RT＝0.38分钟；323(M+H)+。
(y)5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[248mg，0.63mmol，参考实施例1(w)]在甲醇(5ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(6mg，0.03mmol)处理，把溶液在室温下搅拌过夜。加入另外量的对-甲苯磺酸(6mg，0.03mmol)并把反应混合物再一次搅拌过夜。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)并减压蒸发，得到为白色固体的5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(184mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.62(d，1H)，7.52(表观s br，1H)，7.32(d，1H)，6.57(d，1H)，4.16(dd，1H)，4.12(dd，1H)，3.93(m，1H)，3.71(m，1H)，3.40(m，1H)，1.86(m，1H)，1.48-1.66(m，4H)，1.27(m，1H)。LCMS(方法A)RT＝4.71分钟；308(M+H)+。
(z)5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺
向5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[123mg，0.3mmol，参考实施例1(x)]在二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入三氟乙酸(1ml)。把混合物在室温下搅拌4小时，然后真空浓缩。使残余物经反相纯化，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，于30分钟内)作为洗脱剂，得到为树胶状的5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(13mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.39(s br，1H)，9.24(s br，1H)，8.56(d，1H)，7.93(d，1H)，7.65(d br，1H)，7.53(m，2H)，7.41(m，2H)，7.35(m，1H)，6.90(d，1H)，5.52(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.22分钟；328(M+H)+。
(aa)5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[200mg，0.5mmol，参考实施例1(y)]在甲醇(20ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(19mg，0.1mmol)处理，并在短时间(～30分钟后)后，经TLC检测未发生反应。加入另外量的对-甲苯磺酸(19mg，0.1mmol)并把反应混合物搅拌过夜。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)并减压蒸发，得到为灰白色固体的5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(92mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ12.75(s，1H)，11.17(s br，1H)，9.09(s br，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.22-7.32(m，5H)，7.19(m，1H)，6.43(s，1H)，2.93(s br，4H)。LCMS(方法C)RT＝2.75分钟；314(M+H)+。
(ab)5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[16mg，0.04mmol，参考实施例1(z)]在甲醇(5ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(30mg，0.16mmol)处理，把反应混合物搅拌过夜。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)并减压蒸发，得到黄色固体。用乙醚研磨黄色固体，真空干燥，得到为黄色固体的5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(2mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.50(表观s br，1H)，7.21-7.30(m，4H)，7.14-7.21(m，3H)，4.36(m，4H)。LCMS(方法A)RT＝3.64分钟；314(M+H)+。
(ac)5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[392mg，1.29mmol，参考实施例1(aa)]在二氯甲烷(6ml)中的溶液中加入三氟乙酸(0.12ml)和水(2滴)。把混合物在室温下搅拌2小时，之后观察到沉淀。过滤沉淀，用二氯甲烷洗涤并真空干燥，得到为灰白色固体的5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(110mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.39(s br，1H)，8.85(d，2H)，7.92(d，1H)，7.65(d br，1H)，7.43(t，1H0。LCMS(方法A)RT＝3.39分钟；222(M+H)+。
(ad)5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[107mg，0.23mmol，参考实施例1(ab)]在甲醇(10ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(42mg，0.22mmol)处理，把反应混合物搅拌过夜。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)并减压浓缩，得到79mg残余物。使33mg残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-45∶55，v/v，经40分钟；然后45∶55-90∶10，v/v，经随后30分钟)作为洗脱剂，得到5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(21.6mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.54(表观sbr，1H)，7.41(d，1H)，7.26(m，2H)，7.19(m，1H)，7.14(m，2H)，7.05(s，1H)，4.44(t，2H)，3.22(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.66分钟；382(M+H)+。
(ae)5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[120mg，0.39mmol，参考实施例1(ac)]在甲醇(5ml)中的溶液用大孔树脂(Amberlyst)15离子交换树脂(250mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌3小时，然后加入1M盐酸(1ml)，把混合物搅拌另外20分钟。滤出树脂，用水洗涤两次，浓缩滤液，得到残余物。将残余物溶于水(3ml)中，然后冻干，得到灰白色固体，将其悬浮于最小量的乙醇中，用最小量的乙醚稀释。过滤剩下的固体并真空干燥，得到为灰色粉末的5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(13.5mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.40(s br，1H)，9.09(d，1H)，8.67(dd，1H)，8.40(d，1H)，7.75(d，1H)，7.73(dd，1H)，7.69(dbr，1H)。LCMS(方法C)RT＝0.33分钟；221(M+H)+。
(af)5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[147mg，0.48mmol，参考实施例1(ad)]在甲醇(5ml)中的溶液用大孔树脂(Amberlyst)15离子交换树脂(250mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌2小时，然后加入1M盐酸(1ml)，把混合物搅拌另外20分钟。滤出树脂，用水洗涤两次，浓缩滤液，得到残余物。将残余物溶于水(3ml)中，然后冻干，得到淡黄色固体，将其用乙醇和乙醚研磨。过滤剩下的固体并真空干燥，得到为淡黄色粉末的5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(10.1mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.52(s br，1H)，9.37(s br，1H)，8.79(d，2H)，8.09(d，2H)，8.05(d，1H)，7.74(d，1H)。LCMS(方法C)RT＝0.35分钟；221(M+H)+。
(ag)5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[60mg，0.16mmol，参考实施例1(ae)]在甲醇(5ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(18mg，0.09mmol)处理，把溶液在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物并经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经100分钟)作为洗脱剂，得到5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(14mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.45(s br，1H)，9.29(s br，1H)，7.75(d，1H)，7.67(dbr，1H)。LCMS(方法A)RT＝4.27分钟；279(M+H)+。
(ah)5-[5-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-[5-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[69mg，0.2mmol，参考实施例11(a)]在二噁烷(3ml)中的溶液用羟胺盐酸盐(348mg，1mmol)和氢氧化钾(412mg，1.6mmol)在甲醇(2ml)中的溶液处理。把反应混合物搅拌过夜，然后浓缩以除去挥发性溶剂。向剩下的混合物中加入枸橼酸/水(1∶1)溶液，然后用乙酸乙酯(4x)提取。用饱和碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机提取液，分离有机相，干燥(Na2SO4)，然后减压蒸发，得到棕色固体。使棕色固体经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度35∶65-65∶35，v/v，经30分钟)作为洗脱剂，得到5-[5-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8mg)。1HNMR[(CD3)2SO]δ11.22(s br，1H)，10.28(s，1H)，9.13(s br，1H)，8.68(d，1H)，8.12(dd，1H)，7.90(d，1H)，7.65(d，1H)，7.57(表观s br，1H)，7.30(m，2H)，7.26(m，2H)，7.19(m，1H)，2.93(t，2H)，2.68(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.77分钟；368(M2+H)+。
(ai)4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺[224mg，0.6mmol，参考实施例1(af)]在甲醇(20ml)中的溶液用对-甲苯磺酸(23mg，0.12mmol)处理，把反应混合物搅拌4小时。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用盐水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，然后减压蒸发，得到4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(178mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ14.05(s br，1H)，11.31(s br，1H)，9.21(s，1H)，7.50(s，1H)，7.01(s，1H)，2.30(s，1H)。LCMS(方法C)RT＝2.61分钟；583(M2+H)+。
(aj)5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[44mg，0.11mmol，参考实施例1(ag)]在甲醇(1ml)中的溶液用大孔树脂(Amberlyst)15离子交换树脂(87mg)处理。把混合物在室温下缓慢搅拌过夜，然后滤出树脂，用甲醇洗涤两次，浓缩滤液，得到白色固体。用乙醚研磨白色固体并过滤，得到为灰白色固体的5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(18mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.55(表观sbr，1H)，7.46(m，2H)，7.35-7.40(m，3H)，7.32(t，1H)，7.31(m，1H)，7.24-7.29(m，2H)，6.99(ddd，1H)，5.14(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.12分钟；326(M+H)+。
(ak)5-(5-苯乙基氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-(6-苯乙基氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[31mg，0.09mmol，参考实施例28(a)]在甲醇(1.5ml)中的溶液中先后加入羟胺盐酸盐(64mg，0.91mmol)和氢氧化钾粉末(82mg，1.5mmol)。搅拌过夜后，用10％枸橼酸溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯提取两次。合并有机层，用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机相，先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发，得到残余物。使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度20∶80-80∶20，v/v，经60分钟)作为洗脱剂，得到为黄色粉末的5-(6-苯乙基氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(22mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.85(s，1H)，7.81(s，1H)，7.60(表观s br，1H)，7.56(d，1H)，7.44(d，1H)，7.26-7.32(m，4H)，7.21(m，1H)，3.49(t，2H)，2.95(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.90分钟；340(M+H)+。
(al)5-(1-戊-4-炔基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-(1-戊-4-炔基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[85mg，0.31mmol，参考实施例10(b)]中先后加入0.09M羟胺盐酸盐在甲醇中的溶液(800μl，2.42mmol)和0.057M氢氧化钾在甲醇中的溶液(700μl，1.55mmol)。搅拌经周末后，浓缩反应混合物，溶于乙酸乙酯中，然后先后用饱和枸橼酸和水溶液(1∶1，v/v)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤。分离有机相并蒸发至干，得到5-(1-戊-4-炔基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(3.2mg)。LCMS(方法C)RT＝2.49分钟；276(M+H)+。
(am)5-[1-(3-苯基-烯丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(3-苯基-烯丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.31mmol，参考实施例10(c)]以外，通过与参考1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯基-烯丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8.4mg)。LCMS(方法C)RT＝3.01分钟；326(M+H)+。
(an)5-[1-(3-苯氧基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(3-苯氧基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[106mg，0.31mmol，参考实施例10(d)]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯氧基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(44mg)。LCMS(方法C)RT＝2.99分钟；344(M+H)+。
(ao)5-[1-(2-苯甲酰氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(2-苯甲酰氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[110mg，0.31mmol，参考实施例10(e)]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(2-苯甲酰氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(3.1mg)。LCMS(方法C)RT＝2.34分钟；357(M+H)+。
(ap)5-(1-吡啶-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-吡啶-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[93mg，0.31mmol，参考实施例10(f]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-(1-吡啶-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(21mg)。LCMS(方法C)RT＝0.36分钟；301(M+H)+。
(aq)5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[108mg，0.31mmol，参考实施例10(g)]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(57mg)。LCMS(方法C)RT＝2.73分钟；348(M+H)+。
(ar)5-[1-(3-吡咯-1-基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(3-吡咯-1-基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[98mg，0.31mmol，参考实施例10(h)]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(3-吡咯-1-基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(62mg)。LCMS(方法C)RT＝2.71分钟；317(M+H)+。
(as)5-(1-丁-2-烯基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-丁-2-烯基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[81mg，0.31mmol，参考实施例10(i)]以外，通过与实施例1(al)类似的方法进行，制备5-(1-丁-2-烯基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(81mg)。LCMS(方法C)RT＝2.53分钟；264(M+H)+。
(at)5-[5-(2-苯氧基-乙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[5-(2-苯氧基-乙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[87mg，0.23mmol，参考实施例11(b)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，并且N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，制备为黄色固体的5-[5-(2-苯氧基-乙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(38mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.27(s，1H)，10.48(s，1H)，9.18(s br，1H)，8.79(d，1H)，8.18(dd，1H)，7.95(d，1H)，7.69(d，1H)，7.60(dbr，1H)，7.33(m，2H)，7.03(m，2H)，6.99(m，1H)，4.76(s，1H)。LCMS(方法A)RT＝5.61分钟；370(M+H)+。
(au)5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[94mg，0.26mmol，参考实施例11(c)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，四氢呋喃作为助溶剂，制备为灰白色固体的5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(43mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.19(s，1H)，10.50(s，1H)，9.11(s，1H)，8.66(d，1H)，8.09(dd，1H)，7.86(d，1H)，7.61(d，1H)，7.54(表观s br，1H)，7.26-7.32(m，4H)，7.21(m，1H)，3.65(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.35分钟；354(M+H)+。
(av)5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺
向5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[345mg，0.99mmol，参考实施例10(j)]在N，N-二甲基乙酰胺(10ml)中的混合物中先后加入羟胺盐酸盐(344mg，4.95mmol)和甲醇钠在甲醇中的25％溶液(1.66ml，7.7mmol)。搅拌过夜后，用饱和枸橼酸溶液稀释反应混合物并用乙酸乙酯提取两次。合并有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到黄色树胶状物，使其经反相纯化，使用乙腈和水(梯度10∶90-90∶10，v/v)。用乙腈研磨分离的产物，得到为灰色粉末的5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(43mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.18(s，1H)，8.37(d，1H)，8.04(d，1H)，8.00(表观d，1H)，7.97(表观d，1H)，7.78(ddd，1H)，7.61(ddd，1H)，7.55(表观s br，1H)，7.40(d，1H)，7.24(d，1H)，6.78(d，1H)，5.66(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.99分钟；351(M+H)+。
(aw)5-(5-苯甲酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(5-苯甲酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[79mg，0.23mmol，参考实施例11(d)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，甲醇和水(梯度10∶90-30∶70，v/v，经80分钟)作为洗脱剂。制备为棕色固体的5-(5-苯甲酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(9mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.24(s br，1H)，10.59(s，1H)，9.16(s，1H)，8.93(d，1H)，8.30(dd，1H)，7.95-8.05(m，3H)，7.71(d，1H)，7.52-7.68(m，4H)。LCMS(方法A)RT＝5.20分钟；340(M+H)+。
(ax)N-[6-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡啶-3-基]-异烟酰胺 除了使用5-{5-[(吡啶-4-羰基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[93mg，0.27mmol，参考实施例11(e)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，甲醇和水(梯度10∶90-30∶70，v/v，经80分钟)作为洗脱剂。制备为棕色固体的N-[6-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡啶-3-基]-异烟酰胺(11mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ10.97(s br，1H)，10.64(s，1H)，8.97(s br，1H)，8.91(d，1H)，8.80(d，2H)，8.25(dd，1H)，7.93(d，1H)，7.87(d，2H)，7.66(d，1H)，7.62(d，1H)。LCMS(方法A)RT＝3.71分钟；341(M+H)+。
(ay)5-{5-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{5-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[98mg，0.26mmol，参考实施例28(b)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，甲醇和水(梯度10∶90-90∶10，v/v，经80分钟)作为洗脱剂，制备为黄色固体的5-{5-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8mg)。1H NMR(CD3OD)δ8.78(d，1H)，8.21(d，1H)，8.15(d，1H)，8.05(s，1H)，8.00(t，1H)，7.88(d，1H)，7.80(t，1H)，7.73(d，1H)，7.54(表观s，1H)，7.47(表观s，1H)，7.32(表观s，1H)，4.94(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.32分钟；377(M+H)+。
(az)5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[130mg，0.26mmol，参考实施例28(c)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，甲醇和水(梯度10∶90-90∶10，v/v，经80分钟)作为洗脱剂，制备为黄色固体的5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(28mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.86(s br，1H)，7.76(d，1H)，7.56(表观s br，1H)，7.50(d br，1H)，7.34(d br，1H)，6.86(d，1H)，6.84(dd，1H)，6.79(d，1H)，4.32(s，2H)，4.20(s，4H)。LCMS(方法A)RT＝4.74分钟；384(M+H)+。
(ba)5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[84mg，0.23mmol，参考实施例28(d)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备为黄色固体的5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(18mg)。1HNMR(CD3OD)δ8.03(s，1H)，7.81(d，1H)，7.55(s br，2H)，7.52(dd，1H)，7.49(d，1H)，7.43(dd，1H)，7.24(dt，1H)，7.18(dt，1H)，6.74(s，1H)，4.62(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.35分钟；366(M+H)+。
(bb)5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[72mg，0.2mmol，参考实施例29(a)]在N，N-二甲基乙酰胺(3ml)中的混合物中先后加入羟胺盐酸盐(72mg，1.0mmol)和25％甲醇钠在甲醇中的溶液(0.34ml，1.56mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，将残余物溶于乙酸乙酯中。先后用水、饱和枸橼酸溶液(1∶1，v/v)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤生成的溶液。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到橙色的油，使其经反相纯化，使用甲醇和水(梯度5∶95-95∶5，v/v)作为洗脱剂，得到5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.66(d，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.33(d，1H)，7.23(m，2H)，6.98(m，2H)，6.59(m，2H)，4.46(s，2H)，4.34(t，2H)，3.83(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.22分钟；362(M+H)+。
(bc)5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[325mg，0.95mmol，参考实施例10(k)]在N，N-二甲基乙酰胺(5ml)中的溶液中先后加入羟胺盐酸盐(331mg，4.76mmol)和25％甲醇钠在甲醇中的溶液(1.6ml，7.43mmol)。搅拌过夜后，用10％枸橼酸溶液稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥(MgSO4)，然后蒸发，得到树胶状物。使其经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度10∶90-90∶10，v/v)作为洗脱剂，得到为白色固体的5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(44 mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.17(s br，1H)，10.35(s，1H)，9.10(s，1H)，7.85(d，1H)，7.59(m，2H)，7.55(表观s br，1H)，7.39(d，1H)，7.33(m，2H)，7.08(m，1H)，6.71(d，1H)，5.06(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.58分钟；343(M+H)+。
(bd)5-(1-{[(吡啶-2-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-(1-{[(吡啶-2-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[53mg，0.14mmol，参考实施例30(a)]在N，N-二甲基乙酰胺(1ml)中的溶液中先后加入羟胺盐酸盐(52mg，0.74mmol)和25％甲醇钠在甲醇中的溶液(0.24μl，1.09mmol)。搅拌过夜后，用10％枸橼酸溶液稀释反应混合物，用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机相，先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发，得到残余物。使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，得到为棕色固体的5-(1-{[(吡啶-2-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(18mg)。1H NMR(CD3OD)δ8.72(d，1H)，8.46(dt，1H)，7.97(d，1H)，7.86(表观t，1H)，7.74(d，1H)，7.52(表观s br，1H)，7.36(d，1H)，6.68(d，1H)，5.02(s，2H)，4.75(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝2.56分钟；358(M+H)+。
(be)5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[257mg，0.65mmol，参考实施例30(b)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备为棕色固体的5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(24mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.22(s，1H)，10.66(s，1H)，9.13(s br，1H)，8.82(dd，1H)，8.62(dd，1H)，8.41(dd，1H)，7.97(d，1H)，7.70(dd，1H)，7.63(dd，1H)，7.59(表观s br，1H)，7.59(表观t，1H)，7.47(d，1H)，6.79(d，1H)，5.35(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝3.86分钟；394(M+H)+。
(bf)5-{1-[(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-{1-[(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[200mg，0.48mmol，参考实施例10(l)]在N，N-二甲基乙酰胺(2ml)中的溶液中先后加入羟胺盐酸盐(167mg，2.4mmol)和1.8M氢氧化钾在甲醇中的溶液(211mg，3.7mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，把残余物溶于乙酸乙酯中。先后用水和饱和枸橼酸溶液(1∶1，v/v)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤生成的溶液。分离有机相，蒸发至干，得到5-{1-[(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.61分钟；417(M-)。
(bg)5-{1-[(2-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺
除了使用5-{1-[(2-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[178mg，0.48mmol，参考实施例10(m)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备5-{1-[(2-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.55分钟；371(M-)。
(bh)5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[172mg，0.48mmol，参考实施例10(n)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，制备5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.51分钟；359(M-)。
(bi)5-{1-[(3-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(3-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[172mg，0.48mmol，参考实施例10(o)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，制备5-{1-[(3-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.58分钟；359(M-)。
(bj)喹啉-2-羧酸{2-[3-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡唑-1-基]-乙基}-酰胺 除了使用5-(1-{2-[(喹啉-2-羰基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[195mg，0.48mmol，参考实施例10(p)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备喹啉-2-羧酸{2-[3-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡唑-1-基]-乙基}-酰胺。LCMS(方法A)RT＝6.41分钟；408(M+H)+。
(bk)5-[1-(苄基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(苄基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[170mg，0.48mmol，参考实施例10(q)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-[1-(苄基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝5.47分钟；357(M+H)+。
(bl)5-{1-[(N-乙基-N-苯基-氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺
除了使用5-{1-[N-乙基-N-苯基-氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[177mg，0.48mmol，参考实施例10(r)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[N-乙基-N-苯基-氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝6.41分钟；371(M+H)+。
(bm)5-{1-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[168mg，0.48mmol，参考实施例10(s)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝6.95分钟；353(M+H)+。
(bn)5-{1-[(2-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(2-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[204mg，0.48mmol，参考实施例10(t)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[(2-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝6.90分钟；427(M+H)+。
(bo)5-{1-[3-(4-氯-苯基)-丙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[3-(4-氯-苯基)-丙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[172mg，0.48mmol，参考实施例10(u)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[3-(4-氯-苯基)-丙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。1H NMR(CD3OD)δ7.63(d，1H)，7.53(表观br，1H)，7.32(d，1H)，7.25(m，2H)，7.17(m，2H)，6.58(d，1H)，4.15(t，2H)，2.60(t，2H)，2.17(m，2H)。LCMS(方法A)RT＝8.39分钟；362 & 364(M+H)+。
(bp)5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[196mg，0.48mmol，参考实施例10(v)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(43mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.17(s br，1H)，10.82(s，1H)，9.10(s br，1H)，8.27(t，1H)，7.77(d，1H)，7.55(表观sbr，1H)，7.54(d，1H)，7.38(d，1H)，7.34(d，1H)，7.17(d，1H)，7.06(m，1H)，6.98(m，1H)，6.68(d，1H)，4.81(s，2H)，3.39(dt，2H)，2.85(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝6.01分钟；410(M+H)+。
(bq)5-[1-(苯乙基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(苯乙基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[177mg，0.48mmol，参考实施例10(w]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-[1-(苯乙基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。1H NMR(CD3OD)δ7.66(d，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.35(d，1H)，7.24(m，2H)，7.18(m，2H)，7.15(m，1H)，6.64(d，1H)，4.82(s，2H)，3.45(t，2H)，2.79(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.83分钟；371(M+H)+。
(br)5-(1-异喹啉-1-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-异喹啉-1-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[168mg，0.48mmol，参考实施例10(x)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-(1-异喹啉-1-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(17mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.17(s br，1H)，9.08(s br，1H)，8.44(d，1H)，8.43(d，1H)，8.02(d，1H)，7.90(d，1H)，7.83(d，1H)，7.81(m，1H)，7.74(m，1H)，7.52(表观s br，1H)，7.34(d，1H)，6.69(d，1H)，6.03(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.44分钟；351(M+H)+。
(bs)5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[172mg，0.48mmol，参考实施例10(y)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。1H NMR(CD3OD)δ7.98(m，1H)，7.77(d，1H)，7.53(表观s br，1H)，7.38(d，1H)，7.10-7.20(m，3H)，6.68(d，1H)，5.13(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.77分钟；361(M+H)+。
(bt)5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[88mg，0.22mmol，参考实施例30(c)]以外，通过与实施例1(ak)类似的方法进行，并且N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)，制备为白色固体的5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(13mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.20(s，1H)，10.89(s，1H)，9.08(s br，1H)，8.96(d，1H)，8.70(d，1H)，7.98(d，1H)，7.93(dd，1H)，7.90(d，1H)，7.67(m，1H)，7.59(m，1H)，7.56(表观s br，1H)，7.41(d，1H)，6.74(d，1H)，5.18(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.16分钟；394(M+H)+。
(bu)5-[1-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[88mg，0.25mmol，参考实施例30(d)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，用甲醇和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备为棕色固体的5-[1-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(10mg)。1H NMR(CD3OD)δ9.34(表观s br，1H)，8.57(表观s br，1H)，8.48(d，1H)，7.99(表观s，1H)，7.78(表观s，1H)，7.52(表观s，1H)，7.37(d br，1H)，6.69(表观s，1H)，5.18(表观s，2H)。LCMS(方法A)RT＝2.90分钟；344(M+H)+。
(bv)5-[1-(2-喹啉-2-基乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-[1-(2-喹啉-2-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[200mg，0.55mmol，参考实施例10(z)]在N，N-二甲基乙酰胺(3ml)中的溶液中先后加入羟胺盐酸盐(191mg，2.75mmol)和甲醇钠在甲醇中的25％溶液(0.93ml，4.3mmol)。搅拌8小时后，使反应混合物放置经过周末，然后浓缩，在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配残余物。分离有机层，干燥(MgSO4)并蒸发，得到残余物，使其经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度10∶90-90∶10，v/v，经40分钟)作为洗脱剂，得到为玻璃状树胶物的5-[1-(2-喹啉-2-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(55mg)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.16(s，1H)，8.56(d，1H)，8.07(d，1H)，8.06(d，1H)，7.87(m，1H)，7.78(d，1H)，7.69(m，1H)，7.61(d，1H)，7.52(表观s br，1H)，7.31(d，1H)，6.60(d，1H)，4.69(t，2H)，3.59(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝3.58分钟；365(M+H)+。
(bw)5-(1-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-[[(吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[60mg，0.16mmol，参考实施例30(e)]以外，通过与实施例1((ak)类似的方法进行，N，N-二甲基乙酰胺作为助溶剂，(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)，制备为棕色固体的5-(1-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(3.2mg)。LCMS(方法A)RT＝2.26分钟；358(M+H)+。
(bx)5-(1-联苯-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-联苯-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[116mg，0.31mmol，参考实施例10(ac)]以外，通过与参考实施例1(al)类似的方法进行，制备5-(1-联苯-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(33mg)。LCMS(方法C)RT＝3.31分钟；376(M+H)+。
(by)5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[124mg，0.31mmol，参考实施例10(ad)]以外，通过与参考实施例1(al)类似的方法进行，制备5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(42mg)。LCMS(方法C)RT＝2.72分钟；400(M+H)+。
(bz)5-{1-[2-(联苯-4-基氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[2-(联苯-4-基氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[124mg，0.31mmol，参考实施例10(ae)]以外，通过与参考实施例1(al)类似的方法进行，制备5-{1-[2-(联苯-4-基氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(6mg)。LCMS(方法C)RT＝3.38分钟；406(M+H)+。
(ca)5-[1-(3-苯氧基-苄基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(3-苯氧基-苄基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[121mg，0.31mmol，参考实施例10(ag)]以外，通过与参考实施例1(al)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯氧基-苄基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(12 mg)。LCMS(方法C)RT＝3.28分钟；392(M+H)+。
(cb)5-(1-{3-[4-(3-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{3-[4-(3-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[213mg，0.48mmol，参考实施例10(ah)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-(1-{3-[4-(3-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝5.09分钟；446(M+H)+
(cc)5-{1-[(4-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(4-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[205mg，0.48mmol，参考实施例10(ai)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备5-{1-[(4-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.12分钟；428(M+H)+。
(cd)5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[205mg，0.48mmol，参考实施例10(aj)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.54分钟；428(M+H)+。
(ce)5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[196mg，0.48mmol，参考实施例10(ak)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且使粗品物料经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，制备5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝5.71分钟；410(M+H)+。
(cf)5-{1-[(4-乙酰氨基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(4-乙酰氨基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[191mg，0.48mmol，参考实施例10(al)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备5-{1-[(4-乙酰氨基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法A)RT＝4.54分钟；400(M+H)+。
(cg)5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将乙酰氯(1.93ml，21.2mmol)缓慢加入到无水甲醇(10ml)中并搅拌30分钟，然后加入5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[596mg，0.1.32mmol，参考实施例1(au)]在甲醇(5ml)中的溶液。把生成的混合物搅拌3小时，浓缩，使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-95∶5，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，得到5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.20(s，1H)，9.11(s，1H)，8.59(d，1H)，8.06-8.11(m，2H)，7.93(d，1H)，7.87(m，1H)，7.75(m，1H)，7.56(表观s br，1H)，7.43(d，1H)，6.91(d，1H)，6.81(d，1H)，5.75(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.17分钟；367(M+H)+。
(ch)5-(1-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[231mg，0.48mmol，参考实施例10(ap)]以外，通过与实施例1(bf)类似的方法进行，并且用甲醇研磨最终产物，制备5-(1-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.18(s br，1H)，9.08(s br，1H)，8.73(d，1H)，7.74(d，1H)，7.54(表观s，1H)，7.37(d，1H)，7.08(d，1H)，6.69(d，1H)，5.26(s，2H)，3.89(t br，2H)，3.81(t br，2H)，3.65(t br，2H)，3.60(t br，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.21分钟；482(M+H)+。
(ci)5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 将5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[170mg，0.5mmol，参考实施例1(ai)]在二氯甲烷(4.5ml)中的溶液用三氟乙酸(0.5ml)和1滴水处理。把溶液在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，得到残余物。使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，得到5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝0.35分钟；341(M+H)+。
(cj)5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[177mg，0.5mmol，参考实施例1(aj)]以外，通过与实施例1(ci)类似的方法进行，并且使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，制备5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝0.34分钟；355(M+H)+。
(ck)5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[178mg，0.5mmol，参考实施例1(ak)]以外，通过与实施例1(ci)类似的方法进行，并且使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，制备5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝1.86分钟；358(M+H)+。
(cl)5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(6-{{(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[191mg，0.5mmol，参考实施例1(al)]以外，通过与实施例1(ci)类似的方法进行，并且使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，制备5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝1.85分钟；384(M+H)+。
(cm)5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[144mg，0.38mmol，参考实施例1(am)]以外，通过与实施例1(ci)类似的方法进行，并且使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，制备5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝1.70分钟；380(M+H)+。
(cn)5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[178mg，0.5mmol，参考实施例1(an)]以外，通过与实施例1(ci)类似的方法进行，并且使用乙腈和水(梯度5∶95-100∶0，v/v，经15分钟)作为洗脱剂，制备5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺。LCMS(方法C)RT＝0.33分钟；358(M+H)+。
(co)5-{6-[(4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-{6-[(4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[129mg，0.38mmol，参考实施例32(b)]、羟胺Wang_树脂(380mg，1.0mmol/g载荷)和吡啶(81μl，1.0mmol)在二甲基甲酰胺(5ml)中的缓慢搅拌着的悬浮液中加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(159mg，0.43mmol)。然后把混合物在室温下振摇4小时并过滤。用甲醇和二氯甲烷(3x)洗涤树脂并干燥。用20％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液(5ml)洗涤树脂，振摇30分钟，过滤并用二氯甲烷洗涤。浓缩滤液，得到紫色的油，使其经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-5∶95，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，得到为棕色固体的5-{6-[(4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8.4mg)。LCMS(方法C)RT＝2.18分钟；356(M+H)+。
(cp)5-[6-(甲基-苯乙基-氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[6-(甲基-苯乙基-氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[100mg，0.3mmol，参考实施例33(a)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备为棕色油的5-[6-(甲基-苯乙基-氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(9.4mg)。LCMS(方法C)RT＝3.50分钟；354(M+H)+。
(cq)5-{6-[(甲基-吡啶-3-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(甲基-吡啶-3-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[129mg，0.38mmol，参考实施例32(c)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备为浅棕色树胶状物的5-{6-[(甲基-吡啶-3-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(36mg)。1HNMR(CD3OD)δ8.97(表观s，1H)，8.82(表观s，1H)，8.48(d，1H)，7.94(m，2H)，7.84(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.59(表观s，1H)，7.45(m，1H)，4.74(s，2H)，4.63(s，2H)，3.05(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝2.97分钟；355(M+H)+。
(cr)5-[6-(3，4-四氢-1H-异喹啉-2-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[6-(3，4-四氢-1H-异喹啉-2-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[133mg，0.28mmol，参考实施例32(d)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备5-[6-(3，4-四氢-1H-异喹啉-2-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(1.7mg)。LCMS(方法C)RT＝1.84分钟；366(M+H)+。
(cs)5-{6-[(甲基-萘-1-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(甲基-萘-1-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[92mg，0.28mmol，参考实施例32(e)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备5-{6-[(甲基-萘-1-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(7.9mg)。LCMS(方法C)RT＝2.05分钟；404(M+H)+。
(ct)5-[6-(4-苯乙基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺
除了使用5-[6-(4-苯乙基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[114mg，0.28mmol，参考实施例32(g)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备5-[6-(4-苯乙基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(1.3mg)。LCMS(方法C)RT＝1.86分钟；423(M+H)+。
(cu)5-[6-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[6-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[106mg，0.28mmol，参考实施例32(h)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备5-[6-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8.7mg)。LCMS(方法C)RT＝1.45分钟；396(M+H)+。
(cv)2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苯乙基-酰胺 除了使用5-(5-甲基-4-苯乙基氨基甲酰基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[39mg，0.11mmol，参考实施例30(l)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备为灰白色固体的2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苯乙基-酰胺(18mg)。1H NMR(CD3OD)δ12.89(s br，1H)，11.29(s，1H)，9.17(s br，1H)，7.76(t，1H)，7.57(表观s，1H)，7.48(d，1H)，7.31(m，2H)，7.25(m，2H)，7.21(m，1H)，3.46(m，2H0，2.83(t，2H)，2.50(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝5.87分钟；371(M+H)+。
(cw)2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苄基酰胺 除了使用5-(4-苄基氨基甲酰基-5-甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.14mmol，参考实施例30(m)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备为树胶状物的2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苄基酰胺(18mg)。1H NMR(CD3OD)δ12.94(s br，1H)，11.30(s，1H)，9.13(s br，1H)，8.25(t，1H)，7.57(表观s，1H)，7.49(d，1H)，7.32(表观d，4H)，7.23(m，1H)，4.43(d，2H)，2.51(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝5.47分钟；357(M+H)+。
(cx)5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[118mg，0.35mmol，参考实施例29(b)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备为灰白色固体的5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(11mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.83(t，1H)，7.75(d，1H)，7.66(d，1H)，7.57(表观s，1H)，7.44(d，1H)，7.42(表观d，2H)，7.36(m，2H)，7.29(m，1H)，4.68(s，2H)，4.67(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.68分钟；341(M+H)+。
(cy)5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[64mg，0.14mmol，参考实施例1(ap)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且使粗品产物经反相HPLC，使用乙腈和水(梯度30∶70-70∶30，v/v，经40分钟)作为洗脱剂，制备5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(29mg)。1HNMR(CD3OD)δ8.05(d，1H)，7.78(t，1H)，7.64(d，1H)，7.56(d，1H)，7.54(表观s，1H)，7.27(d，4H)，7.17(m，1H)，3.01(t，2H)，2.77(t，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.56分钟；368(M+H)+。
(cz)5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 在0℃下，将乙酰氯(0.8ml，11.5mmol)缓慢加入到无水甲醇(20ml)中并把生成的溶液搅拌1小时，之后，加入5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[300mg，0.66mmol，参考实施例1(aq)]。使混合物温热至室温并搅拌另外30分钟，然后浓缩，得到为白色固体的5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(130mg)。1HNMR(CD3OD)δ11.19(s br，1H)，10.45(s，1H)，7.85(d，1H)，7.57(表观s br，1H)，7.39(d，1H)，7.32(t，1H)，7.23(t，1H)，7.12(m，1H)，6.71(d，1H)，6.66(m，1H)，5.06(s，2H)，3.72(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝5.73分钟；373(M+H)+。
(da)5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[56mg，0.15mmol，参考实施例30(g)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(16mg)。1H NMR(CD3OD)δ11.19(s，1H0，10.56(s，1H)，9.10(s br，1H)，7.85(d，1H)，7.80(t，1H)，7.55(表观s br，1H)，7.46(m，1H)，7.39(d，1H)，7.37(t，1H)，7.15(m，1H)，6.72(d，1H)，5.08(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝6.63分钟；377(M+H)+。
(db)5-{1-[(3，5-二氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(3，5-二氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[22mg，0.06mmol，参考实施例30(h)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备5-{1-[(3，5-二氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(9mg)。1H NMR(CD3OD)δ11.19(s，1H)，10.76(s，1H)，9.10(s，1H)，7.85(d，1H)，7.56(表观s br，1H)，7.40(d，1H)，7.31(m，2H)，6.96(tt，1H)，6.72(d，1H)，5.09(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝6.46分钟；379(M+H)+。
(dc)5-{1-[(3-氨基磺酰基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(3-氨基磺酰基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[63mg，0.15mmol，参考实施例30(i)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备5-{1-[(3-氨基磺酰基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(6.7mg)。1HNMR(CD3OD)δ11.18(s，1H)，10.67(s，1H)，9.09(s br，1H)，8.16(m，1H)，7.86(d，1H)，7.74(m，1H)，7.54(m，3H)，7.39(d，1H)，7.37(s，2H)，6.72(d，1H)，5.09(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝4.41分钟；422(M+H)+。
(dd)5-{1-[(1H-吲唑-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(1H-吲唑-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[71mg，0.19mmol，参考实施例30(j)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备5-{1-[(1H-吲唑-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(15mg)。1H NMR(CD3OD)δ12.69(s，1H)，11.20(s，1H)，10.29(s，1H)，9.11(s br，1H)，8.11(s，1H)，7.90(d，1H)，7.58(d，1H)，7.56 (表观s br，1H)，7.52(d br，1H)，7.40(d，1H)，7.09(t，1H)，6.74(d，1H)，5.18(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.00分钟；383(M+H)+。
(de)5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[57mg，0.15mmol，参考实施例30(k)]以外，通过与实施例1(bd)类似的方法进行，制备5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(10mg)。1H NMR(CD3OD)δ11.17(s br，2H)，9.94(s，1H)，9.10(s br，1H)，7.88(d，1H)，7.60(d，1H)，7.56(表观s br，1H)，7.40(d，1H)，7.33(t，1H)，7.17(d，1H)，7.02(t，1H)，6.73(d，2H)，5.20(s，2H)。LCMS(方法A)RT＝5.17分钟；382(M+H)+。
(df)5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[243mg，0.56mmol，参考实施例28(k)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且使粗品产物经反相HPLC，使用乙腈和水(梯度25∶75-70∶30，v/v)作为洗脱剂，制备为固体的5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(105mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.64(表观t br，1H)，7.58(s，2H)，7.20-7.30(m，4H)，7.15(m，1H)，7.07(d，1H)，6.67(d，1H)，4.34(t，2H)，2.75(t，2H)，1.99(m，2H)。LCMS(方法A)RT＝7.31分钟；354(M+H)+。
(dg)5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[80mg，0.24mmol，参考实施例6(c)]以外，通过与实施例1(co)类似的方法进行，制备为橙色/棕色树胶状物的5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(16mg)。LCMS(方法C)RT＝1.67分钟；343(M+H)+。
(dh)5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 向5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[118mg，0.3mmol，参考实施例6(d)]、羟胺Wang_树脂(300mg，1.0mmol/g载荷)和吡啶(150μl，0.9mmol)在二甲基甲酰胺(3ml)中的缓慢搅拌着的悬浮液中加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(129mg，0.33mmol)。然后把混合物在室温下搅拌过夜并过滤。另外用甲醇和二氯甲烷(3x)洗涤树脂并干燥。用50％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液(3ml)处理树脂，振摇30分钟，过滤并用二氯甲烷洗涤。浓缩滤液，得到残余物，将其先后用乙醚和乙腈研磨，得到5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(9.7mg)。LCMS(方法C)RT＝1.79分钟；408(M+H)+。
(di)5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[116mg，0.3mmol，参考实施例6(e)]以外，通过与实施例1(dh)类似的方法进行，制备5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(19.9mg)。LCMS(方法C)RT＝1.75分钟；401(M+H)+。
(dj)5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[111mg，0.3mmol，参考实施例6(f)]以外，通过与实施例1(dh)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(8.9mg)。LCMS(方法C)RT＝1.84分钟；387(M+H)+。
(dk)5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[98mg，0.3mmol，参考实施例6(g)]以外，通过与实施例1(dh)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(4.4mg)。LCMS(方法C)RT＝1.47分钟；344(M+H)+。
(dl)5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺[197mg，0.41mmol，参考实施例1(at)]以外，通过与实施例1(a)类似的方法进行，并且使粗品产物经反相HPLC，使用乙腈和水(梯度15∶85-95∶5，v/v)作为洗脱剂，制备为固体的5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(31mg)。1H NMR(CD3OD)δ7.91-7.98(m，2H)，7.79(d，1H)，7.60(表观s br，1H)，7.38(m，1H)，7.04-7.08(m，2H)，6.91(d，1H)，6.01(s，2H)，4.52(表观dbr，3H)，4.31(表观s br，1H)，2.96(s，3H)。LCMS(方法A)RT＝4.19分钟；398(M+H)+。
参考实施例1(a)5-(2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺
将5-[2-甲基-5-(三氟甲基)-2H-吡唑-3-基]噻吩-2-羧酸(80mg，0.29mmol)在二甲基甲酰胺(1.2ml)中的溶液用二异丙基乙胺(151μl，0.87mmol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(39mg，0.33mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(110mg，0.29mmol)处理。把混合物在室温下搅拌4小时，此时t.l.c.分析[乙酸乙酯/甲醇，3∶1，v/v]表明起始原料羧酸消耗完全。减压蒸发反应混合物，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，用水洗涤有机相，然后经硫酸钠干燥，然后减压蒸发，使粗品产物经硅胶快速柱层析，用乙酸乙酯和石油醚流分(b.p.30-50℃)的混合物(3∶2，v/v)洗脱，得到为白色固体的5-(2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(85mg，78％)。LCMS(方法A)RT＝8.45分钟；376(M+H)+。
(b)5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 和 除了使用5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸的混合物[参考实施例(2a)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色泡沫物的5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺的混合物(75mg，73％)。LCMS(方法A)RT＝5.95分钟(次要组分)和6.08分钟(主要组分)；308(M+H)+。
(c)5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为白色固体的5-(5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(51mg，52％)。LCMS(方法C)RT＝3.10分钟；362(M+H)+。
(d)5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为黄色树胶状物的5-(1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(244mg，88％)。LCMS(方法A)RT＝8.49分钟；376(M+H)+。
(e)5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[参考实施例2(b)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺和5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺的混合物。经硅胶上的快速层析分离混合物，用在石油醚流分(b.p.40-60℃)中的28％-40％(v/v)乙酸乙酯洗脱，得到为白色固体的5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(22mg，23％)。LCMS(方法A)RT＝8.95分钟；363(M+H)+。
(f)5-苯基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 在0℃下，向5-苯基-噻吩-2-羧酸(72mg，0.35mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(3ml)中的溶液中加入O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(45mg，0.39mmol)、二异丙基乙胺(153μl，0.88mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(148mg，0.39mmol)。经7小时使混合物平衡至室温。蒸发挥发物，在乙酸乙酯和水之间分配残余物。分离这两相，用乙酸乙酯把水相提取两次。先后用水、10％枸橼酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤合并的提取液，然后经硫酸镁干燥，然后蒸发。使残余的黄色树胶状物经硅胶柱层析，用乙酸乙酯/戊烷(1∶3，v/v)洗脱，得到为白色树胶状物的5-苯基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(87mg，81％)，其放置结晶。LCMS(方法A)RT＝8.48分钟；304(M+H)+。
(g)5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸以外，通过与参考实施例1(f)类似的方法进行，制备为淡黄色树胶状物的5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(233mg，78％)。LCMS(方法A)RT＝6.32分钟；305(M+H)+。
(h)[2，2’]联噻吩基-5-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用[2，2’]联噻吩基-5-羧酸以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色油的[2，2’]联噻吩基-5-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(212mg，79％)，其无须进一步纯化即可用于下一步。
(i)5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为黄色泡沫物的5-(4-甲氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(195mg，84％)。LCMS(方法A)RT＝8.47分钟；334(M+H)+。
(j)5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[参考实施例2(c)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为泡沫物的5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(66mg，55％)。LCMS(方法A)RT＝5.52分钟；294(M+H)+。
(k)5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[参考实施例2(d)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色油的5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(65mg，91％)。LCMS(方法A)RT＝8.39分钟；384(M+H)+。
(l)5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[参考实施例2(e)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色油的5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(138mg，92％)。LCMS(方法A)RT＝8.79分钟；398(M+H)+。
(m)5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸[参考实施例6(a)]以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色树胶状物的5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(42mg，80％)。LCMS(方法A)RT＝6.77分钟；362(M+H)+。
(n)5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸以外，通过与参考实施例1(a)类似的方法进行，制备为无色树胶状物的5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(155mg，98％)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(o)5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 将5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[272mg，0.87mmol，参考实施例2(f)]在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液用二异丙基乙胺(600μl，3.36mmol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(200mg，1.7mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(700mg，1.8mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过周末，然后减压蒸发，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配产生的残余物。分离这两相，减压蒸发有机相。使粗品产物经硅胶快速柱层析，使用石油醚流分(b.p.30-50℃)和乙酸乙酯的混合物(梯度9∶1-7∶3，v/v)作为洗脱剂，得到为黄色树胶状物的5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(381mg)。LCMS(方法C)RT＝3.63分钟；412(M+H)+。
(p)5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[56mg，0.16mmol，参考实施例2(g)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜并且使用梯度(9∶1-7∶3，v/v)作为洗脱剂，制备为无色油的5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(67.5mg)。LCMS(方法C)RT＝3.41分钟；442(M+H)+。
(q)5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸[181mg，0.54mmol，参考实施例2(h)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜并且无须层析，制备为无色树胶状物的5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(226mg)。LCMS(方法C)RT＝3.71分钟；466(M+H)+。
(r)5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[181mg，0.55mmol，参考实施例2(i)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌4天并且使用梯度(9∶1-2∶8，v/v)作为洗脱剂，制备5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(173mg)。LCMS(方法C)RT＝3.22分钟；428(M+H)+。
(s)5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸[228mg，0.59mmol，参考实施例2(j)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜并且使用梯度(65∶35-60∶40，v/v)作为洗脱剂，制备为白色泡沫物的5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(243mg)。LCMS(方法C)RT＝3.79分钟；482(M+H)+。
(t)5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸[113mg，0.36mmol，参考实施例2(k)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌4小时并且无须层析，制备为树胶状物的5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(120mg)。LCMS(方法C)RT＝3.41分钟。
(u)5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[205mg，0.7mmol，参考实施例2(l)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌6小时，在乙醚和水之间而不是在乙酸乙酯和水之间分配，使用乙酸乙酯和环己烷(50∶50，v/v)作为洗脱剂，制备5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(214mg)。LCMS(方法C)RT＝3.45分钟；398(M+H)+。
(v)5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[118mg，0.38mmol，参考实施例2(m)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌6小时并且无须层析，制备为浅色树胶状物的5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(58mg)。LCMS(方法C)RT＝1.84分钟；407(M+H)+。
(w)5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[168mg，0.57mmol，参考实施例2(n)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌3小时并且使用1∶1(v/v)作为洗脱剂，制备为白色泡沫物的5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(216mg)。LCMS(方法C)RT＝3.15分钟；392(M+H)+。
(x)5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[108mg，0.34mmol，参考实施例13(a)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌4小时，在乙醚和水之间而不是乙酸乙酯和水之间分配，并且无须层析，制备为树胶状物的5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(123mg)。LCMS(方法C)RT＝3.67分钟；412(M+H)+。
(y)5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[1.19g，3.99mmol，参考实施例13(b)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜并且使用3∶7(v/v)作为洗脱剂，制备5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(1.34g)，其无须进一步纯化即直接使用。
(z)5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸[74mg，0.25mmol，参考实施例2(o)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜并且使用环己烷和乙酸乙酯(1∶9，v/v)作为洗脱剂，制备为浅棕色油的5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(16mg)。LCMS(方法C)RT＝2.19分钟；398(M+H)+。
(aa)5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 向5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸[300mg，1.45mmol，参考实施例14(a)]在二氯甲烷(20ml)中的冷却(10℃)的悬浮液中加入草酰氯(380μl，4.4mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(1滴)。在没有更多的气体从混合物中释放出来以后，观察到细小的沉淀，真空除去溶剂，得到灰白色固体。向固体中加入二氯甲烷(20ml)、二异丙基乙胺(1.26ml，7.25mmol)和O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(170mg，1.45mmol)。把混合物在室温下搅拌过夜，然后减压蒸发溶剂，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。分离这两相，干燥(MgSO4)有机相，减压蒸发，得到为树胶状物的5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(170mg)。LCMS(方法C)RT＝2.51分钟；306(M+H)+。
(ab)5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[125mg，0.34mmol，参考实施例2(p)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌过夜，无须洗涤，使用戊烷和乙酸乙酯(9∶1-7∶3，v/v)作为洗脱剂，制备5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(122mg)。LCMS(方法C)RT＝4.02分钟；466(M+H)+。
(ac)5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸[140mg，0.68mmol，参考实施例14(b)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌4小时，无须洗涤，并且使粗品反应原料经反相纯化，使用乙腈和水(梯度0∶100-100∶0，v/v，以10％间隔)作为洗脱剂，制备为无色玻璃状的5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(120mg)。LCMS(方法C)RT＝2.15分钟；305(M+H)+。
(ad)5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸[87mg，0.42mmol，参考实施例14(c)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方法进行，搅拌4小时，无须洗涤，并且使粗品反应原料经反相纯化，使用乙腈和水(梯度0∶100-100∶0，v/v，以10％间隔)作为洗脱剂，制备为黄色玻璃状的5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(147mg)。LCMS(方法C)RT＝1.79分钟；305(M+H)+。
(ae)5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[60mg，0.23mmol，参考实施例13(c)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方进行始，搅拌过夜，无须洗涤，并且使用梯度[戊烷和乙酸乙酯(7∶3，v/v)-甲醇]作为洗脱剂，制备5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(67mg)。LCMS(方法C)RT＝2.88分钟；363(M+H)+。
(af)4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺 除了使用4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[300mg，1.09mmol，参考实施例13(d)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方进行始，搅拌过夜，并且使用戊烷和乙酸乙酯(1∶1，v/v)作为洗脱剂，制备4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(232mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(ag)5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸[35mg，0.11mmol，参考实施例6(b)]以外，通过与参考实施例1(o)类似的方进行始，并且无须层析，制备为乳状树胶状物的5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(48 mg)。LCMS(方法C)RT＝3.98分钟；410(M+H)+。
(ai)5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 将5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[123mg，0.38mmol，参考实施例32(j)]在二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液用二异丙基乙胺(132μl，0.76mmol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(49mg，0.42mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(152mg，0.4mmol)处理。把混合物在室温下搅拌6小时，然后浓缩，得到5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.77分钟；425(M+H)+。
(aj)5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[129mg，0.38mmol，参考实施例32(k)]以外，通过与参考实施例1(ai)类似的方法进行，制备5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.61分钟；439(M+H)+。
(ak)5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[130mg，0.38mmol，参考实施例32(l)]以外，通过与参考实施例1(ai)类似的方法进行，制备5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.21分钟；442(M+H)+。
(al)5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[140mg，0.38mmol，参考实施例32(m)]以外，通过与参考实施例1(ai)类似的方法进行，制备5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.18分钟；468(M+H)+。
(am)5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[138mg，0.38mmol，参考实施例32(n)]以外，通过与参考实施例1(ai)类似的方法进行，制备5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.09分钟；464(M+H)+。
(an)5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[130mg，0.38mmol，参考实施例32(o)]以外，通过与参考实施例1(ai)类似的方法进行，制备5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.51分钟；442(M+H)+。
(ap)5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 将5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[84mg，0.23mmol，参考实施例6(h)]在二甲基甲酰胺(6ml)中的溶液用二异丙基乙胺(80μl，0.46mmol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(39mg，0.33mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(87mg，0.23mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过周末，然后用水稀释，用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机层，先后用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并减压浓缩，得到5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(101mg)。LCMS(方法C)RT＝3.61分钟；452(M+H)+。
(aq)5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 将5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸[250mg，0.7mmol，参考实施例6(j)]在二甲基甲酰胺(15ml)中的溶液用二异丙基乙胺(366μl，2.1mmol)、O-(四氢-2H-吡喃-2-基)羟胺(94mg，0.8mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(266mg，0.7mmol)处理。把混合物在室温下搅拌30分钟，然后浓缩，得到残余物。在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配残余物。先后用乙酸乙酯(3x)和二氯甲烷提取水层，合并有机层，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到为淡棕色油的5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(391mg)。LCMS(方法C)RT＝3.06分钟；457(M+H)+。
(ar)5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸[200mg，0.59mmol，参考实施例6(i)]以外，通过与参考实施例1(ap)类似的方法进行，制备5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺。LCMS(方法C)RT＝3.74分钟；438(M+H)+。
(at)5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸[156mg，0.41mmol，参考实施例32(p)]以外，通过与参考实施例1(ap)类似的方法进行，制备5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺。LCMS(方法C)RT＝2.22分钟；482(M+H)+。
(au)5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺 除了使用5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸[418mg，1.2mmol，参考实施例6(k)]以外，通过与参考实施例1(ap)类似的方法进行，制备为树胶状物的5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(四氢-吡喃-2-基氧基)-酰胺(596mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例2(a)5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 和 将在氢氧化钠溶液(15ml，1M)中的5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈的混合物
在回流下加热2小时。把反应混合物冷却至室温，用水稀释，用盐酸(1M)酸化并用乙酸乙酯提取3次。经硫酸镁干燥合并的提取液，然后减压蒸发。使残余物经快速柱层析，得到为黄色固体的5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸的混合物(94mg，12％)。LCMS(方法B)RT＝1.48分钟；209(M+H)+。
(b)5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[参考实施例7]以外，通过与参考实施例2(a)类似的方法进行，制备为白色固体的5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(85mg，74％)。LCMS(方法A)RT＝6.34分钟；282(M+H)+。
(c)5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[参考实施例3(b)]以外，通过与参考实施例2(a)类似的方法进行，制备为白色固体的5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(97mg，97％)。LCMS(方法A)RT＝4.79分钟；195(M+H)+。
(d)5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[参考实施例8(a)]以外，通过与参考实施例2(a)类似的方法进行，制备为白色粉末的5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(59mg，96％)。LCMS(方法A)RT＝7.98分钟；285(M+H)+。
(e)5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[参考实施例8(b)]以外，通过与参考实施例2(a)类似的方法进行，制备为白色固体的5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(116mg，97％)。LCMS(方法)RT＝8.44分钟；299(M+H)+。
(f)5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 将5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈[310mg，1.1mmol，参考实施例8(c)]在氢氧化钠溶液(10ml，1M)和二噁烷(5ml)中的溶液在75℃下加热过夜，然后接着在80℃下加热过夜。把反应混合物冷却至室温，用水稀释，用盐酸(1M)酸化并用乙酸乙酯提取3次。然后减压蒸发合并的提取液，得到为黄色树胶状物的5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(308mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(g)5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈[68mg，0.21mmol，参考实施例8(d)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且回流10小时，制备为黄色固体的5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(67mg)。LCMS(方法C)RT＝3.30分钟；343(M+H)+。
(h)5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸 除了使用5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈[142mg，0.42mmol，参考实施例8(e)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且在100℃下加热过夜，制备为白色粉末的5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(190mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(i)5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[407mg，1.31mmol，参考实施例8(f)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且在90℃下加热4.5小时，制备5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(432mg)。LCMS(方法C)RT＝3.10分钟；329(M+H)+。
(j)5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸 除了使用5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈[238mg，0.82mmol，参考实施例8(g)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且在90℃下加热24小时，制备为浅棕色固体的5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(250mg)。LCMS(方法C)RT＝3.66分钟；383(M+H)+。
(k)5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸 除了使用5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈[214mg，0.72mmol，参考实施例8(h)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且回流30分钟，制备为灰白色固体的5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(118mg)。LCMS(方法C)RT＝3.27分钟；317(M+H)+。
(l)5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈[371mg，1.33mmol，参考实施例8(i)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且回流3小时，制备为黄色粉末的5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(255mg)。LCMS(方法C)RT＝3.34分钟；299(M+H)+。
(m)5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈[330mg，1.11mmol，参考实施例8(j)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且在90℃下加热3小时，制备5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(374mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(n)5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈[185mg，0.67mmol，参考实施例8(k)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且在90℃下加热过夜，制备为白色固体的5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(188mg)。LCMS(方法C)RT＝2.99分钟；293(M+H)+。
(o)5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸 将5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.32mmol，参考实施例18(a)]在氢氧化钠溶液(3ml，1M)和甲醇(10ml)中的混合物加热至50℃1小时。使反应混合物冷却至室温，浓缩以除去甲醇，并用二氯甲烷洗涤。然后用浓盐酸把水相酸化至低pH，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，浓缩，得到为棕色油状固体的5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸(79mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(p)5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[125mg，0.36mmol，参考实施例8(l)]以外，通过与参考实施例2(f)类似的方法进行，并且加热至75℃8小时，制备5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(150mg)。LCMS(方法C)RT＝3.91分钟；365(M-)。
参考实施例3(a)5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 和 将5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-噻吩-2-甲腈
在乙醇(30ml)中的溶液用甲基肼(0.19ml，3.58mmol)处理。把混合物加热至回流7小时，然后冷却至室温，然后减压浓缩，得到5-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈和5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈的混合物(0.50g)，其直接用于下一步。
(b)5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 除了使用1.19g的5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-噻吩-2-甲腈、20ml乙醇与水合肼(0.20ml，6.4mmol)以外，通过与参考实施例3(a)类似的方法进行，在回流下把反应混合物加热16小时并在乙酸乙酯和水之间分配反应产物，制备为棕色固体的5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(0.80g，89％)。LCMS(方法A)RT＝5.90分钟；176(M+H)+。
(c)5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 将5-(4，4，4-三氟-3-氧代-丁酰基)-噻吩-2-甲腈[3.6g，14.6mmol，参考实施例5(a)]在乙醇(50ml)中的溶液用水合肼(2ml)处理。把生成的溶液加热至回流4.5小时，使之冷却至室温过夜，然后浓缩，得到残余物。把残余物溶于乙酸乙酯中，用1M盐酸、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)并浓缩，得到5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(2.7g)。LCMS(方法C)RT＝3.31分钟；242(M-)。
参考实施例4(a)5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-噻吩-2-甲腈 将5-乙酰基噻吩-2-甲腈(1.0g，6.6mmol)在二甲基甲酰胺(50ml)中的溶液用叔丁氧基双(二甲基氨基)甲烷(1.7ml，8.27mmol)处理。把生成的黄色溶液在70℃下加热8小时，然后使之冷却至室温，然后减压浓缩。用二异丙醚研磨残余物，浓缩为约5ml并用戊烷再次研磨，得到为黄色固体的5-(3-二甲基氨基-丙烯酰基)-噻吩-2-甲腈(1.3g，95％)。LCMS(方法A)RT＝5.63分钟；207(M+H)+。
(b)5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 将5-(4，4，4-三氟-3-氧代-丁酰基)-噻吩-2-甲腈(200mg，0.81mmol[参考实施例5])在乙醇(4ml)中的溶液用盐酸羟胺(56mg，0.81mmol)和乙酸(4ml)处理。把生成的溶液加热至回流2小时，此时t.l.c.分析[乙酸乙酯/石油醚流分(b.p.40-60℃)7∶3，v/v]表明起始原料完全消失。使混合物冷却至室温，然后减压浓缩。把残余物溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤溶液，然后真空浓缩。使残余物经硅胶柱层析，用在石油醚(b.p.40-60℃)中的10％-19％(v/v)乙酸乙酯洗脱，得到为灰白色固体的5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(162mg，82％)。LCMS(方法A)RT＝7.63分钟；263(M+H)+。
参考实施例5(a)5-(4，4，4-三氟-3-氧代-丁酰基)-噻吩-2-甲腈 在氮气下，将甲醇钠(384mg，17.3mmol)在无水乙醚(50ml)中的悬浮液先后用三氟乙酸乙酯(1.97ml，16.5mmol)和5-乙酰基噻吩-2-甲腈(2.5g，16.5mmol)处理。把溶液剧烈搅拌4天，然后通过加入盐酸(1M)猝灭。用乙酸乙酯提取反应混合物，用盐水洗涤有机相，然后经硫酸钠干燥，然后蒸发，得到为棕色固体的5-(4，4，4-三氟-3-氧代-丁酰基)-噻吩-2-甲腈(4.07g，75％)，其无须进一步纯化即可使用。LCMS(方法C)RT＝2.68分钟；(-veion)246(M-)。
参考实施例6(a)5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸 将5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[142mg，0.51mmol，参考实施例9(a)]在氢氧化钠溶液(15ml，2M)和乙醇(15ml)的混合物中的悬浮液加热至50℃15分钟。使反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯提取5次。经硫酸镁干燥合并的提取液，然后真空浓缩，得到为淡黄色粉末的5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸(115mg，85％)。LCMS(方法A)RT＝6.04分钟；263(M+H)+。
(b)5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸 将5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯[137mg，0.41mmol，参考实施例21(a)]、氢氧化锂单水合物(34mg，0.81mmol)、水(0.75ml)、甲醇(5ml)和四氢呋喃(2ml)的混合物在室温下搅拌过夜。在乙醚和水之间分配反应混合物，分离水相并再次用乙醚洗涤。用1M盐酸酸化水相，然后用乙酸乙酯(3x)提取。合并有机相，先后用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为白色固体的5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸(39mg)。LCMS(方法C)RT＝3.85分钟。
(c)5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 将5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[60mg，0.18mmol，参考实施例28(f)]、氢氧化锂单水合物(20mg，0.48mmol)、水(1.25ml)和乙腈(3.75ml)的混合物在室温下搅拌过夜。浓缩反应混合物，用1M盐酸酸化残余的物料，得到黄色固体，将其过滤，然后真空干燥，得到为黄色固体的5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(80mg)。LCMS(方法C)RT＝1.89分钟；328(M+H)+。
(d)5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸
除了使用5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[154mg，0.38mmol，参考实施例28(g)]以外，通过与参考实施例6(c)类似的方法进行，制备5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸。LCMS(方法C)RT＝2.08分钟；393(M+H)+。
(e)5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[152mg，0.38mmol，参考实施例28(h)]以外，通过与参考实施例6(c)类似的方法进行，制备5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸。LCMS(方法C)RT＝1.98分钟；386(M+H)+。
(f)5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[154mg，0.4mmol，参考实施例28(i)]以外，通过与参考实施例6(c)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸。LCMS(方法C)RT＝1.97分钟；372(M+H)+。
(g)5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[137mg，0.4mmol，参考实施例28(j)]以外，通过与参考实施例6(c)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸。LCMS(方法C)RT＝1.48分钟；329(M+H)+。
(h)5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 向5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[338mg，0.92mmol，参考实施例11(f)]和四氢呋喃(10ml)的溶液中加入三甲基硅烷醇钾(709mg，5.5mmol)。把混合物在室温下搅拌1.5小时，浓缩，使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度5∶95-5∶95，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，得到5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(84mg)。LCMS(方法C)RT＝3.49分钟；353(M+H)+。
(i)5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 向5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[660mg，1.87mmol，参考实施例28(k)]和四氢呋喃(10ml)的溶液中加入三甲基硅烷醇钾(1.44g，11.3mmol)。把混合物在室温下搅拌2.5小时，浓缩，使残余物经反相制备型HPLC，使用乙腈和水(梯度30∶70-70∶30，v/v，经90分钟)作为洗脱剂，得到5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(347mg)。LCMS(方法C)RT＝3.64分钟；339(M+H)+。
(j)5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸 向5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯[300mg，0.8mmol，参考实施例30(f)]、四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的溶液中加入氢氧化锂(90mg，2.2mmol)。把混合物在室温下搅拌2小时，然后用1M盐酸(10ml)猝灭，浓缩，得到残余物。用1M盐酸研磨残余物并过滤，得到为白色固体的5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸(253mg)。LCMS(方法C)RT＝2.89分钟；358(M+H)+。
(k)5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[700mg，0.1.92mmol，参考实施例10(ao)]以外，通过与参考实施例6(c)类似的方法进行，制备为白色固体的5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸(627mg)。LCMS(方法C)RT＝2.59分钟；352(M+H)+。
参考实施例7(a)5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 在氮气下，将5-(5-羟基-5-三氟甲基-4，5-二氢-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[168mg，0.64mmol，参考实施例4(b)]在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液用分子筛和1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(0.1ml，0.67mmol)处理。把混合物回流2小时，然后蒸发二氯甲烷，将残余物再次悬浮于二氯甲烷中。把混合物回流2.5天，然后过滤。真空浓缩滤液，使残余物经硅胶快速柱层析，用在石油醚流分(b.p.40-60℃)中的10％-30％(v/v)乙酸乙酯洗脱，得到为白色固体的5-(5-三氟甲基-异噁唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(136mg，87％)。LCMS(方法A)RT＝9.83分钟；337。
参考实施例8(a)5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 将5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[98mg，0.55mmol，参考实施例3(b)]在甲苯(6ml)中的溶液用氢氧化钾(25mg，0.44mmol)、碳酸钾(61mg，0.44mmol)、四丁基硫酸氢铵(23mg，0.066mmol)和苄基氯(76μl，0.66mmol)处理。把混合物回流过夜，之后t.l.c.(乙酸乙酯3∶2石油醚，b.p.40-60℃)表明存在剩余原料。加入另一等份的苄基氯(76μl，0.66mmol)，把混合物回流另外40小时。过滤反应混合物，用甲苯洗涤残余物。真空浓缩合并的滤液和洗液并在乙酸乙酯和盐水之间分配残余物。分离这两相并经硫酸钠干燥有机相，然后真空浓缩。使粗品产物经硅胶柱层析，用在石油醚流分(b.p.40-60℃)中的8％(v/v)乙酸乙酯洗脱，得到为黄色粉末的5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(63 mg，43％)。LCMS(方法A)RT＝9.72分钟；266(M+H)+。
(b)5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 除了使用2-溴代乙基苯以外，通过与参考实施例8(a)类似的方法进行，并且使反应产物经硅胶柱层析，用在石油醚流分(b.p.40-60℃)中的7.5％-12％(v/v)乙酸乙酯洗脱，制备为白色固体的5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(118mg，89％)。LCMS(方法A)RT＝10.14分钟；280(M+H)+。
(c)5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[244mg，1.39mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(25mg，0.44mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(7ml)的混合物中加入1-溴-3-苯基丙烷(320μl，2.1mmol)。把生成的混合物加热至75℃并搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温并真空浓缩，得到残余物，然后将其在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用乙酸乙酯(2x)洗涤水相。合并有机相并浓缩，然后经硅胶快速柱层析，使用戊烷和乙酸乙酯的混合物(梯度9∶1-1∶1，v/v)作为洗脱剂，得到5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈(342mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(d)5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈 将5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[82mg，0.46mmol，参考实施例3(b)]在甲苯(7ml)中的溶液用氢氧化钾(29mg，0.51mmol)、碳酸钾(71mg，0.51mmol)、四丁基硫酸氢铵(25mg，0.073mmol)和2-溴代甲基-1，4-苯并二噁烷(316mg，1.38mmol)处理。把混合物加热至回流24小时，使之冷却至室温，然后过滤，并用甲苯洗涤残余物。真空浓缩合并的滤液和洗液并在乙酸乙酯和盐水之间分配残余物。分离这两相，干燥(Na2SO4)有机相，然后真空浓缩。使粗品产物经硅胶快速柱层析，用乙酸乙酯和石油醚流分(b.p.40-60℃)(6∶4，v/v)作为洗脱剂，得到为油的5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈。LCMS(方法C)RT＝3.79分钟；324(M+H)+。
(e)5-{1-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[400mg，2.28mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(666mg，4.8mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(8ml)的混合物中加入甲磺酸2-(4-三氟甲基-苯基)-乙酯(612mg，2.3mmol)。把生成的混合物加热至70℃并搅拌过夜。然后用水猝灭反应混合物，用乙酸乙酯提取。干燥(MgSO4)有机层，浓缩，然后经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(3∶1，v/v)作为洗脱剂，得到5-[1-(3-苯基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈(145mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(f)5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[500mg，2.85mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(800mg，5.8mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(20ml)的混合物中加入5-溴代甲基-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯(900mg，4.2mmol)。把生成的混合物加热至75℃并搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温并真空浓缩，得到残余物，然后将其在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层并用乙酸乙酯洗涤水相。浓缩合并的有机相，并经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(梯度100∶0-95∶5至80∶20-50∶50，v/v)作为洗脱剂，得到5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(704mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(g)5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[250mg，1.42mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(315mg，2.28mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(13ml)的混合物中加入甲磺酸2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙酯(650mg，2.28mmol)。把生成的混合物加热至75℃并搅拌24小时。使反应混合物冷却至室温并真空浓缩，得到残余物。将残余物溶于乙酸乙酯中，先后用水(3x)和盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)，浓缩并经硅胶快速柱层析，使用乙酸乙酯和石油醚流分(b.p.40-60℃)(梯度70∶30-15∶85，v/v)作为洗脱剂，得到5-{1-[2-(4-三氟甲氧基-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈(305mg)。LCMS(方法C)RT＝4.18分钟；364(M+H)+。
(h)5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[300mg，1.72mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(500mg，3.6mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(4ml)的混合物中加入1-(2-溴代乙基)-4-氟-苯(566mg，3.4mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。然后用水猝灭反应混合物并用乙醚提取。干燥(MgSO4)有机层，浓缩，然后经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(8∶2，v/v)作为洗脱剂，得到5-{1-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-甲腈。
(i)5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[500mg，2.86mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(820mg，5.72mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(5ml)的混合物中加入(1-溴代乙基)苯(582mg，3.15mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌4小时。真空浓缩反应混合物，然后在乙醚和水之间分配。分离有机层，干燥(MgSO4)，浓缩，然后经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯混合物(梯度100∶0-80∶20，v/v)作为洗脱剂，得到5-[1-(1-苯基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈(371mg)。
(j)5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[400mg，2.28mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(1.26g，9.12mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(9.5ml)的混合物中加入4-(2-氯代乙基)吗啉盐酸盐(640mg，3.44mmol)。把生成的混合物加热至75℃并搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温，然后浓缩，得到残余物。在乙酸乙酯和水之间分配残余物。分离有机层，浓缩，然后经快速柱层析，使用戊烷和乙酸乙酯的混合物(梯度80∶20-0∶100，v/v)作为洗脱剂，得到5-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈(340mg)。
(k)5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[200mg，1.13mmol，参考实施例3(b)]、碳酸钾(203mg，1.47mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入2-(溴代甲基)四氢-2H-吡喃(264mg，1.47mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌28小时。使反应混合物冷却至室温，然后浓缩，得到残余物。在乙酸乙酯和水之间分配残余物。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩，然后经快速柱层析，使用石油醚流分(b.p.40-60℃)和乙酸乙酯的混合物(85∶15，v/v)作为洗脱剂，得到5-[1-(四氢-吡喃-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-甲腈(201mg)。LCMS(方法C)RT＝2.52分钟；274(M+H)+。
(l)5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈 向5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈[532mg，2.2mmol，参考实施例3(c)]、碳酸钾(820mg，5.72mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(7ml)的混合物中加入(1-溴代乙基)苯(511mg，2.76mmol)。把生成的混合物加热至75℃并搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，把生成的残余物悬浮于乙醇中并过滤。浓缩滤液并经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(梯度100∶0-95∶5，v/v，经30分钟)作为洗脱剂，得到5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-甲腈(142mg)。LCMS(方法C)RT＝4.44分钟。
参考实施例9(a)5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向乙酸钠(1.2g，13.9mmol)在水(15ml)中的溶液中加入1，1-二溴-3，3，3-三氟丙酮(0.80ml，5.37mmol)并把生成的混合物加热至80℃反应45分钟。把溶液冷却至0℃并加入在甲醇(20ml)中的5-甲酰基-噻吩-2-羧酸甲酯(0.84g，4.92mmol)，随后加入浓氢氧化铵溶液(25ml)并使溶液温热至室温反应过夜。浓缩反应混合物，用乙酸乙酯把含水残余物提取三次。蒸发合并的有机相，经硅胶上的柱层析纯化粗品产物，用在二氯甲烷中的10％v/v乙酸乙酯洗脱，得到为淡黄色粉末的5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(0.22g，16％)。LCMS(方法A)RT＝7.55分钟；277(M+H)+。
参考实施例10(a)5-[1-(2-苄氧基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[250mg，1.20mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(330mg，2.39mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(5ml)的混合物中加入苄基2-溴代乙基醚(210μl，1.33mmol)。把生成的混合物加热至70℃并搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温，真空浓缩，得到残余物，然后将其在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用1M盐酸洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩，得到黄色的油。把油用戊烷处理并放置过夜。倾析上清液并干燥剩下的残余物，得到为粘稠的黄色油的5-[1-(2-苄氧基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(330mg)。LCMS(方法C)RT＝3.81分钟；343(M+H)+。
(b)5-(1-戊-4-炔基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(150mg，1.09mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2ml)的混合物中加入5-氯-1-戊炔(46mg，0.45mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(2ml)，使其搅拌另外30分钟，之后倾入到Isolute HM-N柱上。把柱先后用乙醚和二氯甲烷与甲醇(90∶10，v/v)洗脱，浓缩生成的洗脱液，得到5-(1-戊-4-炔基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.25分钟；275(M+H)+。
(c)5-[1-(3-苯基-烯丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和肉桂基溴(89mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯基-烯丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.67分钟；325(M+H)+。
(d)5-[1-(3-苯氧基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和3-苯氧基丙基溴(97mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯氧基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.94分钟；375(M+Na)+。
(e)5-[1-(2-苯甲酰氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和N-(2-氯乙基)苯甲酰胺(82mg，0.45mmol)，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(2-苯甲酰氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.93分钟；356(M+H)+。
(f)5-(1-吡啶-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和4-吡啶甲基氯盐酸盐(74mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-(1-吡啶-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.16分钟；300(M+H)+。
(g)5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和(5-叔丁基)-3-(氯代甲基)-1，2，4-噁二唑(78mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.40分钟；347(M+H)+。
(h)5-[1-(3-吡咯-1-基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和1-(3-溴代丙基)吡咯(85mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(3-吡咯-1-基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.42分钟；316(M+H)+。
(i)5-(1-丁-2-烯基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和巴豆基溴(61mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-(1-丁-2-烯基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.30分钟；263(M+H)+。
(j)5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[400mg，1.9mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(1.2g，8.7mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入2-(氯代甲基)喹啉盐酸盐(400mg，2.0mmol)。把生成的混合物加热至80℃，搅拌24小时并使之放置经过周末。浓缩反应混合物，然后在乙酸乙酯和水之间分配，分离有机层并蒸发至干，得到固体。将固体再次溶于乙酸乙酯中，向其中加入戊烷和甲醇，使溶液放置过夜。过滤形成的结晶并抽气干燥，得到为淡黄色固体的5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(345mg)。LCMS(方法C)RT＝3.49分钟；350(M+H)+。
(k)5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[200mg，0.96mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(662mg，4.8mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(3ml)的混合物中加入2-氯-N-苯基乙酰胺(148mg，0.88mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。浓缩反应混合物，用水稀释，用乙酸乙酯(3x)提取，合并有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(325mg)。
(l)5-{1-[(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(300mg，2.18mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2ml)的混合物中加入2-氯-N-[5-(三氟甲基)-1，3，4-噻二唑-2-基]乙酰胺(118mg，0.48mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。向反应混合物中加入水(4ml)，使之搅拌另外30分钟，之后用乙酸乙酯(2x)提取。把合并的有机层蒸发至干，得到5-{1-[(5-三氟甲基-[1，3，4]噻二唑-2-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.99分钟；418(M+H)+。
(m)5-{1-[(2-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(2-甲氧基苯基)乙酰胺(96mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(2-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.13分钟；372(M+H)+。
(n)5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(4-氟苯基)乙酰胺(90mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.99分钟；360(M+H)+。
(o)5-{1-[(3-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(3-氟苯基)乙酰胺(90mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(3-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.06分钟；360(M+H)+。
(p)5-(1-{2-[(喹啉-2-羰基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和喹啉-2-羧酸(2-氯乙基)酰胺(112mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(喹啉-2-羰基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。
(q)5-[1-(苄基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和N-苄基-2-氯代乙酰胺(88mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-[1-(苄基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。
(r)5-{1-[(N-乙基-N-苯基-氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-乙基-N-苯基乙酰胺(95mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[N-乙基-N-苯基-氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。
(s)5-{1-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和3-(2-溴代乙基)吲哚(108mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.33分钟；352(M+H)+。
(t)5-{1-[(2-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(2-三氟甲氧基苯基)乙酰胺(121mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(2-三氟甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.30分钟；426(M+H)+。
(u)5-{1-[3-(4-氯-苯基)-丙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和1-氯-3-(4-氯苯基)丙烷(91mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[3-(4-氯-苯基)-丙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.81分钟；361 & 363(M+H)+。
(v)5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和3-(氯代乙酰氨基乙基)吲哚(113mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.95分钟；409(M+H)+。
(w)5-[1-(苯乙基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-苯乙基乙酰胺(95mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-[1-(苯乙基氨基甲酰基-甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.96分钟；370(M+H)+。
(x)5-(1-异喹啉-1-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和1-(溴代甲基)异喹啉氢溴酸盐(145mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-(1-异喹啉-1-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.06分钟；350(M+H)+。
(y)5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(2-氟苯基)乙酰胺(90mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.02分钟；360(M+H)+。
(z)5-[1-(2-喹啉-2-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[235mg，1.30mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(630mg，4.50mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(10ml)的混合物中加入甲磺酸2-喹啉-2-基-乙酯(287mg，1.14mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。然后浓缩反应混合物，使残余物经快速柱层析，使用乙酸乙酯和环己烷的混合物(梯度35∶65-45∶55，v/v，经30分钟)作为洗脱剂，得到5-[1-(2-喹啉-2-基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.64分钟；364(M+H)+。
(aa)5-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[1.0g，5.5mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(2g，14.4mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30ml)的混合物中加入2-溴代乙醇(0.5ml，0.6mmol)。把生成的混合物加热至70℃并搅拌16小时。然后浓缩反应混合物，在乙酸乙酯和水之间分配残余物。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为黄色固体的5-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(1.94g)。LCMS(方法C)RT＝2.65分钟；253(M+H)+。
(ab)5-(1-叔丁氧基羰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[3.96g，19mmol，参考实施例12(a)]、碳酸钾(7.88g，57mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(100ml)的混合物中加入叔丁基溴代乙酸酯(3.06μl，21mmol)。把生成的混合物加热至80℃并搅拌过夜。然后浓缩反应混合物，在乙酸乙酯和水之间分配残余物。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为固体的5-(1-叔丁氧基羰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(5.94g)。
(ac)5-(1-联苯-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和4-苯基苄基氯(91mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-(1-联苯-4-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.94分钟；375(M+H)+。
(ad)5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和N-(6-溴代甲基-吡啶-2-基)-2，2-二甲基-丙酰胺(121mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.33分钟；399(M+H)+。
(ae)5-{1-[2-(联苯-4-基氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和4-(2-溴代乙氧基)-1，1’-联苯(124mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-{1-[2-(联苯-4-基氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.96分钟；405(M+H)+。
(ag)5-[1-(3-苯氧基-苄基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[65mg，0.31mmol，参考实施例12(a)]和3-苯氧基苄基氯(98mg，0.45mmol)以外，通过与参考实施例10(b)类似的方法进行，制备5-[1-(3-苯氧基-苄基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.87分钟；391(M+H)+。
(ah)5-(1-{3-[4-(3-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和1-(3-氯苯基)-4-(3-氯丙基)哌嗪(131mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-(1-{3-[4-(3-氯-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.40分钟；445(M+H)+。
(ai)5-{1-[(4-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(4-吗啉代苯基)乙酰胺(122mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(4-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.70分钟；427(M+H)+。
(aj)5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-N-(2-吗啉代苯基)乙酰胺(122mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.07分钟；427(M+H)+。
(ak)5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和N-1-[4-(1，3-噁唑-5-基)苯基]-2-氯代乙酰胺(113mg，0.48mmol)，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.88分钟；409(M+H)+。
(al)5-{1-[(4-乙酰氨基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和N-(4-乙酰氨基苯基)-2-氯代乙酰胺(108mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-{1-[(4-乙酰氨基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.56分钟；399(M+H)+。
(ao)5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[511mg，2.46mmol，参考实施例12(a)]和2-氯代甲基-喹啉1-氧化物(479mg，2.46mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.08分钟；366(M+H)+。
(ap)5-(1-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.48mmol，参考实施例12(a)]和2-氯-1-[4-[4-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌嗪基]乙-1-酮(148mg，0.48mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备5-(1-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-哌嗪-1-基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.26分钟；481(M+H)+。
(aq)5-[1-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[1.17g，5.0mmol，参考实施例12(a)]和2-(叔丁氧基羰基氨基)乙基溴(1.26g，5.5mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备为淡黄色固体的5-[1-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(1.44g)。LCMS(方法C)RT＝3.33分钟；352(M+H)+。
(ar)5-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[1.87g，9.0mmol，参考实施例12(a)]和3-(叔丁氧基羰基氨基)丙基溴(2.5g，9.9mmol)以外，通过与参考实施例10(l)类似的方法进行，制备为黄色油的5-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(2.98g)。LCMS(方法C)RT＝3.48分钟；366(M+H)+。
参考实施例11(a)5-[5-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.2mmol，参考实施例15(a)]在乙腈(3ml)中的溶液中先后加入苯丙酰氯(34μl，0.24mmol)和二异丙基乙胺(50μl，0.3mmol)。把混合物在室温下搅拌1小时，然后加入饱和枸橼酸溶液，用氯仿提取生成的混合物。干燥(MgSO4)有机相并减压蒸发，得到为灰白色固体的5-[5-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(69 mg)。LCMS(方法C)RT＝3.67分钟；367(M+H)+。
(b)5-[5-(2-苯氧基-乙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[55mg，0.23mmol，参考实施例15(a)]和苯氧基乙酰氯(35μl，0.25mmol)以外，通过与参考实施例11(a)类似的方法进行，制备为灰白色粉末的5-[5-(2-苯氧基-乙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.67分钟；369(M+H)+。
(c)5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[55mg，0.23mmol，参考实施例15(a)]和苯基乙酰氯(34μl，0.25mmol)以外，通过与参考实施例11(a)类似的方法进行，制备为灰白色粉末的5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.52分钟；353(M+H)+。
(d)5-(5-苯甲酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[55mg，0.23mmol，参考实施例15(a)]和苯甲酰氯(29μl，0.25mmol)以外，通过与参考实施例11(a)类似的方法进行，制备为灰白色粉末的5-(5-苯甲酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝3.56分钟；339(M+H)+。
(e)5-{5-[(吡啶-4-羰基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[55mg，0.23mmol，参考实施例15(a)]和异烟酰氯盐酸盐(47mg，0.25mmol)以外，通过与参考实施例11(a)类似的方法进行，制备为灰白色粉末的5-{5-[(吡啶-4-羰基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.78分钟；340(M+H)+。
(f)5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[258mg，1.1mmol，参考实施例12(b)]和苯丙酰氯(222mg，1.3mmol)加热至160℃反应2.5小时。向反应混合物中加入饱和碳酸钠溶液，然后用二氯甲烷(3x)提取。合并有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到5-[6-(3-苯基-丙酰氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(330mg)。LCMS(方法C)RT＝3.99分钟；367(M+H)+。
参考实施例12(a)5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸[1.09g，9.0mmol，参考实施例2(c)]在甲醇(30ml)和浓盐酸(1.32ml)中的悬浮液加热至回流反应过夜。浓缩反应混合物，得到残余物，将其在饱和碳酸氢钠水溶液和二氯甲烷之间分配。分离有机相并浓缩，得到为米色固体的5-(1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(1.04g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(b)5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[1.5g，6.8mmol，参考实施例14(f)]在甲苯(57ml)和甲醇(12ml)中的搅拌着的悬浮液中加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(6.8ml，13.6mmol)。把反应物搅拌经过周末，然后浓缩，得到5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(1.35g)。
参考实施例13(a)5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 在氮气氛下，向4-苄氧基-2-(5-溴-噻吩-2-基)-嘧啶[226mg，0.65mmol，参考实施例22(a)]在四氢呋喃(20ml)中的冷却(-78℃)的溶液中加入正丁基锂(390μl，0.98mmol，2.5M在己烷中)。把反应混合物搅拌50分钟，然后倾入到固体二氧化碳片上并剧烈搅拌直到浆状物已经达到室温。用浓盐酸小心酸化浆状物，然后用二氯甲烷提取。分离有机相并干燥(MgSO4)，然后真空浓缩，得到为灰白色固体的5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(118mg)。LCMS(方法C)RT＝3.54分钟；313(M+H)+。
(b)5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 在氮气氛下，向5-苯乙基-3-噻吩-2-基-1H-吡唑[2.0g，7.87mmol，参考实施例17(a)]在四氢呋喃(100ml)中的冷却(-78℃)的溶液中加入正丁基锂(6.9ml，17.32mmol，2.5M在己烷中)。把反应混合物搅拌2小时，然后使二氧化碳(100ml的二氧化碳片置于另一个烧瓶中，并把驱气管线连接于反应混合物)鼓泡通过溶液。然后使反应混合物温热至室温，浓缩并用1M氢氧化钠溶液处理。用乙酸乙酯提取生成的溶液，然后酸化并用乙酸乙酯再次提取。合并有机相并用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩，得到5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(1.6g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(c)5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 在氮气氛下，向3-噻吩-2-基-5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑[262g，1.2mmol，参考实施例19(a)]在四氢呋喃(5ml)中的冷却(-78℃)的溶液中加入正丁基锂(2.5ml，6.25mmol，2.5M在己烷中)。把反应混合物搅拌1小时，然后使二氧化碳气体鼓泡通过溶液1小时。然后使反应混合物温热至室温，加入水，然后酸化混合物并用乙酸乙酯(2x)提取。合并有机相，干燥(MgSO4)并浓缩，得到残余物，使其经硅胶快速柱层析，使用戊烷和乙酸乙酯的混合物(梯度10∶1-1∶1，v/v)作为洗脱剂，得到5-(5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(68mg)。LCMS(方法C)RT＝2.88分钟；363(M+H)+。
(d)4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸 在氮气氛下，向3-(3-甲基-噻吩-2-基)-5-三氟甲基-1H-吡唑[500mg，2.16mmol，参考实施例17(b)]在四氢呋喃(25ml)中的冷却(-78℃)的溶液中加入正丁基锂(1.9ml，4.74mmol，2.5M在己烷中)。把反应混合物搅拌2小时，然后使二氧化碳气体鼓泡通过溶液另外2小时。使之温热至室温后，把反应混合物搅拌过夜，然后浓缩并用1M氢氧化钠溶液处理。用乙酸乙酯提取生成的溶液，然后酸化并用乙酸乙酯再次提取，合并有机相并用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到4-甲基-5-(5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸(518g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例14(a)5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸 将乙腈(29mL)和0.4M碳酸钠水溶液(29mL)脱气(通过氮气驱气)，然后在氮气氛下合并。向溶液中加入2-溴代嘧啶(924mg，5.8mmol)和5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(1.0g，5.8mmol)，将其加热至80℃，随后加入四(三苯基膦)钯(O)(336mg，0.29mmol)。搅拌3小时后，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配反应混合物。分离水层并用浓盐酸酸化，得到白色糊状物，将其分离，用水洗涤并真空干燥，得到为白色固体的5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸(1.28g)。LCMS(方法C)RT＝2.33分钟；207(M+H)+。
(b)5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸 将N，N-二甲基甲酰胺(7ml)、乙醇(2ml)和水(3ml)的混合物加入到3-溴代吡啶(398mg，2.52mmol)、5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(518mg，2.7mmol)、碳酸铯(1.64g，5.04mmol)和四(三苯基膦)钯(O)(216mg，0.188mmol)中。使悬浮液经微波照射，加热至150℃反应10分钟，然后在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。分离水层并用1M盐酸酸化，然后过滤，得到为灰白色粉末的5-吡啶-3-基-噻吩-2-羧酸(140mg)。LCMS(方法C)RT＝1.76分钟；206(M+H)+。
(c)5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸 将N，N-二甲基甲酰胺(7ml)、乙醇(2ml)和水(3ml)的混合物加入到4-溴代吡啶盐酸盐(490mg，2.52mmol)、5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(518mg，2.7mmol)、碳酸铯(2.46g，7.56 mmol)和四(三苯基膦)钯(O)(216mg，0.188mmol)中。使悬浮液经微波照射，加热至150℃反应10分钟，然后在饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。分离水层并用1M盐酸酸化，然后过滤，得到为棕色粉末的5-吡啶-4-基-噻吩-2-羧酸(87mg)。LCMS(方法C)RT＝0.32分钟；206(M+H)+。
(d)5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将乙腈(50mL)和0.4M碳酸钠水溶液(50ml)脱气(通过氮气驱气)，然后在氮气氛下合并。向溶液中加入2-溴-5-硝基吡啶(3.48g，17.0mmol)和5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(2.96g，17.0mmol)，将其加热至90℃，随后加入四(三苯基膦)钯(O)(0.98g，0.85mmol)。搅拌过夜后，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配反应混合物。分离水层并用浓盐酸酸化，得到绿色沉淀，将其用水、二氯甲烷和氯仿洗涤，得到5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(2.45g)。LCMS(方法C)RT＝2.97分钟。
(e)5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将乙腈(125mL)和0.4M碳酸钠水溶液(125mL)脱气(通过氮气驱气)，然后在氮气氛下合并。向溶液中加入6-溴代吡啶-2-甲醛(5.6g，30mmol)和5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(4.3g，25mmol)，将其加热至80℃，随后加入四(三苯基膦)钯(O)(585mg，0.51mmol)。搅拌1小时后，在乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液之间分配反应混合物。分离水层并用1M盐酸酸化，得到白色固体，经过滤收集并真空干燥，得到为白色固体的5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(4.29g)。LCMS(方法C)RT＝2.75分钟；233(M)+。
(f)5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将乙腈(5mL)和0.4M碳酸钠水溶液(5mL)脱气(通过氮气驱气)，然后在氮气氛下合并。向溶液中加入2-氨基-6-溴代吡啶(173mg，1.0mmol)和5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(173mg，1.0mmol)。将其加热至80℃，随后加入四(三苯基膦)钯(O)(23mg，0.02mmol)。搅拌1小时后，在乙酸乙酯和饱和氯化铵溶液之间分配反应混合物。分离水层并用1M盐酸酸化，得到细密的白色固体，经过滤收集并真空干燥，得到为白色固体的5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(90mg)。LCMS(方法C)RT＝1.53分钟；221(M+H)+。
(g)5-(6-溴-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将乙腈(150mL)和0.4M碳酸钠水溶液(150mL)脱气(通过氮气驱气)，然后在氮气氛下合并。向溶液中加入2，6-二溴吡啶(14.2g，60mmol)和5-(二羟基硼基)-2-噻吩羧酸(5.16g，30mmol)，将其加热至80℃，随后加入四(三苯基膦)钯(O)(1.06g，0.92mmol)。搅拌3小时后，在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配反应混合物。分离水层并用1M盐酸酸化，得到白色固体，经过滤收集并真空干燥，得到为白色固体的5-(6-溴-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸(3.02g)。
参考实施例15(a)5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 在氢气氛下，将5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[1.78g，6.7mmol，参考实施例20(a)]、钯(5wt.％在活性炭上)(500mg)和乙腈(300ml)的悬浮液搅拌90分钟。然后通过Hyflo过滤混合物，真空除去溶剂，得到为黄色固体的5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(1.40g)。LCMS(方法C)RT＝2.54分钟；235(M+H)+。
参考实施例16(a)4-苄氧基-2-(5-溴-噻吩-2-基)-嘧啶 使1，4-二噁烷(4ml)、N-溴代琥珀酰亚胺(551mg，3.1mmol)和4-苄氧基-2-噻吩-2-基-嘧啶[265mg，0.99mmol，参考实施例22(a)]的混合物经微波照射，加热至100℃反应20分钟。然后把反应混合物倾入到饱和碳酸氢钠溶液中并用乙醚提取。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO4)，真空浓缩，然后经快速柱层析，使用环己烷和二氯甲烷的混合物(梯度100∶0-0∶100，v/v，经20分钟)作为洗脱剂，得到为树胶状物的4-苄氧基-2-(5-溴-噻吩-2-基)-嘧啶(226mg)。LCMS(方法C)RT＝4.70分钟；347 & 349(M+H)+。
参考实施例17(a)5-苯乙基-3-噻吩-2-基-1H-吡唑 将5-苯基-1-噻吩-2-基-戊烷-1，3-二酮[4.37g，15.17mmol，参考实施例23(a)]在乙醇(50ml)中的溶液用水合肼(5ml)处理。把生成的溶液加热至回流反应6小时，然后使之在室温下放置2天。浓缩混合物，得到残余物，将其溶于乙酸乙酯中并用1M盐酸洗涤。分离有机相，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到为棕色固体的5-苯乙基-3-噻吩-2-基-1H-吡唑(3.86g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(b)3-(3-甲基-噻吩-2-基)-5-三氟甲基-1H-吡唑 将1-(3-甲基-噻吩-2-基)-丁-1，3-二酮[3.72g，15.76mmol，参考实施例23(b)]在乙醇(45ml)中的溶液用水合肼(3.2ml)处理。把生成的溶液加热至回流反应过夜，然后浓缩，得到残余物。把残余物溶于乙酸乙酯中，先后用1M盐酸和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到为黄色固体的3-(3-甲基-噻吩-2-基)-5-三氟甲基-1H-吡唑，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例18(a)5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(2，2-二溴-乙酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯
加入到乙酸钠(0.28g，3.4mmol)在水(10ml)中的溶液中，并把生成的混合物在90℃下搅拌45分钟，然后使之冷却至室温。然后先后加入甲醇(15ml)、苯丙醛(0.24g，1.8mmol)和浓氢氧化铵(15ml)。然后把混合物在室温下搅拌4小时，然后在乙酸乙酯和盐水之间分配。分离有机层并用乙酸乙酯(2x)提取水相。合并有机相，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到深棕色的油，使其经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(1∶1，v/v)作为洗脱剂，得到为棕色油的5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(109mg)。
参考实施例19(a)3-噻吩-2-基-5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑 使噻吩-2-羧酸N’-(2，2，2-三氟-1-亚氨基-乙基)-酰肼[261mg，1.1mmol，参考实施例25(a)]在N，N-二甲基甲酰胺(3ml)中的溶液经微波照射，加热至220℃反应15分钟。浓缩反应混合物，得到黄色树胶状物，使其经快速柱层析，使用戊烷和乙酸乙酯的混合物(梯度100∶0-50∶50，v/v)作为洗脱剂，得到为白色粉末的3-噻吩-2-基-5-三氟甲基-1H-[1，2，4]三唑(516mg)。
参考实施例20(a)5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 在60℃下，向5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[2.25g，9.0mmol，参考实施例14(d)]在甲醇(50ml)中的悬浮液中加入浓盐酸(2ml)。把反应混合物在回流下搅拌48小时，然后浓缩，得到黄色粉末。使用碳酸钠溶液和氢氧化钠水溶液碱化黄色粉末并过滤，得到为固体的5-(5-硝基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(1.78g)。LCMS(方法C)RT＝3.56分钟。
参考实施例21(a)5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯 向5-(3-羟基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯[124mg，0.50mmol，参考实施例27(a)]、碳酸钾(83mg，0.60mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(1.5ml)的混合物中加入苄基氯(63μl，0.55mmol)。把生成的混合物加热至70℃并搅拌过夜。使反应混合物冷却后，将其在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机相，用乙酸乙酯(3x)提取水相。合并有机相，先后用10％枸橼酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)并浓缩，得到为棕色油的5-(3-苄氧基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯(154mg)。LCMS(方法C)RT＝4.64分钟。
参考实施例22(a)4-苄氧基-2-噻吩-2-基-嘧啶 向2-噻吩-2-基-嘧啶-4-醇[240mg，1.35mmol，参考实施例26(a)]、碳酸钾(371mg，2.69mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(3ml)的混合物中加入苄基溴(170μl，2.44mmol)。把生成的混合物加热至70℃并搅拌1小时。使反应混合物冷却，然后倾入到水中并用乙醚提取。分离有机相，干燥(MgSO4)并浓缩，得到黄色的油，使其经快速柱层析，使用二氯甲烷作为洗脱剂，得到4-苄氧基-2-噻吩-2-基-嘧啶(265mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例23(a)5-苯基-1-噻吩-2-基-戊烷-1，3-二酮 向2-乙酰基噻吩(2.0g，15.87mmol)和四氢呋喃的溶液中先后加入氢化钠(0.7g，17.46mmol)和3-苯基丙酸甲酯(2.86g，17.46mmol)。然后把反应混合物加热至回流并搅拌5小时，随后在室温下搅拌经过周末。浓缩混合物，得到残余物，将其用盐酸(1M)处理并用乙酸乙酯提取。分离有机相，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到5-苯基-1-噻吩-2-基-戊烷-1，3-二酮(4.37g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
(b)4，4，4-三氟-1-(3-甲基-噻吩-2-基)-丁烷-1，3-二酮 向2-乙酰基-3-甲基噻吩(2.0g，14.29mmol)和四氢呋喃(40ml)的溶液中先后加入氢化钠(0.86g，21.43mmol)和三氟乙酸乙酯(3.04g，21.43mmol)。一旦反应混合物变得澄明，减压除去溶剂，得到残余物，将其用盐酸(1M)处理并用乙酸乙酯提取。分离有机相，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到4，4，4-三氟-1-(3-甲基-噻吩-2-基)-丁烷-1，3-二酮(3.72g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例24(a)5-(2，2-二溴-乙酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯 在50℃下，向5-乙酰基噻吩-2-羧酸(2.5g，14.7mmol)在甲醇(40ml)中的溶液中加入溴(4ml，58.8mmol)。把反应混合物在这个温度下搅拌过夜。浓缩反应混合物，得到残余物，将其溶于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)并浓缩，得到5-(2，2-二溴-乙酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯(4.82g)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例25(a)噻吩-2-羧酸N’-(2，2，2-三氟-1-亚氨基-乙基)-酰肼 向三氟乙脒(1.12g，10.0mmol)在乙醇(20ml)中的溶液中加入2-噻吩甲酰肼(1.11g，7.85mmol)。把生成的溶液搅拌2小时，然后浓缩，得到残余物。将残余物溶于乙酸乙酯中，通过硅胶垫并浓缩，得到为灰白色粉末的噻吩-2-羧酸N’-(2，2，2-三氟-1-亚氨基-乙基)-酰肼(1.93g)。LCMS(方法C)RT＝2.19分钟；238(M+H)+。
参考实施例26(a)2-噻吩-2-基-嘧啶-4-醇 使2-噻吩甲脒(carboxamidine)(0.5g，3.09mmol)和3，3-二乙氧基丙酸乙酯(1.18ml，6.07mmol)的混合物经微波照射，加热至180℃反应5分钟。然后用甲醇研磨反应混合物并过滤，得到为黄色粉末的2-噻吩-2-基-嘧啶-4-醇(238mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。
参考实施例27(a)5-(3-羟基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯 向5-溴代噻吩-2-羧酸乙酯(155mg，0.66mmol)在二甲氧基乙烷/乙醇/水(7∶2∶3，v/v/v)中的溶液中加入3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂戊环-2-基)(dioxaborolan-2-yl)苯酚(174mg，0.79mmol)、四(三苯基膦)钯(O)(15mg，0.013mmol)和碳酸铯(169mg，0.52mmol)。使混合物经微波照射，加热至150℃反应5分钟。然后在乙酸乙酯和10％枸橼酸水溶液之间分配反应混合物，分离这两相。用乙酸乙酯(2x)提取水相，先后用水和盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)并浓缩，得到灰白色油状固体。用乙醚和戊烷(1∶1，v/v-)研磨固体并过滤，得到为白色固体的5-(3-羟基-苯基)-噻吩-2-羧酸乙酯(140mg)。LCMS(方法C)RT＝3.53分钟；247(M-)。
参考实施例28(a)5-(5-苯乙基氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.21mmol，参考实施例15(a)]和苯基乙醛(28mg，0.21mmol)在无水四氢呋喃(2.5ml)中的溶液搅拌16小时。然后向反应混合物中加入冰乙酸(13ml，0.23mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(89mg，0.42mmol)。在搅拌另外20小时后，浓缩反应混合物。把残余物溶于乙酸乙酯中并先后用10％枸橼酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤生成的溶液。分离有机层，干燥(MgSO4)并蒸发，得到残余物，使其经快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(75∶25，v/v)作为洗脱剂，得到为黄色油的5-(6-苯乙基氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺(39mg)。LCMS(方法C)RT＝3.90分钟；339(M+H)+。
(b)5-{5-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[80mg，0.34mmol，参考实施例15(a)]、2-喹啉甲醛(69mg，0.44mmol)和4A分子筛在无水四氢呋喃(3.3ml)中的混合物搅拌20小时。然后向反应混合物中加入冰乙酸(22ml，0.37mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(108mg，0.51mmol)。在搅拌另外16小时后，浓缩反应混合物。把残余物溶于乙酸乙酯中并先后用10％枸橼酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤溶液。分离有机层，干燥(MgSO4)并蒸发至干，得到5-{5-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.15分钟；375(M+H)+。
(c)5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[80mg，0.34mmol，参考实施例15(a)]和1，4-苯并二氧芑-6-甲醛(72mg，0.44mmol)以外，通过与参考实施例28(b)类似的方法进行，制备5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.60分钟；383(M+H)+。
(d)5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(5-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[55mg，0.23mmol，参考实施例15(a)]和苯并[b]呋喃-2-甲醛(38mg，0.25mmol)以外，通过与参考实施例28(b)类似的方法进行，制备5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.87分钟；365(M+H)+。
(f)5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-[1-(3-氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[126mg，0.5mmol，参考实施例35(b)]和苯甲醛(42μl，0.4mmol)在无水甲醇(4ml)中的溶液搅拌过夜。然后向反应混合物中加入硼氢化钠(24mg，0.63mmol)，将其搅拌另外2小时，之后浓缩。用水(2ml)和饱和碳酸氢钠溶液(1ml)处理残余物，然后载荷到Isolute_HM-N柱(5ml)上。30分钟后，用氯仿洗涤柱并浓缩溶剂，得到为黄色树胶状物的5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(60mg)。LCMS(方法C)RT＝2.19分钟；342(M+H)+。
(g)5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-[1-(3-氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例35(a)]和2-喹啉甲醛(49mg，0.31mmol)在无水甲醇(3ml)中的溶液搅拌过夜。然后向反应混合物中加入硼氢化钠(19mg，0.5mmol)，将其搅拌另外2小时，之后浓缩。用水(2ml)和饱和碳酸氢钠溶液(1ml)处理残余物，然后载荷到Isolute_HM-N柱(5ml)上。30分钟后，用氯仿洗涤柱并浓缩溶剂，得到5-(1-{3-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.29分钟；407(M+H)+。
(h)5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-[1-(3-氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例35(a)]和3，4-亚甲二氧基苯甲醛(47mg，0.31mmol)以外，通过与参考实施例28(g)类似的方法进行，制备5-(1-{3-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-丙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.20分钟；400(M+H)+。
(i)5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-[1-(3-氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.4mmol，参考实施例35(b)]和3，4-亚甲二氧基苯甲醛(50mg，0.33mmol)以外，通过与参考实施例28(g)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝2.20分钟；386(M+H)+。
(j)5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-[1-(3-氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.4mmol，参考实施例35(b)]和异烟碱醛(iso-nicotinaldehyde)(35mg，0.33mmol)以外，通过与参考实施例28(g)类似的方法进行，制备5-(1-{2-[(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯。LCMS(方法C)RT＝1.71分钟；343(M+H)+。
(k)5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(6-氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[400mg，1.7mmol，参考实施例12(b)]和3-苯基丙醛(320mg，2.4mmol)在二氯乙烷(6ml)中的混合物搅拌5分钟。然后向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(720mg，3.4mmol)，将其搅拌经过周末。用二氯甲烷稀释反应混合物，并用饱和碳酸钠溶液洗涤。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到5-[6-(3-苯基-丙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(660mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝4.32分钟；353(M+H)+。
参考实施例29(a)5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.4mmol，参考实施例10(aa)]在无水四氢呋喃(6ml)中的溶液中加入氢化钠(30mg，0.6mmol)并把悬浮液搅拌30分钟。然后滴加4-氟苄基溴(200μl，1.6mmol)并把反应混合物搅拌过夜。向反应混合物中加入1M盐酸溶液，然后用乙酸乙酯(3x)提取。用盐水洗涤合并的有机层，然后干燥(MgSO4)并浓缩，得到淡黄色的油。使油经快速柱层析，使用乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(梯度5∶95-25∶75，v/v)作为洗脱剂，得到为黄色油的5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯(72mg)。LCMS(方法C)RT＝3.76分钟；361(M+H)+。
(b)5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向氢化钠(55mg，1.38mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(1ml)中的冷的(0℃)悬浮液中先后加入5-(6-羟基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[220mg，0.88mmol，参考实施例34(a)]在无水N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液和苄基溴(120μl，1.0mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(1ml)中的溶液。使反应混合物温热至室温并搅拌过夜，之后用乙醚稀释并先后用水(x2)和盐水洗涤。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为浅棕色油的5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(155mg)。LCMS(方法C)RT＝4.23分钟；340(M+H)+。
参考实施例30(a)5-(1-{[(吡啶-2-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.18mmol，参考实施例31(a)]在二甲基甲酰胺(1.8ml)中的溶液用二异丙基乙胺(94μl，0.54mmol)、2-(氨基甲基吡啶)(25μl，0.24mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(71mg，0.18mmol)处理。把混合物在室温下搅拌6小时，之后减压蒸发。把残余物溶于乙酸乙酯中并先后用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到黄色残余物，使其经硅胶快速柱层析，使用乙酸乙酯和环己烷的混合物(梯度95∶5-100∶0，v/v)作为洗脱剂，得到为白色固体的5-(1-{[(吡啶-2-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(53mg)。LCMS(方法C)RT＝2.15分钟；356(M+H)+。
(b)5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯
除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[300mg，1.12mmol，参考实施例31(a)]和8-氨基喹啉(211mg，1.46mmol)以外，通过与参考实施例30(a)类似的方法进行，(梯度20∶80-30∶70，v/v)，制备为浅棕色固体的5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(320mg)。LCMS(方法C)RT＝3.64分钟；393(M+H)+。
(c)5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[80mg，0.30mmol，参考实施例31(a)]在二甲基甲酰胺(3ml)中的溶液用二异丙基乙胺(157μl，0.9mmol)、3-氨基喹啉(45mg，0.31mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(114mg，0.30mmol)处理。把混合物在室温下搅拌2小时，之后减压蒸发。把残余物溶于乙酸乙酯中并用水(2x)洗涤生成的溶液。分离有机层，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到残余物，5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.02分钟；393(M+H)+。
(d)5-[1-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[70mg，0.26mmol，参考实施例31(a)]和3-氨基吡啶(26mg，0.27mmol)以外，通过与参考实施例30(c)类似的方法进行，制备5-[1-(吡啶-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.17分钟；343(M+H)+。
(e)5-(1-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[50mg，0.18mmol，参考实施例31(a)]和3-氨基甲基吡啶(20μl，0.19mmol)以外，通过与参考实施例30(c)类似的方法进行，制备5-(1-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.96分钟；357(M+H)+。
(f)5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[400mg，1.5mmol，参考实施例31(a)]在二甲基甲酰胺(4ml)中的溶液用二异丙基乙胺(780μl，4.5mmol)、3-氨基苯甲醚(210μl，1.8mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(570mg，1.5mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，得到残余物。使残余物经硅胶快速柱层析，使用乙酸乙酯和环己烷的混合物(梯度0∶100-50∶50，v/v)作为洗脱剂，得到为固体的5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯(416mg)。LCMS(方法C)RT＝3.32分钟；372(M+H)+。
(g)5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 将5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例31(a)]在二甲基甲酰胺(3ml)中的溶液用二异丙基乙胺(196μl，1.1mmol)、3-氯代苯胺(53mg，0.41mmol)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(143mg，0.38mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，得到残余物。把残余物溶于乙酸乙酯中，先后用饱和碳酸氢钠溶液和1 M盐酸洗涤。分离有机层，浓缩并用乙酸乙酯研磨，得到为白色固体的5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.58分钟；376(M+H)+。
(h)5-{1-[(3，5-二氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例31(a)]和3，5-二氟苯胺(53mg，0.41mmol)以外，通过与参考实施例30(g)类似的方法进行，制备为白色固体的5-{1-[(3，5-二氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.55分钟；378(M+H)+。
(i)5-{1-[(3-氨基磺酰基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例31(a)]和3-氨基苯磺酰胺(71mg，0.41mmol)以外，通过与参考实施例30(g)类似的方法进行，制备为白色固体的5-{1-[(3-氨基磺酰基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.87分钟；421(M+H)+。
(j)5-{1-[(1H-吲唑-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例31(a)]和1H-吲唑-7-胺(55mg，0.41mmol)以外，通过与参考实施例30(g)类似的方法进行，制备为白色固体的5-{1-[(1H-吲唑-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.99分钟；382(M+H)+。
(k)5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[100mg，0.38mmol，参考实施例31(a)]和7-氨基吲哚(55mg，0.41mmol)以外，通过与参考实施例30(g)类似的方法进行，制备为白色固体的5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.18分钟；381(M+H)+。
(l)5-(5-甲基-4-苯乙基氨基甲酰基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸[467mg，1.23mmol，参考实施例31(b)]在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液用二异丙基乙胺(857μl，4.9mmol)、苯乙胺(154μl，1.23mmol)、催化量的4-二甲基氨基吡啶和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(467mg，1.23mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，得到残余物。把残余物通过SCX-2柱并用2 M氨洗脱，收集流分并浓缩，用水稀释。用二氯甲烷提取水层并合并有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为固体的5-(5-甲基-4-苯乙基氨基甲酰基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(39mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.33分钟；370(M+H)+。
(m)5-(4-苄基氨基甲酰基-5-甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 将2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸[467mg，1.23mmol，参考实施例31(b)]在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液用二异丙基乙胺(857μl，4.9mmol)、苄基胺(134μl，1.2mmol)、一粒结晶(one crystal)的4-二甲基氨基吡啶和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-甲基氢脲鎓六氟磷酸盐(467mg，1.23mmol)处理。把混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩，得到残余物。在水和乙酸乙酯之间分配残余物，分离有机层并浓缩，得到黄色树胶状物。用乙腈研磨树胶状物，得到为黄色粉末的5-(5-甲基-4-苄基氨基甲酰基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(39mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.24分钟；356(M+H)+。
参考实施例31(a)5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(1-叔丁氧基羰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯[70mg，0.21mmol，参考实施例10(ab)]、三乙基硅烷(84μl，0.52mmol)和二氯甲烷(430μl)的溶液中加入三氟乙酸(216μl，2.82mmol)。把混合物在室温下搅拌16小时，之后减压蒸发，得到5-(1-羧基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.61分钟；267(M+H)+。
(b)2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸 将2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸叔丁基酯[1.0g，3.10mmol，参考实施例36(a)]和在水中的96％三氟乙酸(60ml)的溶液在室温下搅拌3天，之后浓缩为树胶状物。随后先后用乙醚、甲醇和乙醚研磨树胶状物，得到为棕色树胶状物的2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸(1.17g)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.08分钟；267(M+H)+。
参考实施例32(b)5-{6-[(4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 向5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、4-甲氧基苯胺(46mg，0.38mmol)和二氯乙烷(4ml)的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(97mg，0.46mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为紫色固体的5-{6-[(4-甲氧基-苯基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.65分钟；341(M+H)+。
(c)5-{6-[(甲基-吡啶-3-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 向5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、甲基-吡啶-3-基甲基-胺(46mg，0.38mmol)和二氯乙烷(4ml)的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(97mg，0.46mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到5-{6-[(甲基-吡啶-3-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.59分钟；340(M+H)+。
(d)5-[6-(3，4-四氢-1H-异喹啉-2-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 向5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[66mg，0.28mmol，参考实施例14(e)]、1，2，3，4-四氢异喹啉(37mg，0.28mmol)和二氯乙烷(4ml)的混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠(60mg，0.28mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-[6-(3，4-四氢-1H-异喹啉-2-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.99分钟；351(M+H)+。
(e)5-{6-[(甲基-萘-1-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[66mg，0.28mmol，参考实施例14(e)]和N-甲基-1-萘甲基胺(48mg，0.28mmol)以外，通过与参考实施例32(d)类似的方法进行，制备为灰白色固体的5-{6-[(甲基-萘-1-基甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.24分钟；389(M+H)+。
(g)5-[6-(4-苯乙基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[66mg，0.28mmol，参考实施例14(e)]和1-(2-苯基乙基)-哌嗪(53mg，0.28mmol)以外，通过与参考实施例32(d)类似的方法进行，制备为灰白色固体的5-[6-(4-苯乙基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.05分钟；408(M+H)+。
(h)5-[6-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 除了使用5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[66mg，0.28mmol，参考实施例14(e)]和1-(2-吡啶基)哌嗪(46mg，0.28mmol)以外，通过与参考实施例32(d)类似的方法进行，制备为灰白色固体的5-[6-(4-吡啶-2-基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.55分钟；381(M+H)+。
(j)5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、3-吡啶甲基胺(41mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-(6-{[(吡啶-3-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.56分钟；326(M+H)+。
(k)5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、3-(2-氨基乙基)吡啶(46mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-{6-[(2-吡啶-3-基-乙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝0.34分钟；340(M+H)+。
(l)5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、4-氟苄基胺(48mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-{6-[(4-氟-苄基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.05分钟；343(M+H)+。
(m)5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基-甲基胺(57mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-(6-{[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.05分钟；369(M+H)+。
(n)5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、(1H-苯并咪唑-2-基)-甲基胺(60mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-(6-{[(1H-苯并咪唑-2-基甲基)-氨基]-甲基}-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝1.89分钟；365(M+H)+。
(o)5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[88mg，0.38mmol，参考实施例14(e)]、N-(3-氨基丙基)咪唑(48mg，0.38mmol)和无水乙醇(4ml)的混合物在室温下搅拌2小时，之后加入硼氢化钠(30mg，0.76mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，得到为灰白色固体的5-{6-[(3-咪唑-1-基-丙基氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝0.35分钟；343(M+H)+。
(q)5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸 将5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[132mg，0.56mmol，参考实施例14(e)]、3，4-亚甲二氧苄基胺(86mg，0.56mmol)和无水乙醇(8ml)的混合物在室温下搅拌50分钟，之后加入甲醛(37％w/w，在水中)(45mL，0.60mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(356mg，1.68mmol)。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，溶于甲醇和水中并载荷到SCX-2柱上。用乙酸乙酯、甲醇和在甲醇中的2M氨溶液洗涤柱，得到为粘稠的棕色油的5-{6-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-甲基-氨基)-甲基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸(139mg)。LCMS(方法C)RT＝2.10分钟；383(M+H)+。
参考实施例33(a)5-[6-(甲基-苯乙基-氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸 将5-(6-溴-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[85mg，0.30mmol，参考实施例14(g)]、N-甲基苯乙胺(243mg，1.8mmol)和无水N，N-二甲基甲酰胺(2ml)的混合物经微波照射，加热至210℃反应10分钟。向反应混合物中加入水，然后用乙酸乙酯(2x)提取。干燥(MgSO4)合并的有机层并浓缩，得到为棕色油的5-[6-(甲基-苯乙基-氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸(108mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝3.99分钟；339(M+H)+。
参考实施例34(a)5-(6-羟基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-(6-甲酰基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸[247mg，1.0mmol，参考实施例14(e)]在甲醇(10ml)中的冷却(0℃)的搅拌着的悬浮液中加入硼氢化钠(41mg，1.08mmol)。搅拌2小时后，加入1M盐酸直到得到pH～2。然后加入饱和碳酸氢钠溶液以碱化反应混合物，将其用乙酸乙酯提取。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到为浅棕色固体的5-(6-羟基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸甲酯(222mg)，其无须进一步纯化即可直接使用。LCMS(方法C)RT＝2.85分钟；250(M+H)+。
参考实施例35(a)5-[1-(3-氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 向5-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[128mg，0.35mmol，参考实施例10(ar)]在二氯甲烷(2.5ml)中的冷却(0℃)的溶液中加入三氟乙酸(2.5ml)。把反应物搅拌2小时，然后浓缩，得到残余物，将其在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。用二氯甲烷(x2)进一步提取水层并合并有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到为黄色油的5-[1-(3-氨基-丙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(47mg)。LCMS(方法C)RT＝1.85分钟；266(M+H)+。
(b)5-[1-(2-氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯 除了使用5-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯[137mg，0.4mmol，参考实施例10(aq)]以外，通过与参考实施例35(a)类似的方法进行，制备为黄色油的5-[1-(2-氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸甲酯(73mg)。LCMS(方法C)RT＝1.78分钟；252(M+H)+。
参考实施例36(a)2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸叔丁基酯 使5-甲酰基-噻吩-2-羧酸甲酯[3.37g，19.8mmol，参考实施例37(a)]、2，3-二氧代-丁酸叔丁基酯(3.4g，19.8mmol)、乙酸铵(15.25g，198mmol)和乙腈(38ml)的混合物经微波照射，加热至150℃反应5分钟。浓缩反应混合物并在2 N碳酸钠溶液和乙酸乙酯之间分配残余物。分离有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到橙色残余物，使其经硅胶快速柱层析，使用戊烷和乙酸乙酯的混合物(梯度4∶1-1∶1，v/v)作为洗脱剂，得到为黄色粉末的2-(5-甲氧基羰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸叔丁基酯(1.0g)。
参考实施例37(a)5-甲酰基-噻吩-2-羧酸甲酯 向2-(5-溴-噻吩-2-基)-[1，3]二氧戊环(5.0g，21.3mmol)在四氢呋喃(150ml)中的冷却(-78℃)的溶液中加入正丁基锂(8.52ml，21.3mmol，2.5M在己烷中)，同时保持温度低于70℃。45分钟后，加入在四氢呋喃(5ml)中的氯代甲酸甲酯(1.65ml，21.3mmol)，并使反应混合物搅拌另外4小时。加入1M盐酸(500ml)，用乙醚(2×250ml)提取生成的混合物。合并有机层，干燥(MgSO4)并浓缩，得到油，使其经硅胶快速柱层析，使用环己烷和乙酸乙酯的混合物(4∶1，v/v)作为洗脱剂。浓缩生成的流分并溶于1，2-二甲氧基乙烷和水中，向其中加入浓硫酸。1小时后，浓缩混合物，得到为黑色固体的5-甲酰基-噻吩-2-羧酸甲酯，其无须进一步纯化即可用于下一步反应。
生物活性对化合物测试其抑制组蛋白脱乙酰酶活性的能力(初步试验)和它们对生长的细胞的生物效应(第二步试验)。
脱乙酰酶试验将得自K562慢性人骨髓白血病细胞(得自American Type CultureCollection，Rockville，MD)的总溶胞物用作HDAC活性的来源。细胞在补充10％FSC的RPMI培养基中生长，通过离心收获，用PBS冲洗一次，以24×106/ml的密度重新悬浮于HDA缓冲液(15mM磷酸钾pH 7.5，5％甘油，0.2mM EDTA)中。超声处理后，把溶胞液在1000g下离心20分钟，将得到的上清液试样等分并在-80℃下储存。或者，市场上可以得到的HeLa核提取液(BIOMOL)被用作组蛋白脱乙酰酶活性的来源。
采用116μM含乙酰化赖氨酸(BIOMOL)的荧光底物，将试验进行30分钟。当赖氨酸脱乙酰化发生时，底物可与加入的产生荧光团展开剂反应。产生的荧光团的量与样品中的HDAC活性成比例并且采用360nm下能够激发且在450nm下检测的多孔荧光计数器定量。
加入试验缓冲液前把化合物在DMSO中稀释，试验中最后的DMSO浓度为1％。
如下计算减少组蛋白脱乙酰酶酶促活性的化合物的百分比活性％活性＝{(FS-B)/(FC-B)}×100其中FS为在试验化合物(样品)存在下于450nm处的荧光。
FC为在媒介物1％DMSO(对照)存在下于450nm处的荧光。
B为在酶不存在下(荧光背景)于450nm处的荧光。
IC50定义为所给定的化合物达到50％活性时的浓度。
采用XL拟合软件包(2.0.5版本)计算IC50值。
表1显示自本发明的化合物得到的结果。
表1
次生试验采用下面的细胞系，在细胞增殖试验中测试化合物MCF-7 人乳腺腺癌(ATCC)MDA-MB-231 人乳腺腺癌(ATCC)两种细胞系无支原体污染(PCR Mycoplasma Detection Set，Takara)。在5％CO2湿润孵箱中，于37℃下将MCF-7保持在用10％FCS和1％非必需氨基酸补充的MEM培养基(Gibco)中。在非调节的气氛、湿润孵箱中，于37℃下将MDA-MB-231保持在用15％FCS补充的L-15(Leibovitz)培养基(Gibco)中。
在20000细胞/ml(3000细胞/孔)的密度下，将细胞接种在96-孔板上并在24h后把它们暴露于不同浓度的在0.1％DMSO中的化合物中。细胞另外生长72h，移去媒介物并在-80℃下将细胞冷冻至少30分钟，且在含CyQUANT染料的溶液中溶胞。这是一种特异性结合核酸并且在结合于核酸下荧光大大增强的荧光剂分子。因此，荧光密度与存在于每孔中的细胞数成比例并且采用多孔荧光计通过测量520nm下溶液的荧光来定量。
如下计算化合物减少细胞数的百分比活性％活性＝{(AS-B)/(AC-B)}×100其中
AS为在试验化合物(样品)存在下520nm处的荧光。
AC为在媒介物0.1％DMSO(对照)存在下520nm处的荧光。
B为在细胞不存在下(荧光背景)520nm处的荧光。
IC50定义为所给定的化合物达到50％活性时的浓度。
采用XL拟合软件包(2.0.5版本)计算IC50值。
表2显示自本发明的化合物得到的结果。
表权利要求
1.式(I)的化合物和这样的化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药 其中R1表示芳基或杂芳基，每一个由一个或更多个选自R3、亚烷基二氧基、羧基、氰基、卤代、羟基、硝基、卤代烷基、卤代烷氧基、-C(＝O)-R3、-C(＝O)-OR3、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR3、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R3、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R3、-OR3、-O-C(＝O)R3、-SH、-SR3、-SOR3、-SO2R3和-SO2-NR4R5的基团任选取代；R2表示氢、氯、氰基、氟、烷氧基、烷基或卤代烷基；R3表示芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或R7；R4和R5独立表示选自氢、烷基、链烯基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基的基团，其中所述烷基或链烯基由芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基任选取代；或者基团-NR4R5可形成环状胺；R6表示氢或低级烷基；R7表示烷基、链烯基和链炔基，其中所述烷基、链烯基或链炔基由一个或更多个选自以下的基团任选取代芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、羟基、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SOR8、SO2R8和-SO2-NR4R5；R8表示烷基、链烯基或链炔基，它们由一个或更多个选自芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、羟基和卤素的基团任选取代；或者R8表示芳基、杂芳基、环烷基、环烯基或杂环烷基；和Z为O或S。
2.一种权利要求1的化合物，其中R1为任选取代的苯基。
3.一种权利要求1或2的化合物，其中R1为4-甲氧基苯基。
4.一种权利要求1的化合物，其中R1选自任选取代的单环杂芳基。
5.一种权利要求1的化合物，其中R1选自任选取代的咪唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、噻吩基和嘧啶基。
6.一种权利要求1的化合物，其中R1选自任选取代的咪唑基、吡唑基、吡啶基和嘧啶基。
7.一种权利要求1、5或6的化合物，其中R1由卤代烷基取代。
8.一种权利要求1、5或6的化合物，其中R1由任选取代的烷基、链烯基或链炔基取代。
9.一种权利要求1、5或6的化合物，其中R1由任选取代的烷基取代。
10.一种权利要求8或9的化合物，其中所述烷基、链烯基或链炔基由一个或更多个选自以下的基团取代任选取代的芳基、杂芳基、环烷基、环烯基和杂环烷基，及选自羟基、-C(＝Z)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(＝Z)-R8、-O-C(＝O)-NR4R5、-NR6-C(＝O)-OR8、-NR6-C(＝O)-NR4R5、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SOR8、SO2R8和-SO2-NR4R5的基团取代。
11.一种权利要求8或9的化合物，其中所述烷基、链烯基或链炔基由选自以下的基团取代任选取代的芳基、杂芳基和杂环烷基，及选自-C(O)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(O)-R8、-NR6-SO2-R8、-OR8和-SO2-NR4R5的基团取代。
12.一种权利要求8或9的化合物，其中所述烷基、链烯基或链炔基由任选取代的芳基和杂芳基取代。
13.一种权利要求1或权利要求10的化合物，其中Z为O。
14.一种权利要求5或6的化合物，其中R1被基团X取代，其中X选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、-C(O)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(O)-R8、-NR6-SO2-R8、-OR8、-SO2-NR4R5和烷基，所述烷基由选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、-C(O)-NR4R5、-NR4R5、-NR6-C(O)-R8、-NR6-SO2-R8、-OR8和-SO2-NR4R5的基团取代。
15.一种权利要求14的化合物，其中X选自-(CH2)nCONR4(CH2)mAr，-(CH2)nSO2NR4(CH2)mAr，-(CH2)nNR6CO(CH2)mAr，-(CH2)nNR6SO2(CH2)mAr，-(CH2)nNR4(CH2)mAr，-(CH2)nO(CH2)mAr，和-(CH2)nAr；其中Ar为任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基；n为0、1、2或3；和m为0、1、2、3或4。
16.一种根据任一项前述权利要求所要求的化合物，其中所述R4和R6基团独立选自氢；和/或其中所述R5和R8基团独立选自任选取代的芳基、杂芳基和杂环烷基，和选自由任选取代的芳基、杂芳基或杂环烷基取代的烷基。
17.一种根据权利要求10-16中任何一项的化合物，其中在所述任选取代的芳基、杂芳基和杂环烷基上的取代基选自卤素、CF3、OCF3、烷基、酰氨基、芳基烷基、芳氧基、芳基、环状氨基、杂芳基、亚烷基二氧基和氨基磺酰基。
18.一种根据权利要求10-16中任何一项的化合物，其中所述任选取代的芳基选自苯基；所述任选取代的杂芳基选自喹啉基、异喹啉基、吡啶基、噁二唑基、噻二唑基、咪唑基、吲哚基、吲唑基、吡咯基和苯并呋喃基；并且所述任选取代的杂环烷基选自(i)任选取代的饱和多环杂碳环部分，其中芳基或杂芳基环和杂环烷基稠合在一起以形成环状结构，或者(ii)在氮上由芳基、芳基烷基、杂芳基烷基或者杂芳基取代的哌嗪基。
19.一种根据权利要求5或6的化合物，其中R1选自1-(2-苯基乙基)-1H-吡唑-3-基、1-苄基-1H-吡唑-3-基、4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基、吡啶-2-基、5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、2-甲基-2H-吡唑-3-基、1-甲基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基、2-甲基-5-三氟甲基-2H-吡唑-3-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-4-基、5-三氟甲基异噁唑-3-基、3-甲基[1，2，4]噁二唑-5-基或者噻吩-2-基。
20.一种根据任一项前述权利要求的化合物，其中R2为氢。
21.一种根据任一项前述权利要求的化合物，其中R3和R8独立选自烷基。
22.一种根据任一项前述权利要求的化合物，其中R3和R8独立选自甲基和乙基。
23.一种根据任一项前述权利要求的化合物，其中R4和R5独立选自氢、烷基、芳基烷基和杂芳基烷基。
24.一种根据权利要求1的化合物，它选自5-(4-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；5-(1-苄基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；5-(1-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；5-吡啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；和这样的化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药。
25.一种根据权利要求1的化合物，它选自42. 5-[1-(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；43. 5-(5-苯乙基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；44. 5-嘧啶-2-基-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；45. 5-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；46. 5-(1-苯乙基-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；47. 5-(4-苄氧基-嘧啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；48. 5-(2-苯乙基-3H-咪唑-4-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；49. 5-[1-(5-叔丁基-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；50. 5-{1-[6-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-吡啶-2-基甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；51. 5-(5-苯基乙酰氨基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；52. 5-(1-喹啉-2-基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；53. 5-[5-(2-苄氧基-乙基氨基)-吡啶-2-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；54. 5-{5-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；55. 5-{5-[(苯并呋喃-2-基甲基)-氨基]-吡啶-2-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；56. 5-{1-[2-(4-氟-苄氧基)-乙基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；57. 5-(1-苯基氨基甲酰基甲基-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；58. 5-[1-(喹啉-8-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；59. 5-{1-[(4-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；60. 5-{1-[(4-噁唑-5-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；61.喹啉-2-羧酸{2-[3-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-吡唑-1-基]-乙基}-酰胺；62. 5-{1-[(2-吗啉-4-基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；63. 5-(1-{[2-(1H-吲哚-3-基)-乙基氨基甲酰基]-甲基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；64. 5-{1-[(2-氟-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；65. 5-[1-(喹啉-3-基氨基甲酰基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；66. 2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苯乙基-酰胺；67. 2-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-基)-5-甲基-1H-咪唑-4-羧酸苄基酰胺；68. 5-(6-苄氧基甲基-吡啶-2-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；69. 5-{1-[(1H-吲哚-7-基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；70. 5-{1-[(3-氯-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；71. 5-{1-[(3-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-甲基]-1H-吡唑-3-基}-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；72. 5-[1-(1-氧基-喹啉-2-基甲基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；73. 5-(1-{2-[(苯并[1，3]二氧杂环戊-5-基甲基)-氨基]-乙基}-1H-吡唑-3-基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；74. 5-[1-(2-苄基氨基-乙基)-1H-吡唑-3-基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺；和这样的化合物的相应的N-氧化物、药学上可接受的盐、溶剂合物以及前药。
26.一种根据权利要求1-25中任何一项的化合物，它用于治疗。
27.根据权利要求1-25中任何一项的化合物在制备用于治疗其中抑制组蛋白脱乙酰酶可预防、抑制或者缓解疾病的病理学和/或症状学的疾病的药物中的用途。
28.一种用于在患者中治疗其中抑制组蛋白脱乙酰酶可预防、抑制或者缓解疾病的病理学和/或症状学的疾病的方法，该方法包括给予所述患者治疗有效量的根据权利要求1-25中任何一项的化合物。
29.一种根据权利要求27或28的方法或用途，其中所述疾病为由增加的细胞增殖引起的疾病。
30.一种根据权利要求27或28的方法或用途，其中所述疾病为癌症、牛皮癣、纤维增生性疾病、平滑肌细胞增生性疾病、炎性疾病和通过免疫调节可治疗的病症、神经变性性疾病、涉及血管生成的疾病、真菌和寄生虫感染以及造血细胞疾病。
31.一种根据权利要求27或28的方法或用途，其中所述疾病为肝纤维变性、动脉硬化、再狭窄、类风湿性关节炎、自身免疫性糖尿病、狼疮、变态反应、亨庭顿氏病、视网膜病、原虫感染、贫血、镰状细胞性贫血和地中海贫血。
32.一种根据权利要求31的方法或用途，其中所述原虫感染为疟疾、弓形体病或球虫病。
33.一种根据权利要求31的方法或用途，其中所述视网膜病为糖尿病性视网膜病、与年龄有关的黄斑变性、间质性角膜炎或红眼性青光眼。
34.一种根据权利要求27或28的方法或用途，其中所述疾病为因心肌细胞肥大引起的充血性心力衰竭。
全文摘要
一种式(I)的化合物，它可用于治疗与组蛋白脱乙酰酶酶促活性有关的疾病。
文档编号C07D333/38GK1684957SQ03823154
公开日2005年10月19日 申请日期2003年7月24日 优先权日2002年8月2日
发明者J·A·阿彻尔, W·博尔多纳, R·J·布尔, D·E·克拉克, H·J·戴克, M·I·A·吉尔, N·V·哈里斯, M·范登霍伊维尔, S·普赖斯 申请人:阿根塔发明有限公司