专利名称：一种共轭亚油酸与吉西他滨连接的前体药物制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及共轭亚油酸与吉西他滨(gemcitabine)M位置的氨基通过酰胺键连接的一种前体药物，与吉西他滨相比，本发明的前体药物具有更好的抗肿瘤活性。本发明还涉及所述前体药物的制备方法。
背景技术：
吉西他滨(gemcitabine, GEM)是一种新型卩密唳类脱氧核苷类似物，常用其盐酸盐，其化学名称为(+)2’ -脱氧-2’ 2’ - 二氟胞嘧啶盐酸盐，通过抗代谢作用来发挥抗肿瘤效应，主要作用于DNA合成期，并可在一定条件下阻止细胞由Gl期向S期进展。临床上常与其他药物合用或单独给药，作为乳腺癌，非小细胞肺癌，膀胱癌，胰腺癌的一线用药。但是， 血液中存在的脱氧胞苷脱氨酶会使吉西他滨脱去4’ -氨基失活,使吉西他滨的体内半衰期很短(8-17min)，必须持续静脉给药来维持其对癌细胞的毒性，这种剂量限制性毒性影响临床疗效发挥，并大大增加毒副作用[I]。同时水溶性吉西他滨必须通过特定的核酸转运载体才可以进入肿瘤细胞，当核酸转运载体缺乏时，肿瘤容易产生耐药性[2]。共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid, CLA)即共轭十八碳二烯酸,是亚油酸的一组构象和位置异构体，这些异构体的共同特征为2个双键直接通过I个碳-碳单键连接，没有被亚甲基隔开，包括顺反构型，共有十几种同分异构体。天然共轭亚油酸主要存在于瘤胃动物牛、羊等的乳脂及肉制品中，每克乳脂中含量从2mg 25mg不等，且CLA的含量随奶牛的年龄增长而增加。人工合成共轭亚油酸主要以亚油酸或富含亚油酸的植物油为底物，通过碱催化的异构化反应合成。人工合成的共轭亚油酸仍是多种异构体的混合物，主要含有顺9，反Il-CLA和/或反10，顺12-CLA。有意思的是，目前已有研究证实共轭亚油酸(CLA)体内外抗肿瘤治疗中具有显著的抑制肿瘤生长的作用，其主要作用机制包括抑制DNA合成、促进细胞凋亡以及特异性免疫功能增强等，并且在动物长期给与CLA过程中并没有发现明显的血液毒性和器官毒性，表明该物质在体内应用是具有良好的安全性[3-6]。多不饱和脂肪酸是人体必须的一类脂肪酸，人体无法通过自主合成而得，只能通过外界摄取。与正常细胞相比，肿瘤细胞的代谢更为旺盛，需要更多的营养物质，其中包括多不饱和脂肪酸[7]。由此，可以推测CLA具有一定的肿瘤趋向性。我们课题组在先前的研究工作中曾经设计合成了一种共轭亚油酸与紫杉醇通过酯键连接而成的前体药物，试验结果证实了该前体药物具有良好的肿瘤靶向性和抗肿瘤效果[8]。该研究成果已获得中国专利授权[张烜、柯曦宇、张强，一种共轭亚油酸与抗肿瘤药物连接的前体药物及其制备方法，专利号200910180079]。基于已开展研究中CLA所表现出来的良好生物学活性，本发明将共轭亚油酸与吉西他滨连接，制备成前体药物，意外的发现对水溶性吉西他滨的4’ -氨基用共轭亚油酸进行结构修饰，可以减少脱氧胞苷脱氨酶对吉西他滨的降解失活，并且可以通过改变前体药物脂溶性而影响其跨细胞膜转运机制，以达到降低吉西他滨对核酸转运载体缺乏引起的耐药性。因此，在本发明设计合成共轭亚油酸与吉西他滨相连的前体药物，以达到靶向肿瘤组织，延长吉西他滨半衰期，增加吉西他滨脂溶性和透膜性，提高吉西他滨抗肿瘤疗效，减少并降低耐药性。
发明内容
本发明公开了一种共轭亚油酸与吉西他滨连接的前体药物(CLA-GEM共轭物)的制备方法及其应用。本发明的共轭亚油酸与吉西他滨相连的前体药物，其中，共轭亚油酸与吉西他滨通过酰胺键相连。所述共轭亚油酸至少含有两个同分异构体，一是顺9，反11-共轭亚油酸(I)，二是反10，顺12-共轭亚油酸(II)，其结构式如下
权利要求
1.一种共轭亚油酸与吉西他滨相连的前体药物，其特征在于，共轭亚油酸与吉西他滨通过酰胺键相连。
2.权利要求I所述的前体药物，其特征在于所述共轭亚油酸至少含有两个同分异构体，一是顺9，反11-共轭亚油酸(I)，二是反10，顺12-共轭亚油酸(II)，其结构式如下
3.一种制备权利要求I所述的共轭亚油酸与吉西他滨相连的前体药物的方法，其特征在于，该方法的步骤如下(1)在氮气保护下，将共轭亚油酸溶解于溶剂中，-15°C低温搅拌下加入活化剂，活化共轭亚油酸形成高反应活性的混合酸酐，将吉西他滨溶于溶剂中滴加到混合酸酐中，室温搅拌反应；溶剂是指三乙胺，四氢呋喃、N，N- 二甲基甲酰胺中的一种或其混合溶液；活化剂为氯甲酸乙酯；反应时间为2-72小时；吉西他滨共轭亚油酸的投料摩尔比为I : O. 5-5，活化剂与共轭亚油酸的摩尔比为I : 0.5-5。(2)取上述反应所得物料，减压真空干燥，用饱和碳酸氢钠水溶液与乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，减压真空干燥，用硅胶层析法纯化，洗脱液为甲醇和二氯甲烷的混合溶剂 (I 10-100)，收集有机溶剂，减压真空干燥，得前体药物。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于活化剂与共轭亚油酸的摩尔比优选为 I I0
5.权利要求I所述的前体药物用于肿瘤治疗，所述肿瘤选自乳腺癌、膀胱癌、肺癌、胰腺癌中的一种。
6.含有权利要求I所述的前体药物的药物组合物。
7.权利要求6所述的药物组合物，含有药物可接受的载体。
8.权利要求6所述的药物组合物采用口服给药或非肠道给药。
9.权利要求8所涉及的口服给药可以将药物组合物制备成合适的口服固体或液体制齐U，优选为口服胶囊。
10.权力要求8所涉及的非肠道给药可以将药物组合物制备成合适的注射剂，优选为静脉注射剂。
全文摘要
本发明涉及一种共轭亚油酸与吉西他滨连接的前体药物制备方法及其应用，其中的共轭亚油酸与吉西他滨通过酰胺键相连，其制备方法为，在氮气保护下，将共轭亚油酸溶解于溶剂中，-15℃低温搅拌下加入活化剂，活化共轭亚油酸形成高反应活性的混合酸酐，将吉西他滨溶于溶剂中滴加到混合酸酐中，室温搅拌反应；溶剂是指三乙胺，四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺中的一种或其混合溶液；活化剂为氯甲酸乙酯；反应时间为2-72小时；吉西他滨∶共轭亚油酸的投料摩尔比为1∶0.5-5，活化剂与共轭亚油酸的摩尔比为1∶0.5-5。本发明的目的是增加吉西他滨的抗肿瘤疗效。
文档编号C07H19/073GK102617679SQ20121006488
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月13日 优先权日2012年3月13日
发明者张强, 张烜, 王坚成, 陶小妹 申请人:北京大学