作为转染重排(RET)激酶抑制剂的吡啶酮衍生物的制作方法

发明领域

本发明涉及作为转染重排(rearrangedduringtransfection，ret)激酶抑制剂的新化合物、含有其的药物组合物、其制备方法及其单独或组合在治疗中的用途，所述治疗是用于胃肠道敏感性、运动性和/或分泌作用的正常化、和/或腹部病况或疾病、和/或与ret功能障碍有关的或其中调节ret活性可能具有治疗益处的下述疾病的治疗：包括但不限于全部类型的肠易激综合征(ibs)，包括腹泻主导型、便秘主导型或交替排便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、非特异性功能性肠病、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指肠病、功能性肛门直肠疼痛、炎性肠病，增殖性疾病例如非小细胞肺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、髓样甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌、未分化甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、脑瘤、腹膜腔癌、实体瘤、其它肺癌、头颈癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、vonhipple-lindau综合征和肾肿瘤、乳腺癌、输卵管癌、卵巢癌、过渡型细胞癌、前列腺癌、食道和食管胃连接处的癌症、胆道癌和腺癌、及带有增加的ret激酶活性的任何恶性肿瘤。

发明背景

肠易激综合征(ibs)是一种常见的疾病，在发达国家中影响10-20％的个体，并且其特征为异常肠排便习惯、胃气胀和内脏超敏反应(camilleri,m.,n.engl.j.med.,2012,367:1626-1635)。虽然ibs的病因不明，但据信是由脑和胃肠道之间的病症、肠微生物的干扰或增加的炎症所导致的。所导致的胃肠道变化会影响正常的肠道输送，从而造成腹泻或便秘。此外，在大多数ibs患者中，外周神经系统的敏化导致内脏超敏反应或异常性疼痛(keszthelyi,d.,eur.j.pain,2012,16:1444–1454)。

虽然ibs并不直接改变预期寿命，但其对患者的生活质量有很大的影响。而且，针对ibs相关的健康护理以及由于工作者缺勤导致的生产力损失会存在显著的经济成本(nellesen,d.,etal.,j.manag.carepharm.,2013,19:755-764).。极大影响ibs患者生活质量的最重要的症状之一是内脏痛(spiegel,b.,etal.,am.j.gastroenterol.,2008,103:2536–2543)。抑制ibs相关的内脏痛的分子策略将极大影响ibs患者的生活质量并降低相关花费。

转染重排(ret)是一种神经生长因子受体酪氨酸激酶，其在与分别与共受体神经营养因子(gdnf)家族受体α-1、2、3和4组合的四种神经营养因子(神经胶质细胞系衍生的神经营养因子、neurturin、artemin和persephin)之一结合后被活化(plaza-menacho,i.,etal.,trendsgenet.,2006,22:627-636)。已知ret在皮肤和肠的传入疼痛感受器的发育和存活中起重要作用。ret激酶敲除的小鼠缺少肠神经元，并具有其他神经系统异常，表明在发育过程中需要功能性ret激酶蛋白产物(taraviras,s.etal.,development,1999,126:2785-2797)。而且，对患有特征为因缺乏正常结肠削弱作用(enervation)导致的结肠梗阻的hirschsprung病的患者群研究具有较高比例的家族性和偶发性功能性ret突变丧失(butlertjadenn.,etal.,transl.res.,2013,162:1-15)。

类似地，异常ret激酶活性与多发性内分泌瘤(men2a和2b)、家族性髓样甲状腺癌(fmtc)、乳头状甲状腺癌(ptc)和hirschsprung病(hscr)有关(borello,m.,etal.,expertopin.ther.targets,2013,17:403-419)。men2a是一种由ret胞外富含半胱氨酸结构域中突变经二硫键导致二聚化(其造成酪氨酸激酶活性的组成性激活)导致的癌症综合征(wellsjr,s.,etal.,j.clin.endocrinol.metab.,2013,98:3149–3164)。具有该突变的个体可能会发展髓样甲状腺癌(mtc)、甲状旁腺增生和嗜铬细胞瘤。men2b是由于ret上的met918thr突变导致的，其改变了酪氨酸激酶的特异性。men2b与men2a类似，但缺乏甲状旁腺增生，且还会导致嘴唇、舌头和肠道的许多粘膜神经节的发育。连接启动子和nh2末端结构域或与ret激酶cooh末端不相关的基因从而形成组成性活化嵌合形式的受体(ret/ptc)的染色体重排被认为是ptc中的肿瘤引发事件(viglietto,g.etal.,oncogene,1995,11:1207-1210)。ptc涵盖所有甲状腺癌的约80％。这些数据表明，抑制ret可能是用于治疗与ibs和其他胃肠病症相关的疼痛以及用于治疗具有组成性ret激酶活性的癌症的有吸引力的治疗策略。

发明简述

本发明涉及式(i)表示的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺、或其可药用盐、和其结晶形式∶

，以及式(ii)表示的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺、或其可药用盐∶

本发明还涉及包括式(i)或(ii)的化合物和可药用赋形剂的药物组合物。

本发明还涉及一种治疗肠易激综合征的方法，其包括向有需要的人给药有效量的式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐。本发明还涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的人给药有效量的式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物，用于治疗。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐用于治疗肠易激综合征的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐用于治疗癌症的用途。

本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗ret介导的疾病的药物中的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗肠易激综合征的药物中的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

附图简述

图1显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的x射线粉末衍射图案。

图2显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的拉曼光谱。

图3显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的差示扫描量热法迹线。图4显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的热重量分析迹线。

图5显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的x射线粉末衍射图案。

图6显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的拉曼光谱。

图7显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的差示扫描量热法迹线。

图8显示式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的热重量分析迹线。

图9显示式(i)的化合物的无水盐酸盐的x射线粉末衍射图案。

图10显示式(i)的化合物的无水盐酸盐的拉曼光谱。

图11显示式(i)的化合物的无水盐酸盐的差示扫描量热迹线。

图12显示式(i)的化合物的无水盐酸盐的热重量分析迹线。

图13显示式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的x射线粉末衍射图案。

图14显示式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的拉曼光谱。

图15显示式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的差示扫描量热迹线。

图16显示式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的热重量分析迹线。

图17显示式(i)的化合物的马尿酸盐的x射线粉末衍射图案。

图18显示式(i)的化合物的马尿酸盐的拉曼光谱。

图19显示式(i)的化合物的马尿酸盐的差示扫描量热法迹线。

图20显示式(i)的化合物的马尿酸盐的热重量分析迹线。

图21显示式(i)的化合物的磷酸盐的x射线粉末衍射图案。

图22显示式(i)的化合物的磷酸盐的拉曼光谱。

图23显示式(i)的化合物的磷酸盐的差示扫描量热法迹线。

图24显示式(i)的化合物的磷酸盐的热重量分析迹线。

发明详述

本发明涉及如上定义的式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐。

本领域技术人员认识到，当使用不同命名软件时，本发明化合物可具有不同的名称。

本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐，用于治疗，特别地用于其中受试者为人的治疗。特别地，用于治疗下述ret介导的疾病∶肠易激综合征(ibs)，包括腹泻主导型、便秘主导型或交替排便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、非特异性功能性肠病、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指肠病、功能性肛门直肠疼痛、炎性肠病，增殖性疾病例如非小细胞肺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、髓样甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌、未分化甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、脑瘤、腹膜腔癌、实体瘤、其它肺癌、头颈癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、vonhipple-lindau综合征和肾肿瘤、乳腺癌、输卵管癌、卵巢癌、过渡型细胞癌、前列腺癌、食道和食管胃连接处的癌症、胆道癌和腺癌。特别地，本发明涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐，用于治疗下述疾病∶肠易激综合征(ibs)，包括腹泻主导型、便秘主导型或交替排便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、非特异性功能性肠病、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指肠病、功能性肛门直肠疼痛、炎性肠病，非小细胞肺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、髓样甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌、未分化甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、脑瘤、腹膜腔癌、实体瘤、其它肺癌、头颈癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、vonhipple-lindau综合征和肾肿瘤、乳腺癌、输卵管癌、卵巢癌、过渡型细胞癌、前列腺癌、食道和食管胃连接处的癌症、胆道癌和腺癌。

本发明还涉及用作药物的式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐。在另一个实施方案中，本发明涉及本发明的化合物在制备用于治疗ret介导的疾病的药物中的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗肠易激综合征的药物中的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物在治疗中的用途。本发明进一步包括本发明的化合物作为活性治疗物质的用途，特别地在治疗ret介导的疾病中的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物用于治疗肠易激综合征的用途。本发明还涉及式(i)或(ii)的化合物用于治疗癌症的用途。

由于它们在医学中的潜在用途，式(i)化合物的盐优选地是药学上可接受的。合适的药学上可接受盐包括由berge,bighley,andmonkhouse,j.pharm.sci.(1977)66,pp1-19描述的那些。涵盖在术语“药学上可接受盐”之内的盐指本发明的化合物的无毒盐。所公开化合物的盐可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机酸或有机酸处理游离碱，所述无机酸比如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有机酸比如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖基酸(pyranosidylacid)(比如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟酸(比如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(比如天冬氨酸或谷氨酸)、芳香酸(比如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(比如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸)等。药学上可接受盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐(phenylbutrate)、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、扁桃酸盐和磺酸盐，比如二甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐和萘-2-磺酸盐。

药学上可接受的盐也可以用提供药学上可接受的阳离子的碱基来制备，其包括碱金属盐(特别是钠和钾)、碱土金属盐(特别是钙和镁)、铝盐和铵盐、以及由生理学可接受的有机碱制成的盐，所述有机碱比如三甲胺、三乙胺、吗啉、吡啶、哌啶、甲基吡啶、二环己胺、n,n'-二苄基乙二胺、2-羟基乙胺、双-(2-羟乙基)胺、三-(2-羟乙基)胺、普鲁卡因、二苄基哌啶、脱氢枞胺、n,n'-双脱氢枞胺、葡萄糖胺、n-甲基葡萄糖胺、可力丁(collidine)、胆碱、奎宁、喹啉和碱性氨基酸(比如赖氨酸和精氨酸)。

不是药学上可接受的其他盐可用于制备本发明化合物，并且这些应视为形成本发明的一个进一步的方面。这些盐，比如三氟乙酸盐，虽然其本身不是药学上可接受的，但可用于制备用作获得本发明化合物及其药学上可接受盐的中间体的盐。

如果本发明的化合物以盐的形式被分离，则该化合物的相应游离碱形式可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机碱或有机碱处理该盐，合适地是具有比该化合物的游离碱形式更高pka的无机碱或有机碱。类似地，如果本发明的化合物以盐的形式被分离，则该化合物的相应游离酸形式可以通过本领域已知的任何合适的方法制备，包括用无机酸或有机酸处理该盐，合适地是具有比该化合物的游离酸形式更低pka的无机酸或有机酸。

式(i)或(ii)的化合物可以以结晶或非结晶形式或其混合物存在。本领域技术人员应理解，对于结晶或非结晶化合物，都可形成药学上可接受的溶剂合物。在结晶溶剂合物中，溶剂分子在结晶过程中被结合到晶格中。溶剂化物可包括非水溶剂，比如但不限于乙醇、异丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯，或者它们可包括水作为结合到晶格中的溶剂。其中水为结合到晶格中的溶剂的溶剂化物通常被称为“水合物”。水合物包括化学计量的水合物以及含有可变量水的组合物。本发明包括所有这样的溶剂化物。

本领域技术人员应当进一步理解，以结晶形式存在的本发明化合物(包括其各种溶剂化物)可显示多晶型现象(即，能够以不同的晶体结构存在)。这些不同的晶型通常被称为“多晶型物(polymorph)”。本发明包括所有这样的多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但是在堆积(packing)、几何排布和结晶固态的其他表征性质方面不同。因此，多晶型物可以具有不同的物理性质，比如形状、密度、硬度、变形性、稳定性和溶出性。多晶型物通常显示出不同的熔点、红外光谱和x射线粉末衍射图，其可用于鉴定。本领域技术人员应当理解，不同的多晶型物可通过例如改变或调整制备该化合物所用的反应条件或试剂进行生产。例如，温度、压力或溶剂的改变可能导致多晶型物。另外，一种多晶型物可以在一定的条件下自发地转化成另一种多晶型物。

本发明进一步涉及n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的各种盐(特别是盐酸盐、天门冬氨酸盐、马尿酸盐和磷酸盐)的一些晶型。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐(式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1)的晶型的特征在于，当使用cukα射线测量时，x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：约6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于，当使用cukα射线测量时，x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于，当使用cukα射线测量时，x射线粉末衍射(xrpd)图案包含至少选自下述的三个衍射角：约6.0、6.1、9.0、9.2、11.8、11.9、12.1、13.3、13.4、13.6、14.0、14.8、14.9、15.3、20.5、22.2、22.3、24.5、24.6、25.0、25.1和25.2度2θ。

在还有另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于，当使用cukα射线测量时，x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图1实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952、和3033cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952和3033cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约456、581、698、774、809、952、999、1030、1109、1172、1248、1282、1335、1362、1461、1532、1626、1678、2903、2952和3033cm^-1。

在还有另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于拉曼光谱包含位于约774、809、999、1282、1335、1362、1532、1626、2903、2952和3033cm^-1的峰。在还有另一实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图2实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图3实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图4实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应理解，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图1实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图2实质上一致的拉曼光谱和与图3实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图4实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图1实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图2实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图1实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图3实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有与图1实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图4实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射线测量的约6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约774、809、999、1282、1335、1362、1532、1626、2903、2952和3033cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射线测量的约6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图3实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的特征在于具有包含使用cukα射线测量的约6.0、9.0、11.8、12.1、13.4、14.8和20.5度的2θ衍射角x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图4实质上一致的热重量分析迹线。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐(式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2)的晶型的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：约6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少三个衍射角：约6.0、9.0、12.1、13.4、13.5、14.7、14.8、14.9、15.3、20.3、20.4、22.2、22.3、22.4、24.7和24.8度2θ。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图2实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约455、588、699、734、775、807、885、949、1000、1033、1112、1181、1247、1269、1283、1332、1366、1425、1466、1530、1550、1570、1627、1684、2902、2946和3044cm^-1。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于拉曼光谱包含位于约775、1000、1247、1269、1283、1332、1366、1627、2902和2946cm^-1的峰。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图6实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图7实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图8实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应理解，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图5实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图6实质上一致的拉曼光谱和与图7实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图8实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图5实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图6实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图5实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图7实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有与图5实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图8实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约775、1000、1247、1269、1283、1332、1366、1627、2902和2946cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有当使用cukα射线测量时约6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图7实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约6.0、9.0、12.1、14.7、20.3和24.7度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图8实质上一致的热重量分析迹线。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐(式(i)的化合物的无水盐酸盐)的晶型的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少三个衍射角：约8.3、8.4、10.7、11.3、15.5、16.0、20.0、20.4、20.8、22.6、23.2、23.3、23.6、24.6、24.9、25.3、25.9、26.9、27.3、27.4、28.1和28.2度2θ。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图9实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约418、454、575、636、699、771、782、805、864、894、941、974、998、1058、1116、1190、1246、1273、1299、1329、1356、1407、1433、1462、1489、1511、1546、1562、1614、1626、1667、1695、2922、2950、2986、3036、3075和3095cm^-1。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于拉曼光谱包含位于约771、805、998、1058、1246、1329、1614、1626、2922、2950和3036cm^-1的峰。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图10实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图11实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图12实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应当理解，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图9实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图10实质上一致的拉曼光谱和与图11实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图12实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图9实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图10实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图9实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图11实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐的特征在于具有与图9实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图12实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐具有当使用cukα射线测量时包含约16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约771、805、998、1058、1246、1329、1614、1626、2922、2950和3036cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐具有当使用cukα射线测量时包含约16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图11实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的无水盐酸盐具有当使用cukα射线测量时包含约16.0、20.0、22.6、23.3和26.9度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图12实质上一致的差示扫描量热法迹线。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐(式(i)的化合物的天门冬氨酸盐)的晶型的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：约6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少三个衍射角：约6.7、7.0、7.6、11.8、13.9、14.8、15.6、15.8、16.2、17.7、18.4、18.7、19.1、19.2、20.1、20.6、21.0、21.1、21.2、21.7、22.1、22.8、23.0、23.1、23.3、23.7、23.8、25.0、25.1、25.4、25.5、25.7、26.2、27.4、28.2、31.2、35.9和36.0度2θ。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度的2θ衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图13实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约452、574、691、770、807、1000、1037、1106、1162、1237、1274、1332、1364、1471、1487、1530、1627、1705、2918和3073cm^-1。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于拉曼光谱包含位于约770、807、1000、1237、1274、1332、1364、1471、1627、2918和3073cm^-1的峰。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图14实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图15实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图16实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应理解，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图13实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图14实质上一致的拉曼光谱和与图15实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图16实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图13实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图14实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图13实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图15实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有与图13实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图16实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约770、807、1000、1237、1274、1332、1364、1471、1627、2918和3073cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图15实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约7.0、7.6、11.8、16.2、20.6、21.7和23.8度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图16实质上一致的热重量分析迹线。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐(式(i)的化合物的马尿酸盐)的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：约6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于当使用cukα射线时x射线粉末衍射(xrpd)图案选自下述的至少三个衍射角：约6.1、9.2、10.1、12.0、12.3、12.6、13.8、14.0、17.2、17.3、18.1、18.4、18.9、19.0、19.1、19.6、20.6、21.1、21.2、21.5、21.7、22.4、22.9、23.5、23.6、24.9、27.2、27.4、27.6和28.0度2θ。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ的衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图17实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约557、618、694、771、809、917、997、1042、1108、1236、1272、1335、1366、1467、1537、1575、1601、1630、1695、2944和3071cm^-1。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于拉曼光谱包含位于约809、997、1236、1272、1335、1366、1601、1630、2944和3071cm^-1的峰。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图18实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图19实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图20实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应理解，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图17实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图18实质上一致的拉曼光谱和与图19实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图20实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图17实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图18实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图17实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图19实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有与图17实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图20实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约809、997、1236、1272、1335、1366、1601、1630、2944、和3071cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图19实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的马尿酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约6.1、9.2、12.6、18.4、20.6和22.4度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图20实质上一致的热重量分析迹线。

在某些实施方案中，n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐(式(i)的化合物的磷酸盐)的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少九个衍射角：5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少八个衍射角或至少七个衍射角或至少六个衍射角或至少五个衍射角或至少四个衍射角：约5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含选自下述的至少三个衍射角：约5.5、5.6、7.7、9.9、11.2、15.4、16.0、16.8、18.2、19.9、20.3、23.9、24.2、24.4、26.5、26.7、27.0和28.7度2θ。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于当使用cukα射线测量时x射线粉末衍射(xrpd)图案包含约9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图21实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案。

在其它实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少九个峰：约461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少八个峰或至少七个峰或至少六个峰或至少五个峰或至少四个、三个峰：约461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于拉曼光谱包含选自如下峰位置的至少三个峰：约461、485、529、577、638、696、732、773、786、806、867、889、1002、1036、1187、1243、1276、1296、1326、1358、1375、1442、1466、1510、1532、1580、1625、1698、2936、2964和3069cm^-1。

在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于拉曼光谱包含位于约786、806、1002、1036、1243、1296、1326、1375、1625、2936和2964cm^-1的峰。在仍然另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图22实质上一致的拉曼光谱。

在进一步的实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图23实质上一致的差示扫描量热法迹线和/或与图24实质上一致的热重量分析迹线。

在仍然进一步的实施方案中，本领域普通技术人员应理解，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有表征前述实施方案的分析数据的任意组合。例如，在一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图21实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图22实质上一致的拉曼光谱和与图23实质上一致的差示扫描量热法迹线及与图24实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图21实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图22实质上一致的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图21实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图23实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有与图21实质上一致的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图24实质上一致的热重量分析迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和包含位于约786、806、1002、1036、1243、1296、1326、1375、1625、2936和2964cm^-1的峰的拉曼光谱。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图23实质上一致的差示扫描量热法迹线。在另一个实施方案中，式(i)的化合物的磷酸盐的特征在于具有当使用cukα射线测量时包含约9.9、16.8、19.9、20.3、24.2、26.5和27.0度2θ的衍射角的x射线粉末衍射(xrpd)图案和与图24实质上一致的热重量分析迹线。

应当理解，当xrpd图案包含的衍射角(以度2θ表示)在指定值的±0.3度2θ之内时，则该xrpd图案包括本文所指定“约”值的衍射角。进一步，本领域技术人员熟知且理解，所用的装置、湿度、温度、粉末晶体的取向及涉及获得x射线粉末衍射(xrpd)图案的其它参数可以造成衍射图谱的外观、强度和直线位置的某些变化。本领域技术人员应理解，本文提供的与图1、5、9、13、17或21“实质上一致”的x射线粉末衍射图案为表示具有与提供图1、5、9、13、17或21的xrpd图案的化合物相同晶形的化合物的xrpd图案。即，该xrpd图案可能与图1、5、9、13、17或21的相同，或者更可能其可能有些差异。这样的xrpd图案可能并不一定显示本文所示的衍射图中任一个的各个线条，和/或可能显示由于涉及获得数据的条件不同导致的在外观、强度或该线的位移上的稍微变化。本领域技术人员能够通过比较它们的xrpd图案确定，结晶化合物的样品是否具有与本文公开形式相同的形式或不同的形式。例如，本领域技术人员可以将n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的样品的xrpd图案与图1重叠，并且使用本领域的专门技术和知识容易地确定样品的xrpd图案是否与本文公开的式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的xrpd图案实质上一致。如果该xrpd图案与图1实质上一致，则该样品形式可以被容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1具有相同的形式。类似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的样品的xrpd图案与图5实质上一致，则该样品形式可以容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2具有相同的形式。类似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的样品的xrpd图案与图9实质上一致，则该样品形式可以容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的无水盐酸盐具有相同的形式。类似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的样品的xrpd图案与图13实质上一致，则该样品形式可以容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的天门冬氨酸盐具有相同的形式。类似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的样品的xrpd图案与图17实质上一致，则该样品形式可以容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的马尿酸盐相同的形式。类似地，如果n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的样品的xrpd图案与图21实质上一致，则该样品形式可以容易及精确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的磷酸盐具有相同的形式。

应当理解，当拉曼光谱包括的峰(以cm^-1表示)在指定值的±5.0cm^-1之内时，则该拉曼光谱包括本文所指定“约”值的峰。进一步，本领域技术人员还熟知且理解，所用的装置、湿度、温度、粉末晶体的取向及涉及获得拉曼光谱的其它参数可以造成该光谱的外观、强度和峰位置的某些变化。本领域技术人员应理解，与本文提供的图2、6、10、14、18或22“实质上一致”的拉曼光谱为表示具有与提供图2、6、10、14、18或22的拉曼光谱的化合物相同晶形的化合物的拉曼光谱。即，该拉曼光谱可能与图2、6、10、14、18或22的相同，或者更可能其可能有些差异。这样的拉曼光谱可能并不一定显示本文所示的光谱中任一个的各个峰，和/或可能显示由于涉及获得数据的条件不同导致在外观、强度或所述峰的位移上的稍微变化。本领域技术人员能够通过比较它们的xrpd拉曼光谱确定，结晶化合物的样品是否具有与本文公开形式相同的形式或不同的形式。例如，本领域技术人员可以将n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的样品的拉曼光谱与图2重叠，并且使用本领域的专门技术和知识容易地确定样品的拉曼光谱是否与本文公开的式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的拉曼光谱实质上一致。如果该拉曼光谱与图6实质上一致，则该样品形式可被容易且准确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2具有相同的形式。类似地，如果该拉曼光谱与图10实质上一致，则该样品形式可被容易且准确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的无水盐酸盐具有相同的形式。类似地，如果该拉曼光谱与图14实质上一致，则该样品形式可被容易且准确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的天门冬氨酸盐具有相同的形式。类似地，如果该拉曼光谱与图18实质上致，则该样品形式可被容易且准确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的马尿酸盐具有相同的形式。类似地，如果该拉曼光谱与图22实质上一致，则该样品形式可被容易且准确地确定为与本文公开的式(i)的化合物的磷酸盐具有相同的形式。

进一步理解式(i)或(ii)化合物或其盐可以以不同于化学式中所显示的互变异构形式存在，这些也包括在本发明的范围之内。例如，当式(i)和(ii)的化合物描述为含有吡啶-2-酮部分时，则该相应的2-羟基吡啶互变异构体也包括在本发明的范围之内。

本领域技术人员应理解，式(i)或(ii)的化合物的某些保护的衍生物，其可以在之前或最后脱保护阶段之后制备，因而可以不具有药理学活性，但是在某些情况下，可以以口服或肠胃外给药，且之后在体内代谢以形成具有药理学活性的本发明的化合物。因此，这样的衍生物可以描述为“前药”。所有本发明的化合物的保护的衍生物和前药都包括在本发明的范围之内。

本发明化合物的合适的前药的实例描述在drugsoftoday,volume19,number9,1983,pp499-538andintopicsinchemistry,chapter31,pp306-316andin“designofprodrugs”byh.bundgaard,elsevier,1985,chapter1中。本领域技术人员还应当理解，当合适的官能团存在于本发明的化合物之内时，可以将本领域技术人员已知为“前体部分(pro-moieties)”的一些部分(例如h.bundgaard在“designofprodrugs”中描述的)置于合适的的官能团上。本发明的化合物的优选的“前体部分”包括：式(i)或(ii)化合物的酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝基酯、硫酸酯、亚砜、酰胺、氨基甲酸酯、偶氮(azo-)、磷酰胺、糖苷、醚、缩醛和缩酮衍生物。

给药呈前药的本发明的化合物可以使本领域技术人员进行以下中的一或多项：(a)修饰该化合物在体内的起始作用；(b)修饰该化合物在体内的作用持续时间；(c)修饰该化合物在体内的运输或分布；(d)修饰该化合物在体内的溶解性；和(e)克服该化合物所遭遇的副作用或其他困难。

本发明还包括同位素标记的化合物，其与式(i)或(ii)中列举的那些化合物相同，但是一个或多个原子被具有不同于自然界通常发现的该原子的原子质量或质量数的原子所替代。可掺入本发明的化合物及其可药用盐的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，比如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹⁵n、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i和¹²⁵i。

含有前述同位素和/或其他原子的其它同位素的本发明的化合物和所述化合物的药学上可接受盐都在本发明的范围之内。同位素标记的本发明的化合物，例如将放射性同位素(比如³h或¹⁴c)掺入其中的那些化合物，用于药物和/或底物组织分布测定。氚代的(即，³h)和碳-14(即，¹⁴c)同位素由于它们易于制备和检测，因此是特别优选的。¹¹c和¹⁸f同位素尤其用于pet(正电子发射断层显像)，以及¹²⁵i同位素尤其用于spect(单光子发射计算机化断层显像)，它们全部用于脑成像。进一步，用较重同位素(比如氘，即，²h)的取代，因其更大的代谢稳定性，可提供一些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求，因此，在一些情况可能是优选的。同位素标记的式(i)的化合物和按照本发明的化合物通常可以通过下述进行制备：实施下述方案和/或实施例中公开的操作、用容易获得的同位素标记试剂代替非同位素标记试剂。

定义

术语在其可接受的含义内使用。下述定义旨在阐明而非限定所定义的术语。

“药学上可接受(可药用)”指其在合理的医学判断范围内，适于接触人类和动物的组织而没有过度毒性、刺激或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相称的那些化合物、物质、组合物和剂型。

如本文使用的术语“药学上可接受的盐”指保留所述主题化合物期望的生物活性，并显示出最小的不希望的毒理效应的盐。这些药学上可接受的盐可以在化合物的最后分离和纯化过程中原位制备，或通过单独地将其游离酸或游离碱形式的纯化化合物分别与合适的碱或酸反应来制备。

药物组合物

本发明进一步提供药物组合物(也称为药物制剂)，其包含式(i)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种赋形剂(在药学领域也称为载体和/或稀释剂)。从与制剂的其他成分相容以及对接受者(即患者)无害的意义上说，赋形剂是药学上可接受的。合适的药学上可接受赋形剂包括下述类型的赋形剂：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、抗结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域技术人员应当理解一些可药用赋形剂可以提供一种以上的功能，且其可提供其他的功能，这取决于该赋形剂存在于制剂中的多少以及还有什么其他成分存在于该制剂中。

本领域技术人员拥有本领域知识和技术，从而能够选择合适的量的合适的药学上可接受赋形剂用于本发明。此外，本领域技术人员可获得描述药学上可接受赋形剂并可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂的大量资源。实例包括remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany),thehandbookofpharmaceuticaladditives(gowerpublishinglimited),andthehandbookofpharmaceuticalexcipients(theamericanpharmaceuticalassociationandthepharmaceuticalpress)。

使用本领域技术人员已知的技术和方法制备本发明药物组合物。常用于本领域的一些方法描述在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany)中。

根据本发明的另一个方面，提供一种制备药物组合物的方法，包括将式(i)或(ii)的化合物或其药学上可接受盐与至少一种赋形剂混合(或掺和)。

药物组合物可以为每个单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量形式。这样的单位可以含有治疗有效剂量的式(i)或(ii)的化合物或其药学上可接受盐，或一定比例的治疗有效剂量的式(i)或(ii)化合物或其药学上可接受盐，从而在给定的时间可给药多个单位剂量形式以达到期望的治疗有效剂量。优选的单位剂量制剂是本文上述列举的含有活性成分的每日剂量或亚剂量或其适当的比例的那些。此外，这样的药物组合物可以通过药学领域熟知的任何方法制备。

药物组合物可以适于通过任何合适的途径给药，例如，经口服(包括颊内或舌下)、直肠、鼻、局部(包括颊内、舌下或透皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)途径给药。这样的组合物可通过本领域已知的任何方法制备，例如，通过使活性成分与一种或多种赋形剂结合。

当适于口服给药时，药物组合物可以为离散单位比如片剂或胶囊剂、粉末或颗粒、在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、可食用泡沫或搅打剂(whip)，或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。本发明的化合物或其盐或本发明的药物组合物也可被掺入到糖果、威化饼(wafer)和/或舌带型(tonguetape)制剂中，用于作为“快速溶解”的药物给药。

例如，以片剂或胶囊剂形式的口服给药，可以将活性药物组分与口服的、无毒的药学上可接受惰性载体比如乙醇、甘油、水等混合。粉末剂或颗粒剂是如下制备的：将化合物研磨至合适的微细尺寸，然后与经类似研磨的药物载体比如可食用的碳水化合物(如例如淀粉或甘露醇)混合。矫味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可存在。

胶囊剂是如下制备的：如上所述制备粉末混合物，然后填充到成形的明胶或非明胶壳中。可以将助流剂和润滑剂比如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、固体聚乙二醇加入到粉末混合物中，之后进行填充操作。也可以加入崩解剂或增溶剂比如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善胶囊剂被摄入时的药物利用度。

而且，当期望或需要时，也可以将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入到混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(比如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然胶和合成胶比如阿拉伯胶、西黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。

片剂是如下配制的：例如制备粉末混合物，制粒或预压片，加入润滑剂和崩解剂，然后压制成片剂。粉末混合物是如下制备的：将经合适粉碎的化合物与如上所述稀释剂或基质混合，以及与任选的粘合剂(比如羧甲基纤维素和海藻酸盐、凝胶或聚乙烯吡咯烷酮)、溶液阻滞剂(比如石蜡)、吸收促进剂(比如季胺盐)和/或吸收剂(比如膨润土、高岭土或磷酸二钙)混合。粉末混合物可以如下制粒：润湿粘合剂比如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶液、纤维素溶液或聚合物溶液，然后挤压过筛。作为可选择的制粒方法，粉末混合物可以通过压片机来处理，导致不完全成形的预压片破裂成颗粒。可以通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油的方式来对颗粒进行润滑，以防止与片剂成形模粘连。然后，将润滑的混合物压制成片剂。本发明的化合物或盐也可以与自由流动的惰性载体组合，并且在不经历制粒或预压片步骤的情况下直接压制成片剂。可以提供由下述组成的透明的或不透明的保护性包衣：由虫胶形成的隔离包衣层、由糖或聚合物形成的包衣层和由蜡形成的光亮包衣层。可以将染料加入到这些包衣中以区分不同的剂量。

口服流体比如溶液剂、糖浆剂和酏剂可以按剂量单位形式来制备，从而使给定的量含有预定量的活性成分。糖浆剂可以通过将本发明的化合物或其盐溶于经合适矫味的水溶液中来制备，而酏剂通过使用无毒的含醇媒介物来制备。悬浮剂可以通过将本发明的化合物或其盐分散在无毒的媒介物中来制备。也可以加入增溶剂和乳化剂(比如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚)、防腐剂、矫味添加剂(比如薄荷油、天然甜味剂、糖精或其它人造甜味剂)等。

当合适时，可以对用于口服给药的剂量单位制剂进行微囊化。也可以例如通过将颗粒物质包衣或包埋到聚合物、蜡等中来制备制剂，以延长或维持释放。

在本发明中，对于递送药物组合物而言，片剂和胶囊剂是优选的。

在一些实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐存在。

在一些实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺门冬氨酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺门冬氨酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐存在。

在一些实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，.在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐以本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐以本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐盐以本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐存在。

在一些实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中至少10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以本文所述式(i)的化合物的磷酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中至少20％重量、或至少30％重量、或至少40％重量、或至少50％重量、或至少60％重量、或至少70％重量、或至少80％重量、或至少90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以本文所述式(i)的化合物的磷酸盐存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中至少95％重量、或至少96％重量、或至少97％重量、或至少98％重量、或至少99％重量、或至少99.5％重量、或至少99.8％重量、或至少99.9％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以本文所述式(i)的化合物的磷酸盐存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的药学上可接受盐(特别是盐酸盐、天门冬氨酸盐、马尿酸盐和磷酸盐)的药物组合物，其中不超过90％重量的所述盐为非晶形的。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的药学上可接受盐(特别是盐酸盐、天门冬氨酸盐、马尿酸盐或磷酸盐)的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的所述盐为非晶形的。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的药学上可接受盐(特别是盐酸盐、天门冬氨酸盐、马尿酸盐或磷酸盐)的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的所述盐为非晶形的。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的形式存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的形式存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的无水盐酸盐的形式存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的形式存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的马尿酸盐的形式存在。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中不超过90％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中不超过80％重量、或不超过70％重量、或不超过60％重量、或不超过50％重量、或不超过40％重量、或不超过30％重量、或不超过20％重量、或不超过10％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸盐的形式存在。在另一个实施方案中，本发明涉及包含n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐的药物组合物，其中不超过5％重量、或不超过4％重量、或不超过3％重量、或不超过2％重量、或不超过1％重量、或不超过0.5％重量、或不超过0.2％重量、或不超过0.1％重量的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐以不同于本文所述式(i)的化合物的磷酸盐的形式存在。

如本文使用的术语“治疗”指在先前患有的或被诊断的患者或受试者中减轻具体的病症，消除或减少所述病症的一种或多种症状，减慢或消除所述病症的进展以及预防或延迟所述病症的复发。

本发明提供一种治疗患有下述病症的哺乳动物(特别是人类)的方法：肠易激综合征(ibs)，包括腹泻主导型、便秘主导型或交替排便模式、功能性胃气胀、功能性便秘、功能性腹泻、非特异性功能性肠病、功能性腹痛综合征、慢性特发性便秘、功能性食管病、功能性胃十二指肠病、功能性肛门直肠疼痛、炎性肠病、增殖性疾病例如非小细胞肺癌、肝细胞癌、结直肠癌、甲状腺髓样癌、滤泡性甲状腺癌、未分化甲状腺癌、乳头状甲状腺癌、脑瘤、腹膜腔癌、实体瘤、其它肺癌、头颈癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、vonhipple-lindau综合征和肾肿瘤、乳腺癌、输卵管癌、卵巢癌、过渡型细胞癌、前列腺癌、食道和食管胃连接处的癌症、胆道癌和腺癌、或其组合。这样的治疗包括向所述哺乳动物(例如人类)给药治疗有效量的式(i)或(ii)的化合物或其药学上可接受盐的步骤。治疗还包括以下步骤：向所述哺乳动物(特别是人类)给药治疗有效量的含有式(i)或(ii)的化合物或其药学上可接受盐的药物组合物。

如本文使用的术语"有效量"指引发例如研究人员或临床医师寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂的量。

术语“治疗有效量”指与未接受所述量的相应受试者相比，使疾病、病症或副反应得到改善的治疗、治愈、预防或缓解，或降低疾病或病症的进展速度的任何量。该术语还在其范围内包括有效增强正常生理功能的量。对于治疗中使用，治疗有效量的式(i)或(ii)化合物以及其盐可以作为化学原料(rawchemical)的形式给药。另外，活性成分可以作为药物组合物存在。对于治疗中使用，尽管治疗有效量的式(i)或(ii)化合物或其可药用盐可以作为化学原料的形式给药是可能的，但其通常作为药物组合物或制剂的活性成分存在。

本发明的化合物或其盐的精确的治疗有效量将取决于多种因素，包括但不限于，待治疗的受试者(患者)的年龄和体重、需要治疗的精确病症及其严重性、药物制剂/组合物的性质，以及给药途径，并且最终将由主治医师或兽医判断决定。通常，给予治疗的式(i)或(ii)化合物或其药学上可接受盐的范围为每天约0.1至100mg/kg接受者(患者，哺乳动物)的体重，更通常地范围为每天0.1至10mg/kg体重。可接受的日剂量可以为约0.1至约1000mg/天，以及优选地约1至约100mg/天。该量可以以每天的单次剂量给予或以每天数次(比如2、3、4、5或更多)亚剂量给予，从而使得总日剂量是相同的。盐的有效量可以按照式(i)或(ii)化合物本身有效量的一定比例来确定。用于治疗的类似的剂量对于治疗本文提及的其他病症而言应当是适合的。通常，适合剂量的确定可以容易地由医学或药学领域的技术人员获得。

本发明的化合物可以单独使用或与一种或多种其他治疗剂组合使用。因此，本发明提供一种组合，其包含式(i)的化合物或其药学上可接受盐以及一或多种其他治疗剂。这样的组合可单独存在(其中各活性物质在单独的组合物中)或该活性物质以组合的组合物存在。

本发明的化合物可以与其他治疗剂，特别是可提高该化合物活性或处置时间(timeofdisposition)的药剂组合或共同给药。根据本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物以及使用至少一种其他治疗方法。在一个实施方案中，根据本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明的化合物和外科手术疗法。在一个实施方案中，根据本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明的化合物和放射疗法。在一个实施方案中，根据本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明化合物和至少一种支持疗法试剂(例如，至少一种镇吐药)。在一个实施方案中，根据本发明的组合疗法包括施用至少一种本发明的化合物以及至少一种其他化疗剂。在一个具体的实施方案中，本发明包括施用至少一种本发明的化合物和至少一种抗肿瘤剂。在仍然另一个实施方案中，本发明包括一种治疗方案，其中本公开的ret抑制剂本身并不是有活性的或活性不显著，但当其与其他疗法(作为单独疗法可能有活性也可能没有活性)组合时，该组合提供有用的治疗结果。

如本文使用的术语“共同给药”及其衍生词指同时给药或以任意单独依次的方式给药如本文所述的ret抑制化合物和其他的活性成分，特别是已知用于治疗癌症(包括化疗和放疗治疗)的那些组分。如本文使用的术语其他的活性成分包括已知或证实当给药至需要治疗癌症的患者时具有或展示出有益的性质的任意化合物或治疗剂。优选地，如果该给药不是同时的，则该化合物是在彼此接近的时间进行给药的。此外，无论该化合物是否以同一剂型给药都不重要，例如一种化合物可以局部给药而另一种化合物可以口服给药。

通常，对治疗的敏感性(susceptible)肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可以在本发明具体癌症治疗中共同给药。这样的试剂的实例可以在cancerprinciplesandpracticeofoncologybyv.t.devitaands.hellman(editors),6^thedition(february15,2001),lippincottwilliams&wilkinspublishers中找到。本领域技术人员能够根据药物与所涉及癌症的具体特征鉴别有用的药剂组合。本发明有用的典型抗肿瘤药物包括，但不限于：抗微管剂，比如二萜类化合物和长春花生物碱；铂配位络合物；烷化剂，比如氮芥(nitrogenmustard)、氧氮磷环类(oxazaphosphorine)、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯；抗生素试剂，比如蒽环类抗生素(anthracyclin)、放线菌素和博来霉素；拓扑异构酶ii抑制剂，比如表鬼臼毒素；抗代谢剂，比如嘌呤和嘧啶类似物和抗叶酸化合物；拓扑异构酶i抑制剂，比如喜树碱；激素和激素类似物；dna甲基转移酶抑制剂，比如阿扎胞苷和地西他滨；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；和细胞周期信号抑制剂。

通常，对所治疗的敏感性瘤具有活性的任意化疗剂都可以与本发明的化合物组合使用，条件是该具体试剂与采用本发明的化合物的疗法在临床上相容。用于本发明的典型抗肿瘤剂包括，但不限于：烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、抗有丝分裂剂、核苷类似物、拓扑异构酶i和ii抑制剂、激素和激素类似物；类视黄醇，组蛋白脱乙酰基酶抑制剂；信号转导通路抑制剂，包括细胞生长或生长因子功能的抑制剂、血管生成抑制剂和丝氨酸/苏氨酸或其他激酶抑制剂；细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂；反义疗法和免疫治疗剂，包括单克隆抗体、疫苗或其他生物制剂。

核苷类似物是转化成三磷酸脱氧核苷酸并代替胞嘧啶并入到复制的dna中的那些化合物。dna甲基转移酶共价结合至该修饰的碱基上，导致酶失活以及降低的dna甲基化。核苷类似物的实例包括阿扎胞苷和地西他滨，其都用于治疗骨髓增生异常疾病。组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂包括伏立诺他，用于治疗皮肤t细胞淋巴瘤。hdac通过组蛋白脱乙酰基作用来修饰染色质。另外，它们具有各种作用底物，包括各种转录因子和信号分子。其他hdac抑制剂正在研发中。

信号转导通路抑制剂是阻断或抑制化学过程的那些抑制剂，所述化学过程引起细胞内变化。如本文使用的，所述变化是细胞增殖或分化或存活。用于本发明的信号转导通路抑制剂包括，但不限于，受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、sh2/sh3结构域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇-3-oh激酶、肌醇信号传导和ras癌基因的抑制剂。信号转导通路抑制剂可以与上述组合物和方法中的本发明的化合物组合使用。

受体激酶血管生成抑制剂也可以用于本发明中。涉及vegfr和tie-2的血管生成抑制剂在上述针对信号传导抑制剂(两者都是受体酪氨酸激酶)中进行了讨论。其它抑制剂可以与本发明的化合物组合使用。例如，抗vegf抗体，其不识别vegfr(受体酪氨酸激酶)，但结合配体；整联蛋白(αvβ3)的小分子抑制剂，其抑制血管生成；内皮他丁和血管他丁(非-rtk)也被证明可用于与本发明的化合物组合。vegfr抗体的一个实例是贝伐单抗

生长因子受体的多种抑制剂正在研发中，且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂、反义寡核苷酸和适体。任意这些生长因子受体抑制剂都可以与本发明的化合物组合用于本文所述的任意组合物和方法/用途中。曲妥珠单抗是生长因子功能的抗-erbb2抗体抑制剂的一个实例。生长因子功能的抗-erbb2抗体抑制剂的实例是西妥昔单抗(erbitux^tm,c225)。贝伐单抗是直接针对vegfr的单克隆抗体的一个实例。表皮生长因子受体的小分子抑制剂的实例包括但不限于拉帕替尼和厄洛替尼甲磺酸伊马替尼是pdgfr抑制剂的一个实例。vegfr抑制剂的实例包括帕唑帕尼zd6474、azd2171、ptk787、舒尼替尼和索拉非尼。

抗微管或抗有丝分裂剂是时相特异性试剂(phasespecificagent)，其在细胞周期中的m期或有丝分裂期对肿瘤细胞的微管具有活性。抗微管剂的实例包括，但不限于二萜类化合物(diterpenoid)和长春花生物碱(vincaalkaloid)。

天然来源的二萜类化合物是时相特异性的抗癌剂，其在细胞周期中的g2/m期起作用。据信二萜类化合物通过与该蛋白结合，使微管的β-微管蛋白亚基稳定。然后使蛋白的分解受到抑制，有丝分裂停止，接着发生细胞死亡。二萜类化合物的实例包括，但不限于紫杉醇(paclitaxel)及其类似物多西他赛。

紫杉醇，5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4,10-二乙酸酯2-苯甲酸酯13-(2r,3s)-n-苯甲酰基-3-苯基异丝氨酸酯；是一种从太平洋紫杉树短叶紫杉(taxusbrevifolia)中分离出来的天然二萜产物，且作为可注射的溶液市售可获得的。其为萜类紫杉烷家族的成员。其在1971年由wani等人首次分离出来(j.am.chem，soc.,93：2325,1971)，并通过化学和x-射线结晶学方法表征其结构。其活性的机理之一是关于紫杉醇结合微管蛋白的能力，由此抑制癌细胞生长。schiffetal.,proc.natl,acad,sci.usa,77:1561-1565(1980)；schiffetal.,nature,277:665-667(1979)；kumar,j.biol,chem,256:10435-10441(1981)。对于一些紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的综述，参见∶d.g.i.kingstonetal.,studiesinorganicchemistryvol.26,entitled“newtrendsinnaturalproductschemistry1986”,attaur-rahman,p.w.lequesne,eds.(elsevier,amsterdam,1986)pp219-235。

在美国，已经批准了紫杉醇的临床用途，用于治疗难治性卵巢癌(markmanetal.,yalejournalofbiologyandmedicine,64:583,1991；mcguireetal.,ann.int.med.,111:273,1989)和用于治疗乳腺癌(holmesetal.,j.nat.cancerinst.,83:1797,1991.)。其为一种用于治疗皮肤癌(einziget.al.,proc.am.soc.clin.oncol.,20：46)和头颈癌(forastireet.al.,sem.oncol.,20：56,1990)的可能的候选药物。该化合物还具有治疗多囊性肾病(wooet.al.,nature,368：750,1994)、肺癌和疟疾的潜力。采用紫杉醇治疗患者，导致骨髓抑制(多重细胞谱系(multiplecelllineage),ignoff,r.j.et.al,cancerchemotherapypocketguide,1998)，这与高于阈浓度(50nm)的给药的持续时间有关(kearns,c.m.et.al.,seminarsinoncology,3(6)p.16-23,1995)。

多西他赛，(2r,3s)-n-羧基-3-苯基异丝氨酸n-叔丁基酯，13-酯与5β-20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯，三水合物；以可注射溶液市售可获得。多西他赛指明用于治疗乳腺癌。多西他赛是紫杉醇的半合成衍生物，参见，使用天然前体，从欧洲紫杉树的针叶中提取的10-去乙酰基浆果赤霉素iii制备。多西他赛的剂量限制性毒性是嗜中性白细胞减少症。

长春花生物碱(vincaalkaloids)是来源于长春花属植物的时相特异性的抗肿瘤剂。长春花生物碱通过特异性地结合微管蛋白而在细胞周期的m期(有丝分裂)起作用。因此，被结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。有丝分裂被认为在中期被停止，随后细胞死亡。长春花生物碱的实例包括，但不限于长春碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春碱(vinblastine)，长春碱硫酸盐，以注射溶液市售可获得。尽管其有可能作为各种实体瘤的二线治疗，但是其最初指定用于治疗睾丸癌和各种淋巴瘤，包括霍奇金病；以及淋巴细胞和组织细胞的淋巴瘤。骨髓抑制是长春碱的剂量限制性副作用。

长春新碱(vincristine)，长春碱22-氧代-硫酸盐，以注射溶液市售可获得。长春新碱指定用于治疗急性白血病，还发现用于治疗霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤。脱发和神经作用是长春新碱最常见的副作用，并产生较小程度的骨髓抑制和胃肠粘膜炎作用。

长春瑞滨，3',4'-二脱氢-4'-脱氧-c'-去甲长春碱(norvincaleukoblastine)[r-(r*,r*)-2,3-二羟基丁二酸二酯(1：2)(盐)]，以长春瑞滨酒石酸盐注射溶液市售可获得，是半合成的长春花生物碱。长春瑞滨可以作为单独的药剂或与其它化学治疗剂(比如顺铂)组合，用于治疗各种实体瘤，特别是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素难治性前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的剂量限制性副作用。

铂配位络合物是非时相特异性的抗癌剂，其与dna相互作用。铂络合物进入肿瘤细胞，进行水合作用，并与dna形成链内和链之间的交联，导致对肿瘤不利的生物学作用。铂配位络合物的实例包括但不限于顺铂和卡铂。

顺铂，顺式-二氨二氯合铂，以注射溶液市售可获得。顺铂最初指定用于治疗转移性睾丸癌和卵巢癌以及晚期的膀胱癌。顺铂的主要剂量限制性副作用是肾毒性和耳毒性，所述肾毒性可以通过水合和利尿来控制。

卡铂，二氨[1,1-环丁烷-二羧酸根(2-)-o,o']合铂，以注射溶液市售可获得。卡铂最初指定用于晚期卵巢癌的一线和二线治疗。骨髓抑制是卡铂的剂量限制性毒性。

烷化剂是非时相特异性抗癌药剂和强亲电试剂。通常，烷化剂借助于烷基化作用，通过dna分子的亲核部分比如磷酸基(phosphate)、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基，与dna形成共价键。这样的烷基化作用破坏核酸功能，导致细胞死亡。烷化剂的实例包括，但不限于氮芥，比如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥；磺酸烷基酯，比如白消安；亚硝基脲，比如卡莫司汀；以及三氮烯，比如达卡巴嗪。

环磷酰胺，2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2h-1,3,2-氧氮磷杂环己二烯(oxazaphosphorine)2-氧化物一水合物，以注射溶液或片剂市售可获得。环磷酰胺指定作为单独的药剂或与其它化学治疗剂组合，用于治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。脱发、恶心、呕吐和白细胞减少症是环磷酰胺最常见的剂量限制性副作用。

美法仑，4-[双(2-氯乙基)氨基]-l-苯基丙氨酸，以注射溶液或片剂市售可获得。美法仑指定用于多发性骨髓瘤和不可切除的卵巢上皮癌的姑息疗法。骨髓抑制是美法仑最常见的剂量限制性副作用。

苯丁酸氮芥，4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，以片剂市售可获得。苯丁酸氮芥指定用于慢性淋巴细胞性白血病和恶性淋巴瘤(比如淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金病)的姑息疗法。骨髓抑制是苯丁酸氮芥最常见的剂量限制性副作用。

白消安，1,4-丁二醇二甲磺酸酯，以片剂市售可获得。白消安指定用于慢性髓细胞性白血病的姑息疗法。骨髓抑制是白消安最常见的剂量限制性副作用。

卡莫司汀，1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，以单瓶的冻干产物市售可获得。卡莫司汀指定作为单独的药剂或与其它药剂组合，用于脑瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的姑息疗法。延迟的骨髓抑制是卡莫司汀最常见的剂量限制性副作用。

达卡巴嗪，5-(3,3-二甲基-1-三氮烯基)-咪唑-4-甲酰胺，以dtic-单瓶装的物质市售可获得。达卡巴嗪指定用于转移性恶性黑素瘤的治疗，并且可与其它药剂组合，用于霍奇金病的二线治疗。恶心、呕吐和厌食是达卡巴嗪最常见的剂量限制性副作用。

抗生素类抗肿瘤剂(antibioticanti-neoplastics)是非时相特异性的药剂，其结合或嵌入dna中。通常，这种作用导致稳定的dna复合物或链断裂，破坏核酸的正常功能，导致细胞死亡。抗生素类抗肿瘤剂的实例包括但不限于放线菌素(比如更生霉素)，蒽环类(anthrocyclins)(比如柔红霉素和多柔比星)；以及博来霉素。

更生霉素，也称为放线菌素d，以注射液形式市售可获得。更生霉素指定用于维尔姆斯肿瘤(wilm’stumor)和横纹肌肉瘤的治疗。恶心、呕吐和厌食是更生霉素最常见的剂量限制性副作用。

柔红霉素，(8s-顺式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧基α-l-来苏-己吡喃糖基)-氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮盐酸盐，以脂质体可注射形式或可注射形式市售可获得。柔红霉素指定在急性非淋巴细胞性白血病和晚期hiv相关的卡波西肉瘤的治疗中用于诱导症状缓解。骨髓抑制是柔红霉素最常见的剂量限制性副作用。

多柔比星，(8s,10s)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-l-来苏-己吡喃糖基)氧基]-8-乙醇酰基-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮盐酸盐，以或adriamycin注射溶液市售可获得。多柔比星最初指定用于急性成淋巴细胞性白血病和急性成髓细胞性白血病的治疗，但也是治疗某些实体瘤和淋巴瘤的有用组分。骨髓抑制是多柔比星最常见的剂量限制性副作用。

博来霉素，是从轮丝链霉菌(streptomycesverticilus)菌株中分离出来的细胞毒素糖肽类抗生素的混合物，以市售可获得。博来霉素指定作为单独的药剂或与其它药剂组合，用于鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌的姑息疗法。肺部和皮肤毒性是博来霉素最常见的剂量限制性副作用。

拓扑异构酶ii抑制剂包括但不限于表鬼臼脂毒素。

表鬼臼脂毒素是来源于曼德拉草(mandrake)植物的时相特异性的抗肿瘤药物。表鬼臼脂毒素通常通过与拓扑异构酶ii和dna形成三元复合物，来影响处于细胞周期的s和g2期的细胞，导致dna链断裂。链断裂积聚，接着细胞死亡。表鬼臼脂毒素的实例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-亚乙基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液或胶囊市售可获得，并且通常称为vp-16。依托泊苷指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。骨髓抑制是依托泊苷最常见的副作用。白细胞减少症的发病率倾向于比血小板减少症的发病率更严重。

替尼泊苷，4'-去甲基-表鬼臼脂毒素9[4,6-0-(r)-噻吩亚甲基-β-d-吡喃葡萄糖苷]，以注射溶液市售可获得，并且通常称为vm-26。替尼泊苷指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗儿童急性白血病。骨髓抑制是替尼泊苷最常见的剂量限制性副作用。替尼泊苷可引起白细胞减少症和血小板减少症。

抗代谢肿瘤药剂是时相特异性的抗肿瘤药剂，其作用于细胞周期的s期(dna合成)，通过抑制dna的合成，或者通过抑制嘌呤或嘧啶碱基的合成从而限制dna的合成。因此，s期不能继续下去，接着细胞死亡。抗代谢类抗肿瘤药剂的实例包括，但不限于氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、巯基嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶，5-氟-2,4-(1h,3h)嘧啶二酮，以氟尿嘧啶市售可获得。5-氟尿嘧啶的给药导致胸苷酸合成的抑制，并且还结合到rna和dna中。结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。骨髓抑制和粘膜炎是5-氟尿嘧啶的剂量限制性副作用。其它的氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿嘧啶核苷(氟尿苷)和5-氟脱氧尿嘧啶核苷单磷酸盐。

阿糖胞苷，4-氨基-1-β-d-阿拉伯呋喃糖基-2(1h)-嘧啶酮，以市售可获得，并且通常称之为ara-c。据信阿糖胞苷在s-期具有细胞时相特异性，其通过将阿糖胞苷末端结合到生长的dna链中而抑制dna链的延长。阿糖胞苷作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。其它的胞苷类似物包括5-氮杂胞苷和2',2'-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。阿糖胞苷引起白细胞减少症、血小板减少症和粘膜炎。

巯基嘌呤，1,7-二氢-6h-嘌呤-6-硫酮一水合物，以市售可获得。巯基嘌呤在s-期通过至今尚未清楚的机理抑制dna的合成，显示出细胞时相特异性。巯基嘌呤指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。预期骨髓抑制和胃肠粘膜炎是高剂量巯基嘌呤的副作用。可使用的巯基嘌呤类似物是硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤，2-氨基-1,7-二氢-6h-嘌呤-6-硫酮，以市售可获得。硫鸟嘌呤在s-期通过至今尚未清楚的机理抑制dna的合成，显示出细胞时相特异性。硫鸟嘌呤指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗急性白血病。骨髓抑制，包括白细胞减少症、血小板减少症和贫血是给药硫鸟嘌呤最常见的剂量限制性副作用。然而，还发生胃肠副作用，而且该副作用可能是剂量限制性的。其它的嘌呤类似物包括喷司他丁、赤式羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨，2'-脱氧-2',2'-二氟胞苷一盐酸盐(β-异构体)，以市售可获得。吉西他滨通过阻断细胞通过g1/s边界的发展在s-期显示出细胞时相特异性。吉西他滨指定与顺铂组合，用于治疗局部的晚期非小细胞肺癌，和单独用于治疗局部的晚期胰腺癌。骨髓抑制(包括白细胞减少症、血小板减少症和贫血)是给药吉西他滨最常见的剂量限制性副作用。

甲氨蝶呤，n-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲基氨基]苯甲酰基]-l-谷氨酸，以甲氨蝶呤钠市售可获得。甲氨蝶呤在s-期显示出细胞时相特异性作用，其通过抑制合成嘌呤核苷酸和胸苷酸所需的脱氢叶酸还原酶来抑制dna的合成、修复和/或复制。甲氨蝶呤指定作为单独的药剂或与其它化疗剂组合，用于治疗绒毛膜癌、脑膜白血病、非霍奇金淋巴瘤，以及乳腺癌、头癌、颈癌、卵巢癌和膀胱癌。预期骨髓抑制(白细胞减少症、血小板减少症和贫血)和粘膜炎是给药甲氨蝶呤的副作用。

喜树碱(camptothecins)，包括喜树碱和喜树碱衍生物，作为拓扑异构酶i抑制剂来使用或在开发中。喜树碱细胞毒素活性被认为与其拓扑异构酶i抑制活性相关。喜树碱的实例包括，但不限于伊立替康、托泊替康，以及如下所述7-(4-甲基哌嗪基-亚甲基)-10,11-亚乙二氧基-20-喜树碱的各种光学形式。

盐酸伊立替康(irinotecanhcl)，(4s)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶子基哌啶子基)羰基氧基]-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14(4h,12h)-二酮盐酸盐，以注射溶液市售可获得。

伊立替康是喜树碱的衍生物，其与其活性代谢物sn-38一起结合在拓扑异构酶i-dna复合物上。据信由于双链不可修复的(irreparable)断裂，导致出现细胞毒性，所述断裂是由拓扑异构酶i：dna：伊立替康或sn-38三元复合物与复制酶之间的相互作用引起的。伊立替康指定用于治疗结肠或直肠的转移癌。盐酸伊立替康的剂量限制性副作用是骨髓抑制，包括嗜中性白细胞减少症，以及包括腹泻的gi效应。

盐酸托泊替康(topotecanhcl)，(s)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1h-吡喃并[3',4',6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-3,14-(4h,12h)-二酮一盐酸盐，以注射溶液市售可获得。托泊替康是喜树碱的衍生物，其与拓扑异构酶i-dna复合物结合，并阻止单链断裂的再连接，所述单链断裂是拓扑异构酶i响应dna分子的扭转应变(torsionalstrain)所引起的。托泊替康指定用于转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。盐酸托泊替康的剂量限制性副作用是骨髓抑制，主要是嗜中性白细胞减少症。

试验例

下述实施例说明本发明。这些实施例并非旨在限制本发明的范围，而是为本领域技术人员提供关于制备和使用本发明的化合物、组合物和方法的指导。虽然描述了本发明的特定的实施方案，但是本领域技术人员应当理解，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以作出各种变化和修饰。除非另有说明，否则试剂是市售可获得的或根据文献中的方法制备的。在描述方法、方案和实施例时使用的符号和惯例与当前的科学文献例如thejournaloftheamericanchemicalsociety或thejournalofbiologicalchemistry中使用的那些一致。

在实施例∶

化学位移是以百万分率(ppm)单位表示。偶合常数(j)的单位是赫兹(hz)。分裂模式描述了表观多重性(apparentmultiplicities)，且被称为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)、dq(双四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。

快速柱色谱在硅胶上进行。

所使用的命名程序是ultra12.0。

缩写

18-冠-61,4,7,10,13,16-六氧杂环十八烷

cdcl3氯仿-d

cd3od甲醇-d4

cs2co3碳酸铯

d天

dcm二氯甲烷

dmfn,n-二甲基甲酰胺

ea乙酸乙酯

es-lcms电喷射液相色谱-质谱

et3n三乙胺

etoh乙醇

g克

h小时

h2氢气

hcl盐酸

h2o水

hplc高效液相色谱

h2so4硫酸

k2co3碳酸钾

koac乙酸钾

koh氢氧化钾

lcms液相色谱-质谱

lioh·h2o氢氧化锂水合物

mecn乙腈

meoh甲醇

mg毫克

mgso4硫酸镁

min分钟

ml毫升

mmol毫摩尔

n2氮气

nacn氰化钠

nahco3碳酸氢钠

naoh氢氧化钠

na2so4硫酸钠

nbsn-溴代琥珀酰亚胺

nh4oh氢氧化铵

nmr核磁共振

pd/c钯碳

pdcl2(dppf)1,1'-双(二苯膦基)二茂铁]二氯钯(ii)

pe石油醚

pmb对-甲氧基苄基

rt室温

socl2亚硫酰氯

tbme叔丁基甲基醚

tfa三氟乙酸

tlc薄层色谱

丙基膦酸酸酐

中间体的制备

中间体1：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸

步骤1：2-氯-4-乙氧基吡啶

在0℃下，向2-氯-4-硝基吡啶(170g,1070mmol)在thf(2l)中的混合物中慢慢地加入乙醇钠(109.45g，1610mmol)。在25℃下，搅拌该混合物12小时。lcms和tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.6)显示反应完成。过滤该混合物，并通过减压除去大部分的滤液溶剂。将混合物用水淬灭，并用ea萃取，用盐水洗涤有机层，然后浓缩。按照相同的方法制备另外六批，得到2-氯-4-乙氧基吡啶(1100g,7.01mol,92.4％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.15(d,j＝6.0hz,1h),6.99(d,j＝2.0hz,1h),6.91-6.89(m,1h),4.16-4.14(m,2h),1.41-1.38(m,3h)；es-lcmsm/z:158.1(m+h)。

步骤2：5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶

将2-氯-4-乙氧基吡啶(100g,634.5mmol)慢慢地加入到h2so4(500ml)中。然后，在室温下，将nbs(124.2g,698.0mmol)加入到上述反应混合物中。在80℃下，搅拌该混合物3小时。tlc分析(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)显示反应完成。将该反应混合物倾倒入冰-水(2000ml)中，用ea萃取，然后浓缩。按照相同的方法制备另外十批。通过快速柱色谱纯化合并的粗产物，得到5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶(670g,2.84mol,40.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.31(s,1h),7.14(s,1h),4.32-4.10(m,2h),1.58-1.35(m,3h)；es-lcmsm/z:236.0,238.0(m,m+2h)。

步骤3：5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶

在室温下，向5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶(75g,317.1mmol)在甲苯(500ml)中的混合物中加入(4-甲氧基苯基)甲醇(52.6g,380.6mmol)、koh(35.6g,634.3mmol)和18-冠-6(8.4g,31.2mmol)。在120℃下，搅拌该反应混合物2小时。用tbme萃取该混合物，用盐水洗涤并浓缩。按照相同的方法制备另外八批。通过快速柱色谱(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)纯化合并的粗产物，得到5-溴-4-乙氧基-2-((4--甲氧基苄基)氧基)吡啶(650g,1.99mol,70.0％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.05(s,1h),7.33(d,j＝8.6hz,2h),6.90-6.84(m,2h),6.38(s,1h),5.20(s,2h),4.16-4.05(m,2h),3.77(s,3h),1.43(q,j＝6.8hz,3h)；es-lcmsm/z:338.3(m+2h)。

步骤4：2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈

在20℃下，于n2下，向搅拌的4-溴-1-(溴乙基)-2-氟苯(500g,1.87mol)在etoh(2.2l)中的溶液中一次性加入nacn(93g,1.90mmol)。在60℃下，搅拌反应混合物12小时。然后，浓缩该溶液，并分配在dcm(2000ml)和饱和的nahco3溶液(1800ml)之间。按照相同的方法制备另一批。然后，合并两批。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩，得到2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈(794g,99％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38-7.27(m,3h),3.72(s,2h)。

步骤5：2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸

在20℃下，于n2下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙腈(397g,1.82mol)在meoh(500ml)中的溶液中一次性加入naoh(2.22l,2.5m,5.56mol)溶液。在80℃下搅拌该反应混合物5小时。然后，浓缩该溶液，并用浓hcl中和至ph＝5，同时搅拌。接着，用ea(1.5l×2)萃取溶液。按照相同的方法制备另外两批。然后，合并三批。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到纯化的2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸(1200g，92％)∶tlc(pe/ea＝5:1,rf＝0.2)；；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(br.s.,1h),7.12(t,j＝7.9hz,1h),3.65(s,2h)。

步骤6：2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯

在室温下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸(260g,1.13mol)在meoh(2l)中的溶液中加入h2so4(30ml)。将该溶液加热回流过夜。然后，浓缩溶剂，并将残余物分配在ea和饱和的nahco3溶液之间。将有机萃取物用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。按照相同的方法制备另一批。然后，合并两批，得到2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯(520g,94％)。tlc(pe/ea＝10:1,rf＝0.7).¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.25-7.20(m,2h),7.14(t,j＝8.0hz,1h),3.70(s,3h),3.62(s,2h)。

步骤7：2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯

在室温下，向2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸甲酯(260g,1.05mol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(320g,1.26mol)在1,4-二噁烷(2l)中的溶液中加入koac(206g,2.10mol)和pdcl2(dppf)(23g,0.03mol)。在n2下，将该溶液加热回流4小时。然后，将该溶液过滤，并在真空中浓缩滤液，得到粗产物。按照相同的方法制备另一批。然后，将两批合并，并通过快速柱色谱(pe/ea＝30:1至10:1)纯化。将通过tlc(pe/ea＝10:1,rf＝0.5)发现包含产物的所有级分合并，并浓缩，得到呈浅黄色油状物的2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(560g,90％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.54(d,j＝7.5hz,1h),7.49(d,j＝10.0hz,1h),7.31-7.26(m,1h),3.73(s,2h),1.34(s,12h),1.27(s,3h)；es-lcmsm/z295.2(m+h)。

步骤8：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯

在n2气氛下，向5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶(175g,519mmol)在1,4-二噁烷(1200ml)和h2o(300ml)中的溶液中加入2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(167g,569mmol)、pdcl2(dppf)(25g,5.19mmol)和cs2co3(337g,1038mmol)。将该混合物回流2小时。tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)显示反应完成。用ea/h2o(2l)萃取混合物，得到油层，经na2so4干燥，过滤，浓缩。按照相同的方法制备另两批。通过快速柱色谱(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)纯化合并的粗产物，得到5-溴-4-乙氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶(630g,1.48mol,90.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.94(s,1h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),7.32-7.22(m,3h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.43(s,1h),5.26(s,2h),4.11(d,j＝6.8hz,2h),3.78(s,3h),3.72(s,2h),3.70(s,3h),1.36(t,j＝7.0hz,3h)；es-lcmsm/z:426.1(m+h)。

步骤9：2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶3-基)-2-氟苯基)乙酸

向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯(210g,519mmol)在thf(500ml)中的溶液中加入在h2o(700ml)中的lioh·h2o(52g,1230mmol)。在60℃下，搅拌该混合物过夜。tlc分析(pe/ea＝5:1,rf＝0.3)显示反应完成。将混合物浓缩，并用hcl(1n)调节至ph＝7。按照相同的方法制备另两批。然后，过滤合并的粗产物，用水洗涤固体并干燥，得到2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(550g,1.34mol,93.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ7.94(s,1h),7.41-7.28(m,3h),7.24(d,j＝9.5hz,2h),6.91(d,j＝8.6hz,2h),6.44(s,1h),5.26(s,2h),4.11(q,j＝6.9hz,2h),3.78(s,3h),3.67(s,2h),1.36(t,j＝7.0hz,3h)；es-lcmsm/z:412.1(m+h)。

本发明的化合物的制备

实施例1：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

步骤1：3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸

向3-(三氟甲基)苯甲酸(5g,26.3mmol)在h2so4(50ml,938mmol)中的混合物中加入硝酸(3.53ml,79mmol)。在0℃下，搅拌该混合物15分钟，并经1小时升温至90℃。然后，将该混合物滴加到冰水中。过滤该混合物，得到白色固体的3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(5.2g,21.01mmol,80.0％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.99(s,1h),8.72(s,1h),8.61(s,1h)。

步骤2：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

在75℃下，搅拌3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(3.3g,14.04mmol)在socl2(50ml,685mmol)和dmf(0.5ml,6.46mmol)中的混合物2小时。然后，浓缩该混合物，并将酰基氯溶于dcm(50ml)中。将该混合物冷却至0℃，然后加入et3n(2.348ml,16.84mmol)，接着加入n¹,n¹-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.740ml,15.44mmol)。在0℃下，搅拌该反应30分钟，然后，浓缩该混合物。通过快速柱色谱(dcm/meoh＝15:1)纯化粗物质。将通过tlc(dcm/meoh＝15:1,rf＝0.3)发现包含产物的所有级分合并并浓缩，得到黄色油状物的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(5g,8.19mmol,58.4％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ9.00(s,1h),8.65(s,1h),8.61(s,1h),3.86(t,j＝6.0hz,2h),3.42(t,j＝6.0hz,2h),2.99(s,6h)；es-lcmsm/z306.1(m+h)。

步骤3：3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二盐酸盐

向n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(5g,8.19mmol)在meoh(100ml)中的混合物中加入pd/c(500mg,10％)。在10℃下，在h2气氛下，搅拌该混合物16小时。然后，将该混合物过滤并浓缩。通过制备hplc(柱：asbc18150*25mm；流动相a:h2o+0.1％hcl；流动相b：mecn；流速：25ml/min；gradientprofiledescription:5-35(b％))纯化粗物质，得到黄白色固体的3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二盐酸盐(878.01mg,2.52mmol,30.8％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ8.28(s,1h),8.19(s,1h),7.86(s,1h),3.84(t,j＝6.0hz,2h),3.47(t,j＝6.0hz,2h),3.02(s,6h)；es-lcmsm/z276.1(m+h)。

步骤4：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(3-(2-(5-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-4-甲基嘧啶-5-基)脲基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(100mg,0.243mmol)在吡啶(3ml)中的混合物中加入3-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(66.9mg,0.243mmol)和(0.8ml，0.243mmol，在ea中50％)。在10℃下，搅拌该混合物16小时。浓缩该混合物。通过制备tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.3)纯化粗物质，得到黄色固体的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(80mg,0.096mmol,39.4％)：¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.55(d,j＝4.4hz,1h),8.43(s,1h),8.06(s,1h),7.96(s,1h),7.89(s,1h),7.48-7.45(m,1h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),7.29(s,1h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),6.45(s,1h),5.26(s,2h),4.12(q,j＝7.2hz,2h),3.84(s,2h),3.78(s,3h),3.76(t,j＝2.4hz,2h),3.37(t,j＝5.6hz,2h),2.97(s,6h),1.36(t,j＝7.2hz,3h)；es-lcmsm/z669.1(m+h)。

步骤5：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

向n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(80mg,0.120mmol)在dcm(20ml)中的混合物中加入tfa(2ml,26.0mmol)。在25℃下，搅拌该混合物2小时。然后，浓缩反应物，并用nh4oh碱化。通过制备hplc(仪器：gilsongx281；柱∶gemini150*25mm*5um；流动相a∶h2o(0.05％氨溶液)；流动相b：mecn；梯度∶25-55(b％)；流速∶25ml/min；运行时间∶10min)纯化粗物质，得到白色固体的n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(27.71mg,0.050mmol,41.8％)：tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.2)¹hnmr(400mhz,cd3od):δ8.26(s,1h),8.20(s,1h),7.90(s,1h),7.45-7.39(m,2h),7.29-7.23(m,2h),6.02(s,1h),4.14(q,j＝7.2hz,2h),3.86(s,2h),3.57(t,j＝6.4hz,2h),2.63(t,j＝6.8hz,2h),2.36(s,6h),1.40(t,j＝7.2hz,3h)；es-lcmsm/z549.2(m+h)。

实施例2：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

步骤1：n,n-二甲基-2-(3-硝基5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺

向1-氟-3-硝基-5-(三氟甲基)苯(2g，,9.56mmol)在dmf(15ml)中的悬浮液中加入2-(二甲基氨基)乙醇(2.56g,28.7mmol)和k2co3(2.64g,19.13mmol)。在80℃下，搅拌该混合物8小时。将该混合物冷却至室温。然后，浓缩该溶液，并分配在ea(10ml)和饱和的nahco3溶液(10ml)之间。将该有机萃取物用盐水(10ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱(pe/ea＝1:1)纯化粗物质。将通过tlc(pe/ea＝1:1,rf＝0.5)发现包含产物的所有级分合并并浓缩，得到浅黄色固体的n,n-二甲基-2-(3-硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺(1.8g,5.18mmol,54.1％)：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.07(s,1h),7.94(s,1h),7.50(s,1h),4.18(t,j＝5.4hz,2h),2.79(t,j＝5.4hz,2h),2.36(s,6h)；es-lcmsm/z279.0(m+h)。

步骤2：3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺

向n,n-二甲基-2-(3硝基-5-(三氟甲基)苯氧基)乙胺(1.8g,6.47mmol)在meoh(20ml)中的悬浮液中加入pd/c(0.344g,10％)。在26℃下，在15psi的h2气氛下，将该混合物氢化3小时。然后，过滤溶液并浓缩。通过快速柱色谱(pe/ea＝1:1)纯化粗物质。将通过tlc(pe/ea＝1:1,rf＝0.4)发现包含产物的所有级分合并并浓缩，得到浅黄色固体的3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺(1g,3.54mmol,54.7％):¹hnmr(400mhz,cd3od)δ6.53(d,j＝16.8hz,2h),6.38(s,1h),4.05(t,j＝5.6hz,2h),2.75-2.70(m,2h),2.35-2.32(m,6h)；es-lcmsm/z249.1(m+h)。

步骤3：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

在27℃下，在n2气氛下，向2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(400mg,0.972mmol)和3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯胺(241mg,0.972mmol)在吡啶(8ml)中的溶液中加入(4ml,0.972mmol)。在27℃下，搅拌该混合物30分钟。lcms显示反应完成。然后，将该混合物置于冰(1g)中。将该混合物浓缩成残余物，通过制备tlc(dcm/meoh＝10:1,rf＝0.6)纯化，得到浅黄色固体的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(300mg,0.421mmol,43.3％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.96(s,1h),7.75-7.68(m,1h),7.52(s,1h),7.38(d,j＝8.4hz,2h),7.32-7.24(m,3h),7.05(s,1h),6.92(d,j＝8.6hz,2h),6.45(s,1h),5.27(s,2h),4.43-4.36(m,2h),4.12(q,j＝6.8hz,2h),3.83(s,2h),3.82-3.77(m,3h),3.60-3.51(m,2h),2.93(s,6h),1.37(t,j＝6.9hz,3h)；es-lcmsm/z642.2(m+h)。

步骤4：n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺

向n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(300mg,0.468mmol)在meoh(10ml)中的悬浮液中加入pd/c(49.8mg,10％)。在25℃下，在h2气氛下氢化该混合物3小时。然后，将反应物过滤并浓缩成残余物，通过制备hplc(仪器：gilsongx281/column:gemini150*25mm*5um/流动相a：h2o(0.05％氨水溶液)/流动相b：mecn/梯度:40-70(b％)/流速25ml/min/运行时间:10min)纯化，得到白色固体的n-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰胺(54.34mg,0.104mmol,22.2％)：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.52(d,j＝9.9hz,2h),7.43-7.31(m,2h),7.27-7.17(m,2h),6.95(s,1h),5.99(s,1h),4.21-4.04(m,4h),3.80(s,2h),2.79(t,j＝5.3hz,2h),2.35(s,6h),1.38(t,j＝7.1hz,3h)；es-lcmsm/z522.2(m+h)。

实施例3：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐，水合物1

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(350mg)在8.4ml的丙酮：水(9:1,v/v)中的悬浮液15分钟。加入hcl(5m水溶液，1.0当量)，并将样品加热至40℃。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环24小时，然后在20℃下搅拌0.5小时。通过真空过滤分离固体，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小时，得到呈结晶固体的标题化合物。

可替代的方法将n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐、脱水物(500mg)在水(12ml)中的浆液于40℃和5℃之间的温度循环2天。通过过滤收集样品，并干燥，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图1中，衍射角和d-间距的概述在下表1中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射计于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表i

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm^-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图2中，观察到的主要峰位于455.6、581.0、697.7、773.5、809.3、951.5、999.3、1029.7、1109.3、1172.1、1247.8、1282.4、1334.7、1361.6、1461.3、1531.6、1626.3、1677.7、2902.7、2951.6和3032.8cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图3中。在卷边铝盘(crimpedaluminumpan)中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的dsc热分析图显示第一次吸热具有约32℃的起始温度，约74℃的峰温度和44.07j/g的焓，随后的第二次吸热具有约158℃的起始温度，约173℃的峰温度和55.24j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图4中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的盐酸盐的水合物1的tga热分析图显示，在最终热分解之前观察到两个步骤的重量损失事件。第一次重量损失事件发生在30℃至100℃的温度范围，重量损失1.52％。第二次重量损失事件发生在100℃至200℃的温度范围，重量损失2.57％。

实施例4：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐，水合物2

搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐水合物1(39.1mg)在1ml的丙酮：水(9:1，v/v)中的悬浮液，并在40℃和5℃之间的温度循环3天。然后，在室温下蒸发滤液七天，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图5中，衍射角和d-间距的概述在下表2中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射计于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表ii

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图6中，观察到的主要峰位于455.3、588.2、699.4、734.2、775.3、806.8、884.7、948.6、1000.0、1033.3、1112.3、1180.6、1247.3、1269.2、1282.5、1331.8、1365.7、1424.7、1466.3、1530.0、1549.9、1569.7、1627.3、1683.8、2901.8、2946.4和3044.2cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图7中。在卷边铝盘中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的dsc热分析图显示，第一次吸热具有约66℃的起始温度，约82℃的峰温度和26.177j/g的焓，随后的第二次吸热具有约166℃的起始温度，约181℃的峰温度和65.71j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图8中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的盐酸盐的水合物2的tga热分析图显示，在最终热分解之前观察到两个步骤的重量损失事件。第一次重量损失事件发生在30℃至100℃的温度范围，重量损失2.43％。第二次重量损失事件发生在100℃至220℃的温度范围，重量损失3.29％。

实施例5：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐，无水物

搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺盐酸盐水合物1(500mg)在12.5ml的etoh中的浆液，并在40℃和5℃之间的温度循环1天。通过过滤收集样品并风干至少1小时，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的无水盐酸盐)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图9中，衍射角和d-间距的概述在下表iii中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertprodiffractometer于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表iii

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图10中，观察到的主要峰位于418.4、453.5、575.3、635.8、699.3、771.0、782.0、805.0、863.9、893.8、940.5、974.2、997.9、1058.1、1115.8、1190.2、1245.9、1272.8、1299.2、1328.5、1355.7、1406.8、1433.1、1462.1、1489.0、1511.0、1546.3、1562.1、1614.1、1625.9、1666.7、1695.0、2921.9、2950.2、2986.2、3036.1、3075.0和3095.0cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图11中。在卷边铝盘中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的无水盐酸盐的dsc热分析图显示尖吸热峰(sharpendotherm)具有256.44℃的起始温度，约258.48℃的峰温度和128.0j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化。在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图12中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的无水盐酸盐的tga热分析图显示在25℃至150℃的温度范围的可忽略的重量损失和267.33℃的热分解起始温度。实施例6：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(353.1mg)在8.4ml的丙酮中的悬浮液15分钟。加入l-天门冬氨酸(纯度99％，85.1mg，粉末，1.0当量)，并将样品加热至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺天门冬氨酸盐作为晶种结晶。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环6小时，然后在20℃下搅拌0.5小时。通过真空过滤分离固体，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小时，得到呈结晶固体的标题化合物。¹hnmr分析(500mhz,dmso-d6)指示1:1的酸：游离碱化学计量。

晶种制备

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的悬浮液30分钟。加入l-天门冬氨酸(6.1mg)，并将样品加热至40℃。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环48小时，然后在20℃下搅拌24小时，之后在4℃下搅拌24小时。通过真空过滤分离固体并干燥，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的天门冬氨酸盐)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图13中，衍射角和d-间距的概述在下表iv中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射计于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表iv

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图14中，观察到的主要峰位于452.2、573.8、690.5、770.0、806.8、999.6、1036.5、1106.3、1162.4、1236.9、1274.1、1332.1、1363.6、1470.7、1487.4、1529.5、1627.1、1704.6、2917.9和3072.7cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图15中。在卷边铝盘中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的dsc热分析图显示尖吸热峰，具有220.62℃的起始温度，约223.048℃的峰温度和75.76j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图16中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的天门冬氨酸盐的tga热分析图显示在25℃至150℃的温度范围的可忽略的重量损失和240.39℃的热分解起始温度。实施例7：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(350mg)在8.4ml的丙酮中的悬浮液15分钟。加入马尿酸(纯度98％，117.3mg，粉末，1.0当量)，并将样品加热至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺马尿酸盐作为晶种结晶。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环6小时，然后在20℃下搅拌0.5小时。通过真空过滤分离固体，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小时，得到呈结晶固体的标题化合物。¹hnmr分析(500mhz,dmso-d6)指示1:1的酸：游离碱化学计量。

晶种制备

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的悬浮液30分钟。加入马尿酸(8.4mg)，并将样品加热至40℃。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环48小时，然后在20℃下搅拌24小时，之后在4℃下搅拌24小时。通过真空过滤分离固体并干燥，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的马尿酸盐)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图17中，衍射角和d-间距的概述在下表v中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射计于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表v

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图18中，观察到的主要峰位于556.6、618.1、694.0、771.4、809.0、916.5、997.2、1041.9、1108.4、1235.8、1272.2、1335.1、1366.2、1466.6、1537.0、1575.4、1601.4、1630.2、1695.0、2943.8和3071.4cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图19中。在卷边铝盘中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的马尿酸盐的dsc热分析图显示尖吸热峰，具有232.10℃的起始温度，约233.32℃的峰温度和123.1j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化。

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图20中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的马尿酸盐的tga热分析图显示在25℃至150℃的温度范围的可忽略的重量损失和245.70℃的热分解起始温度。

实施例8：n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(352mg)在8.4ml的丙酮中的悬浮液15分钟。加入磷酸(3.0m水溶液，1.0当量)，并将样品加热至40℃，然后用n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺磷酸盐作为晶种结晶。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环6小时，然后在20℃下搅拌0.5小时。通过真空过滤分离固体，并在真空烘箱中于40℃下干燥至少16小时，得到呈结晶固体的标题化合物。感应耦合等离子体原子发射光谱指示1:1的酸：游离碱化学计量。

晶种制备

在23℃下，搅拌n-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酰氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(25mg)在0.6ml的丙酮中的悬浮液30分钟。加入磷酸(3.0m水溶液，1.0当量)，并将样品加热至40℃。搅拌样品，并在40℃和5℃之间的温度循环48小时，然后在20℃下搅拌24小时，之后在4℃下搅拌24小时。通过真空过滤分离固体并干燥，得到呈结晶固体的标题化合物。

该物质(式(i)的化合物的磷酸盐)的x射线粉末衍射(xrpd)图案显示在图21中，衍射角和d-间距的概述在下表vi中给出。xrpd分析是在pananalyticalx’pertpro衍射计于si零-背景晶片上进行的。采集条件包括∶cukα射线，发生器电压∶45kv，发生器电流：40ma，步距：0.02°2θ。

表vi

在nicoletnxr9650ft-ramanspectrometer上记录标题化合物的拉曼光谱，4cm-1分辨率，采用来自nd:yvo4激光的激发波长(λ＝1064nm)。该物质的拉曼光谱显示在图22中，观察到的主要峰位于460.6、484.5、529.3、577.0、637.8、696.3、731.9、773.1、786.2、805.7、866.9、888.7、1002.3、1035.6、1187.1、1242.7、1275.9、1296.0、1326.2、1357.6、1375.1、1441.7、1466.0、1510.1、1531.6、1580.3、1624.5、1698.2、2936.4、2964.1和3068.6cm^-1。

在40ml/minn2吹扫下，在装有自动采样器和冷冻冷却系统的tainstrumentsq100differentialscanningcalorimeter上记录标题化合物的差示扫描量热法(dsc)热分析图，并显示在图23中。在卷边铝盘中，使用15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的磷酸盐的dsc热分析图显示尖吸热峰，具有235.69℃的起始温度，约242.24℃的峰温度和135.3j/g的焓。本领域技术人员应当认识到吸热的起始温度、峰温度和焓可能根据实验条件而变化

在tainstrumentsq500thermogravimetricanalyzer上记录标题化合物的热重量分析(tga)热分析图，并显示在图24中。以40ml/minn2气流和15℃/min的加热速率进行实验。式(i)的化合物的磷酸盐的tga热分析图显示在25℃至150℃的温度范围的可忽略的重量损失和237.30℃的热分解起始温度。

生物分析

在ret激酶的酶分析、基于细胞的机理分析和基于细胞的增殖分析中检测本发明的化合物的ret激酶抑制活性。

ret激酶的酶分析

使用杆状病毒表达系统，将人类ret激酶细胞质结构域(登记号np_000314.1的氨基酸658-1114)表达为n-末端gst-融合蛋白。使用谷胱甘肽琼脂糖色谱纯化gst-ret。以总体积10ul与递增浓度的ret激酶抑制剂作为单峰在384孔模式，如下进行ret激酶的酶分析：通过如下制备ret抑制剂化合物：将100nl不同浓度的ret抑制剂加入到384-孔板中。将5μl/孔的2x酶混合物(50mmhepes(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)；1mmchaps(3-[(3-胆酰胺丙基(cholamidopropyl))二甲基铵基(ammonio)]-1-丙磺酸盐)；0.1mg/mlbsa(牛血清白蛋白)；1mmdtt(二硫苏糖醇)；0.2nmret激酶)加入到该384孔板中，并在23℃下培养30分钟。加入5μl/孔的2x底物混合物(50mmhepes；1mmchaps；0.1mg/mlbsa；20μm三磷腺苷；20mmmgcl2和1mm生物素化的肽底物)，并在23℃下培养1小时。在23℃下，培养10μl/孔2x停止/检测混合物(50mmhepes；0.1％bsa；800mm氟化钾；50mmedta(乙二胺四乙酸)；铕穴状化合物标记的抗-磷酸酪氨酸抗体的200x稀释物；62.5nm链亲和素-xl665)1小时，并在homogenoustime-resolvedfluorescence读数机上读数。使用graphpadprism将ic50拟合到s形剂量相应曲线。

ret激酶基于细胞的机理分析

在基于细胞的分析中，检测本发明的化合物抑制组成型ret激酶磷酸化能力的功效。将tt细胞(atcccrl-1803)，一种具有组成型活化ret激酶的髓样甲状腺癌细胞系，保持在37℃下的150cm²皿中5％二氧化碳中的f12kaighn’s培养基、10％胎牛血清、1xglutamax、1x非必需氨基酸、1xpen/strep抗生素中。将1.0e5tt细胞/孔铺板在96孔细胞培养板中，并使其粘附过夜。在37℃下，在5％二氧化碳中，用不同浓度的ret抑制剂化合物处理tt细胞，用冰冷的pbs(磷酸盐缓冲盐水)洗涤并通过加入200μl的25mmtrishclph7.5；2mmedta；150mmnacl；1％脱氧胆酸钠；1％tritonx-100；50mmβ甘油磷酸钠；1mm原钒酸钠；1x磷酸酶抑制剂混合物#_2(sigma#_p5726)；1x磷酸酶抑制剂混合物#_3(sigma#_p0044)和1x完全小型无edta蛋白酶抑制剂混合物(roche#_4693159001)裂解，在-80℃下培养10分钟，并在冰上融解。在4℃下，将100μl的tt细胞裂解产物加入到96孔板中过夜，其在4℃过夜已经覆盖1xpbs；0.05％吐温-20；1％牛血清白蛋白阻断的兔子抗-ret抗体(cellsignaling#_7032)。将该板用200μl的1xpbs冲洗4x；加入0.05％吐温-20，然后加入100μl的抗-磷酸酪氨酸检测抗体(cellsignaling#_7034)的1:1,000稀释液，并在37℃下培养1小时。将所述板用200μl的1xpbs冲洗4x；加入0.05％tween-20，然后加入100μl的抗-小鼠免疫球蛋白辣根过氧化物酶结合抗体(cellsignaling#_7034)的1:1,000稀释液，并在37℃下培养30分钟。将所述板用200μl的1xpbs冲洗4x；加入0.05％吐温-20、100ml的tmb(3,3',5,5”-四甲基联苯胺)底物(cellsignaling#_7004)，并在37℃下培养10分钟，加入100μl的终止液(cellsignaling#_7002)，并在分光光度计上于450nm读取吸光度。使用graphpadprism将ic50拟合到s形剂量响应曲线。

ret激酶基于细胞的增殖分析

检测本发明的化合物抑制细胞增殖和细胞生存力的能力的功效。将tt细胞(atcccrl-1803)，一种具有组成型活化ret激酶的髓样甲状腺癌细胞系，保持在37℃下的150cm²皿中5％二氧化碳中的f12kaighn's培养基、10％胎牛血清、1xglutamax、1x非必需氨基酸、1xpen/strep抗生素中。将在50μl培养基中的6.0e3tt细胞/孔加入到96孔细胞培养板中，并使其粘附过夜。将50μl的连续稀释的ret抑制剂化合物加入到含有培养的tt细胞的96孔板中，并在37℃下，在5％二氧化碳中培养八天。加入50μl的celltiter-glo(promega#_g-7573)，并在搅拌器上混合内含物1分钟，接着在23℃下避光10分钟，并通过envision(perkinelmer)读取发光。使用graphpadprism将ic50拟合到s形剂量响应曲线。

生物学数据

在上述ret分析中检测了本发明的示例性化合物，发现所述示例性化合物为具有ic50＜10μm的ret抑制剂。所检测的特定实施例的数据列在如下表1中：+＝10μm>ic50>100nm；++＝100nm≥ic50>10nm；+++＝ic50≤10nm.

表1

体内结肠超敏模型

在结肠超敏的体内模型中评价ret激酶抑制剂化合物的功效(hoffman,j.m.,etal.,gastroenterology,2012,142:844-854)。