本发明涉及一种苯并异硒唑酮修饰的亚硝脲类化合物制备方法和应用，属于化学领域
背景技术：
亚硝基脲类抗肿瘤药物是一种应用十分广泛的烷化剂，应用于脑瘤、白血病、恶性淋巴瘤、神经胶质瘤等疾病的临床治疗。
亚硝基脲类抗肿瘤药物大部分属于双官能团烷化剂。其作用机制是：亚硝基脲类药物在水溶液中迅速分解，产生偶氮氢氧化物中间体。此中间体可以进一步分解为碳正离子。由于dna等大分子属于富电子分子，可以与碳正离子结合，比如在鸟嘌呤的o6位或n7位形成烷化损伤，甚至进一步反应形成互补碱基对之间的共价交联物。这些交联作用会对dna的复制产生损伤，最终引起细胞凋亡。
以甲基亚硝基脲为例，亚硝基脲类药物与dna作用机制如下：
卡莫司汀是一种烷化剂，是亚硝基脲类抗肿瘤药物中的代表药物。由于具有分子量小、脂溶性好、能透过血脑屏障、血浆结合率高等优点，被广泛应用于临床中。它在小鼠实验和临床研究中都被证明有抗中枢神经系统肿瘤的作用，是治疗恶性胶质瘤的首选药物。此外，它还被用于多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤等疾病的治疗。
卡莫司汀是双功能烷化剂。它在水中会迅速分解，生成氯乙基重氮氢氧化物(cl-ch2-ch2-n＝n-oh)和氯乙基异氰酸盐(o＝c＝n-ch2-ch2-cl)。前者可以与dna发生交联作用，异氰酸盐可以是蛋白质氨甲酰化i。此外，卡莫司汀还对trxr有抑制作用，trxr也可以成为其作用的靶点，它对trxr有不可逆抑制作用。
卡莫司汀具有很强的细胞毒作用。在标准计量给药时，它的限制性毒性是对造血系统产生迟发型毒性。而长期给药时，会造成可能致命的肺纤维化。在大剂量给药时，卡莫司汀的限制性毒性是肝毒性和肺毒性，而且有5％～20％的患者会出现静脉栓塞性疾病。
苯并异硒唑酮代表化合物乙烷硒啉是靶向硫氧还蛋白还原酶的、用于抗肿瘤作用的有机硒化合物，现在正在进行临床研究，临床i期显示，乙烷硒啉毒性低，与卡莫司丁毒性表现相比，显示较好的耐受性。前期研究表明，苯并异硒唑酮结构作为该药的主要药效团，能够主动识别靶酶活性中心并体现出对肿瘤和相关组织的靶向性。药物的体内代谢研究显示，乙烷硒啉在肿瘤组织的浓度远高于血浆中浓度，表现出了良好的肿瘤靶向性。
本专利创新点通过在亚硝脲结构的n原子上引入苯并异硒唑酮结构，得到一类新型的、具有苯并异硒唑酮结构的亚硝脲类化合物，根据苯并异硒唑酮药物(乙烷硒啉)特点，该类化合物能够靶向硫氧还蛋白还原酶，并且具有肿瘤靶向性，且硫氧还蛋白还原酶活性是肿瘤生长的重要因素，因此该类化合物将具有多靶点特点，同时该类结构相对于亚硝脲结构提高了药物的靶向性，因此能达到增效减毒的作用。
本研究采用了具有苯并异硒唑酮结构的亚硝脲的全新的结构形式，其意义如下
1、此系列化合物保留了乙烷硒啉和卡莫司汀的活性药效团。研究表明，苯并异硒唑酮是乙烷硒啉中的活性药效团，可以主动识别trxr中的活性位点并与之结合，从而发挥对trxr的抑制作用。因此，我们保留了乙烷硒啉中的苯并异硒唑酮结构。卡莫司汀的分解片段之一——氯乙基重氮氢氧化物是发挥dna交联作用的基团。
2、作为一种前药形式，此系列化合物在水中发生分解作用，产生两个分子片段。前者中的苯并异硒唑酮结构和异氰酸盐结构会协同产生trxr抑制活性。另一片段会与dna产生交联作用。这两个药效团会产生抗肿瘤的协同作用，从而提高抗肿瘤活性。
3、由于苯并异硒唑酮结构具有较好的肿瘤靶向性，因此可以产生靶向药效，而与亚硝脲类结构结合后，使得新系列的分子具有高靶向性，同时进一步减弱了化合物毒性。
4、由于亚硝脲来化合物具有较好的水溶性，而与苯并异硒唑酮结构拼合后，改变了乙烷硒啉中对称性分子结构，提高了化合物溶解性，增强了成药性。
此类化合物活性测试显示在苯并异硒唑酮部分c-5位和c-6位取代为f的化合物，同时苯并异硒唑酮部分和亚硝脲部分间的连接臂越短越好(n＝2)可以获得更明显的抗肿瘤活性。其中，3-[2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲以及3-[2-(6-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲在lovo，rko，miapaca-2，panc-1细胞系中均有较好的抗肿瘤活性，具有抗肿瘤作用意义。且引入苯并异硒唑酮后，化合物靶向性得到提升，有利于减毒增效目标的实现。因此，本申请对该类化合物进行了专门申请。这是因为作为新型的具有苯并异硒唑酮结构的亚硝脲类结构药物溶解度较乙烷硒啉有了很大程度提升，靶向性较卡莫司丁有了较大提升，起到了增效减毒作用，同时增加了成药性。而苯并异硒唑酮结构和亚硝脲类结构在药理作用上能够起到协同增效的作用，因此这类化合物表现出体外良好的抗肿瘤活性，其ic50值也低于卡莫司丁或与之相当。
技术实现要素：
本发明的目的在于基于以上理论提供一种苯并异硒唑酮修饰亚硝脲类化合物，并通过实验测定其抗肿瘤活性。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
以下结构的化合物，
n为连接臂之间碳的数目
通式i
其中，r1、r2、r3、r4分别为h、c1-4的链烷基基团、c1-4的链烷氧基基团、c1-4的酰氧基基团、no2、oh或卤素取代。
n为连接臂之间碳的数为2-4。
2、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述c1-4的链烷基基团是甲基、乙基或丙基；c1-4的链烷氧基基团是甲氧基、乙氧基或丙氧基。
3、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述卤素是f、cl、br。
4、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，r1，r2，r3，r4是h、me、och3、f、cl、br
5、根据权利要求1中所述化合物，其特征在于，n为连接臂之间的碳数为2-4。
6、权利要求1-5中任一项所述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
在本发明的优选实施方案中，所述药物组合物适用于肠内(例如口服或直肠给药)、局部或肠胃外给药，例如，口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入等。
在本发明的优选实施方案中，所述口服药物组合物选自片剂(普通片、含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、阴道片或阴道泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片、口腔速释片等)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、肠溶胶囊等)、丸剂(滴丸、糖丸、小丸)、口服液体制剂(糖浆剂、混悬剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、糖浆剂、合剂、露剂或茶剂)、颗粒剂(混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等)、散剂的任一种。
在本发明的优选实施方案中，所述注射剂包括注射液、注射用无菌粉末或无菌块状物(包括采用溶剂结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等工艺制备)、输液、注射用浓溶液的任一种。
在本发明的优选实施方案中，所述外用制剂选自栓剂、气雾剂、粉雾剂、喷雾剂、膜剂、凝胶剂、贴剂、胶剂、贴膏剂、膏药、软膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂、凝膏剂的任一种。
在本发明的优选实施方案中，可采用本领域熟知的制剂技术手段来制备本发明组合物。
在本发明的优选实施方案中，所述药物组合物选自包合制剂或分散制剂。
在本发明的优选实施方案中，所述的药学上可接受的载体为本领域熟知用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料，其中，口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于填充剂或稀释剂、润滑剂或助流剂或抗粘着剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂等。粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮，优选的纤维素衍生物为微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐、山梨醇或甘氨酸，优选无机钙盐为硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙；润滑剂，例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇；崩解剂，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素，优选的淀粉衍生物为羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等，优选药学上可接受的载体为环糊精(α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精)、celldone102cg、polyplasdonexl-10、滑石粉、硬脂酸镁或乙醇等。
在本发明的优选实施方案中，所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于：抗氧剂，例如硫代硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、二丁基苯酸或焦亚硫酸钠等；抑菌剂，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇；ph调节剂，例如盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂磷酸二氧钠和磷酸氢二钠；乳化剂，例如聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克f-68，卵磷酯、豆磷脂；增溶剂，例如吐温-80、甘油等。
在本发明的优选实施方案中，还可将活性成分与药学上可接受的缓控释载体按其制备要求加以混合，再按照本领域熟知的缓控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将活性成分微囊化后再制成微丸，如缓释微丸或控释微丸；所述的缓控释载体包括但不仅限于油腊性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂为单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的亲水胶体为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物，或pvp、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普等；所述的包衣阻滞剂为乙基纤维素(ec)、羟丙甲基纤维素(hmpc)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(cap)、丙烯酸类树脂等。
在本发明的优选实施方案中，根据所需给药方式，药学上可接受的组合物包含约1-99重量％的化合物1-18或其药物学上可接受的盐的任一种或其组合，以及1-99重量％适宜的药用赋形剂。
在本发明的优选实施方案中，所述药物组合物中包含约5-75重量％的化合物1-18或其药物学上可接受的盐的任一种或其组合，余量为药用赋形剂。
本发明的另一个方面是提供化合物1-18或其药物学上可接受的盐或其药物组合物用于制备抗肿瘤的药物中的应用。
在本发明的优选实施方案中，所述抗肿瘤作用是指用于预防或治疗异常细胞生长，所述异常细胞生长可以表现为肿瘤，所述肿瘤选自脑瘤、肺癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、软组织肉瘤、尿道癌、前列腺癌、淋巴细胞瘤、膀胱癌、肾癌、输尿管癌、脊椎肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肺癌、肝癌、血癌的任一种。
在本发明的优选实施方案中，本发明的苯并异硒唑酮修饰亚硝脲类化合物在治疗肿瘤时的给药剂量约为0.05-250mg/kg体重，优选为0.5-200mg/kg体重，更优选为2-125mg/kg体重，最更优选为5-85mg/kg体重。
所述化合物是
3-【2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基脲-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(6-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(6-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
3-【2-(5-溴-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基】-1-氯乙基-1-亚硝基脲
本发明的又一目的在于提供一种制备以上所述化合物的方法，具体包括如下步骤：
(1)制备化合物1
化合物1
在亚硝酸钠存在下使
(2)将化合物1溶于乙醚中，滴加n-boc-1，2-乙二胺，室温下搅拌反应，有固体析出。抽滤得中间体。
(3)将步骤(2)中得到的中间体加入二氯甲烷，滴加三氟乙酸，室温下搅拌反应。用饱和nahco3调节ph到7-8，取水层。浓缩，二氯甲烷萃取(少量多次)。干燥，浓缩，滴加氯乙基异氰酸酯，有沉淀析出。抽滤得中间体。
(4)将步骤(3)中得到的中间体溶于2ml无水甲酸中，0℃下加入nano2(摩尔比1∶4)，0℃下反应40min，加适量水后有固体析出，抽滤，得白色粉末状固体，即通式i化合物
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
以下是本发明化合物的合成路线：
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以下以28种化合物为例来说明通式i化合物的制备以及抗肿瘤活性。
这28种化合物如表1所示。
表1
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实施例12，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
(1)氢氧化钠16g，保险粉18g，硒粉16g，依次加入水中，升温至50℃，反应完毕得到双硒化钠溶液。
(2)冰浴条件下，邻氨基苯甲酸28g加入1∶1盐酸80ml搅拌混合，在其中慢慢滴入亚硝酸钠18.0g的水溶液，得到氯化2-苯甲酸重氮盐。
(3)冰水浴搅拌下将步骤1得到的氯化2-苯甲酸重氮盐的溶液滴加到步骤2得到的双硒化钠溶液中，混合物继续搅拌。ph试纸证明溶液呈碱性。硅藻土过滤，调ph到3，过滤，滤饼用水洗涤，干燥，得棕黄色固体。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.34(t，2h)，7.46(t，2h)，7.67(d，2h)，8.02(d，2h)，13.69(s，br，2h)
实施例22-硒氯苯甲酰氯的制备
2，2’-二硒化双苯甲酸40g、氯化亚砜200ml和dmf数滴搅拌回流，反应完毕旋蒸除去多余的二氯亚砜，残渣用石油醚重结晶，得到黄色针状结晶。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.39(t，j＝7.7hz，1h，ar-h)，7.67(t，j＝7.7hz，1h，ar-h)，7.85(d，j＝7.7hz，1h，ar-h)，8.09(d，j＝7.7hz，1h，ar-h).
实施例35，5’-二氟-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.23(m，2h)，7.40(dd，2h)，8.11(m，2h)，13.93(s，br，2h)
实施例42-硒氯-5-氟苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.42(td，j＝8.3，2.7hz，1h，ar-h)，7.65(dd，j＝8.3，5.4hz，1h，ar-h)，7.78(dd，j＝9.0，2.7hz，1h，ar-h).
实施例55，5’-二氯-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.12(br，2h，cooh)，8.00(d，j＝2.2，2h，arh)，7.64(d，j＝8.6，2h，arh)，7.60(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，2h，arh).
实施例62-硒氯-5-氯苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.12(d，j＝8.6，1h，arh)，7.69(d，j＝2.2，1h，arh)，7.65(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，1h，arh).
实施例75，5’-二甲基-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ2.30(s，3h)，7.43(m，2h)，7.66(m，2h)，7.79(dd，2h)，13.50(s，br，2h)
实施例82-硒氯-5-甲基苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ2.37(s，3h，ch3)，7.48(d，j＝8.2hz，1h，ar-h)，7.65(s，1h，ar-h)，7.96(d，j＝8.2hz，1h，ar-h).
实施例95，5’-二甲氧基-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ2.30(s，3h)，7.43(m，2h)，7.66(m，2h)，7.79(dd，2h)，13.50(s，br，2h)
实施例102-硒氯-5-甲氧基苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δ3.80(s，3h，och3)，7.33(dd，j＝8.8，2.7hz，1h，ar-h)，7.39(d，j＝2.7hz，1h，ar-h)，7.90(d，j＝8.8hz，1h，ar-h).
实施例115，5’-溴-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.06(br，2h，cooh)，8.10(d，j＝2.3，2h，arh)，7.69(dd，j1＝8.6，j2＝2.3，2h，arh)，7.55(d，j＝8.6，2h，arh).
实施例122-硒氯-5-溴苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.14(d，j＝2.2，1h，arh)，7.65(dd，j1＝8.6，j2＝2.2，1h，arh)，7.49(d，j＝8.6，1h，arh)
实施例134，4’-二氟-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δδ7.23(m，2h)，7.40(dd，2h)，8.11(m，2h)，13.93(s，br，2h)
实施例142-硒氯-4-氟苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)：δδ7.19(td，j＝8.4，2.3hz，1h，ar-h)，7.80(dd，j＝8.4，5.7hz，1h，ar-h)，7.86(dd，j＝9.9，2.3hz，1h，ar-h).
实施例154，4’-二氯-2，2’-二硒化双苯甲酸的制备
2se+4naoh+na2s2o4→na2se2+2na2so3+2h2o
以与实施例1相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso-d6)d14.08(br，2h，cooh)，8.03(d，j＝8.3，2h，arh)，7.60(d，j＝1.7，2h，arh)，7.44(dd，j1＝8.3，j2＝1.7，2h，arh).
实施例162-硒氯-4-氯苯甲酰氯的制备
以与实施例2相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.13(d，j＝1.8，1h，arh)，7.74(d，j＝8.1，1h，arh)，7.40(dd，j1＝8.1，j2＝1.8，1h，arh)
实施例173-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
(1)将2-硒氯苯甲酰氯溶于乙醚中，滴加n-boc-1，2-乙二胺，室温下搅拌反应，有固体析出。抽滤得中间体。
(2)将步骤(1)中得到的中间体加入二氯甲烷，滴加三氟乙酸，室温下搅拌反应。用饱和nahco3调节ph到7-8，取水层。浓缩，二氯甲烷萃取(少量多次)。干燥，浓缩，滴加氯乙基异氰酸酯，有沉淀析出。抽滤得中间体。
(3)将步骤(2)中得到的中间体溶于2ml无水甲酸中，0℃下加入nano2(摩尔比1∶4)，0℃下反应40min，加适量水后有固体析出，抽滤，得白色粉末状固体，即通式i化合物
1hnmr(400mhz，dmso)d8.87(t，j＝5.6hz，1h)，8.01(d，j＝8.0hz，1h)，7.77(d，j＝7.0hz，1h)，7.66-7.52(m，1h)，7.41(t，j＝7.1hz，1h)，4.04(t，j＝5.7hz，2h)，3.76(t，j＝5.6hz，2h)，3.66-3.42(m，4h).
ms(ei)m/z：376.0(m+).
实施例183-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(t，j＝5.7hz，1h)，8.05(d，j＝8.0hz，1h)，7.80(d，j＝6.9hz，1h)，7.62(t，j＝7.6hz，1h)，7.42(t，j＝7.4hz，1h)，3.85-3.78(m，2h)，3.76(t，j＝6.3hz，2h)，3.70-3.57(m，3h)，2.06-1.94(m，1h)，1.76-1.63(m，2h).
ms(ei)m/z：390.0(m+).
实施例193-[2-(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(t，j＝5.5hz，1h)，8.04(d，j＝8.0hz，1h)，7.79(d，j＝6.8hz，1h)，7.61(t，j＝7.6hz，1h)，7.42(t，j＝7.0hz，1h)，3.77(dt，j＝12.8，6.5hz，3h)，3.68(t，j＝6.9hz，2h)，3.61(dd，j＝12.2，6.1hz，2h)，2.04-1.93(m，1h)，1.54-1.43(m，2h)，1.36(dd，j＝19.7，12.8hz，2h).
ms(ei)m/z：404.0(m+).
实施例203-[2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.88(t，j＝5.6hz，1h)，8.12-7.95(m，1h)，7.57-7.40(m，2h)，4.04(t，j＝5.6hz，2h)，3.76(t，j＝5.6hz，2h)，3.63(t，j＝6.2hz，2h)，3.54-3.43(m，2h).ms(ei)m/z：393.9(m+).
实施例213-[2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.99-8.66(m，1h)，8.10(dd，j＝8.6，4.6hz，1h)，7.61-7.28(m，2h)，3.81(ddd，j＝22.4，13.7，7.2hz，4h)，3.69-3.51(m，4h)，1.76-1.60(m，2h).ms(ei)m/z：408.0(m+).
实施例223-[2-(5-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(t，j＝18.7hz，1h)，8.17-7.98(m，1h)，7.52(t，j＝8.9hz，2h)，3.91-3.51(m，8h)，1.53-1.29(m，4h).ms(ei)m/z：422.0(m+).
实施例233-[2-(6-氟-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.86(t，j＝5.6hz，1h)，7.79(dt，j＝8.5，4.4hz，2h)，7.34-7.17(m，1h)，4.03(t，j＝5.6hz，2h)，3.75(t，j＝5.7hz，2h)，3.62(t，j＝6.3hz，2h)，3.53(dd，j＝12.1，6.1hz，2h).ms(ei)m/z：394.0(m+).
实施例243-[2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，cdcl3)d8.01(t，j＝4.6hz，1h)，7.63-7.42(m，2h)，4.31-4.10(m，2h)，3.88(dd，j＝15.2，9.7hz，2h)，3.83-3.70(m，2h)，3.64(t，j＝5.6hz，2h).ms(ei)m/z：409.9(m+).
实施例253-[2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(s，1h)，8.18-8.00(m，1h)，7.80-7.59(m，2h)，3.90-3.70(m，4h)，3.62(dt，j＝12.8，6.1hz，4h)，2.05-1.87(m，2h).
ms(ei)m/z：424.0(m+).
实施例263-[2-(5-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝21.6，16.0hz，1h)，8.04(dd，j＝18.4，8.6hz，1h)，7.79-7.53(m，2h)，4.08(t，j＝6.4hz，1h)，3.87-3.51(m，6h)，2.00(dd，j＝14.5，6.8hz，1h)，1.60-1.28(m，4h).ms(ei)m/z：438.0(m+)
实施例273-[2-(6-氯-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.12(d，j＝31.9hz，1h)，7.54-7.41(m，1h)，7.21(s，1h)，6.67(s，1h)，3.68(dd，j＝34.6，28.6hz，4h)，3.05(t，j＝5.9hz，2h)，2.63(d，j＝31.7hz，2h).ms(ei)m/z：410.0(m+).
实施例283-[2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.87(t，j＝5.4hz，1h)，7.89(t，j＝10.8hz，1h)，7.61(d，j＝19.9hz，1h)，7.43(d，j＝8.0hz，1h)，4.03(t，j＝5.6hz，2h)，3.74(t，j＝5.6hz，2h)，3.68-3.57(m，2h)，3.53(dd，j＝12.0，6.0hz，2h)，2.36(d，j＝22.8hz，3h).ms(ei)m/z：390.0(m+).
实施例293-[2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(dd，j＝19.6，14.3hz，1h)，7.92(d，j＝8.2hz，1h)，7.67-7.54(m，1h)，7.44(d，j＝8.3hz，1h)，3.92-3.69(m，4h)，3.69-3.50(m，4h)，2.36(d，j＝26.8hz，3h)，1.68(dd，j＝14.0，7.0hz，2h).
ms(ei)m/z：404.0(m+).
实施例303-[2-(5-甲基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝21.3，15.6hz，1h)，7.90(dd，j＝16.5，8.3hz，1h)，7.72-7.56(m，1h)，7.41(dt，j＝41.3，20.7hz，1h)，3.75(dt，j＝28.9，14.9hz，4h)，3.62(tt，j＝19.3，6.4hz，4h)，2.36(d，j＝25.5hz，3h)，1.59-1.44(m，2h)，1.36(dt，j＝13.4，6.6hz，2h).ms(ei)m/z：418.0(m+).
实施例313-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.89(dd，j＝23.3，17.5hz，1h)，8.08(dd，j＝26.5，14.3hz，1h)，7.78-7.58(m，2h)，4.18-3.98(m，2h)，3.74(dt，j＝13.0，5.8hz，2h)，3.67-3.57(m，2h)，3.57-3.43(m，2h)，3.34(s，3h).ms(ei)m/z：406.0(m+).
实施例323-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.92(t，j＝5.6hz，1h)，7.91(d，j＝8.7hz，1h)，7.27(ddd，j＝11.5，7.9，3.6hz，2h)，3.85-3.71(m，6h)，3.69-3.55(m，4h)，2.05-1.95(m，1h)，1.75-1.62(m，2h).ms(ei)m/z：420.0(m+).
实施例333-[2-(5-甲氧基-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)丁基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.91(s，1h)，7.90(d，j＝8.6hz，1h)，7.37-7.19(m，2h)，3.93-3.71(m，5h)，3.70-3.55(m，3h)，2.33(s，1h)，2.05-1.94(m，2h)，1.47(m，2h)，1.39(m，2h).ms(ei)m/z：434.0(m+).
实施例343-[2-(5-溴-1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)乙基]-1-氯乙基-1-亚硝基脲
以与实施例17相同的方式得到该化合物。
1hnmr(400mhz，dmso)d8.86(s，1h)，7.97(d，j＝8.5hz，1h)，7.91-7.83(m，1h)，7.77(dd，j＝8.6，2.1hz，1h)，4.05(dd，j＝10.5，5.5hz，2h)，3.82-3.70(m，2h)，3.62(t，j＝6.1hz，2h)，3.53(d，j＝5.8hz，2h).ms(ei)m/z：453.9(m+).
实验例3518种化合物的体外抗肿瘤活性的测定
采用mtt法，首先将处于对数生长期的lovo，rko，miapaca-2，panc-1细胞接种于96孔板，接种密度为4×104个/ml。待细胞贴壁后，每孔加入20微升药液，使药物最终浓度为0，1，5，10，50，微升/毫升，作用48小时后，加入5mg/ml的mtt溶液(20ul/孔)，放入二氧化碳孵箱培养3～4小时后，小心弃上清，待残留液体风干后，加入dmso，200微升/孔，于摇床上震摇0.5～1小时，待结晶完全溶解后，于酶标仪492nm处测吸光度od值。
细胞生长抑制率＝(阴性对照od值-加药组od值)/(阴性对照od值-空白组od值)×100％
表2
表2的实验结果显示，在rko细胞系中，有16个化合物(编号除9，18外)的ic50值低30um；在lovo细胞系中，有14个化合物(编号除10，11，17，18外)的ic50值低于30um；在mia-paca2细胞系中，有14个化合物(编号除9，10，11，18外)的ic50值低于30um；在panc-1细胞系中，有14个化合物(编号除9，10，17，18外)的ic50值低30um；可见，这一类苯并异硒唑酮修饰的亚硝脲类化合物表现出了良好的抗肿瘤活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。