检测人KRAS基因突变的微滴PCR试剂盒的制作方法

技术特征：

1.一种检测人KRAS基因突变的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括核酸扩增试剂和对照品，其中，所述核酸扩增试剂包括以下组分：

其中，所述用于检测12、13号密码子突变的引物和探针为：含有由SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4、由SEQ ID NO：7所示的上游引物；由SEQ ID NO：5、由SEQ ID NO：8所示的下游引物；由SEQ ID NO：6、由SEQ ID NO：9所示的探针。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，SEQ ID NO：6所示核苷酸序列的5’端标记有FAM、3’端标记有BHQ1；SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列所示核苷酸序列的5’端标记有VIC、3’端标记有BHQ1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增试剂中各成分的含量为：浓度为100μmol/L的引物各0.18μl，浓度为100μmol/L的探针各0.035μl。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增试剂中还包括以下组分：

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述对照品包括：

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述质粒和细胞株DNA混合液中含有：由SEQ ID NO：10～SEQ ID NO：17所示的突变质粒DNA，以及HT-1080细胞株DNA。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒所适用的样本选自石蜡包埋切片或外周血游离DNA，优选的，所述样本中DNA的浓度小于或等于50ng/μl；更优选的，所述样本中DNA的浓度大于或等于25ng/μl。

8.一种采用微滴PCR检测人KRAS基因突变的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的序列为：含有由SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4、由SEQ ID NO：7所示的上游引物、由SEQ ID NO：5、由SEQ ID NO：8所示的下游引物、由SEQ ID NO：6、由SEQ ID NO：9所示的探针；SEQ ID NO：6所示核苷酸序列的5’端标记有FAM、3’端标记有BHQ1；SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列所示核苷酸序列的5’端标记有VIC、3’端标记有BHQ1。