1. 嵌合型猪圆环病毒活疫苗C1-402株,保藏号为CGMCC No.13593。
2.如权利要求1所述嵌合型猪圆环病毒活疫苗C1-402株的构建方法,其特征在于包括以下步骤:
1)构建缺失PCV1 ORF2基因组的pSK(+)-PCV1ΔORF2:
以PCV1全基因组为模板,用引物Kpn I-F和引物Kpn I-R扩增出PCV1全基因组;将PCV1全基因组与pGEM-T Easy质粒连接,获得质粒T-PCV1,pBluescript SK(+)载体的酶切及去磷酸化,再通过T-PCV1基因组的酶切、回收和去磷酸化,将PCV1与pSK(+)载体连接,获得重组质粒pSK(+)-PCV1;以质粒pSK(+)-PCV1为模板,用引物Hpa I-R和引物Nar I-F扩增出pSK(+)-PCV1ΔORF2基因;
2)构建重组质粒pSK(+)-sPCV1-2d:
以PCV2d 0402株基因组为模板,用引物Psi I-F和引物Acl I-R扩增出PCV2d ORF2的DNA片段;再将pSK(+)-PCV1ΔORF2与PCV2d ORF2连接得到重组质粒pSK(+)-sPCV1-2d;
3)构建重组质粒pSK(+)-dPCV1-2d:
对重组质粒pSK(+)-sPCV1-2d用KpnⅠ和BstBⅠ进行双酶切,得到1566 bp的条带片段;
对重组质粒pSK(+)-sPCV1-2d用KpnⅠ和BstEⅡ进行双酶切,得到1546 bp的条带片段;
对重组质粒pSK(+)-sPCV1-2d用BstBⅠ和BstEⅡ进行双酶切,得到3428 bp的条带片段;
将上述1566 bp的条带片段、1546 bp的条带片段和3428 bp的条带片段按照1∶1∶3的摩尔比混合,并用T4 DNA连接酶进行连接,得到重组质粒pSK(+)dPCV1-2d,即嵌合型猪圆环病毒活疫苗C1-402株;
所述引物Kpn I-F:5’-TTTGGTACCCGAAGGCCGATT-3’;
引物Kpn I-R:5’-ATTGGTACCTCCGTGGATTGTTCT -3’;
引物Hpa I-R:
5’-GAAGTTAACCCTAAATGAATAAAAATAAAAACCATTACG-3’;
引物Nar I-F:
5’-GGTGGCGCCTCCTTGGATACGTCATCCTATAAAAGTG-3’;
引物Psi I-F:5’-AGGTTATAAGTGGTGGGGGGTCTTTAAGATTAA-3’;
引物Acl I-R:5’-GGAAACGTTACCGCAGAAGAAGACACC-3’。