及30天，其酶活保留率分别为 90% -95%和85% -92%，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为30% -40%和 20% -25%，见表 1。
[0041] 实施例3
[0042] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0043] 脯氨酸特异性内切蛋白酶l-10g/L
[0044] 甘油 30-40% (v/v)
[0045] PEG400 5-8% (v/v)
[0046] 明胶 0· 5-lg/L
[0047] 山梨醇 8-10g/L
[0048] 山梨酸钾 0.05-lg/L
[0049] CaCl2 3-5mM
[0050] NaCl l-3mM
[0051] KCl l-3mM
[0052] 调复配酶制剂pH在3. 0-5. 0。
[0053] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 93% -97%和90% -95%，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为30% -40%和 20% -25%，见表 1。
[0054] 实施例4
[0055] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0056] 脯氨酸特异性内切蛋白酶l-10g/L
[0057] 甘油 40-50% (v/v)
[0058] PEG400 5-10% (v/v)
[0059] 明胶 0.5_0.8g/L
[0060] 山梨醇 4-10g/L
[0061] 山梨酸钾 0.05-lg/L
[0062] CaCl2 I. 5_3mM
[0063] NaCl I. 5_3mM
[0064] KCl I. 5-3mM
[0065] 调复配酶制剂pH在3· 0-5. 0。
[0066] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 90% -96%和90% -94%，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为30% -38%和 20% -24%，见表 1。
[0067] 实施例5
[0068] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0069] 脯氨酸特异性内切蛋白酶l-10g/L
[0070] 甘油 50%-60% (v/v)
[0071] PEG400 5-8% (v/v)
[0072] 明胶 0· 5-1. Og/L
[0073] 山梨醇 6-10g/L
[0074] 山梨酸钾 0· 05-0. lg/L
[0075] CaCl2 3-5mM
[0076] NaCl l_3mM
[0077] KCl l-3mM
[0078] 调复配酶制剂pH在3· 0-5. 0。
[0079] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 95% -98%和95% -97%，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为50% -55%和 40% -45%，见表 1。
[0080] 实施例6
[0081] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0082] 脯氨酸特异性内切蛋白酶l-10g/L
[0083] 甘油 60%-70% (v/v)
[0084] PEG400 5-10% (v/v)
[0085] 明胶 0.5-1. Og/L
[0086] 山梨醇 6-10g/L
[0087] 山梨酸钾 0· 05-0. lg/L
[0088] CaCl2 3_5mM
[0089] NaCl l_3mM
[0090] KCl l-3mM
[0091] 调复配酶制剂pH在3· 0-5. 0。
[0092] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 90-93 %和90-92 %，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为30-35 %和15-20 %，见 表1。
[0093] 实施例7
[0094] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0095] 脯氨酸特异性内切蛋白酶l-10g/L
[0096] 甘油 70-80% (v/v)
[0097] PEG400 5-10% (v/v)
[0098] 明胶 0· 1-1. Og/L
[0099] 山梨醇 5-10g/L
[0100] 山梨酸钾 0· 05-0. lg/L
[0101] CaCl2 3-5mM
[0102] NaCl l-3mM
[0103] KCl l-3mM
[0104] 调复配酶制剂pH在3· 0-6. 0。
[0105] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 85-90 %和85-88 %，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为25-30 %和15-20 %，见 表1。
[0106] 而对照1组实验数据表明，未添加保护试剂的pH 5. 0的脯氨酸特异性内切蛋白酶 溶液，放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为80-88%和70-75%，37°C保存 的脯氨酸特异性内切蛋白酶溶液7天后就几乎完全丧失酶活，见表1。
[0107] 实施例8
[0108] 复配液体酶制剂各组分的含量如下：
[0109] 酸性蛋白酶l-10g/L
[0110] 甘油 50-60% (v/v)
[0111] PEG400 5-10% (v/v)
[0112] 明胶 0.5-1. Og/L
[0113] 山梨醇 6_8g/L
[0114] 山梨酸钾 0· 05-0. lg/L
[0115] CaCl2 3-5mM
[0116] NaCl l-3mM
[0117] KCl l-3mM
[0118] 调复配酶制剂pH在4. 0-5.0。
[0119] 复配后的液体酶制剂放置于4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为 90-96 %和90-93 %，37°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为40-50 %和35-39 %，见 表1。
[0120] 而对照2组实验数据表明，未添加保护试剂的pH 5. 0的酸性蛋白酶溶液，放置于 4°C保存15天以及30天，其酶活保留率分别为80-86 %和70-75%，37°C保存的酸性蛋白酶 溶液10天后就几乎完全丧失酶活，见表1。
[0121] 表1复配酶制剂的保存效果
[0122]
【主权项】
1. 一种蛋白酶复配酶制剂，其特征在于，主要包含脯氨酸特异性内切蛋白酶、 30%-90% 的甘油、I-IOmM CaCl2U-IOmM NaCl、I-IOmM KCl、l-10g/L 山梨醇、0.01-2g/L 山 梨酸钾、2% -10%的聚乙二醇以及0. 5-1. 5g/L明胶；所述百分比是体积百分比。
2. 根据权利要求1所述的蛋白酶复配酶制剂，其特征在于，将脯氨酸特异性内切蛋白 酶替换为其他类似的酸性蛋白酶。
3. 根据权利要求1所述的蛋白酶复配酶制剂，其特征在于，含有脯氨酸特异性内切蛋 白酶 l-l〇g/L。
4. 根据权利要求1所述的复配酶制剂，其特征在于，所述脯氨酸特异性内切蛋白酶的 编码基因来源于曲霉属（Aspeigillus sp·)。
5. 根据权利要求1所述的复配酶制剂，其特征在于，含有脯氨酸特异性内切蛋白 酶l-10g/L、30-60%的甘油、4-6%的PEG400 和L0-L5g/L的明胶、8-10g/L的山梨醇、 0· 05-lg/L 的山梨酸钾，3-5mM 的 CaCl2、3-5mM 的 NaCl 以及 3-5mM 的 KC1。
6. 根据权利要求1-5任一所述的复配酶制剂，其特征在于，用2mol/L柠檬酸溶液调节 复配酶制剂的pH至3-6。
7. 根据权利要求1-5任一所述的复配酶制剂，其特征在于，所述脯氨酸特异性内切蛋 白酶是通过微生物发酵制备获得的。
8. 权利要求1-5任一所述的复配酶制剂的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种液态脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，属于酶制剂技术领域。本发明提供的脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂，具有极其优异的储存稳定性，在4℃保存一年，其酶活保留率仍达90％以上，在37℃保存15天，其酶活保留率仍达50％以上，保存30天，其酶活保留率仍高达45％以上，解决了由于产品运送或储存时间较长导致产品应用性能迅速下降的问题。本发明提供的液体酶制剂复配方法简单，原料来源丰富并且成本低，特别适合在工业上推广。
【IPC分类】C12N9-96
【公开号】CN104560933
【申请号】CN201410820656
【发明人】徐岩, 喻晓蔚, 康超
【申请人】江南大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月25日