一种卷曲乳杆菌及其在妇女保健产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种乳杆菌属的新菌株及其应用，具体涉及一种卷曲乳杆菌，其在调 节阴道微环境、抑制阴道加德纳菌（BV致病菌)的同时，具有明显的抑制白色念珠菌、病原菌 作用，对于在日常妇女保健的应用具有巨大的优势和潜力。
【背景技术】
[0002] 医疗器械作为近代科学技术的产品已广泛应用于疾病的预防、诊断、治疗、保健和 康复过程中，成为现代医学领域中的重要诊疗手段。但是，与药品一样，使用医疗器械也具 有一定的风险。与风险有关的因素包括：（1)设计因素。受科学技术条件、认知水平、工艺 等因素的限制，医疗器械在研发过程中不同程度地存在目的单纯、考虑单一、设计与临床实 际不匹配、应用定位模糊等问题，造成难W回避的设计缺陷。（2)材料因素。医疗器械许多 材料的选择源自于工业，不可避免地要面临生物相容性、微生物污染，化学物质残留等实际 问题，并且医疗器械无论是材料的选择，还是临床应用，跨度都非常大，而人体还受着内、外 环境复杂因素的影响，一种对于医疗器械本身非常好的材料，不一定就能完全适用于临床 使用。而更多的化学材料对人体安全性的评价，往往不是在短时间内能够完成的。（3)临床 应用因素。主要是风险比较大的医疗器械在预期设计、使用过程中与其他医疗器械协同、应 用人群特性、医师对新医疗器械的熟练程度等。所有该些都决定了医疗器械自身及其使用 中固有的潜在风险。在妇科疾病的检查和诊治过程中，如果检查的器械材料成分欠合理、器 械不干净或应用人群过于敏感，则会引发感染。因此改善妇科医疗器械的材料、成分、与人 体接触面成分从而增强器械的生物相容性、降低引发感染的概率、保证检查的安全性显得 尤为重要。
[0003] 女性阴道是非常易感染的地方，如果不注意卫生常会导致许多妇科炎症产生。健 康妇女阴道内存在多种微生物，它们与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调、动态平 衡的阴道微生态系统。健康妇女的阴道菌群主要由乳杆菌构成，包括卷曲乳杆菌、詹氏乳杆 菌和格氏乳杆菌等。正常情况下乳杆菌对阴道可W起到保护作用，而W乳杆菌占优势的阴 道微生态的奈乱可W导致阴道炎。生活中很多女性使用妇科消毒产品、护理产品及保养产 品来保持卫生和保养，然而也经常出现各种各样的问题。
[0004] 妇科消毒产品用于皮肤粘膜、妇科粘膜清洗抗菌，其主要有效成分大部分为楓、高 猛酸钟，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和真菌有抗菌作用，对皮肤粘膜无刺激，一部分女性 频繁使用外洗剂、消毒剂来冲洗阴道及外阴W达到预防妇科病发生的目的，但实际上，该种 做法反而可能产生不良后果，由于在正常情况下，阴道内生存着大量对人有益的杆菌，它们 将阴道表皮细胞中胆存的糖元分解成乳酸，W维持阴道的酸度，构成一道防御致病菌在阴 道内繁殖的天然防线。使用消毒剂冲洗或坐浴浸泡，可能破坏阴道的防御功能，各种致病菌 乘虚而入，在阴道内大量繁殖而引起多种妇科疾病。对于阴部用的化妆品，同样存在上述问 题，如果护理不当，很容易变成细菌滋生的温床，导致发痒、发炎甚至妇科炎症的发生，因此 专家建议不要经常、长期滥用消毒剂、化妆品，W防菌群失调，患上妇科疾病等。
[0005] 进一步的，健康妇女阴道内存在多种乳杆菌，具有个体差异性，且乳杆菌各株间抗 致病菌能力差异明显。选择乳杆菌益生菌时，需要综合考虑乳杆菌的种类，其产酸、产化 能力，及与阴道上皮细胞粘附的能力，其中乳酸杆菌能否在阴道成功定殖，是乳杆菌及其W 乳杆菌为活性成分的菌剂持续作用的基础，也是乳杆菌发挥疗效的关键因素。
[0006] 研究表明：产&〇2乳杆菌是健康妇女阴道内的优势菌，是保护女性阴道免受病原 体感染的重要因素。另外乳杆菌代谢产生的酸和一些抗微生物因子也可有效地抑制其他细 菌的生长繁殖。
[0007] 在阴部卫生及其护理已经广泛受到大家重视的今天，开发既能保证卫生、又对女 性健康有益的产品成为研究热点。
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的技术问题是提供一种筛选于健康人体、具有活跃稳定的生物学特 性、在每剂量中活菌数CFU〉1〇9、抑菌能力强的卷曲乳杆菌、菌剂及其在妇女保健相关产品 方面的应用。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案1是： 一种卷曲乳杆菌，其特征在于所述卷曲乳杆菌命名为卷曲乳杆菌化actobacillus crispa化S) Lc262-1，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也的保藏编号为 CGMCC No. 6469。
[0010] 上述卷曲乳杆菌1x262-1从中国健康育龄妇女阴道分泌物中筛选得来，已于2012 年8月22日保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也(简称CGMCC)，保 藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所，保藏登记号为CGMCC No. 6469。
[0011] 本发明的技术方案2是： 一种利用权利要求1所述的卷曲乳杆菌1x262-1 CGMCC No. 6469制成的菌剂，所述菌 剂活性成分为卷曲乳杆菌1x262-1 CGMCC No. 6469。
[0012] W卷曲乳杆菌Lc262-1 CGMCC No. 6469为活性成分制成菌剂，所述菌剂形态为液 态或固态或凝胶态，其中固态菌剂的剂型如胶囊或片剂或粉剂，相应的，该菌剂同样具有与 卷曲乳杆菌化actobacillus crispa1:us)Lc262-l CGMCC No. 6469相同或相近的各类用 途，本发明的技术方案3是： 如权利要求1所述的卷曲乳杆菌1x262-1 CGMCC No. 6469在妇科医疗器械中的应用。
[0013] 本发明的技术方案4是： 如权利要求1所述的卷曲乳杆菌1x262-1 CGMCC No. 6469在妇科消毒产品中的应用。
[0014] 本发明的技术方案5是： 如权利要求1所述的卷曲乳杆菌1x262-1 CGMCC No. 6469在女性阴部用化妆品中的 应用。
[0015] 采用上述技术方案产生的有益效果在于；（〇本发明的卷曲乳杆菌株可W长期保 存，并抵抗细菌性阴道病和各种阴道感染，包括白色念珠菌性阴道炎、淋病、病毒性阴道炎、 W及泌尿道感染等。（2)本发明的菌株直接采集于健康人体，具有活跃稳定的生物学特性， 无需驯化和复壮工艺，直接进入制剂工艺即可，制剂冻干粉4C条件下保存6个月活菌率 高。（3)本发明的菌株及菌剂的活性成分具有抑制加德纳菌、抑制白色念珠菌的作用，与市 售对照菌相比较，具有优势的阴道上皮细胞黏附力，具有灵长类阴道定殖的优势能力。
【附图说明】
[0016] 图1AUB分别是本发明的卷曲乳杆菌1x262-1菌落形态的正面、反面照片； 图2是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1的革兰氏染色镜检照片； 图3是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1放大不同倍数的电镜照片； 图4是本发明的卷曲乳杆菌1x262-1 T0、T30、T50的leSrDNA基因PCR扩增产物电泳 图； 图5是本发明的卷曲乳杆菌Lc262-1过氧化氨产生反应0 min、5 min、10 min结果图 片； 图6是本发明的卷曲乳杆菌Lc262-1T0、T30、T50的菌落形态的正面、反面照片； 图7是本发明的卷曲乳杆菌1x262-1 TO、T30、T50的革兰氏染色镜检照片； 图8是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1T0、T30、T50的过氧化氨产生反应0 min、5 min、 10 min结果图片； 图9是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1化）和德氏乳杆菌祐）对阴道加德纳菌的抑菌 效果； 图10是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1祐列2个)和德氏乳杆菌化列1个)对阿巧波 菌的抑菌效果； 图11是本发明的卷曲乳杆菌1x262-1 (左)和德氏乳杆菌(右）对白色念珠菌的抑菌效 果； 图12是本发明的卷曲乳杆菌LC262-1定植中华恒河猴阴道后中华恒河猴阴道微生物 区部分菌株leSrDNA片段PCR扩增产物电泳图； 图13是本发明的卷曲乳杆菌在受试动物定植后检出卷曲乳杆菌LC262-1数量，其中纵 轴为卷曲乳杆菌1x262-1的CFU值，横轴为各个动物的5个取样时间点；dayl代表定植后 第1天，W此类推。
【具体实施方式】
[0017] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂 等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0018] 细菌培养基配制： 1.卷曲乳杆菌Lc262-1选择性培养基（Rogosa SL)配制： (1) 将琼脂粉配成溶液，1. 5 g/lOOml去离子水，密封； (2) 放入高压锅，1. 0 Ml^a蒸20分钟；打开超净台，紫外线照射20分钟W上； (3) 待高压锅无压力后取出琼脂溶液，加入乳杆菌选择性培养基（Rogosa化Broth) 5. 97 g/lOOml琼脂溶液； (4) 加入冰醋酸0. 132ml/100ml琼脂溶液，密封后于微波炉煮沸2. 3分钟； (5) 待培养基温度降至室温后倒入培养皿，根据培养皿大小约10ml/个或2