糖聚合物AB3再进行以下层析纯化： 1) 离子交换柱层析：纯化后的糖聚合物AB3进行离子交换柱层析，用蒸馏水进行梯度 洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分，然后浓缩、冷冻干 燥；再分别用水进行溶解，离心，取上清液； 2) 分子筛凝胶柱层析：将上一步所得的上清液再进行分子筛凝胶柱层析，用水进行洗 脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，浓缩、冷冻干燥后获得糖 聚合物纯品，将其命名为ABW3-1。
[0032] 优选的，上述离子交换柱为DEAE离子交换柱。
[0033] 优选的，上述分子筛凝胶层析选用S印hacryl分子筛色谱柱。
[0034] 优选的，上述牛膝糖聚合物ABW3-1是由葡萄糖和果糖组成的寡糖，主要由 -2) - 0 -D-Fru- (1 -和一2) -a-D-Fru- (6 -组成，末端糖残基由a-D-Glc- (1 -和 -2) - 0 -D-Fru组成，ABW3-1 的结构为：
[0035] 优选的，ABW3-1的分子量为1074Da。
[0036] 牛膝糖聚合物，该糖聚合物的制备方法为上述所述的牛膝中糖聚合物的提取方 法。
[0037] 牛膝糖聚合物ABW3-1在制备防治骨质疏松的药物或保健食品或功能食品中的应 用。
[0038]牛膝糖聚合物AB1、AB2、AB3、ABB在制备防治骨质疏松的药物或保健食品或功能 食品中的应用。
[0039] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0040] 实施例1牛膝中糖聚合物的提取方法 1) 剪切：将l〇kg的牛膝干燥根用剪刀剪至l~2cm，用冷水快速清洗，晾干； 2) 水提：将剪切好的牛膝，用10倍体积量热水（60~100°C)提取，提取时间2h，收集提 取液，残渣晾干。
[0041] 3 )分级醇沉：提取液于60°C减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为50%，室温静 置24h后，离心，收集沉淀，称重323g，为粗糖聚合物AB1 ;收集上清液于60°C减压浓缩后， 加入乙醇使乙醇体积浓度为70%，室温静置24h后，离心，收集沉淀，称重893g，为粗糖聚合 物AB2,重复按上述同样的操作（除了乙醇体积浓度为90%外，其他操作均同上)，得671g粗 糖聚合物AB3。
[0042] 4)碱提：将水提后的药渣浸没于15倍体积量的0. 3MNaOH溶液中，室温放置2h， 上清液用〇. 5MHC1进行中和，使其pH为6~8,取上清液进行离心（5000r/min，lOmin)，取上 清液，60°C减压浓缩，然后加入乙醇使乙醇体积浓度为75%，静置24h后离心，收集沉淀，称 重为410g，此为碱提粗糖聚合物ABB。
[0043] 5)纯化：利用Sevag法分别对各组分粗糖聚合物进行除蛋白，除蛋白后粗糖聚合 物用透析袋(截留分子量为3000Da)进行透析、冻干，即得牛膝糖聚合物。
[0044] 实施例2牛膝糖聚合物ABW3-1的提取方法 1) 剪切：将l〇kg的牛膝干燥根用剪刀剪至l~2cm，用冷水快速清洗，晾干； 2) 水提：将剪切好的牛膝，用10倍体积量热水（60~100°C)提取，提取时间2h，收集提 取液，残渣晾干。
[0045] 3)醇沉：提取液于60°C减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为50%，静置24h，收 集上清液于60°C减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为70%，静置24h，重复按上述同样 的操作（除了乙醇体积浓度为90%，其他操作均同上)，室温静置24h后，离心，收集沉淀，称 重671g，为粗糖聚合物AB3; 4)纯化：利用Sevag法对粗糖聚合物AB3进行除蛋白，除蛋白后粗糖聚合物用透析袋 (截留分子量为3000Da)进行透析、冻干，即得牛膝糖聚合物AB3。
[0046] 5)离子交换柱层析：取lOOmg上述纯化后的糖聚合物AB3,溶于5mL的去离子水 中，上样于DEAE-Cellulose52柱，在不同盐浓度的洗脱液条件下出现2个峰，其中峰一为 水（0MNaCl)洗脱部分，峰二为0. 1MNaCl洗脱部分(洗脱过程中使用苯酚-硫酸法跟踪洗 脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分)，分别将所得洗脱液浓缩、冷冻干燥后，得到两种糖 聚合物(峰一糖聚合物、峰二糖聚合物)。
[0047] 6)分子筛凝胶层析：将上述冻干后的峰一糖聚合物样品，用水进行溶解，离心，取 上清液，上S印hacrylS-100HR柱，用水进行洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，出现 一个单一对称峰，收集主峰，浓缩，冷冻干燥后得牛膝糖聚合物ABW3-1。
[0048] 纯度及分子量检测：将上述获得的糖聚合物ABW3-1配成2%浓度（W/V)的水溶液， HPGPC法测得保留时间，根据标准曲线计算得分子量。
[0049] 结果如图1所示，经离子交换和凝胶过滤法分离纯化后得到的组分ABW3-1呈单一 对称峰，说明ABW3-1为均一糖聚合物，测得分子量为1074Da。
[0050] 下面对以上述实施例中提取分离到的ABW3-1作进一步的结构分析。
[0051] 牛膝寡糖ABW3-1的结构分析 (1)单糖组成分析 由完全酸水解产物离子色谱HPAEC-PAD图谱可知，ABW3-1单糖组成为葡萄糖和果糖。
[0052] (2)红外光谱检测 ABW3-1的红外光谱检测结果如图2所示，从中可以看出，ABW3-1含有寡糖的特征吸收 峰为：3368. 98cm1为0-H伸缩振动，2935. 72cm1为C-H伸缩振动，1643. 45cm1为羰基吸收 峰。927. 69cm1和813. 60cm1为呋喃环的特征吸收峰；873. 72cm1处有吸收峰，说明ABW3-1 为主要由0型糖残基组成。
[0053] (3)甲基化分析 样品经甲基化，水解、还原，乙酰化后GC-MS分析，结果表明ABW3-1含有一1)-0 -D_Fru/^ (2 -和一2) - 0 -D_Fru/^ (6 -糖残基。
[0054] (4)糖聚合物的核磁共振分析 将均一糖聚合物ABW3-1样品置于核磁管中，用D20溶解后测谱，所得结果如图3~6所 不。
[0055] 根据上述图3~6的核磁图谱可知各个碳和氢的归属，如下表1所示。
[0056] 表1ABW3-1核磁共振分析结果
经上述完全酸水解、甲基化分析、红外光谱检测及核磁分析，结果显示ABW3-1是一种 由葡萄糖和果糖以1:5比例组成的寡糖，从甲基化分析说明其含有一l)-P-D-Fru/-(2 - 和一2) - 0 -D-Fru/-(6 -糖残基，不同糖残基之间的连接顺序由二维核磁HMBC谱图分析得 出，由以上分析得出ABW3-1的结构为：
，其分子量为 1074Da〇
[0057] 另外，我们前期已经分离得到牛膝多糖ABW2-l、ABP2-2结构如下所示。
[0058] 牛膝多糖ABW2-1的结构：
其中m为0~19，n为0~19,且m+n为2~19。
[0059] 牛膝多糖ABP2-2的结构：
[0060] 以上均一多糖、寡糖可能是牛膝糖聚合物抗骨质疏松的活性成分，因而，均一糖聚 合物的结构鉴定将为后续探究牛膝糖聚合物抗骨质疏松的机制提供有力依据。
[0061] 下面对本发明提取的牛膝糖聚合物的活性进行检测。
[0062] 实施例3牛膝糖聚合物的抗骨质疏松作用研究 1实验方法 1. 1实验设计与分组：3月龄未交配雌性SD大鼠70只，SPF级（由广州中医药大学实验 动物中心提供)，按体重对等原则随机分为7组，各组动物数和给药方法见表1，其中阳性对 照组E2为17 0 -雌二醇，模型组OVX与假手术组SHAM为蒸馏水。手术后每天灌胃给药，每 周称重一次，按体重变化调整相应给药量，连续灌胃90d。
[0063] 表1实验设计与分组
1. 2大鼠去卵巢手术方法： 将大鼠以45mg/kg剂量的戊巴比妥钠溶液（4%)腹腔注射麻醉，腹位固定。在其最末肋 骨下，腋中线与距脊柱外侧约lcm之交叉处，去毛暴露手术视野。先任取一侧进行手术，以 聚维酮碘溶液消毒，切开皮肤、背部肌肉和肌膜，以小镊子轻轻将白色发亮脂肪团拉出切口 外，分离脂肪团，便可见到卵巢。将卵巢下端输卵管用手术缝合线结扎，然后摘除卵巢。切 口缝合后，外部敷以消炎粉(青霉素钠)，同法摘除另一侧卵巢。假手术组（SHAM)的处理方 法同上，只是切除小块脂肪组织，不摘除卵巢。术后置于温暖环境，看护观察。
[0064] 1. 3取材与保存 具体操作如下： 1) 称重、麻醉； 2) 从腹部解剖大鼠暴露内脏，贴近背部肌肉处用镊子夹住动脉取2ml血液于肝素钠管 中，立即换普通取血管取全血(静置lh后，经3000rmp离心