乳酸的光学纯度达到99. 8%W上。到8化发酵结束k乳酸的量为165. 03g/L。 阳0创实施例4
[0063] (1)种子培养液制备：将处于对数期生长的芽抱杆菌13002的菌悬液接种于种子 培养基中，进行连续2~3次活化培养，在45 °C，摇瓶培养2地，得到种子培养液；所述种 子培养基为：按照质量比计算，细菌学蛋白腺0. 8份，酵母提取粉0. 3份，葡萄糖1. 0份， 化C11. 2份，用蒸馈水定容至100份，调节抑至7. 0,灭菌后冷却备用； W64] 似同步糖化发酵高光学纯度的k乳酸：W体积比8 :100的比例，将种子培养液 接种于发酵培养基中，在发酵罐中启动发酵后，W恒定补料速率向发酵培养基中补充一定 量的a-淀粉酶和糖化酶溶液的混合液，培养至8化收集发酵培养液；所述发酵培养基为： W重量份数计，25 %的玉米淀粉溶液50份、木馨淀粉20份，葡萄糖2. 5份，氮源1. 0份，屯 水合硫酸儀0. 06份，用蒸馈水定容至100份，调培养基抑至7. 0,灭菌后冷却至65°C。 阳0化]所述氮源是指：牛肉膏0. 5份、蛋白腺0. 5份。
[0066] 所述a-淀粉酶的添加量是W每100g干淀粉加入a-淀粉酶为0. 08血，W每100g 干淀粉加入糖化酶0. 20mU两种酶混合后，用无菌水稀释5倍；所述流加速率为1. 5mL/min。
[0067] 利用手性柱高效液相色谱法测定k乳酸的含量确定发酵终点。在整个发酵过程 中k乳酸的光学纯度达到99. 8%W上。到8化发酵结束k乳酸的量为172.lOg/L。 W側 实施例5
[0069] (1)种子培养液制备：将处于对数期生长的芽抱杆菌13002的菌悬液接种于种子 培养基中，进行连续2~3次活化培养，在45 °C，摇瓶培养2地，得到种子培养液；所述种 子培养基为：按照质量比计算，细菌学蛋白腺0. 8份，酵母提取粉0. 3份，葡萄糖1. 5份， 化CIO. 5份，用蒸馈水定容至100份，调节抑至6. 5,灭菌后冷却备用；
[0070] 似同步糖化发酵高光学纯度的k乳酸：W体积比8 :100的比例，将种子培养液 接种于发酵培养基中，在发酵罐中启动发酵后，W恒定补料速率向发酵培养基中补充一定 量的a-淀粉酶和糖化酶溶液的混合液，培养至7化收集发酵培养液；所述发酵培养基为： W重量份数计，15 %的马铃馨淀粉溶液60份、糖米淀粉10份，葡萄糖1. 0份，氮源2. 5份， 屯水合硫酸儀0. 1份，用蒸馈水定容至100份，调培养基抑至6. 5,灭菌后冷却至50°C。
[0071] 所述氮源是指：牛肉膏0. 5份、玉米浆蛋白水解液2. 0份。 阳07引所述a-淀粉酶的添加量是W每100g干淀粉加入a-淀粉酶为0. 06血，W每100g干淀粉加入糖化酶0. 15血，两种酶混合后，用无菌水稀释10倍；所述流加速率为2. 0血/ min。
[0073] 利用手性柱高效液相色谱法测定k乳酸的含量确定发酵终点。在整个发酵过程 中k乳酸的光学纯度达到99. 8%W上。到7化发酵结束k乳酸的量为180. 32g/L。
[0074] 实施例6
[00巧](1)种子培养液制备：将处于对数期生长的芽抱杆菌13002的菌悬液接种于种子 培养基中，进行连续2~3次活化培养，在45 °C，摇瓶培养2地，得到种子培养液；所述种 子培养基为：按照质量比计算，细菌学蛋白腺0. 8份，酵母提取粉0. 4份，葡萄糖1. 2份， 化C11. 2份，用蒸馈水定容至100份，调节抑至7. 0,灭菌后冷却备用；
[0076] 似同步糖化发酵高光学纯度的k乳酸：W体积比8:100的比例，将种子培养液 接种于发酵培养基中，在发酵罐中启动发酵后，W恒定补料速率向发酵培养基中补充一定 量的a-淀粉酶和糖化酶溶液的混合液，培养至9化收集发酵培养液；所述发酵培养基为： W重量份数计，23%的玉米淀粉溶液80份，葡萄糖1. 5份，氮源3. 5份，屯水合硫酸儀0.08 份，用蒸馈水定容至100份，调培养基抑至7. 0,灭菌后冷却至45°C。
[0077] 所述氮源是指：牛肉膏0. 5份、蛋白腺0. 5份、豆巧水解液2. 5份。
[0078] 所述a-淀粉酶的添加量是W每100g干淀粉加入a-淀粉酶为0. 06血，W每100g 干淀粉加入糖化酶0. 10血，两种酶混合后，用无菌水稀释10倍；所述流加速率为2. 0血/ min。
[0079] 利用手性柱高效液相色谱法测定k乳酸的含量确定发酵终点。在整个发酵过程 中k乳酸的光学纯度达到99. 8%W上。到9化发酵结束k乳酸的量为220. 40g/L。
【主权项】
1. 一种芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株为芽孢杆菌（Bacillus sp.)13002,于2013年 4月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为 CGMCC NO.7431。2. -种同步糖化发酵生产L-乳酸的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 种子培养液制备：将处于对数期生长的芽孢杆菌13002的菌悬液接种于种子培养 基中，进行连续活化培养，得到种子培养液；所述种子培养基为：按照质量比计算，细菌学 蛋白胨0. 2份~I. 0份，酵母提取粉0. 1份~0. 5份，葡萄糖I. 0份~2. 0份，NaCl 0. 5份~ 1. 5份，用蒸馏水定容至100份，调节pH至6. 0~7. 5,灭菌后冷却即可； (2) 同步糖化发酵L-乳酸：以体积比2~10 :100的比例，将种子培养液接种于发酵培 养基中，在发酵罐中启动发酵后，以恒定补料速率向发酵培养基中补充a -淀粉酶和糖化 酶的混合液，培养至72h~96h收集发酵培养液。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基为：以重量份数计，15~ 25 %的淀粉溶液60~80份，葡萄糖I. 0~2. 5份，氮源I. 0~4. 0份，七水合硫酸镁0. 01~ 〇. 10份，用蒸馏水定容至100份，调培养基PH至6. 0~7. 5,灭菌后冷却至45~65°C。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氮源是指：酵母粉、蛋白胨、牛肉膏、 豆柏水解液、酵母浸膏、玉米浆蛋白水解液中的一种或两种以上以任意比例组合。5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述a -淀粉酶的添加量是以每100g干 淀粉加入a -淀粉酶为0. 02~0. 08mL，以每100g干淀粉加入糖化酶0. 05~0. 20mL，两种 酶混合后，用无菌水稀释5~10倍。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述a -淀粉酶的用量为0. 03mL/100g干 淀粉；糖化酶的用量为0. 10mL/100g干淀粉。7. 根据权利要求2或3或4或5或6所述的方法，其特征在于，所述a -淀粉酶和糖化 酶的混合液的流加速率为0. 5~2. OmL/min。8. 根据权利要求3或4或5或6所述的方法，其特征在于，所述淀粉为玉米淀粉、木薯 淀粉、马铃薯淀粉、大米粉或糙米粉中的一种或两种以上。9. 根据权利要求2或3或4或5或6所述的方法，其特征在于，步骤（2)所述发酵温度 为 45 ~65°C。10. 根据权利要求2或3或4或5或6所述的方法，其特征在于，步骤⑴所述连续活 化培养2~3次，发酵温度均为45°C，培养时间均为24h。
【专利摘要】本发明公开了一种芽孢菌及其同步糖化发酵生产L-乳酸的方法，所述菌株为芽孢杆菌(Bacillus？sp.)13002，保藏编号为CGMCC？NO.7431。具体方法为：(1)将芽孢杆菌13002的菌悬液接种于种子培养基中，进行连续活化培养，得到种子培养液；(2)将种子培养液接种于发酵培养基中，以恒定补料速率向发酵培养基中补充α-淀粉酶和糖化酶的混合液，培养至72h～96h收集发酵培养液。本发明利用淀粉的液化酶和糖化酶的作用温度与发酵温度范围一致进行同步糖化发酵生产L-乳酸，L-乳酸的产量为150～230g/L；且具有高光学纯度，达到99.8％以上；由于发酵温度高，可以避免杂菌的污染。CGMCC No. 743120130408
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/07, C12P7/56
【公开号】CN105154358
【申请号】CN201510510895
【发明人】刘冬梅, 周全兴, 郭均, 周劲松, 徐锋
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月19日