。
[0100]表12
[0101]
[0102] 通过Ab检测三明治间接ELISA分析血清的结果表明，在表达PCV0RF2的酵母全 细胞的含佐剂组^&(：1~￥&〇3)中，在2110 7个细胞~21109个细胞&也）的剂量范围内 抗原量上没有差异，这表明这些组的阳性T/C值等于或高于阳性对照的T/C值。另外，表达 PCV0RF2的酵母全细胞的无佐剂组（vac4)的免疫原性基本等于阳性对照的免疫原性，这 显现出需要检验是否会在甚至2X109个细胞或更低的剂量下维持免疫原性。
[0103] 因此，可以看出，当表达PCV 0RF2的酵母全细胞与佐剂一起使用时，给予至少 2X 107个细胞的量的上述细胞就示出有疫苗效果。还可以看出，即使在没有添加独立佐剂 (无佐剂）时，细胞也示出疫苗效果。
[0104] 此外，在与其它测试组类似的水平（2X109个细胞）下，表达0RF2_Tyl融合蛋白 的酵母全细胞（vac5)也呈阳性。
[0105] 序列表文本
[0106] SEQ ID NO. 1 :由Bioneer合成的针对酵母密码子进行最优化的0RF2的核苷酸序 列，以在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中有效表达0RF2 ;
[0107] SEQ ID N0. 2:针对酵母密码子进行最优化的0RF2的氨基酸序列，以在酿酒酵母 Saccharomycescerevisiae中有效表达0RF2；
[0108] SEQ ID NO.3 :酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae的逆转录转庵子元件Tyl的 核苷酸序列；
[0109] SEQ ID NO. 4 :酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae的逆转录转庵子元件Tyl的 氨基酸序列。
[011η?
[011
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[0116] 表达 0RF2 的Y2805gal80 缺失菌株（Y2805Λgal80/pGAL10-0RF2)和表达Tyl 和0RF2的融合蛋白的Y2805菌株（Y2805/pGAL10-Tyl-0RF2)于2013年2月20日保藏在 韩国典型菌种保藏中心（KCTC)，登记号分别为KCTC12372BP和KCTC12373BP。
[0117] 保藏单位的名称：韩国生命工学研究院
[0118] 登记号：KCTC12372BP
[0119] 保藏日期：2013年2月20日
[0120] 保藏单位的名称：韩国生命工学研究院
[0121] 登记号：KCTC12373BP
[0122] 保藏日期：2013年2月20日
[0123]
[0124]
【主权项】
1. 一种用于猪圆环病毒疫苗的酵母全细胞，所述酵母全细胞包括猪圆环病毒的II型 衣壳Orf2基因。2. 根据权利要求1所述的酵母全细胞，其中，所述0rf2基因由SEQ ID NO: 1表示。3. 根据权利要求1所述的酵母全细胞，其中，所述0rf2基因编码由SEQ ID NO: 2表示 的蛋白。4. 根据权利要求1所述的酵母全细胞，其中，酵母用作宿主细胞并且是酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 的菌株。5. 根据权利要求4所述的酵母全细胞，其中，所述菌株是Y2805菌株。6. 根据权利要求1所述的酵母全细胞，其中，所述酵母全细胞是经热灭活的细胞或经 福尔马林灭活的细胞。7. -种用于猪圆环病毒疫苗的酵母全细胞的裂解液，所述裂解液包括猪圆环病毒的 II型衣壳0rf2基因。8. 根据权利要求7所述的酵母全细胞的裂解液，其中，所述0rf2基因由SEQ ID NO: 1 表不。9. 根据权利要求7所述的酵母全细胞的裂解液，其中，所述0rf2基因编码由SEQ ID NO: 2表不的蛋白。10. 根据权利要求7所述的酵母全细胞的裂解液，其中，酵母用作宿主细胞并且是酿酒 酉孝母 Saccharomyces cerevisiae 的菌株。11. 根据权利要求10所述的酵母全细胞的裂解液，其中，所述菌株是Y2805菌株。12. -种猪圆环病毒疫苗组合物，包括酵母全细胞或该细胞的裂解液，该酵母全细胞包 括猪圆环病毒的II型衣壳蛋白0RF2。13. 根据权利要求12所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述蛋白0RF2由SEQ ID NO: 1表示的基因编码。14. 根据权利要求12所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述蛋白0RF2是由SEQ ID NO:2表示的多肽。15. 根据权利要求12所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，酵母用作宿主细胞并且是 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 的菌株。16. 根据权利要求15所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述菌株是Y2805菌株。17. 根据权利要求16所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述Y2805菌株缺乏gal 80基因。18. 根据权利要求12所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述酵母全细胞是经热灭 活的细胞或经福尔马林灭活的细胞。19. 根据权利要求12所述的猪圆环病毒疫苗组合物，所述猪圆环病毒疫苗组合物是无 佐剂的。20. 根据权利要求12至19中任一项所述的猪圆环病毒疫苗组合物，其中，所述酵母全 细胞以4 X IO9个细胞或更低的浓度使用。21. -种生产用于猪圆环病毒疫苗的经转化的酵母全细胞的方法，所述方法包括以下 步骤： 制备包括0rf2基因的重组表达载体，该0rf2基因编码猪圆环病毒的II型衣壳蛋白； 和 使用重组载体转化酵母。22. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述Orf2基因是由SEQ ID NO: 1表示的基因。23. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述0rf2基因编码由SEQ ID NO: 2表示的多 肽。24. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述酵母用作宿主细胞并且是酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 的菌株。25. 根据权利要求24所述的方法，其中，所述菌株是Y2805菌株。26. 根据权利要求25所述的方法，其中，所述Y2805菌株缺乏gal 80基因。27. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述重组表达载体包括GALlO启动子。28. 根据权利要求21所述的方法，其中，所述0rf2基因与Tyl融合，以便增加所述0rf2 基因的表达。29. 根据权利要求21所述的方法，进一步包括对所述酵母全细胞进行热灭活的步骤。30. 根据权利要求21所述的方法，进一步包括对所述酵母全细胞进行福尔马林灭活的 步骤。31. -种生产用于猪圆环病毒疫苗的经转化的酵母全细胞裂解液的方法，所述方法包 括以下步骤： 制备包括0rf2基因的重组表达载体，该0rf2基因编码猪圆环病毒的II型衣壳蛋白； 使用重组载体转化酵母以制备转化株；和 裂解所述转化株。32. -种为猪接种疫苗的方法，包括给予所述猪酵母全细胞或该细胞的裂解液，该酵母 全细胞包括猪圆环病毒的II型衣壳蛋白0RF2。33. 根据权利要求32所述的方法，其中，所述0RF2由SEQ ID NO: 1表示的基因编码。34. 根据权利要求32所述的方法，其中，所述0RF2是由SEQ ID N0:2表示的多肽。35. 根据权利要求32所述的方法，其中，所述酵母用作宿主细胞并且是酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 的菌株。36. 根据权利要求35所述的方法，其中，所述菌株是Y2805菌株。37. 根据权利要求36所述的方法，其中，所述Y2805菌株缺乏gal 80基因。38. 根据权利要求32所述的方法，其中，所述重组表达载体包括GALlO启动子。39. 根据权利要求32所述的方法，其中，所述0RF2与Tyl融合，以便增加所述0RF2的 表达。
【专利摘要】本发明涉及一种使用酵母全细胞或其裂解液的重组的猪圆环病毒(PCV2)亚单位疫苗，以及它的制造方法。根据本发明的酵母全细胞或其裂解液作为疫苗组合物具有优异的效果，并且还能显著简化工艺，诸如在使用各种有利的酵母和重组微生物来制造猪圆环病毒疫苗的过程中不能避免的细胞破坏、抗原提取、纯化、稳定等。KCTC 12372BP20130220
【IPC分类】A61K39/12, C12N15/34, C12N1/19
【公开号】CN105247037
【申请号】CN201480026972
【发明人】崔毅星, 朴景民, 徐成和, 安廷梧, 李殷教, 金千锡, 尹寅重, 俞成植, 沈宁贞
【申请人】韩国生命工学研究院, 中央疫苗研究所
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2014年3月11日
【公告号】WO2014142515A1