、果糖浓度为 1. 5~2. 5克/升、α-酬戊二酸浓度为0. 75~1. 25克/升、酵母粉浓度为3. 0~4. 0克 /升、丝氨酸浓度为0. 15~0. 20克/升、精氨酸浓度为0. 125~0. 175克/升、氯化锭浓 度为0. 8~1. 25克/升、憐酸氨二钟浓度为1. 1~1. 6克/升、憐酸二氨钟浓度为0. 25~ 0. 4克/升、屯水合硫酸儀浓度为0. 15~0. 25克/升、二水合氯化巧浓度为0. 11~0. 15 克/升、屯水合硫酸铁浓度为0. 006~0. 009克/升、氯化钢浓度为0. 08~0. 12克/升、 二水合钢酸钢浓度为0. 015~0. 025克/升和生物素浓度为0. 0008~0. 0012克/升称取 上述物质。
[0022] 进一步，步骤一中所述的按丙Ξ醇浓度为2克/升、甘露醇浓度为2. 0克/升、葡 萄糖浓度为2. 0克/升、鼠李糖浓度为2. 0克/升、果糖浓度为2. 0克/升、α-酬戊二酸浓 度为1. 0克/升、酵母粉浓度为3. 5克/升、丝氨酸浓度为0. 18克/升、精氨酸浓度为0. 15 克/升、氯化锭浓度为1. 1克/升、憐酸氨二钟浓度为1. 2克/升、憐酸二氨钟浓度为0. 34 克/升、屯水合硫酸儀浓度为0. 2克/升、二水合氯化巧浓度为0. 13克/升、屯水合硫酸铁 浓度为0. 0083克/升、氯化钢浓度为0. 1克/升、二水合钢酸钢浓度为0. 02克/升和生物 素浓度为0. 001克/升称取上述物质。
[0023]进一步，步骤二中所述的大豆液体根瘤菌培养基占发酵罐总体积的70%。
[0024]进一步，步骤二中所述的发酵条件为：在发酵溫度为29~3rC、揽拌速度为75~ 125r/min、空气流量为0. 35~0. 55v/v/m、罐压为0. 075~0. 18kPa、溶氧为65~75%、发 酵液抑为6. 8~7. 3的条件下，发酵72~14地。
[00巧]进一步，步骤二中所述的在发酵溫度为30°C、揽拌速度为l(K)r/min、空气流量为 0.45乂八/111、罐压为0.化?曰、溶氧为70%、发酵液抑为7.2的条件下，发酵72~14地。 [00%] 进一步，步骤二中所述的大豆根瘤菌为慢生型大豆根瘤菌。
[0027]本发明具有W下有益效果：
[0028]本发明采用甘油、甘露醇、葡萄糖、鼠李糖、果糖、α-酬戊二酸等物质组成混合碳 源，来替代常规使用的单一碳源，精确控制碳源、氮源和矿质营养元素的平衡，并用优化的 发酵工艺控制大豆根瘤菌的生产过程，制备得到的大豆液体根瘤菌剂在20°C恒溫柜中保存 12个月活菌数仍然达每毫升100亿W上，中国农业部微生物肥料及食用菌菌种质量检测中 屯、对本发明的菌剂抽样检测的结果为110亿/毫升，杂菌数为0。目前我国的农业微生物菌 剂（包括根瘤菌剂）的国家标准为2亿/克活菌数，相比提高了 50倍。国外液体大豆根瘤 菌剂最好产品的实测活菌数为50亿左右，保质期为12个月，保证最低活菌数不低于20亿 /毫升。本产品的活菌数高于国外最好产品。
【具体实施方式】
[0029]本发明技术方案不局限于W下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。
[0030] 实施例1 :按丙Ξ醇浓度为1. 0克/升、甘露醇浓度为1. 0克/升、葡萄糖浓度为 1.0克/升、鼠李糖浓度为1.0克/升、果糖浓度为1.0克/升、α-酬戊二酸浓度为0. 5克 /升、酵母粉浓度为2. 5克/升、丝氨酸浓度为0. 13克/升、精氨酸浓度为0.1克/升、氯化 锭浓度为0. 65克/升、憐酸氨二钟浓度为1克/升、憐酸二氨钟浓度为0.2克/升、屯水合 硫酸儀浓度为0.1克/升、二水合氯化巧浓度为0.1克/升、屯水合硫酸铁浓度为0. 005克 /升、氯化钢浓度为0. 05克/升、二水合钢酸钢浓度为0. 01克/升、生物素浓度为0. 0005 克/升称取上述物质，并依次加入到1L纯水中混合均匀，调节抑至6.8,得大豆液体根瘤菌 培养基；
[0031] 实施例2 :按丙Ξ醇的浓度为2. 0克/升、甘露醇的浓度为2. 0克/升、葡萄糖的 浓度为2.0克/升、鼠李糖的浓度为2.0克/升、果糖的浓度为2.0克/升、α-酬戊二酸 的浓度为1.0克/升、酵母粉的浓度为3. 5克/升、丝氨酸的浓度为0. 18克/升、精氨酸的 浓度为0. 15克/升、NH4CI的浓度为1. 1克/升、Κ2ΗΡΟ4的浓度为1. 2克/升、ΚΗ2ΡΟ4的浓 度为0. 34克/升、Μ拆〇4· 7&0的浓度为0. 13克/升、CaClz· 2&0的浓度为0. 13克/升、 FeS〇4· 7&0的浓度为0. 0083克/升、NaCl的浓度为0. 1克/升、NazMcA· 2&0的浓度为 0.02克/升和生物素的浓度为0.001克/升称取上述物质，并依次加入到1L纯水中混合均 匀，调节pH至7.2,得大豆液体根瘤菌培养基；
[0032] 实施例3 :丙Ξ醇浓度为3. 0克/升、甘露醇浓度为3. 0克/升、葡萄糖浓度为3. 0 克/升、鼠李糖浓度为3.0克/升、果糖浓度为3.0克/升、α-酬戊二酸浓度为1. 5克/ 升、酵母粉浓度为4. 5克/升、丝氨酸浓度为0. 25克/升、精氨酸浓度为0.2克/升、氯化 锭浓度为1.6克/升、憐酸氨二钟浓度为3克/升、憐酸二氨钟浓度为0. 5克/升、屯水合 硫酸儀浓度为0. 3克/升、二水合氯化巧浓度为0.2克/升、屯水合硫酸铁浓度为0.011克 /升、氯化钢浓度为0. 15克/升、二水合钢酸钢浓度为0. 03克/升、生物素浓度为0.002克 /升称取上述物质，并依次加入到1L纯水中混合均匀，调节抑至7. 5,得大豆液体根瘤菌培 养基；
[0033] 实施例4 :将装有lOOmL实施例1大豆液体根瘤菌培养基的250mLΞ角瓶，命分为 摇瓶1、将装有lOOmL实施例2大豆液体根瘤菌培养基的250mLΞ角瓶，命分为摇瓶2,将装 有lOOmL实施例3大豆液体根瘤菌培养基的250mLΞ角瓶，命分为摇瓶3 ;向摇瓶1、摇瓶2 和摇瓶3中分别接种一环慢生型大豆根瘤菌度radyrhizobiumjaponicum)活化的斜面菌 种，在溫度为30°C、转速为18化/min的条件下振荡培养96h，得种子液；将5mL种子菌液转 至新的摇瓶1、摇瓶2和摇瓶3中，然后在溫度为30°C、转速为18化/min的条件下振荡培养 120h，即得大豆液体根瘤菌剂。
[0034]本试验的慢生型大豆根瘤菌度radyrhizobium japonicum)，购买自中国农业大学 微生物菌种保藏中屯、，地址：北京圆明园西路2号，保藏编号：CCBAU15464。
[0035] 将摇瓶1、摇瓶2和摇瓶3得到的大豆液体根瘤菌剂在溫度为20°C条件下，分别放 置3个月、6个月W及9个月，通过平板计数检测菌数，结果见表1。
[0036] 表1摇瓶培养大豆根瘤菌试验数据
[0037]
[0038] *注：由于Ξ角瓶的瓶塞具有透气性，储存过程会有水分损失，每个月补加无菌水 至原体积。
[0039] 由表1可知，摇瓶发酵得到的大豆液体根瘤菌剂，起始菌数为81. 7亿/mL，在20°C 条件下放置3个月后菌数高于刚培养结束时的菌数，表明根瘤菌在摇瓶中可缓慢增长，随 后菌数就缓慢下降，9个月时活菌数仍有72亿/mL。
[0040] 实施例5 :将装有实施例1大豆液体根瘤菌培养基的5升台式发酵罐命分为第 1批、将装有实施例2大豆液体根瘤菌培养基的5升台式发酵罐命分为第2批，将装有 实施例3大豆液体根瘤菌培养基的5升台式发酵罐命分为第3批；将慢生型大豆根瘤菌 度rady;rhizobiumjaponicum)活化的菌种按体积百分含量5%的接种量分别接种到装有第 1批、第2批和第3批样品的发酵